不同培养液对小鼠胚胎体外发育的影响

不同培养液对小鼠胚胎体外发育的影响李智俞生黄冰陈系古（中山医科大学动物中心；广州，５１００８９）主题词小鼠／胚胎学；培养基中图号Ｒ３２１在转基因小鼠构建过程中，其受精卵常常会在早期体外培养时出现原因不明的发育停滞或发育阻断（ＢｌｏｃｋｔｏＤｅｖｅｌｏ...     

两种硫辛酸对映体对胚胎体外发育的影响

目的：探讨(R)-硫辛酸和(S)-硫辛酸对胚胎体外发育的影响。方法解冻复苏卵裂期胚胎,分别在含不同浓度(R)-硫辛酸和(S)-硫辛酸的GⅡ培养基微滴中培养,观察各组的桑胚率、致密化率、囊胚率和优质囊胚率。结果硫辛酸可提高胚胎体外发育率,(R)-硫辛酸浓度10×10-9 mol/m3组桑胚率、致密化率、囊胚率和优质囊胚率分别达到了59.2%,55.1%,49.0%和54.2%,均高于其他浓度组（P<0.01）。(R)-硫辛酸浓度10×10-9 mol/m3组的桑胚率、致密化率和优质胚胎率均高于(S)-硫辛酸10×10-9 mol/m3组（P<0.05）。结论硫辛酸对胚胎体外发育具有促进作用,特别是对桑胚率和囊胚率具有显著的影响。(R)-硫辛酸10×10-9 mol/m3组的效果最好。     

改进的EBSS培养液与常用商品化试剂对鼠胚体外发育的影响

目的：利用改进后的EBSS(SIGMA)培养液和常用商品化培养液G1/G2（Vitrolife）,Quinn's1026/Quinn's1029（SAGE）对昆明系小白鼠胚胎进行体外培养,以对新建IVF实验室进行评估。方法对简单培养液EBSS进行改进,分别制得卵裂培养液和囊胚培养液以构成序贯培养系统。卵裂培养液：EBSS中加入适当浓度的丙酮酸钠,乳酸钠以及5种非必须氨基酸;囊胚培养液：EBSS中加入适当浓度的5种非必须氨基酸及6种必须氨基酸。将胚胎分成4组,A组使用EBSS（Earle's Bal-anced Salt Solution）培养液,B组使用改进后的EBSS培养液,C组使用G1和G2培养液,D组使用Quinn's1026和Quinn's1029培养液,四种培养液均添加10%人血清白蛋白。结果72 h后,鼠胚总体囊胚形成率为70.57%（614/870）,其中A组的囊胚形成率为26.21%（27/103）,B组为72.22%（143/198）,C组为73.81%（155/210）,D组为80.50%（289/359）B,C,D 3组的囊胚形成率显著高于A组（P<0.001)。结论通过鼠胚体外培养,对新建试管婴儿实验室进行了较好的质控检测,经改进后的EBSS培养液在鼠胚囊胚形成率上与商品化序贯培养液G1/G2,Quinn's1026/Quinn's1029相近,均远高于简单培养液EBSS,但前者成本较之常用商品化试剂有大幅度的降低,说明改进的EBSS培养液在鼠胚体外培养上具有较好的实用价值。     

胚胎培养液和体外操作环境对IVF-ET妊娠率的影响

目的：探讨胚胎培养液和体外操作环境对体外受精胚胎移植（IVFET）妊娠率的影响，以便建立更适宜的胚胎体外培养体系。方法：对78例（79个周期）不孕症患者的临床资料进行同顾性分析。79个IVF-ET周期患者分为2组，Ⅰ组21个周期使用单纯EBSS培养液，无37℃恒温、保湿、维持pH的设施，Ⅱ组58个周期使用HTF、IVC-ONE序列培养基，且配备37℃恒温、保湿、维持pH恒定的设施，比较2组的受精率、卵裂率、优质胚胎率、着床率和临床妊娠率。结果：Ⅰ组与Ⅱ组的受精率、卵裂率、优质胚胎率分别为74．88％、76．39％，72．46％、76．01％，38．00％、41．86%，差异均无统计学意义（P〉0．05），而胚胎着床率、临床妊娠率分别为2．32％、19．75％，9．52％、44．82％，Ⅱ组显著高于1组，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：序列培养基与37℃恒温、保湿、维持pH设施结合应用，改善了胚胎的潜在质量，显著提高了IVF的妊娠率。     

两种不同培养体系对卵母细胞体外受精及胚胎体外发育的影响

目的　挑选出一种较为理想的体外受精(IVF)培养体系。方法　90例(91个周期)接受IVF/单精子胞浆内注射(ICSI)技术治疗的患者,卵母细胞的IVF及胚胎的体外培养分别采用GⅢ体系(A组, 51周期, )和Quinn体系(B组,40周期)。结果　A组和B组分别获得683枚和652枚卵母细胞,IVF后,受精率分别为63 .25% ( 432 /683 )及66 41%(433 /652),无显著性差异(P>0. 05)。体外培养24h后,A组414枚受精卵发生卵裂,卵裂率为95. 83% ( 414 /432 );B组397枚受精卵发生卵裂,卵裂率为91 69% (397 /433) ,无显著性差异(P>0 .05)。继续培养,行第3天胚胎移植,A、B两组分别获得优质胚胎220及140枚(53. 14%和35. 26% )。最终,A组共有26例获得临床妊娠,B组15例获得临床妊娠,妊娠率为50. 98%和37. 5%,两者之间有显著性差异(P<0 .05)。另外,B组中受精率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率方面,IVF周期与ICSI周期之间无显著性差异(P>0. 05),而A组中优质胚胎率及临床妊娠率方面,有显著性差异(48. 97%和63 .11%, 45 .71%和56 25%,P<0 05),受精率和卵裂率方面两周期之间无显著性差异(P>0. 05 )。结论　Quinn系列似乎有助于卵母细胞的体外受精,而GⅢ体系更有利于胚胎的早期发育及后期的着床方面。对于GⅢ系列采取ICSI授精方式似乎更能提高试管婴儿的     

两种商品化开放式冷冻载杆对冻融周期胚胎移植结局影响的比较

目的:探讨两种不同商品化冷冻载杆对冻融周期胚胎移植结局的影响.方法:回顾性分析2017年3月-2019年3月在武汉大学人民医院生殖中心接受冻融胚胎移植的患者资料,根据使用冷冻载杆的不同分为Cryotop组(K组)和iVitri组(S组),根据移植胚胎时期不同分为卵裂期和囊胚期,比较各组间胚胎复苏率、着床率、人绒毛膜促性...     

两种未成熟卵母细胞体外成熟培养液的运用效果比较

目的:通过比较自行研配的培养液与商品化培养液在卵母细胞体外成熟中的运用效果,为进一步优化体外成熟培养体系提供依据?方法:分别选择使用自行配制培养液的(IVM-A组)110个周期和使用商品化(IVM-B组)培养液的99个周期,并以同期行ICSI的治疗周期为对照(ICSI-C1和ICSI-C2),比较两组在体外成熟?胚胎发育?胚胎种植?临床妊娠及结局等方面的差异?结果:在两对照ICSI-C1和ICSI-C2各项指标无差异的情况下,IVM-A组体外成熟和胚胎发育等方面均高于IVM-B组,且可移植胚胎率?优质胚胎率明显提高(P < 0.05或P < 0.01),可移植胚胎率已达到ICSI组水平?虽然表面上IVM-A组在胚胎种植率?妊娠率(临床妊娠率)?活产率等指标低于IVM-B组,但不同阶段的对照组其指标明显改变,ICSI-C2(2006年以后)明显好于ICSI-C1?这种差异可能与近年来的临床治疗方案的改善及宫腔镜的使用有关?值得注意的是,IVM-A的流产率只有10.53%,显著低于其他3组,而同期的对照(ICSI-C1)却明显高于ICSI-C2,提示使用自行配制培养液培养的胚胎可显著降低流产的发生?但由于样本量还不够大,结果尚待进一步验证?结论:自行配制的培养液具有较好的运用效果,可能与其中额外添加的mHFF及E2等有关?但系统尚需进一步优化,以保证其高效?安全?价廉?     

单胚胎玻璃化冷冻对小鼠胚胎体外发育的影响

目的:比较单胚胎玻璃化冷冻与慢速冷冻对小鼠分裂期胚胎损伤和体外发育的影响,探讨使用玻璃化冷冻保存大量胚胎的可行性。方法:选择8-细胞胚胎随机进行改良的玻璃化和慢速冷冻,复苏后培养至囊胚孵出,计数胚胎复苏率、卵裂球死亡率、囊胚形成率、细胞团数、孵出率,并进行组间比较分析。结果:玻璃化冷冻组复苏率、卵裂球死亡率、囊胚形成率、孵出率、细胞团数分别为100%、12.7%、75.7%、66.4%、112,慢速冷冻组分别为87.1%、31.0%、35.5%、58.7%、78,除囊胚孵出率其余各指标两组间差异均具有统计学意义。结论:单胚胎玻璃化法冻存小鼠分裂期胚胎复苏后细胞成活率高,结构完整,更好的保持了胚胎的发育潜能。     

内毒素和大肠杆菌繁殖对小鼠胚胎体外发育的影响

目的：通过了解内毒素和大肠杆菌繁殖对小鼠胚胎发育的影响,探讨污染胚胎对内毒素的耐受性及胚胎污染的解决办法。方法：将150枚小鼠2-细胞胚胎随机分成5组,A组作为对照,B、C组分别加入细菌内毒素0.25 EU/ml、0.5 EU/ml,D、E组均加入大肠杆菌,中途对E组换液,终止细菌污染。在第2天和第4天观察各组胚胎发育情况,对胚胎质量进行评估。结果：（1）对照组存活率和囊胚形成率均100%,内毒素B、C 2组存活率和囊胚形成率均为100%,囊胚形态学观察与对照组无差别。（2）D、E组第２天存活无统计学差异（P>0.05）,第4天E组囊胚形成率明显高于D组（P<0.01）,但囊胚质量较差。结论：菌体繁殖代谢对胚胎的影响大于单纯的内毒素,及时终止污染可部分缓解细菌污染对胚胎发育的影响。     

胚胎早期发育体外共培养体系的比较

目的 探讨共培养体系中体细胞对胚胎早期发育的影响及比较2种常用共培养体系的优劣. 方法 实验分3组:同种不同类型体细胞.受精卵分别在含颗粒细胞和成纤维细胞的M199培养液中培养;异种同类型体细胞,受精卵分别在含牛颗粒细胞和小鼠颗粒细胞中M199培养液中培养;2种共培养体系比较,受精卵分别在"M199 颗粒细胞"和"B2 Vero细胞"的共培养体系中培养. 结果 颗粒细胞组较成纤维细胞组囊胚率高(P＜0.05);牛颗粒细胞组和小鼠颗粒细胞组在卵裂率和囊胚率方面差别无统计学意义;"M199 颗粒组"在卵裂率和囊胚率方面与"B2 Vero组"差别无统计学意义,但囊胚细胞数较少(P＜0.05). 结论 在一定的条件下,共培养体系中体细胞对胚胎早期发育有一定影响;"B2 Vero细胞"的共培养体系优于"M199 颗粒细胞"的共培养体系.     

乙醇对小鼠胚胎体外发育影响的研究

用含不同浓度乙醇的 Whitten氏培养液对小鼠 2细胞、4细胞、8细胞和桑椹期胚胎分别进行体外培养 ,研究乙醇对小鼠不同发育时期胚胎体外发育的影响。首先利用含 0 .0 1%、0 .5 %、1.0 %、1.5 %、2 .0 %、3.0 %、5 .0 %、10 .0 %乙醇的 Whitten氏培养液对 2细胞胚胎进行培养 ,观察研究小鼠 2细胞胚胎对培养液中乙醇浓度的耐受极限。然后再用含 1%和 3%乙醇的 Whit-ten氏培养液分别对小鼠 2细胞、4细胞、8细胞和桑椹期胚胎进行培养。结果 :含低浓度乙醇 (1%以下 )的培养液对外细胞胚胎和桑椹胚的囊胚形成有促进作用 ,而在 2细胞和 4细胞胚胎…     

乙醇对小鼠胚胎体外发育影响的研究

用含不同浓度乙醇的Whitten氏培养液对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎分别进行体外培养，研究乙醇对小鼠不同发育时期胚胎体外发育的影响。首先利用含0、0．1％、0．5％、1．0％、1．5％、2．0％、3．0％、5．0％、10．0％乙醇的Whitten氏培养液对2细胞胚胎进行培养，观察研究小鼠2细胞胚胎对培养液中乙醇浓度的耐受极限。然后再用含1％和3％乙醇的Whitten氏培养液分别对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎进行培养。结果：含低浓度乙醇（1％以下）的培养液对8细胞胚胎和桑葚胚的囊胚形成有促进作用，而在2细胞和4细胞胚胎中则影响不明显。含高浓度乙醇（≥3％）的培养液则对各期胚胎有不同程度的抑制作用，但随着胚胎发育其对乙醇的耐受力将逐渐增强。     

胰岛素对ICR小鼠胚胎体外发育的影响

目的研究ICR小鼠胚胎体外培养时,添加胰岛素的作用、浓度及所需阶段．方法用添加不同浓度胰岛素的mKSOM培养基对小鼠胚胎进行体外培养及选择最适浓度对不同阶段鼠胚进行体外培养,观察囊胚发育率和囊胚细胞数的变化．结果所有添加胰岛素的浓度组,囊胚发育率均高于对照组,其中0．005μg／mL和0．05μg／mL浓度组囊胚细胞数显著高于对照组和其他各浓度组．2-细胞至4-细胞、4-细胞至桑椹胚前添加胰岛素囊胚率显著高于对照组和其他实验组．结论在ICR小鼠胚胎体外培养时添加胰岛素能够促进胚胎发育;胰岛素浓度增至μg／mL对在ICR小鼠胚胎无毒性作用;在ICR小鼠胚胎体外培养的适宜胰岛素浓度为0．005μG／mL和0．05μG／mL;2-细胞至4-细胞、4-细胞至桑椹胚前添加胰岛素更加重要．     

碳水化合物对牛体外受精胚胎体外发育的影响

目的　在SOF +PVA(合成输卵管液 +聚乙烯醇 )这一化学成分明确培养系统条件下 ,观察了葡萄糖、丙酮酸和乳酸三种碳水化合物对牛体外受精胚胎体外发育的影响 ,以便为今后进一步探讨影响牛早期胚胎体外发育的因素提供实验依据。方法　牛卵母细胞体外成熟和体外受精后 ,在化学成分明确培养系统内进行体外发育培养。结果　实验 1将牛体外受精卵培养于不含有葡萄糖的SOF +PVA培养系统中 ,培养 12 0h后分别移入含有 0、1 5 0、3 30、5 0 0mmol L的SOF +PVA培养系统中 ,对照组胚胎一直在含有 1 5 0mmol L葡萄糖的SOF +PVA中培养 ,结果囊胚的发育率分别为 9 2 % a、12 1%、19 2 % b、18 9%和 11 7% (a 相似文献   

激活方法和培养体系两种因素对大鼠-牛异种核移植重组胚胎体外发育的影响

目的 :构建大鼠 -牛异种体细胞核移植重组胚胎 ,探讨激活方法和培养体系两种因素对重组胚胎体外发育的影响。方法 :采用血清饥饿法同步处理的 SD大鼠成纤维细胞为供体细胞 ,以牛去核卵母细胞为受体 ,显微直接注射法构建重组胚 ,在 M199成熟培养基中 ,分别采用透明质酸酶、放线菌酮和 6- DMAP+乙醇 3种化学激活方法激活重组胚 ,并分别观察重组胚被放线菌酮激活后在 M16 、M199和改良的 CZB3种培养基中的发育情况。结果 :透明质酸酶、放线菌酮和 6- DMAP+乙醇激活重组胚胎 ,卵裂率分别是 5 .36%、1 5 .42 %、1 7.86% ;M16 、M199和改良的 CZB培养重组胚胎 ,卵裂率分别是 9.0 9%、1 6.1 7%、1 7.0 5 %。结论 :放线菌酮和 6- DMAP+乙醇均可有效激活重组胚 ;M199和改良的 CZB均可支持胚胎的体外发育 ,且二者胚胎培养的效果显著优于 M16 。     

氨基酸浓度对昆明小鼠胚胎体外发育的影响

目的探讨培养液中氨基酸成分对植入前昆明小白鼠胚胎发育的影响,摸索植入前胚胎体外培养氨基酸的最佳浓度.方法从超排昆明小鼠输卵管中取出的630枚受精卵均分为7组,分别在经添加不同浓度Eagle‘s氨基酸的去牛血清白蛋白KSOM培养液(mKSOM、mKSOM 1/16AA、mKSOM 1/8AA、mKSOM 1/4AA、mKSOM 1/2AA、mKSOM AA、mKSOM 2AA)中培养,对比观察各组胚胎体外发育的过程.用卡方检验分析添加各浓度氨基酸的培养液培养效率的差别,并将8细胞发育率和囊胚发育率分别与相应的氨基酸浓度进行曲线拟合分析.结果与未添加氨基酸组对比,添加氨基酸组胚胎发育率高,8细胞胚和囊胚的形成率与培养液中氨基酸的浓度关系均符合三次模型,在氨基酸为 1/2浓度时8细胞胚和囊胚的形成率均达到最高.结论氨基酸对胚胎的体外发育有促进作用,但含有高浓度氨基酸的培养液培养效果反而有所下降,可能是由于高浓度的氨基酸影响胚胎的代谢和渗透压的改变,且氨基酸分解及胚胎代谢所产生的铵对胚胎有毒性作用.     

氨基酸浓度对昆明小鼠胚胎体外发育的影响

目的探讨培养液中氨基酸成分对植入前昆明小白鼠胚胎发育的影响,摸索植入前胚胎体外培养氨基酸的最佳浓度。方法从超排昆明小鼠输卵管中取出的630枚受精卵均分为7组,分别在经添加不同浓度Eagle's氨基酸的去牛血清白蛋白KSOM培养液(mKSOM、mKSOM 1/16AA、mKSOM 1/8AA、mKSOM 1/4AA、mKSOM 1/2AA、mKSOM AA、mKSOM 2AA)中培养,对比观察各组胚胎体外发育的过程。用卡方检验分析添加各浓度氨基酸的培养液培养效率的差别,并将8细胞发育率和囊胚发育率分别与相应的氨基酸浓度进行曲线拟合分析。结果与未添加氨基酸组对比,添加氨基酸组胚胎发育率高,8细胞胚和囊胚的形成率与培养液中氨基酸的浓度关系均符合三次模型,在氨基酸为1/2浓度时8细胞胚和囊胚的形成率均达到最高。结论氨基酸对胚胎的体外发育有促进作用,但含有高浓度氨基酸的培养液培养效果反而有所下降,可能是由于高浓度的氨基酸影响胚胎的代谢和渗透压的改变,且氨基酸分解及胚胎代谢所产生的铵对胚胎有毒性作用。     

序贯培养对小白鼠胚胎体外发育的影响

目的:探索序贯培养技术对小白鼠胚胎体外发育的影响。方法:将 2 -细胞期的小鼠胚胎随机分为序贯培养组与传统培养组进行培养 ,观察分析两组的 8-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率及囊胚形成率。结果:序贯培养组 8-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率及囊胚形成率分别为 70 .5 %、6 8.2 %、6 5 .9% ,传统培养组分别为 4 5 .7%、4 5 .7%、34.3%。两组比较 ,序贯培养组高于传统培养组 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :采用适当的培养液进行序贯培养 ,更适合小白鼠胚胎的体外发育