槐耳清膏抑制人胃癌MKN-45细胞生长和转移的体内研究

目的 研究槐耳清膏对人胃癌MKN-45细胞在裸鼠体内生长和转移的抑制作用,并探讨其作用机制。方法 采用BALB/c裸鼠建立人胃癌MKN-45细胞淋巴结转移模型,随机分为槐耳清膏组、空白对照组,每组各20只。建模后,每5天测量裸鼠荷瘤并计算肿瘤相对体积(RTV)；用药5周后处死裸鼠,Real-time qPCR检测肿瘤组织中Wnt、β-catenin、E-cadherin、N-cadherin和VEGF表达水平。结果 (1)槐耳清膏组末次测得的足垫瘤RTV为(662.75±450.66),明显小于空白对照组的RTV(1611.85±611.83)(P<0.01)。(2)槐耳清膏组淋巴结转移率15/20(75%)与对照组8/20(40%)相比,其差异有统计学意义(P<0.05)。(3)槐耳清膏组肿瘤组织中Wnt、β-catenin、N-cadherin和VEGF表达低于空白对照组,而E-cadherin的表达高于对照组(P<0.05)。结论 槐耳清膏可抑制人胃癌MKN-45细胞在裸鼠上的生长及转移,其机制可能与抗血管生成和阻碍上皮间质转化(EMT)过程有关。     

槐耳清膏抑制小鼠模型人胃癌MKN-45细胞生长和转移的实验研究

目的研究槐耳清膏对人胃癌MKN-45细胞在裸鼠体内生长和转移的抑制作用,并探讨其作用机制。方法采用BALB/c裸鼠建立人胃癌MKN-45细胞淋巴结转移模型,随机分为槐耳清膏组、空白对照组,每组20只。建模后,每5天测量裸鼠荷瘤并计算肿瘤相对体积(RTV);用药5周后处死裸鼠,Real-time q PCR检测肿瘤组织Wnt、β-catenin、E-cadherin、N-cadherin和VEGF表达水平。结果槐耳清膏组末次测得的足垫瘤RTV为(662.75±450.66)mm3,明显小于空白对照组的(1611.85±611.83)mm3(P0.01)。槐耳清膏组淋巴结转移率8/20(40%)与对照组15/20(70%)相比,差异有统计学意义(P0.05)。槐耳清膏组肿瘤组织Wnt、β-catenin、N-cadherin和VEGF的△CT值分别为(11.36±1.32)、(11.31±1.76)、(12.82±2.22)、(13.22±1.52),均高于对照组的(9.48±2.07)、(9.37±1.88)、(7.74±2.64)、(11.04±1.61),而E-cadherin的△CT值(8.26±2.39)低于对照组的(10.64±1.48)(P0.05)。结论槐耳清膏可抑制人胃癌MKN-45细胞在裸鼠上的生长及转移,其机制可能与抗血管生成和阻碍上皮间质转化(EMT)过程有关。     

槐耳清膏诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究

目的研究槐耳清膏对胃癌SGC-7901细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制。方法用终浓度为0、0．5、1、2、4、6mg／mL的槐耳清膏和10μg／mL的5-氟尿嘧啶（5-Fu）作用于SGC-7901细胞,分别于24h和48h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;48h后收集各组胃癌SGC-7901细胞,琼脂糖凝胶电泳检测DNA,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测survivin mRNA表达。结果MTT法检测显示,槐耳清膏对胃癌SGC-7901细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系（P〈0．05）;槐耳清膏6mg／mL组的抑制率48h后达到（77．9&#177;2．3）％,5-Fu组为（53．4&#177;1．6）％,差异有统计学意义（P〈0．05）。流式细胞术检测显示,槐耳清膏4mg／mL组的细胞凋亡率最高,早期凋亡细胞达33．2％;6mg／mL组早期凋亡细胞6．3％,而晚期凋亡细胞为19．9％。RT—PCR结果显示,槐耳清膏组胃癌SGC-7901细胞survivin mRNA表达下调。结论槐耳清膏在体外对胃癌SGC-7901细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断槐耳清膏诱发胃癌细胞凋亡与其对survivin基因表达的抑制有关。     

槐耳清膏诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究

目的 研究槐耳清膏对胃癌SGC-7901细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制.方法 用终浓度为0、0.5、1、2、4、6 mg/mL的槐耳清膏和10 μg/mL的5-氟尿嘧啶(5-Fu)作用于SGC-7901细胞,分别于24 h和48 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;48 h后收集各组胃癌SGC-7901细胞,琼脂糖凝胶电泳检测DNA,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测survivin mRNA表达.结果 MTT法检测显示,槐耳清膏对胃癌SGC-7901细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系(P＜0.05);槐耳清膏6 mg/mL组的抑制率48 h后达到(77.9±2.3)%,5-Fu组为(53.4±1.6)%,差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术检测显示,槐耳清膏4 mg/mL组的细胞凋亡率最高,早期凋亡细胞达33.2%;6 mg/mL组早期凋亡细胞6.3%,而晚期凋亡细胞为19.9%.RT-PCR结果显示,槐耳清膏组胃癌SGC-7901细胞survivin mRNA表达下调.结论 槐耳清膏在体外对胃癌SGC-7901细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断槐耳清膏诱发胃癌细胞凋亡与其对survivin基因表达的抑制有关.     

金克(槐耳清膏)抑制胰腺癌细胞Panc-1生长转移的实验研究

目的探讨金克(槐耳清膏)在胰腺癌细胞Panc-1生长转移过程中的影响及可能机制.方法不同浓度的金克及5-FU分别与人胰腺癌细胞Panc-1共同培养.MTT法观察生长抑制曲线,FCM观察细胞周期变化及凋亡发生,TUNEL法观察凋亡发生情况并计算凋亡率,细胞免疫组化检测凋亡基因Caspase-3的表达,ELISA法检测细胞培养上清VEGF的分泌变化.结果金克抑制Panc-1的生长,主要阻滞在G1期,促进凋亡发生、Caspase-3的表达并抑制VEGF的分泌.结论金克对于胰腺癌细胞Panc-1有确切杀伤抑制疗效.     

胃癌组织中 MMP-9表达与胃癌侵袭与转移

目的：探讨胃癌组织基质金属蛋白酶9（MMP-9）基因表达在胃癌侵袭、转移中的作用。方法采用免疫组织化学S-P法,用抗MMP-9单克隆抗体对54例胃癌和10例正常胃组织标本中MMP-9表达情况进行标记分析。结果 MMP-9在胃癌组织中阳性表达率为59．3％;在正常胃组织中均无表达。MMP-9的表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分化程度及TNM分期均密切相关（P＜0．05）。结论胃癌组织中基质金属蛋白酶-9的基因表达与胃癌侵袭、转移密切相关,可作为侵袭性胃癌的分子标志物,对其表达进行监控有助于胃癌预后的判断。     

CXCR4和MMP-9在胃癌组织中表达及其与淋巴结转移的关系

目的探讨胃癌组织中CXCR4和MMP-9的表达与淋巴转移的关系及两者的相关性。方法 S-P免疫组化法及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CXCR4和MMP-9在30例无淋巴转移与46例有淋巴转移人胃癌组织中的表达水平。结果 CXCR4蛋白在胃癌组织中的阳性表达率为55.26%,其中淋巴结转移组阳性表达率分别为73.91%,无淋巴转移组阳性表达率为36.37%,差异有统计学意义(P=0.000)。MMP-9蛋白在胃癌组织中阳性表达率(67.11%),其中淋巴转移组阳性表达率为80.43%,无淋巴结转移者和46.67%,差异有统计学意义(P=0.002)。CXCR4和MMP-9蛋白及mRNA在胃癌中的阳性表达随淋巴结转移增加而增加,且CXCR4阳性表达与VEGF-C阳性表达呈显著正相关(r=0.498,P<0.05)。结论胃癌CXCR4的表达和MMP-9的表达与胃癌淋巴结转移呈正相关,而且两者之间存在一定相关性,联合可能对预测胃癌患者淋巴结转移及判断预后有重要临床价值。     

槐耳清膏联合顺铂改变胃癌SGC7901细胞周期分布的实验研究

目的观察槐耳清膏联合顺铂（DDP）作用于人胃腺癌SGC7901细胞后细胞周期的变化,并探讨其可能的作用机制。方法通过细胞流式实验,观察不同浓度槐耳清膏、DDP及两药联合作用于胃癌SGC7901细胞24h后细胞周期的变化情况,并通过Westernblot检测不同浓度的槐耳清膏、DDP及两药联合作用于胃癌SGC7901细胞后,细胞周期相关蛋白ATM、H2AX、cdc-2、CyclinB1等的表达情况。结果细胞流式实验结果显示,槐耳清膏能够阻滞SGC7901细胞于G2/M期,DDP能够阻滞SGC7901细胞于S期,而两药联用后S期和G2/M期都有阻滞。Westernblot实验结果显示,槐耳清膏、DDP均可上调p-ATM、γ-H2AX蛋白表达,同时下调CyclinB1蛋白表达,且两药联用后效果更加明显。结论槐耳清膏、DDP能够通过调节细胞周期相关蛋白的表达改变细胞周期,抑制细胞增殖,与槐耳清膏联用可提高DDP对胃癌的疗效。     

槐耳清膏对荷瘤小鼠瘤细胞Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨槐耳清膏治疗肿瘤的作用机制。方法将雄性昆明小鼠分为对照组、5-Fu组、槐耳清膏组和槐耳清膏＋5-Fu组。用H22细胞给小鼠皮下注射,复制皮下瘤模型。观察各组移植瘤质量和抑瘤率,采用免疫组织化学法检测各组瘤组织Bcl-2、Bax蛋白表达。结果3个用药组小鼠的移植瘤质量和瘤组织Bcl-2阳性率显著低于对照组（P〈0．05）;与5-Fu组和槐耳清膏组比较,槐耳清膏＋5-Fu组小鼠瘤质量和瘤组织Bcl-2阳性率显著降低,Bax阳性率显著升高（P〈0．05）。结论槐耳清膏有明显的抑制肿瘤生长的作用,其机制可能是通过下调Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白表达,促进肿瘤细胞凋亡。     

胃癌淋巴结转移相关基因差异表达分析

[目的]探讨胃癌淋巴结转移过程中相关基因群的表达和功能。[方法]从6例胃癌患者分别抽取胃癌和淋巴结转移组织的总RNA,采用逆转录的方法,制成cDNA链,并以两种荧光Cy5和Cy3标记后做探针,与含有14784条人类14KcDNA基因表达谱芯片进行杂交。以Agilent荧光扫描仪扫描芯片上两种荧光信号,进行计算机处理和分析,筛选出胃癌淋巴结转移组织中差异表达的基因,并用RT—PCR实验对部分差异表达基因进行验证。[结果]在14784条基因中,胃癌原发灶与淋巴结转移组织间存在差异表达的基因共80条,其中59条基因表达显著上调,21条基因表达显著下调。经RT-PCR验证,差异表达趋势与基因芯片技术检测的结果一致。[结论]胃癌组织和淋巴结转移组织之间存在多个差异表达的基因,胃癌淋巴结转移的发生与发展是多种相关基因表达失常所致。     

CXCR4、VEGF-C 和MMP-9在胃癌淋巴结转移中的作用及意义

目的 探讨趋化性细胞受体因子4（CXCR4）、血管内皮生长因子-C（VEGF-C）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在 胃癌淋巴结转移中的作用及意义。方法 应用免疫组化法检测76例人胃癌组织中CXCR4、VEGF-C 和MMP-9 的表达水平,并分析其与胃癌淋巴结转移的关系。结果 CXCR4、VEGF-C 或MMP-9 任一指标表达水平与胃癌淋巴结转移均有显著关系（均P＜0.01）,且这3 项指标两两相关,CXCR4/VEGF-C 联合阳性表达的患者淋巴结转移率为84.8%（28/33）,高于仅1 项指标阳性表达（11/22,50.0%）及两者联合阴性表达（7/21,33.3%）的患者,差异有统计学意义（均P＜0.01）;VEGF-C/MMP-9 联合阳性表达的患者淋巴结转移率为80.0%（32/40）,高于仅1 项指标阳性表达（9/19,47.4%）及两者联合阴性表达（5/17,29.4%）的患者,差异均有统计学意义（P＜0.05 或0.01）;CXCR4/MMP-9 联合阳性表达的患者淋巴结转移率为83.3%（30/36）,高于仅1 项指标阳性表达（11/22,50.0%）及两者联合阴性表达（5/18,27.8%）的患者,差异均具有统计学意义（均P＜0.01）。3 项指标共同表达的患者淋巴结转移率高达90.0%。结论 CXCR4、VEGF-C 和MMP-9 在胃癌组织中的表达与淋巴结转移关系密切,如果3项指标均为阳性者淋巴结转移的可能性最大。     

MMP-9在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨MMP-9在胃癌中的表达及其与胃癌生物学行为的关系。方法应用免疫组化技术SP法检测MMP-9基因蛋白在68例胃癌的表达情况，以20例非肿瘤性胃黏膜组织作对照。对随访14个月至13年的35例患者作了生存分析。结果68例胃癌组织MMP-9阳性表达率86．76％（59／158），对照组胃黏膜组织阳性表达率20．00％（4／20）。有淋巴结转移胃癌的MMP-9阳性表达率比无淋巴结转移者高，分别为95．65％、68．18％（P〈0．05）；侵及黏膜及黏膜下层、肌层和浆膜层胃癌的MMP-9阳性表达率分别为33．33％、91．30％、92．05％（P〈0．05）。MMP-9阳性者术后1、3、5、7、10年以上生存率分别为90．00％、56．67％、36．67％、10．00％和3．33％，MMP-9阴性患者术后1、3、5、7、10年以上生存率分别为100％、100％、80．00％、60．00％和40．00％。MMP-9阳性患者术后生存率比MMP-9阴性患者显著降低（P〈0.01）。结论MMP-9高表达促进肿瘤转移。MMP-9在胃癌的表达与肿瘤浸润深度及淋巴结转移有关；与患者年龄、性别无关。     

MMP-9和E-cadherin在胃癌中的表达

目的研究MMP-9和E—cadherin在胃癌中的表达，探索胃癌侵袭与转移的分子基础和可能机制。方法采用免疫组化技术检测99例胃癌，16例癌周黏膜石蜡切片标本中MMP-9和E-cadherin表达情况。结果MMP-9表达与Laureffs分型、Borrmanffs分型、浸润深度和肿瘤TNM分期有关；E-cadherin表达与肿瘤细胞分化、Laureffs分型和Borrmann＇s分型有关；在癌与癌周非癌黏膜间E-cadherirL和MMP-9表达的差别具有统计学意义；而且E-cadherin与MMP-9之间存在负相关关系；结论随着肿瘤的演进和异质化，MMP-9和E-cadherin的异常表达率相应逐渐增加，这提示它们在胃癌演进过程中起着关键作用；而且，这两种因素间的互相作用更加速了肿瘤演进过程。     

选择素单抗对裸鼠胃癌转移抑制的研究

晚近发现的粘附分子Ｐ－选择素，能介导血小权和内皮细胞与肿瘤细胞之间相互作用，在肿瘤转移过程中起粘附介质作用。该文用人胃癌细胞株原位移植方法建立动物模型，术后分别注射Ｐ－选择素单克隆抗体或ＰＢＳ液体。结果发现，ＰＢＳ对照组肿瘤转移率为５４．５％，单抗组仅１例有肿瘤转移，ＥＬＩＳＡ法测定显示，肿瘤转移裸鼠血浆Ｐ－选择素含量显著高于非转移裸鼠，表明Ｐ－选择素与肿瘤转移相关，其单抗对肿瘤转移有抑制作用。     

MMP-9和PEDF在胃癌侵袭转移中的作用

目的探讨基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9，MMP-9）和色素上皮源性因子（pigment epithelium-derived factor，PEDF）基因表达在胃癌侵袭转移中的作用，为防治胃癌转移提供理论依据。方法应用免疫组织化学法检测82例人体胃癌组织标本中胃癌细胞内MMP-9和PEDF的表达；统计学分析两种分子标记物与胃癌侵袭转移关系。结果胃癌组织中的MMP-9和PEDF表达率分别约为70％和43％，MMP-9高表达和PEDF低表达与浸润深度、淋巴管转移和远处转移呈正相关（P〈0、05）；MMP-9与PEDF表达呈负相关（P〈0、01）。结论MMP-9在胃癌侵袭转移中起促进作用，PEDF可抑制胃癌的进展，PEDF低表达可能通过上调MMP-9的表达从而促进胃癌的得袭转移．     

未分化型鼻咽癌中MMP-9表达与淋巴结转移及预后的关系

目的:探讨未分化型鼻咽癌组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达与肿瘤淋巴结转移及预后的关系。方法:应用免疫组织化学检测46例鼻咽未分化癌病例标本MMP-9表达情况。结果:淋巴结转移组MMP-9的阳性率为82.4%(28/34),无淋巴结转移组MMP-9的阳性率为41.7%(5/12)。统计分析表明MMP-9的表达与淋巴结转移呈正相关(P<0.01)。MMP-9高表达患者的生存时间低于MMP-9低表达患者(P<0.05)。结论:检测未分化型鼻咽癌的MMP-9的表达可能有助于鼻咽癌的辅助诊断和预后判断。     

Ghrelin和MMP-9在直肠癌组织中的表达及其与淋巴结转移的关系

目的:探讨直肠癌组织中生长激素释放肽(Ghrelin)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达与淋巴结转移的关系。方法:应用免疫组织化学方法及Western blot检测Ghrelin和MMP-9在21例无淋巴结转移及35例有淋巴结转移直肠癌组织中的表达水平的表达,分析Ghrelin和MMP-9与直肠癌淋巴结转移中的关系及两者的相关性。结果:Ghrelin和MMP-9在直肠癌组织中的阳性表达率分别为53.57%和80.36%,明显高于癌旁正常组织(P0.05);Ghrelin和MMP-9蛋白表达与肿瘤淋巴结转移比率联系密切,并且在直肠癌组织中的阳性表达随着淋巴结转移个数增加而增加(P0.05);Ghrelin与MMP-9的阳性表达呈正相关(κ=0.832,P0.001)。结论:Ghrelin和MMP-9表达升高与直肠癌的淋巴结转移呈正相关,联合检测Ghrelin和MMP-9可能对直肠癌患者淋巴结转移及预后评估具有重要临床价值。     

MMP-7和MMP-9在胃癌组织中的表达和意义

目的:通过检测基质金属蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7,MMP-7)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在胃癌中的表达,探讨它们在肿瘤转移和侵袭过程中的作用。方法:1.收集46例临床病理资料完整的胃癌手术切除标本及10例正常的胃组织标本。2.每例切片3张,分别用于HE染色病理形态学观察和MMP-7和MMP-9的表达情况的检测,分析其与胃癌浸润转移的关系。3.数据统计学分析用SPSS11.0软件,采用χ2检验和Spearman等级相关分析,P<0.05具有统计学意义。结果:10例正常胃组织中MMP-7和MMP-9的表达为阴性,46例胃癌组织中MMP-7的阳性表达率为73.91%,显著高于正常胃组织(P<0.05),MMP-7阳性表达与胃癌淋巴结转移、浸润程度、分化程度相关(P<0.05),与患者性别、年龄无关(P>0.05)。MMP-9的阳性表达率为80.43%,显著高于正常胃组织(P<0.05),MMP-9阳性表达与胃癌淋巴结转移、浸润深度、分化程度相关(P<0.05),与患者性别、年龄无关(P>0.05)。Spearman等级相关分析显示,MMP-7和MMP-9表达呈正相关(相关系数r=0.504,P<0.01)。结论:胃癌组织中MMP-7和MMP-9呈现异常表达。胃癌组织中MMP-7和MMP-9的阳性率与胃癌淋巴结转移、浸润程度、分化程度相关,提示它们在胃癌的发生发展和浸润转移过程中有促进作用。胃癌组织中MMP-7和MMP-9表达正相关,提示其在胃癌的发生发展以及浸润转移中存在着相互促进的作用。MMP-7和MMP-9各自都可以成为胃癌诊断和预后判断的指标。