金振口服液HPLC-UVD-ELSD特征指纹图谱及13个成分同时定量的整体质量控制研究

目的 建立金振口服液（Jinzhen Oral Liquid,JOL）高效液相色谱-紫外真空波-蒸发光散射检测器（HPLC-UVD-ELSD）特征指纹图谱,结合13个主要代表性成分（没食子酸、甘草苷、芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、甘草素、黄芩苷、白杨素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸、千层纸苷、汉黄芩苷、大黄酚-1-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-β-D葡萄糖苷、甘草酸、猪去氧胆酸、胆酸）同时定量的方法,对市售制剂进行整体质量控制。方法 采用Cosmosil-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;检测波长为254 nm;ELSD漂移管温度115℃;载气体积流量2.0 L/min;以甲醇-水（含0.1%甲酸）为流动相进行梯度洗脱,建立JOL的HPLC-UVD-ELSD特征指纹图谱,对主要特征峰进行明确化学指认并确定组方中药来源,运用相似度软件对15批市售制剂进行相似度评价,同时在市售制剂批间差异小的前提下测定主要代表性成分的含量。结果 建立了JOL的HPLC-UVD-ELSD指纹图谱结合13个代表性成分同时定量的方法;覆盖该复方4味组方中药的15个主要特征峰得到明确化学指认,分别为没食子酸（1号峰）、甘草苷（5号峰）、芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷（7号峰）、甘草素（11号峰）、黄芩苷（13号峰）、白杨素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸（16号峰）、千层纸苷（17号峰）、汉黄芩苷（18号峰）、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷（19号峰）、大黄酚1-O-β-D-葡萄糖苷（20号峰）、大黄酸（24号峰）、甘草酸（26号峰）、（18β,20α）-甘草酸（27号峰）、猪去氧胆酸（28号峰）、胆酸（29号峰）,并初步确定了29个特征峰的组方中药来源分别为8、12、13、15～18号峰归属于黄芩,3～5、10、11、25～27号峰归属于甘草,1、6、7、9、14、19、20、24号峰归属于大黄,2号峰归属于平贝母,28、29号峰归属于人工牛黄,21～23号峰归属于辅料;15批市售制剂的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度值在0.968～1.000;13个定量成分线性关系良好（R²＝0.999 0～0.999 9）,且平均回收率为96.90%～102.84%,15批市售制剂定量成分的质量浓度分别为没食子酸51.82～148.27 μg/mL、甘草苷75.04～130.00 μg/mL、芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷31.72～39.84 μg/mL、甘草素14.24～43.65 μg/mL、黄芩苷610.37～867.40 μg/mL、白杨素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸12.87～34.09 μg/mL、千层纸苷62.45～101.48 μg/mL、汉黄芩苷155.41～205.86 μg/mL、大黄酚-1-O-β-D-葡萄糖苷11.56～23.72 μg/mL、大黄酚-8-O-β-D葡萄糖苷16.14～36.87 μg/mL、甘草酸222.97～310.32 μg/mL、猪去氧胆酸177.48～239.70 μg/mL、胆酸98.54～132.85 μg/mL。结论 所建立的金振口服液HPLC-UVD-ELSD特征图谱和定量测定分析方法为进一步提升制剂整体质量标准提供了重要证据。     

鹿角胶中氨基酸类成分的HPLC指纹图谱

目的：建立鹿角胶氨基酸类成分的高效液相色谱指纹图谱。方法：采用异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生法建立高效液相指纹图谱,梯度洗脱进行分离,选用Diamonsil C₁₈（2）（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱,流动相为乙腈-醋酸钠缓冲液（pH 6.5）,检测波长254 nm,柱温43 ℃,流速1.0 mL·min^-1。结果：共指认13个共有峰,10批样品具有较高的相似度,其液相色谱指纹图谱可反映鹿角胶所含的18种氨基酸成分。结论：该方法稳定可靠,可为鹿角胶中氨基酸成分质量的全面控制提供依据。     

UPLC法同时测定裸花紫珠中5种类黄酮类成分

目的 建立同时测定裸花紫珠中5个有效成分的超高效液相色谱（UPLC）方法。方法 采用Agilent Eclipse XDB-C₁₈色谱柱（100 mm×3.0 mm,1.8 μm）,流动相为乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）,梯度洗脱,体积流量为0.7 mL/min。检测波长350 nm,柱温40 ℃。结果 木犀草苷、毛蕊花糖苷、木犀草素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素、5,4'-二羟基-3,7,3'-三甲氧基黄酮分别在2.44～122.0 μg/mL（r=0.999 8）、9.06～453.0 μg/mL（r=0.999 9）、4.42～221.0 μg/mL（r=0.999 9）、3.36～168.0 μg/mL（r=0.999 8）、2.52～126.0 μg/mL（r=0.999 8）内线性关系良好;平均回收率在98.5%～100.8%。结论 所建立的UPLC法简便快速、重复性良好、结果准确可靠,可作为裸花紫珠药材质量标准控制的方法。     

珍珠层粉氨基酸指纹图谱的构建及氨基酸含量测定的研究

目的 建立中药珍珠层粉HPLC氨基酸指纹图谱,进行指纹图谱的模式识别研究,并测定珍珠层粉的氨基酸含量,为珍珠层粉质量评价提供依据;方法 采用Venusi1-AA 氨基酸分析柱（4.6 mm × 250 mm,5 μm,柱号：AA952505-0）,柱温：28℃,进样量。10 μL,波长：254 nm,流速：0.9 mL?min-1,以pH为6.5的醋酸钠水溶液为流动相A,以80%乙腈水溶液为流动相B。运用SAS和SPSS统计软件进行聚类分析和主成分分析,对珍珠层粉指纹图谱进行模式识别研究。结果 建立了珍珠层粉氨基酸指纹图谱,以及氨基酸指纹图谱的共有模式,检测出23个共有峰,并指认出其中15个共有峰相似度分析的结果与聚类分析和主成分分析保持一致,不同产地的珍珠层粉氨基酸成分差异不大,但不同基源的珍珠层粉氨基酸成分差异明显。本研究测定17个批次珍珠层粉中17种氨基酸（Asp天门冬氨酸、Glu谷氨酸、Ser丝氨酸、Gly甘氨酸、His组氨酸、Arg精氨酸、Thr苏氨酸、Ala丙氨酸、Pro脯氨酸、Tyr酪氨酸、Val缬氨酸、Met蛋氨酸、Cys胱氨酸、Ile异亮氨酸、Leu亮氨酸、Phe苯丙氨酸、Lys赖氨酸）的含量。结论 本研究建立的珍珠层粉氨基酸指纹图谱分析方法专属性强,及氨基酸含量测定方法简便易行、准确可靠,可对珍珠层粉的质量评价提供依据。     

氧化槐定碱对福尔马林致痛大鼠脊髓氨基酸含量的影响

 目的 研究氧化槐定碱（oxysophoridine,OSR对福尔马林致痛大鼠脊髓背角氨基酸含量的影响。方法 实验采用Wistar大鼠,OSR（1 000,500,250 mg·kg-1,ip1 h后右后足跖掌部皮下注射福尔马林（5%,100 μL致痛,30 min后取脊髓L4-6节段背角组织,采用氨基酸自动分析仪检测脊髓组织氨基酸含量。结果 OSR（1 000,500 mg·kg-1可使福尔马林致痛大鼠脊髓L4-6节段背角组织中谷氨酸含量明显下降（P<0.05,OSR（1 000 mg·kg-1还能明显增加γ-氨基丁酸和甘氨酸含量（P<0.05,P<0.01。结论 OSR能降低福尔马林致痛大鼠脊髓L4-6节段谷氨酸含量并升高γ-氨基丁酸和甘氨酸含量,此作用与OSR的镇痛作用有关。     

基于指纹图谱结合多元统计分析不同干燥方式蟾蜍肉氨基酸类成分

目的 建立不同干燥方式所得蟾蜍肉氨基酸类成分的指纹图谱及4个氨基酸的含量测定方法,比较不同干燥方式对蟾蜍肉品质及其氨基酸含量的影响。方法 采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化-高效液相色谱法,建立热风干燥、冷冻干燥、真空干燥和阴干干燥4种方式所得蟾蜍肉干燥样品的指纹图谱,同时测定4个氨基酸含量,并进行相似度评价;运用SPSS 22.0软件进行聚类分析,运用SIMCA 14.1软件进行主成分分析（PCA）和偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA）。结果 不同干燥方式得到的16批蟾蜍肉样品指纹图谱相似度结果均大于0.970,共匹配出10个共有峰,指认出缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸4个氨基酸;PCA提取出2个主成分,累积方差贡献率为87.95%;PLS-DA得出异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸、蛋氨酸的变量重要性投影（VIP）值均大于0.7,提示4个氨基酸可作为评价不同干燥方式所得蟾蜍肉品质的关键指标;阴干干燥、热风干燥、冷冻干燥和真空干燥4种方式所得蟾蜍肉氨基酸总质量分数测定值分别为7.92%、4.62%~5.37%、7.89%~9.02%和4.60%~9.24%。结论 所建立的指纹图谱及含量测定方法稳定可行,结合多元统计分析发现不同干燥方式对蟾蜍肉氨基酸含量产生较大影响,可为蟾蜍肉干燥方式和质量控制研究提供参考。     

定量指纹图谱在醒脑通络注射液氨基酸成分分析中的应用

目的：采用定量指纹图谱对醒脑通络注射液成品中的氨基酸成分进行控制,以此来评价其产品的质量。 方法：采用AccQ Tag柱前衍生的方法,建立醒脑通络注射液中氨基酸成分的定量指纹图谱方法,对10批醒脑通络注射液中的各氨基酸进行定量检测,并结合10批成品的相似度指标,综合评价其质量。 结果：醒脑通络注射液中含有12种氨基酸,各氨基酸特征峰定量结果均一、稳定,10批成品指纹图谱相似度在0.90以上。 结论：该方法准确、可行,是一种简便、有效的中药质量评价手段。     

不同产地野菊花HPLC指纹图谱建立及化学模式识别研究

目的 建立野菊花Chrysanthemum indicum药材HPLC指纹图谱,并进行化学模式识别。方法 采用Hypersil ODS C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱,检测波长334 nm;体积流量1 mL/min;柱温30℃;进样量10 μL,建立野菊花药材HPLC指纹图谱,结合相似度评价、聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘-判别分析等模式识别方法,对不同产地野菊花药材进行质量评价。结果 建立的指纹图谱方法符合方法学要求,29批野菊花药材HPLC指纹图谱有10个共有峰,相似度均在0.91以上;通过聚类分析将样品按不同产地分为2大类;主成分分析与聚类分析结果一致;最后采用正交偏最小二乘-判别分析筛选出了不同批次野菊花药材的6个差异标志物,通过对照品指认,确定了10号峰为蒙花苷、5号峰为3,4-二咖啡酰奎宁酸、3号峰为木犀草苷、1号峰为绿原酸。结论 建立的指纹图谱方法稳定、可靠、重复性好;结合化学模式识别可用于野菊花药材的质量品质评价。     

复方蜘蛛香挥发油GC-MS指纹图谱的建立及多组分定量分析

目的 建立复方蜘蛛香挥发油GC-MS指纹图谱及其10个指标成分的定量分析方法,为其质量控制及评价提供参考。方法 提取15批复方蜘蛛香挥发油,采用GC-MS技术建立指纹图谱,使用中南大学"中药指纹图谱计算软件"计算相似度,并对共有峰进行归属。采用聚类分析(cluster analysis,CA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)对指纹图谱进行评价。利用GC法测定挥发油中10个指标成分的含量。结果 15批挥发油得量在4.4~6.8mL;GC-MS指纹图谱有31个共有峰,其中峰1、11归属于蜘蛛香挥发油;峰31归属于木香挥发油;峰6~9、15、21归属于草果挥发油;峰2~5、10、18为蜘蛛香、草果挥发油共有;峰23、25、27、29、30为蜘蛛香、木香挥发油共有;峰12~14、16、17、19、20、22、24、26、28为蜘蛛香、木香、草果3者挥发油共有;15批样品指纹图谱与中位数法生成的指纹图谱共有模式的相似度在0.798~0.998;聚类分析可以将样品分为2类,其中S1、S2、S5、S6、S11、S14、S15为第1类;S3、S4、S7~S10、S12、S13为第2类;PCA及OPLS-DA可将样品分为4类,其中S1、S2、S5、S6为第1类,S3、S4、S7~S9为第2类,S10、S12、S13为第3类,S11、S14、S15为第4类。异戊酸(峰1)、α-蒎烯(峰2)、β-蒎烯(峰3)、1,8-桉叶素(峰7)、α-松油醇(峰13)、香叶醇(峰15)、β-榄香烯(峰23)、β-丁香烯(峰25)、反式-橙花叔醇(峰28)、石竹素(峰29)的质量浓度在19.49~43.24、2.90~13.15、7.47~17.19、182.94~248.19、12.83~20.48、21.82~57.63、1.54~2.83、3.07~6.50、12.06~19.02、2.94~5.43mg/mL。结论 建立的复方蜘蛛香挥发油指纹图谱及定量分析方法分离度好、准确性高,可为复方蜘蛛香挥发油质量控制及评价提供参考。     

虎驹乙肝胶囊特征图谱研究及其3种活性成分定量测定

目的 建立虎驹乙肝胶囊的HPLC-ELSD和HPLC-UV 2种特征图谱以及胶囊中虎杖苷、丹酚酸B和五味子醇甲3种活性成分的定量测定方法.方法 HPLC-ELSD特征图谱:Thermo C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,漂移管温度85 ℃,气体压力275.80 kPa,增益500,柱温35 ℃,体积流量1 mL/min,进样量10 μL.HPLC-UV特征图谱:Hedra ODS-2(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为0.8 mL/min,检测波长为215 nm,柱温30 ℃,进样量10 μL.结果 建立了虎驹乙肝胶囊的HPLC-ELSD和HPLC-UV 2个特征图谱,分别确定了10、12个共有峰,指认其中的11个共有峰为虎杖苷、三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、黄芪甲苷、绿原酸、大黄素、丹酚酸B、五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素,共有峰的参数符合"中药注射剂指纹图谱技术要求"的有关规定.定量测定中虎杖苷、丹酚酸B、五味子醇甲3种活性成分的分离度良好,线性范围分别为2.24～287.33 μg/mL(r=0.999 9)、1.95～250 μg/mL(r=0.999 9)和1.10～141.66 μg/mL(r=0.999 9),测定结果具有很好的重复性和稳定性.结论 特征图谱结合3种成分的定量测定,能更好地控制虎驹乙肝胶囊的质量.     

苦碟子注射液中4种氨基酸含量的测定

[目的]建立同时测定苦碟子注射液中4种氨基酸类成分(缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸)含量的2,4-二硝基氟苯(DNFB)柱前衍生化法。[方法]采用Diamonsil C18(2)色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm);流动相A为超纯水,B为p H=6.40的30 mmol/L乙酸钠(含1%N,N-二甲基甲酰胺),C为乙腈,梯度洗脱。流速为1.0 m L/min,柱温25℃,检测波长为350 nm。[结果]对10批苦碟子注射液中4种氨基酸含量进行了测定,缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸分别在0.138 8~4.440、0.124 4~3.980、0.135 0~4.320、0.131 9~4.220 mg/L范围内线性关系良好(r≥0.999 4)。平均回收率分别为98.49%、100.60%、98.50%、98.56%,相对标准偏差(RSD)≤2.0%(n=6)。[结论]该方法简便、准确,可靠,为苦碟子注射液质量控制提供参考。     

柱前衍生化HPLC法测定丹红注射液氨基酸

目的通过建立HPLC分析方法,测定丹红注射液(丹参、红花)中氨基酸,为丹红注射液质量标准的提高提供科学依据。方法通过OPA-FMOC柱前衍生化法,建立了同时检测丹红注射液中18种氨基酸的液相色谱方法。色谱柱为Agilent SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相A为0.02 mol/L醋酸钠溶液(含200μL/L三乙胺和3.5mL/L四氢呋喃,2%醋酸溶液调pH 7.2±0.05),流动相B为0.02 mol/L醋酸钠溶液-甲醇-乙腈(200∶400∶400)(pH 7.2±0.05),梯度洗脱;体积流量0～38 min为1.0 mL/min,38～49 min为1.5 mL/min;柱温40℃;检测波长:0～32.5 min为338 nm,32.5 min后为262 nm。结果所测18种氨基酸线性关系良好;7批次丹红注射液水解氨基酸测定平均值为1.680 mg/mL。结论所建立的氨基酸定量方法结果准确可靠,重复性好,有助于丹红注射液的质量控制。     

夏桑菊颗粒氨基酸类成分指纹图谱的研究

目的:建立夏桑菊颗粒(夏枯草、野菊花、桑叶)氨基酸类成分HPLC指纹图谱。方法:采用AQC(6-氨基酸喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基-氨基甲酸酯)柱前衍生化HPLC法。色谱柱为SYMMETRY C18分析柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相:(A)pH为5.05的醋酸钠缓冲液、(B)60乙腈(梯度洗脱);柱温:30℃;流速:1.0mL/min。荧光检测:激发波长(Ex)为250nm,发射波长(Em)为395nm,分析时间50min。结果:确定12个色谱峰作为共有峰,利用夹角余弦系数,相关系数及指纹图谱相似度评价系统软件,测得10批夏桑菊颗粒指纹图谱相似度0.95～1.00之间。结论:本实验建立的夏桑菊颗粒氨基酸类成分HPLC指纹图谱方法准确可靠,可控性强,重复性好,为有效控制夏桑菊颗粒质量提供可靠依据。     

清开灵系列制剂的氨基酸色谱指纹图谱

目的建立清开灵系列制剂(注射液、软胶囊、胶囊、颗粒)的氨基酸色谱指纹图谱。方法样品与2,4-二硝基氟苯衍生化反应,Venusil AA色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm,Agela),以乙腈与N,N-二甲基甲酰胺-0.025mol/L醋酸钠(1∶100,乙酸调p H6.4)为流动相,梯度洗脱,检测波长360 nm,体积流量1.0 m L/min,柱温25℃。结果建立了清开灵注射液、软胶囊、胶囊和颗粒等剂型的氨基酸色谱指纹图谱,并指认了其中15个共有峰(门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、脯氨酸、丙氨酸、结氨酸、甲硫氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、色氨酸、组氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸),并对氨基酸类成分的归属进行了探讨。结论本研究建立的氨基酸色谱指纹图谱基本能控制清开灵系列制剂中的水牛角、珍珠母及板蓝根的内在质量。     

珍珠粉中氨基酸的高效液相色谱指纹图谱研究

目的 参比商品珍珠粉及珍珠蚌壳粉液相指纹特征,建立淡水养殖1～5年珍珠中氨基酸的液相指纹图谱以控制质量.方法 采用HPLC测定,色谱条件:Venusil-AA氨基酸分析柱,乙腈- 0.1 mol/L的醋酸钠水溶液(pH 6.50)为流动相,梯度洗脱,检测波长254 nm,体积流量1.0 mL/min,柱温45℃.结果 建立了HPLC指纹图谱共有模式,得出不同品系的样本相似度分布谱带.结论 色谱指纹图谱分析法能准确地鉴别区分不同品系的珍珠类产品,可为珍珠粉的质量控制和真伪鉴别提供依据和方法.     

土鳖虫超微粉体中游离氨基酸的测定及指纹图谱研究

目的 建立土鳖虫超微粉体的游离氨基酸的HPLC指纹图谱,考察其主要氨基酸的量.方法 采用异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生,梯度洗脱进行色谱分离,固定相为依利特Hypersil BDS C18柱(4.6 mm× 250 mm,5μm),流动相A乙腈-水(4∶1),流动相B醋酸钠缓冲溶液(pH=6.5)-乙腈(97∶3),检测波长为254 nm,体积流量为1 mL/min,柱温为30℃.结果 初步建立了土鳖虫超微粉体中游离氨基酸的HPLC指纹图谱,标定了24个共有峰,同时定量分析了6种氨基酸成分.结论 建立的方法分离效果好,灵敏、准确、简单,可作为土鳖虫超微粉体质量评价的方法.     

蒙药材家猪心中氨基酸含量测定

目的 建立家猪心脏组织中17种氨基酸的含量测定方法。方法 用氨基酸分析仪测定家猪心脏组织中17种氨基酸的含量(茚三酮柱后衍生化)。结果 在实验的浓度范围内,17种氨基酸线性方程的相关系数(r)均大于0.999 0。甘氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、精氨酸的平均加样回收率(n=6)分别为99.0%、99.6%、101.7%、97.9%,RSD均小于2.0%。结论 该方法简便、准确,可用于测定家猪心脏组织中氨基酸的含量。     

芦笋水解氨基酸的测定

目的 测定芦笋中的水解氨基酸.方法 新鲜芦笋匀浆液加盐酸水解后得到的过滤液,采用HPLC-AccQ-Tag法进行分析,以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(AQC)为衍生试剂进行柱前衍生,色谱柱为Diamonsil(R) C18柱(200 mm ×4.6 mm,5μm),流动相A为磷酸-三乙胺-水(0.3∶0.5∶ 100),流动相B为乙腈-水(60∶40),进行梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长为248nm,柱温37℃.结果 11种氨基酸的线性回归方程r值为0.9988～0.9999,平均回收率为99.31％～100.44％(RSD为1.52％～2.41％,n=6).结论 该法简单、准确、重复性好,可用于芦笋水解氨基酸的测定.     

羚羊角商品药材各部位中氨基酸分析

目的测定羚羊角不同商品药材、同一药材不同部位中18种氨基酸量。方法采用柱前衍生化、氨基酸自动分析法,测定样品中18种氨基酸的量。结果 18种氨基酸的线性方程r值均大于0.998 2,平均回收率(n=6)为98.1%,RSD为1.4%。羚羊角商品药材各部位中均含有18种氨基酸及8种必需氨基酸;角尖与角基中含有量接近;全角含有量高于角丝、粉末;角塞中除甘氨酸量较高,脯氨酸量与全角接近外,其余氨基酸的量均低于全角。结论该方法可用于羚羊角商品药材中氨基酸测定。