RNA干扰HIF-1α对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的VEGF表达及增殖的影响

目的 探讨shRNA特异性干扰沉默缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）的血管内皮生长因子（VEGF）表达及其增殖的影响.方法 获取9例RA患者滑膜组织进行RA-FLS的分离培养及传代.将FLS分为4组：常氧组、缺氧组、阴性质粒组（转染阴性质粒）和阳性质粒组（转染HIF-1α阳性质粒）,常氧组进行常规培养,后3组进行缺氧培养12h;采用Western blot和qRT-PCR法分别检测各组FLS中HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGFmRNA表达情况.将缺氧组、阴性质粒组和阳性质粒组的FLS分别于缺氧条件下培养6、12、24、48h,应用MTT比色法检测各组细胞增殖情况.结果 与常氧组相比,缺氧组FLS的HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGFmRNA表达明显升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,而阴性质粒组和缺氧组FLS的HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGFmRNA表达水平无明显差异（P＞0.05）;阳性质粒组FLS的HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGF mRNA较缺氧组下调,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）.4组FLS的HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGF mRNA表达呈正相关（P＜0.01）.缺氧培养12h后阳性质粒组的FLS生长较缺氧对照组及阴性质粒组减慢,差异有统计学意义（P＜0.05）,而后两组FLS生长无统计学差异（P＞0.05）.结论 RNA干扰HIF-1α表达能有效下调RA-FLS中HIF-1α和VEGF以及HIF-1α和VEGFmRNA水平,并且能抑制FLS的异常增殖.     

HIF-1α及 VEGF 在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中的表达及意义

目的研究类风湿性关节炎（RA）患者滑膜细胞在体外常氧和缺氧培养条件下缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的差异性及意义。方法对RA患者及骨关节炎（OA）患者的关节滑膜细胞在体外常氧和缺氧条件下分别进行培养,根据培养条件分为常氧组、缺氧6h组及缺氧12h组;采用免疫印迹法分别检测各组成纤维样滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达情况。结果与常氧组相比,缺氧6h及12h的RA和OA患者滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达均显著增加,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。同时RA和OA患者缺氧12h组滑膜细胞HIF-1α及VEGF的表达高于缺氧6h组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。RA和OA患者3组滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达均呈正相关（均P＜0.05）。常氧组RA与OA患者滑膜细胞的HIF-1α及VEGF的表达均无统计学差异（均P＞0.05）;而缺氧6h和12h组中RA滑膜细胞HIF-1α及VEGF的表达均高于OA滑膜细胞,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论在缺氧条件下RA患者滑膜细胞HIF-1α及VEGF表达显著升高且密切相关,可能缺氧-HIF-1α-VEGF这一信号途径在RA的发生、发展中起着重要作用。     

青藤碱对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜血管新生的影响

目的观察青藤碱对Ⅱ型胶原诱导性关节炎模型大鼠（CIA）低氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）及基质金属蛋白9（MMP-9）的影响,探讨青藤碱对类风湿关节炎（RA）滑膜血管新生的作用机制。方法40 只远交群大鼠,随机选取10 只作为对照组,余30 只大鼠采用尾根部皮下注射Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂的方法复制关节炎模型。15 d 后造模大鼠随机分为模型组、雷公藤组、青藤碱组,每组10 只。雷公藤组：雷公藤多甙片9.68 mg/（kg·d）灌胃给药;青藤碱组：青藤碱片100 mg/（kg·d）灌胃给药;模型组灌服等体积0.9%氯化钠注射液。1 次/d,共28 d。期间测量大鼠踝关节肿胀度。灌药28 d 后处死大鼠,免疫组织化学法检测关节滑膜组织HIF-1α水平,酶联免疫吸附试验测定血清中VEGF、MMP-9 水平。结果与模型组比较,青藤碱组和雷公藤组大鼠关节肿胀度减轻（p <0.05）;青藤碱组和雷公藤组滑膜组织中HIF-1α 表达降低（p <0.05）;青藤碱组和雷公藤组血清中VEGF、MMP-9 表达降低（p <0.05）。结论青藤碱可降低CIA 踝关节肿胀,疗效与雷公藤多甙相当。其机制可能是通过下调HIF-1α的表达及VEGF、MMP-9水平,从而减少滑膜新生血管生成。     

姜黄素对佐剂性关节炎模型大鼠HIF-1α、VEGF及VEGFR表达的影响

目的 :探讨姜黄素(CUR)对佐剂性关节炎(AA)模型大鼠低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR)表达的影响和CUR治疗类风湿关节炎的作用机制。方法:40只健康SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、甲氨蝶呤组和姜黄素组。造模9 d后甲氨蝶呤组和姜黄素组分别给予腹腔注射甲氨蝶呤0.5 mg/kg,3 d 1次,连续5次;姜黄素50 mg/kg-1,1 d 1次,连续14 d。第23天引颈处死大鼠,取膝关节滑膜组织,分别采用免疫组织化学染色及PCR技术检测HIF-1α、VEGF及VEGFR的表达。结果 :与正常对照组比较,模型组HIF-1α、VEGF、VEGFR表达明显增加(P0.0l,P0.05);与模型组比较,姜黄素组HIF-1α及VEGFR表达明显减少(P0.01,P0.05)。且佐剂性关节炎大鼠滑膜中HIF-1α与VEGF呈明显正相关关系(r=0.910,P0.01)。结论:姜黄素能够抑制AA大鼠滑膜血管新生,其机制可能与其降低HIF-1α表达而下调靶基因VEGF、VEGFR的表达有关,这可能是其治疗类风湿关节炎的作用机制之一。     

类风湿关节炎患者血清缺氧诱导因子-1α的检测及与关节滑膜病变的相关性

目的探讨类风湿关节炎（RA）患者血清缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）水平与关节滑膜病变的关系。方法采用酶联免疫吸附法检测18名健康人、20例骨关节炎（OA）患者及63例RA患者血清中HIF-1α的水平。RA组根据疾病活动评分确定活动组与稳定组,活动组中再根据病程分为早期活动组及中晚期活动组,其中早期活动组22例,中晚期活动组21例,稳定组20例,并分析血清HIF-1α水平与RA关节滑膜病变及病情活动指标的相关性。结果RA组血清HIF-1α水平（064±1．90）ng／ml显著高于OA组（O13±0．01）ng／ml及健康对照组（O．12±0．01）ng／ml,早期活动组RA组血清HIF-1α水平（1．54±3．25）ng／ml显著高于中晚期活动组（0．35±0．35）ng／ml、稳定组患者（0．17±0．09）ng／ml及OA组（013±001）ng／ml;RA患者血清HIF-1α水平与存在滑膜增厚的关节个数计数、28个滑膜增厚的总积分、采集到能量信号的关节个数计数呈正相关,而与存在关节积液的关节个数计数、28个关节积液的总积分、每个关节的滑膜点评分最高的点所得的分数和各关节滑膜内动脉的阻力指数总和、CRP、血沉、血清抗环瓜氨酸抗体、关节肿胀数、关节压痛数、疾病活动度DAS28评分无明显相关性。结论HIF-1α与RA初期滑膜组织增厚相关,检测其血清水平有助于早期诊断RA。     

低氧和IL-1β联合刺激对类风湿 关节炎成纤维样滑膜细胞基质 金属蛋白酶表达的影响及机制 研究

探讨低氧和IL-1β联合刺激对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）基质金属蛋白酶（MMP）-1、MMP-3、MMP-9水平的影响,并分析缺氧诱导因子1α（HIF-1α）通路和NF-κB通路在其中的调控作用。方法应用组织块法从临床RA患者滑膜组织分离原代FLS,一阶段实验中,细胞分为常氧组、低氧组、IL-1β组、IL-1β+低氧组;二阶段实验中,细胞分为IL-1β+低氧组、YC组、BAY组、YC+BAY组。采用ELISA法和Real-timePCR法分别检测MMP-1、MMP-3、MMP-9水平及MMP-1、MMP-3、MMP-9mRNA表达水平,采用Westernblot法检测HIF-1α和磷酸化NF-κBp65(p-p65)的表达,采用免疫荧光法检测p-p65的表达及核移位。结果与常氧组比较,IL-1β组MMP-1、MMP-3、MMP-9水平均升高（均P＜0.05）;而与IL-1β组比较,IL-1β+低氧组MMP-1、MMP-3、MMP-9水平均升高（均P＜0.05）。与常氧组比较,低氧组、IL-1β组MMP-1、MMP-3、MMP-9mRNA表达水平均升高（均P＜0.05）;而与IL-1β组、低氧组比较,IL-1β和IL-1β+低氧组MMP-1、MMP-3、MMP-9水平均升高（均P＜0.05）。与常氧组比较,低氧组、IL-1β组HIF-1α和p-p65核移位明显增加,而IL-1β+低氧组HIF-1α和p-p65蛋白表达水平及核移位进一步增加。YC或BAY预处理细胞后,IL-1β+低氧组MMP-1、MMP-3、MMP-9水平和mRNA表达水平均下降（均P＜0.05）。结论低氧和IL-1β能协同促进RA关节滑膜组织中FLS生成MMP,而HIF-1α和NF-κB通路在RA炎症缺氧微环境病变机制中起重要作用。     

HIF-1α在类风湿性关节炎组织中的表达及其相关性研究

目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在类风湿性关节炎(RA)组织中的表达及其相关性作用。方法 通过组织形态学和免疫学等手段检测,观察Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠模型的关节组织中HIF-1α蛋白的表达情况。结果 Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠的关节滑膜层和滑膜下层均表达HIF-1α,第21天阳性表达量最高,随病程进展,表达逐渐下降,与滑膜病理学评分、滑膜增生评分及血管生成评分呈显著正相关。结论H1F-1α在RA组织中的表达,与炎症严重程度呈正相关,提示HIF-1α对RA的发生发展密切相关,为RA的临床治疗提供了新的思路。     

CCR5基因沉默对RA大鼠滑膜细胞炎症反应的影响

【摘要】 目的 探讨CCR5基因沉默对类风湿关节炎（RA）大鼠滑膜细胞炎症因子TNF-α、IL-6、MMP-1及MMP-3 的影响。方法 将SPF级Wistar雄鼠饲养一周后随机分为Control(WC)组与RA模型组,采用胶原诱导法构建RA大鼠模型,然后分离和培养RA大鼠滑膜细胞,再将细胞分为4组：RA组（RA大鼠滑膜细胞）、RA+NC组（加入脂质体包裹的NC siRNA）、RA+mock组（加入脂质体）、RA+siRNA组（加入脂质体包裹的CCR5 siRNA）。利用RNA干扰技术干扰大鼠滑膜细胞CCR5的表达,干扰后用qRT-PCR检测各组滑膜细胞CCR5及炎症因子TNF-α、IL-6、MMP-1及MMP-3 mRNA相对表达水平,用Western Blot检测其CCR5蛋白表达情况,并用ELISA方法检测各组滑膜细胞上清液中TNF-α、IL-6、MMP-1、MMP-3的水平。结果 干扰大鼠滑膜细胞CCR5的表达后,与RA组比较,RA+siRNA组CCR5 mRNA及TNF-α、IL-6、MMP-1、MMP-3 mRNA及蛋白水平均显著降低（P＜0.05）,而RA+NC组、RA+mock比较组差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论 沉默CCR5可抑制CCR5 mRNA及其蛋白的表达,并有助于降低RA大鼠滑膜细胞的炎症因子TNF-α、IL-6、MMP-1及MMP-3的表达,减轻大鼠滑膜细胞的炎症反应,并为以后利用RNA干扰技术沉默CCR5用于RA的治疗提供新的方向。     

痹肿消汤对实验性关节炎大鼠滑膜VEGF表达水平的影响

目的：观察痹肿消汤对实验性关节炎大鼠滑膜组织血管内皮生长因子（VEGF）表达水平的影响，探讨痹肿消汤治疗类风湿性关节炎（RA）的作用机制。方法：75只SD大鼠随机分为4组，皮下注射Ⅱ胶原诱导实验性关节炎模型，用免疫组化法检测各组不同时间点大鼠滑膜VEGF的表达，同时采用关节炎指数积分法评价其关节炎症状。结果：免疫大鼠88.57%出现关节炎症状；模型组的关节炎指数积分逐渐增加，而痹肿消汤组和甲氨喋呤组关节炎指数积分则在30d后逐渐下降。正常组滑膜组织未见明显VEGF表达，模型组VEGF表达明显高于痹肿消汤组和甲氨喋呤组（P＜0.01）；随着时间的延长，模型组VEGF表达逐渐升高，痹肿消汤组和甲氨喋呤组的VEGF表达明显低于模型组（P＜0.01），且痹肿消汤组又低于甲氨喋呤组（P＜0.05）。结论：VEGF参与了RA疾病滑膜炎的形成和发展过程；其VEGF表达的高低与关节炎症状的轻重有关。痹肿消汤和甲氨喋呤均具有阻断关节炎滑膜组织VEGF表达，且痹肿消汤阻断作用优于甲氨喋呤；提示痹肿消汤可能通过阻断VEGF的表达来阻抑关节炎滑膜血管翳的形成或骨质侵蚀。     

复原益肾汤对类风湿关节炎大鼠白细胞介素-17、肿瘤坏死因子-α及基质金属蛋白酶-3的影响

目的：观察复原益肾汤对Ⅱ型胶原诱导的关节炎大鼠滑膜组织病理改变及相关细胞因子表达的作用,探讨复原益肾汤治疗类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）的潜在机制。方法：以Ⅱ胶原诱导大鼠RA模型,设正常组、模型组、甲氨蝶呤（methotrexate,MTX）组、复原益肾汤高中低剂量组,测算大鼠足肿胀率;酶联免疫吸附试验法检测血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白细胞介素-17（interleukin-17,IL-17）水平;免疫组化法检测软骨和滑膜基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinase-3,MMP-3）水平;光镜观察大鼠足关节滑膜组织病理学变化。结果：复原益肾汤高剂量组及MTX组的RA大鼠关节炎症积分较模型组有显著降低（F=156.671,P=0.000）;中药高、中剂量组及MTX组血清中TNF-α、IL-17均有显著降低（TNF-α：F=20.233,P=0.000;IL-17：F=205.412,P=0.000）,中药高剂量组与MTX组之间无统计学差异（TNF-α：P=0.952;IL-17：P=0.142）;中药高剂量组和MTX组中软骨层及滑膜层MMP-3较模型组有显著降低（F=14.867,P=0.000）,中药高剂量组与MTX组之间无统计学差异（P=0.08）。结论：复原益肾汤可改善关节炎大鼠的病理损伤,其作用机制与抑制TNF-α、IL-17、MMP-3等炎症介质的表达密切相关,为复原益肾汤治疗类风湿关节炎提供了科学依据。     

通痹灵对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织血管内皮生长因子表达水平的影响

目的 观察通痹灵对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠关节滑膜组织炎症和血管内皮生长因子（VEGF）表达水平的影响，以探讨通痹灵治疗类风湿性关节炎（RA）的作用机理。方法 大鼠尾根部皮下注射Ⅱ型胶原蛋白建立CIA模型，分组给药治疗，给药37d后处死动物，对动物膝关节滑膜病理切片后分别常规HE染色和免疫组化染色。对HE染色切片用显微镜观察炎症细胞浸润，巨噬细胞增生和纤维增生情况，对免疫组化染色切片观察血管内皮生长因子（VEGF）阳性细胞情况以了解各组动物关节滑膜VEGF的表达水平。结果 HE染色切片显示通痹灵高剂量组滑膜炎症细胞浸润，巨噬样A型细胞增生和纤维组织增生的程度均比模型组低（P＜0．05或P＜0．01），并与正常组相仿（P＞0．05）。免疫组化染色切片显示通通痹灵和雷公藤高剂量组均能降低滑膜VEGF表达水平（P＜0．05）。结论 通痹灵有改善大鼠关节滑膜炎症，抑制滑膜VEGF表达作用，这可能是通痹灵治疗关节炎取得临床疗效的机理之一。     

清热化瘀凝胶对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠炎症细胞因子表达的影响

目的通过观察清热化瘀凝胶对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜及血清细胞因子表达的影响,探讨清热化瘀凝胶外敷治疗类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)的相关作用机制。方法 50只SD雌性大鼠随机分为清热化瘀凝胶外敷组、雷公藤多苷片口服组、扶他林外敷组、模型组和正常组,每组10只。观察大鼠关节肿胀度,关节病理切片,肝脏、肾脏组织病理切片,采用ELISA法检测血清及滑膜组织中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素1(Ang-1)和白介素1β(IL-1β)表达差异。结果清热化瘀凝胶外敷组CIA大鼠关节肿胀程度明显减轻;与模型组比较,清热化瘀凝胶组显著降低CIA大鼠血清中IL-1β(P 0. 01)、TNF-α(P 0. 001)和Ang-1(P 0. 01)的水平;滑膜组织中IL-1β(P 0. 001)、TNF-α(P 0. 01)、VEGF(P 0. 01)及Ang-1(P 0. 001)较模型组显著下降;关节病理切片显示清热化瘀凝胶可减少炎症细胞浸润、抑制滑膜组织增殖、延缓骨质破坏;肝脏、肾脏病理切片与正常组比较无异常变化。结论清热化瘀凝胶通过降低RA炎症细胞因子水平,抑制滑膜组织增殖,减少滑膜中血管新生和血管翳形成,进而控制RA病情,且安全性良好。     

草乌甲素对大鼠胶原诱导性关节炎的作用

探究草乌甲素对大鼠胶原诱导性关节炎的作用。方法 20只雄性SPF级SD大鼠随机选取5只作为对照组,剩下的15只SD大鼠用来建立胶原诱导性关节炎（CIA）模型,根据关节炎评分表评估CIA模型,建模成功后再随机分成模型组、低剂量草乌甲素治疗组（50 μg/kg）、高剂量草乌甲素治疗组（100 μg/kg）,此后每组大鼠连续给药干预30 d,第31天后处死大鼠。酶联免疫吸附法（ELISA）测定大鼠TNF-α、IL-6、IL-17、MMP-3水平,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）测定关节滑膜组织中MMP-3 mRNA表达水平,蛋白印迹法（Western Blot）检测关节滑膜组织中MMP-3蛋白水平,HE染色观察滑膜组织病理变化。结果 与对照组比较,模型组及草乌甲素治疗组TNF-α、IL-6、IL-17、MMP-3水平明显升高（P＜0.05）;同时,与模型组比较,草乌甲素治疗组TNF-α、IL-6、IL-17、MMP-3水平明显降低（P＜0.05）。与对照组相比,模型组MMP-3 mRNA、MMP-3蛋白表达水平明显升高;同时,与模型组比较,草乌甲素治疗组MMP-3 mRNA、MMP-3蛋白表达水平降低（P＜0.05）。组织病理结果显示草乌甲素治疗组的关节滑膜处的炎症细胞浸润及滑膜增生情况均减轻。结论 草乌甲素可以抑制炎症因子分泌和降低MMP-3的表达,对大鼠胶原诱导性关节炎具有一定的治疗作用     

HIF-1α、VEGF在CIA大鼠模型中的表达与意义

目的制备牛Ⅱ型胶原诱导性大鼠关节炎(collagen Ⅱ-induced arthritis,CIA)模型,探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在类风湿关节炎发病中的作用。方法50只SD大鼠,随机分为对照组与模型组。建立CIA模型,动态观察各项关节炎活动指标,于造模第21、28、35、42天取踝关节行HE染色及HIF-1α、VEGF免疫组化染色,分析两者在CIA中的相关性及与关节炎活动指标、滑膜病理学评分之间的关系。结果CIA大鼠关节滑膜层和滑膜下层均表达HIF-1α、VEGF二者呈明显正相关,r为0.75(P<0.01),第21天阳性表达量最高,随病程进展,表达逐渐下降,与滑膜病理学评分、滑膜增生评分及血管生成评分呈显著正相关,r分别为0.4、0.48、0.50(P<0.05),与炎症浸润评分无明显相关r为0.30(P<0.05)。结论HIF-1α可能通过调控一系列下游靶基因,如VEGF等,促进滑膜增生及血管生成,影响类风湿性关节炎(rheumatoi...     

穴位埋线对CIA大鼠IL-1β、TGF-α及MVD表达的影响

目的通过观察穴位埋线对大鼠胶元诱导型关节炎(CIA)模型血清IL-1β、TNF-α表达及其滑膜新生血管的影响,探讨其对类风湿关节炎(RA)的作用机理。方法建立Ⅱ型胶原诱导大鼠胶原性关节炎模型,造模成功的大鼠随机分为模型组、来氟米特组、穴位埋线治疗组、来氟米特+穴位埋线治疗组。ELISA法血清中IL-1β、TNF-α表达含量变化和SP免疫组织化学染色法滑膜组织MVD计数。结果与模型组比较,各治疗组血清中IL-1β、TNF-α及滑膜组织MVD均明显下降(P0.01),且各治疗组之间比较无统计学差异(P0.05)。结论穴位埋线可能通过降低大鼠血清IL-1β、TNF-α表达而发挥抑制关节滑膜血管新生作用,这可能是姜黄素治疗类风湿关节炎的作用机制之一。     

关节内注射不同浓度臭氧对类风湿关节炎大鼠TNF-α、TNFRⅠ和TNFRⅡ的影响

摘要：目的观察不同浓度臭氧(O3)对类风湿关节炎(RA)大鼠体内TNF-α、TNFRⅠ和TNFRⅡ的影响,阐述O3治疗类风湿
关节炎的机理。方法健康雄性Wistar大鼠48只,采用随机数字表法分为CON组、RA组、O2组、O3-10组、O3-20组、O3-30
组、O3-40组、O3-50组,每组6只。除空白对照组外,采用注射弗氏完全佐剂乳化的牛Ⅱ型胶原蛋白的方法建立大鼠RA模
型。造模后21 d,根据分组关节内注射纯氧和浓度分别为10、20、30、40、50 μg/ml的O3各1 ml,每周1次,共注射3周。治
疗前后测量双后肢足爪厚度。治疗结束后1周,检测大鼠血清和滑膜TNF-α、TNFRⅠ和TNFRⅡ的含量。结果治疗结束
后,O3-40 组大鼠足爪厚度减小,与RA组相比差异有统计学意义（P<0.01）。RA组、O2组、及O3治疗各组血清中TNF-α、
TNFRⅠ、TNFRⅡ含量差异无统计学意义（P>0.05）。与RA组相比,O3-40组、O3-50组大鼠滑膜TNF-α、TNFⅡ含量降低,
差异有统计学意义（P<0.01）。与RA组相比,O3-40组大鼠滑膜TNFRⅠ含量升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论关
节内注射O3可减轻RA大鼠的关节肿胀,浓度为40 μg/ml的O3最为明显,作用机制和O3可以降低滑膜内TNF-α、TNFRⅡ
的活性,上调TNFRⅠ的表达有关。     

晚期骨关节炎患者关节软骨细胞中HIF-1α和VEGF的表达

目的 研究低氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）在晚期骨关节炎（OA）患者关节软骨细胞中的表达,初步探讨HIF-1α在OA发病机制中的作用.方法 选取18例晚期膝骨关节炎（KOA）接受全膝关节置换术患者的膝关节软骨组织标本,根据取材部位分为KOA负重区组（磨损较重的股骨内髁）和KOA相对非负重区组（磨损较轻的股骨外髁）;另选取5例因股骨近端或股骨干肿瘤而截肢患者的正常膝关节软骨组织标本作为对照.HE和SaFRanin O染色下进行Mankin整体评分比较各组关节软骨组织退变程度;免疫组织化学染色检测关节软骨细胞HIF-1α和VEGF表达,比较各组HIF-1α和VEGF阳性细胞计数.结果 KOA负重区组Mankin整体评分为（12.36±0.84）,显著高于KOA相对非负重区组的（7.23±0.32）和对照组的（0.88±0.15）（P＜0.05）.免疫组织化学染色显示,KOA负重区组关节软骨细胞HIF-1α和VEGF阳性细胞计数分别为4.81±0.62和5.67±0.32,均显著高于KOA相对非负重区组和对照组（分别为2.37±0.68、4.87±0.33和0.78±0.14、2.02±0.45）（P＜0.05）.结论 晚期OA患者关节软骨细胞中HIF-1α和VEGF蛋白表达明显增加.提示上调靶基因VEGF表达是HIF-1α在OA发病中可能的调节机制.     

白喉乌头对RA大鼠B10细胞和炎症因子的影响

目的探讨白喉乌头对类风湿关节炎(RA)大鼠B10细胞和炎症因子的影响。方法将40只SPF级雌性Wistar大鼠均分为空白对照组、模型组、低剂量组、高剂量组与阳性对照组。除空白对照组外,其他组大鼠均建立类风湿关节炎模型,造模成功后,模型组生理盐水灌胃,低剂量和高剂量组每天22.5、45 mg/kg白喉乌头灌胃,阳性对照组每天1 mg/kg雷公藤灌胃,每次灌胃1 mL,每天1次,连续4周。HE染色观察各组大鼠踝关节滑膜组织病理学变化,免疫组化法检测各组滑膜组织B10细胞表面抗原CD19、CD5表达情况,ELISA法检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、IL-10、IL-12的水平。 结果模型组关节滑膜有水肿及大量纤维组织增生;低剂量组、阳性对照组有少量纤维组织增生;高剂量组轻微水肿,无纤维组织增生。模型组CD5、CD19蛋白表达较空白对照组增高(P＜0.05),低剂量组、高剂量组和阳性对照组CD5、CD19蛋白表达较模型组降低(P＜0.05)。模型组TNF-α、IL-6、IL-12、IL-1β水平较空白对照组增加(P＜0.05),低剂量组、高剂量组、阳性对照组TNF-α、IL-6、IL-12、IL-1β水平较模型组降低(P＜0.05)。结论白喉乌头可能通过调控B10细胞减少RA滑膜组织的炎症反应。     

养血通络方对类风湿关节炎超声关节评分、HIF-1α与Tfh细胞作用研究

摘要 目的 探讨养血通络方对类风湿关节炎超声关节评分、HIF-1α与Tfh细胞影响及其相关性研究。方法 选取2021年5月-2022年5月浙江省中西医结合医院风湿科门诊或病房RA患者60人，随机分为对照组及治疗组各30人，对照组给予甲氨蝶呤、来氟米特、叶酸治疗，治疗组在对照组基础上加用养血通络方治疗，比较两组患者治疗前后超声关节评分、DAS28评分，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法、流式检测技术检测两组患者治疗后外周血HIF-1α、Tfh细胞水平，运用SPSS 23.0软件进行分析比较，P＜0.05 有统计学差异。结果 治疗后两组患者超声关节评分、DAS28评分均下降，差异有统计学意义（P <0.05）；治疗组较对照组超声关节评分、DAS28评分下降更明显（P <0.05）。治疗组外周血HIF-1α、Tfh细胞水平较对照组均下降，差异有统计学意义（P <0.05）。两组治疗后HIF-1α、Tfh细胞水平呈正相关性（Pearson相关系数r值分别为0.482、0.409，P值均小于0.05）。两组RA患者疾病活动度DAS28评分与外周血HIF-1α、Tfh细胞水平呈正相关（治疗组r值分别为0.575、0.364，对照组r值分别为0.524、0.376，P值均小于0.05）。结论 养血通络方在降低RA疾病活动、改善关节滑膜血供方面具有优势。同时，HIF-1α与Tfh细胞之间存在一定相关性，且与疾病活动度DAS28评分存在关联性。     

骨关节炎与类风湿关节炎患者膝关节滑膜中血管内皮生长因子及血管形态的特征

目的：比较骨关节炎（osteoarthritis,OA）患者与类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者膝关节滑膜组织血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及滑膜血管形态的特征,分析VEGF与部分炎症指标的相关性。方法：将滑膜组织分为滑膜衬里层、血管周围及衬里下基质组织进行研究,采用原位杂交及免疫组织化学方法检测OA与RA患者膝关节滑膜组织各层VEGF mRNA及蛋白表达。将滑膜组织VEGF蛋白表达的平均光密度比值分别与患者外周血的部分实验室炎性指标进行相关性分析,并将VEGF表达结果进一步与关节镜下滑膜形态学所见进行相关性分析。应用视觉模拟表（visual analog scale,VAS）对关节镜下滑膜形态（血管密度、血管形态、扭曲或直行血管走行方式）进行评分;滑膜增生程度也采取VAS半定量分析方法,分为几乎无滑膜增生、少有、有及滑膜肥厚。结果：在滑膜衬里层、血管周围及衬里下层基质组织, VEGF mRNA及蛋白表达在OA与RA患者之间差异均有统计学意义（P<0.05）。OA衬里下层基质组织VEGF蛋白表达与红细胞沉降率呈正相关（r=0.58,P<0.05）;RA滑膜衬里层VEGF蛋白表达与血小板计数呈正相关（r=0.87,P<0.05）,RA衬里下层基质组织VEGF蛋白表达与C反应蛋白呈正相关（r=0.56,P<0.05）。此外,OA滑膜衬里层VEGF蛋白表达与直行血管走行方式呈正相关（P＜0.05）,OA衬里下层基质组织VEGF蛋白表达与滑膜纤维素增生程度呈正相关（P＜0.05）;RA滑膜衬里层VEGF蛋白表达与血管形态、弯曲血管走行方式及血管密度均呈正相关（P＜0.05）。结论：滑膜组织各层VEGF mRNA及蛋白表达在OA及RA患者之间均存在差异,VEGF表达与部分炎症指标及关节镜下滑膜血管形态呈正相关。