siRNA沉默Msi1表达对宫颈癌Hela细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人宫颈癌Hela细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法针对Msi1基因mRNA序列设计合成siRNA,转染人宫颈癌Hela细胞;实验分Msi1siRNA组、空白对照组、脂质体组及阴性对照组;通过RT-PCR法检测Msi1基因在mRNA水平的表达;分别利用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色试验、群体倍增时间及平皿克隆实验分析干扰Msi1基因对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制效应;通过细胞划痕实验观察干扰Msi1对细胞迁移能力的影响;利用Transwell小室实验观察干扰Msi1对细胞侵袭能力的影响。结果Msi1siRNA能有效抑制人宫颈癌Hela细胞中Msi1基因的表达;Msi1siRNA转染Hela细胞24、48、72h后,与其他各组比较,Msi1siRNA组Hela细胞的生长、增殖速度明显减缓（均P＜0.05）。空白对照组Hela细胞群体倍增时间为（20.18±0.01）h,而干扰Msi1基因处理后的Hela细胞,群体倍增时间延长至（35.68±0.04）h（P＜0.05）;同时平皿克隆实验结果发现,Msi1siRNA处理后的Hela细胞与其他各组相比,Hela细胞生长明显减慢（均P＜0.05）;细胞划痕实验和Transwell小室实验分别显示处理后的Hela细胞其迁移和侵袭能力均明显下降,与其他各组相比差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论沉默Msi1基因表达对人宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移及侵袭有负性调节作用。     

siRNA沉默CD44表达对人胆囊癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨siRNA沉默CD44表达对人胆囊癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法利用RNA干扰技术在人胆囊癌细胞株EH-GB1和GBC-SD中敲低CD44的表达;通过CCK8实验检测si-NC和si-CD44对人胆囊癌细胞株EH-GB1和GBC-SD增殖能力的影响;通过Transwell迁移实验检测其对迁移能力的影响;通过Transwell侵袭实验检测其对侵袭能力的影响。结果转染si-CD44对胆囊癌细胞GBC-SD和EH-GB1的增殖能力无明显影响（P＞0.05）,但能明显抑制胆囊癌细胞的迁移能力[si-NC组穿膜细胞数在人胆囊癌细胞株EH-GB1、GBC-SD分别为（193.7±3.９）、（193.7±7.８）个,明显大于si-CD44组的（88.7±5.8）、（110.3±5.５）个（t=15.12、10.42,均P＜0.05）]和侵袭能力[（si-NC组穿膜细胞数在人胆囊癌细胞株EH-GB1、GBC-SD分别为（175.3±7.5）、（188.0±9.0）个,明显大于si-CD44组的（85.3±3.7）、（73.0±3.6）个（t=10.74、11.84,均P＜0.05）]。结论CD44能够促进胆囊癌细胞的侵袭、迁移能力,可能作为胆囊癌治疗的生物靶点。     

应用siRNA敲低TPM3基因表达后对大鼠胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响

目的：探究原肌球蛋白3（tropomyosin alpha-3 chain,TPM3）在大鼠胰腺癌细胞中对其侵袭转移能力的影响并初步阐述其可能的分子机制。方法：（1）将70只大鼠随机分为手术组40只[将7,12-二甲基苯并蒽（7,12-dimethyl-1,2-benzanthracene,DMBA]植入大鼠胰腺被膜下后荷包缝合被膜）,假手术组15只（只对胰腺进行荷包缝合而后关腹,不置入DMBA）,阴性对照组15只（不做任何处理）,建立大鼠胰腺癌模型。（2）通过组织免疫组化染色的方法对差异蛋白TPM3进行验证。（3）通过机械分离和酶阶段消化法分离胰腺癌组织的方法获取大鼠胰腺癌细胞,体外传代培养获得纯度较高的细胞后,应用siRNA敲低大鼠胰腺癌细胞中TPM3基因的表达;通过RT-PCR技术检测其沉默效果。（4）通过Transwell实验和平板克隆实验分别对细胞的侵袭、迁移能力及生长增殖能力进行观察。结果：（1）经病理验证模型组有37.83%（14/37）形成胰腺癌,证明大鼠胰腺癌模型建立成功。（2）免疫组化验证胰腺癌组织中TPM3阳性率（92.8%）明显高于正常胰腺组织（6.7%）。（3）RT-PCR结果显示,转染TPM3-siRNA的细胞中TPM3的表达量（0.31±0.02）明显低于其余各组,脂质体组（0.45±0.02）,阴性对照组（0.45±0.02）,空白对照组（0.43±0.02）（P＜0.05）,其余各组之间TPM3表达量差异无统计学意义（P ＞0.05）。（4）转染TPM3-siRNA的细胞其侵袭[（161.63±4.94）个]、迁移能力[（206.87±4.21）个]及生长增殖能力[（51.5±2.327）个]较对照组明显降低[分别为（39.7±1.40）个,（67.27±1.76）个,（5.900±0.767）个]（P＜0.05）。结论：体外化学合成的TPM3-siRNA可有效的抑制大鼠胰腺细胞TPM3的表达,TPM3表达降低后其侵袭能力、迁移能力及生长增殖能力下降。     

沉默GOLPH3对人胃癌细胞迁移与侵袭能力的影响及机制

目的探讨沉默GOLPH3对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响及机制。方法设计3对靶向GOLPH3的shRNA,通过脂质体介导的方法转染人胃癌BGC-823细胞,采用qRT-PCR和Westernblot检测BGC-823细胞转染前后GOLPH3mRNA和蛋白表达水平的变化,划痕实验和侵袭实验法检测细胞迁移和侵袭能力的变化,qRT-PCR检测细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9mRNA的表达水平,明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性。结果与转染无关序列质粒的NC-shRNA组比较,GOLPH3-shRNA1、GOLPH3-shRNA2、GOLPH3-shRNA3组GOLPH3mRNA和蛋白表达水平均明显降低（均P＜0.05）;与GOLPH3-shRNA1组比较,GOLPH3-shRNA2组、GOLPH3-shRNA3组GOLPH3mRNA和蛋白表达水平均明显升高（均P＜0.05）;划痕后24h,GOLPH3-shRNA1组细胞愈合率（13.2±2.0）%,明显低于NC-shRNA组的（40.37±5.37）%（P＜0.05）;GOLPH3-shRNA1组细胞穿过基底膜的细胞数（67.0±7.2）个,明显少于NC-shRNA组（110.0±9.5）个（P＜0.05）;GOLPH3-shRNA1组细胞,MMP-2、MMP-9mRNA表达水平分别为0.49±0.04和0.69±0.04,均低于NC-shRNA组的1.00±0.08和1.00±0.04（均P＜0.05）;与NC-shRNA组相比,GOLPH3-shRNA1组Active-MMP-2、pro-MMP-9活性分别下降44.2%和29.9%（均P＜0.05）。结论沉默胃癌细胞BGC-823中GOLPH3的表达可抑制细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与降低MMP-2、MMP-9的表达及活性有关。     

SPAG5通过影响JAK2/STAT3信号通路磷酸化促进乳腺癌细胞的增殖和侵袭

目的：探究人类精子相关抗原5（sperm?associated antigen 5,SPAG5）对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响及分子机制。方法：采用qRT?PCR和Western blot筛选相应SPAG5高表达细胞株和低表达细胞株;分别设计并构建重组SPAG5敲减/过表达质粒（siRNA?SPAG5/OE?SPAG5）,通过慢病毒表达质粒系统,制备敲减/过表达SPAG5的稳定细胞株;采用CCK?8增殖实验和裸鼠成瘤实验,检测乳腺癌细胞增殖能力的变化;采用细胞划痕实验、Transwell细胞实验检测乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的变化;采用qRT?PCR和Western blot检测JAK2/STAT3通路和下游蛋白的变化;采用WP1066抑制JAK2/STAT3通路,检测细胞增殖和侵袭能力的变化。结果：相较于各自对照组,SPAG5敲减的 si1?MDA?MB?231组细胞SPAG5 mRNA 和蛋白水平显著降低,SPAG5过表达的OE?MCF?12A组细胞SPAG5 mRNA 和蛋白水平显著升高（P＜0.05）;同时,si1?MDA?MB?231组细胞的增殖、迁移、侵袭能力受到抑制,OE?MCF?12A组细胞得到增强（P＜0.05）;si1?MDA?MB?231组细胞的JAK2/STAT3通路磷酸化水平和下游蛋白表达受抑制（P＜0.05）,OE?MCF?12A组细胞的JAK2/STAT3通路磷酸化水平和下游蛋白表达水平提高（P＜0.05）;抑制JAK2/STAT3通路后SPAG5对乳腺癌细胞增殖和侵袭的促进作用消失（P＜0.05）。结论：SPAG5通过JAK2/STAT3信号通路增强乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力。     

QSOX1在子痫前期胎盘中的表达及其对滋养细胞凋亡和增殖功能的影响

目的：探究静息巯基氧化酶-1（quiescin sulfhydryl oxidase 1,QSOX1）在子痫前期（preeclampsia,PE）胎盘中的表达情况,QSOX1对滋养细胞的生物学行为的影响,及其参与PE发生的潜在机制。方法：收集2015年11月至2016年12月于重庆医科大学附属第一医院产科住院行选择性剖宫产术的孕妇的胎盘组织,包括正常足月妊娠组（31 例）和PE组（35例）。正常氧条件下,人绒毛外滋养细胞系（human transformed primary extravillous trophoblast cell line,HTR8/SVneo）细胞分为小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）阴性对照组（siControl）和QSOX1特异siRNA干扰组（siQSOX1）,每组6例样本,实验重复3次。缺氧条件下,HTR8/SVneo细胞分为4组,分别为正常氧处理组（0 h）、缺氧6 h处理组（6 h）、缺氧12 h处理组（12 h）和缺氧24 h处理组（24 h）,每组各6例样本,实验重复3次。采用Western blot法检测正常孕妇与PE孕妇胎盘中QSOX1的差异表达以及HTR8/SVneo细胞缺氧处理后QSOX1和缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）的蛋白表达。利用siRNA技术干扰HTR8/Svneo细胞QSOX1的表达,用Western blot法检测转染细胞活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase,Cleaved caspase）相关蛋白和细胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表达水平。并利用流式细胞术检测转染细胞凋亡,比色法检测转染细胞的增殖情况。结果：QSOX1在PE胎盘中的表达明显高于正常胎盘（0.955±0.285 vs. 3.921±0.960）（P=0.001）。缺氧处理HTR8/SVneo细胞后QSOX1和HIF-1α的表达均明显升高(1.183±0.160 vs. 3.987±0.098;1.051±0.444 vs. 1.912±0.118）（均P=0.000）。下调QSOX1后HTR8/SVneo细胞Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9蛋白表达明显减少（2.940±0.514 vs. 1.075±0.121;9.223±1.230 vs. 1.011±0.019）（P=0.004;P=0.000）,而CyclinD1的蛋白表达增加（1.851±0.972 vs. 4.189±0.399）（P=0.018）。QSOX1干扰后HTR8/SVneo细胞凋亡能力减低[（21.007±2.214）% vs. （10.057±0.388）％]（P=0.001）,增殖能力增加（0.389±0.162 vs. 1.401±0.059）（P=0.020）。结论：QSOX1高表达引起滋养细胞凋亡增加和增殖减少,可能参与PE的发生。     

臭椿酮对非小细胞肺癌H460的作用和机制研究

目的 探究臭椿酮（ailanthone）抗非小细胞肺癌的作用及分子机制。 方法 CCK8检测ailanthone对H460非小细胞肺癌增殖的影响;Cultrex细胞迁移和侵袭法检测ailanthone对细胞迁移和侵袭的作用;细胞免疫荧光检测ailanthone对cyclin d1表达的影响;WB检测ailanthone对细胞蛋白激酶B（Akt）、蛋白酪氨酸激酶Src磷酸化和细胞周期蛋白D1（cyclin d1）蛋白表达的影响。结果 CCK8结果表明,于对照组相比,不同浓度（0.2、0.4、0.6、0.8和1.0μM）的ailanthone处理下H460细胞的增殖能力明显受抑制（P<0.05或P<0.001）;Cultrex 96孔细胞迁移法检测结果显示,于对照组（1.00±0.07）相比,ailanthone组（0.35±0.03,P＜0.01）明显抑制细胞迁移;Cultrex BME细胞侵袭法表明,ailanthone组（0.27 ± 0.04,P＜0.001）与对照组（1.00 ± 0.07）比明显抑制细胞侵袭;细胞免疫荧光实验显示,ailanthone处理细胞（14.67 ±1.20,P＜0.001）与对照组（50.00 ±1.73）比,明显抑制了Cyclin d1阳性细胞数;WB结果显示,H460细胞在ailanthone处理后Akt和Src的磷酸化明显降低,同时cyclin d1的表达明显下降。结论 ailanthone抑制非小细胞肺癌H460的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能是抑制Akt的磷酸化抑制细胞的迁移和侵袭,同时抑制Src的磷酸化抑制细胞周期相关蛋白cyclin d1的表达。     

慢病毒介导siRNA干扰CEP55表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响

本文通过慢病毒介导siRNA干扰卵巢癌SKOV3细胞中心体相关蛋白55(CEP55)表达,以观察其对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为的影响。实验分为CEP55组(转染CEP55 siRNA慢病毒)、阴性对照组(转染不含CEP55 siRNA的慢病毒)和空白对照组(不处理)。结果显示:CEP55 siRNA慢病毒转染效率为(89.4±4.7)%,CEP55组CEP55的mRNA和蛋白表达显著降低(P＜0.05),第12、24、36、48、72 h时的OD(570)值显著降低(P＜0.05),细胞凋亡率[(23.7±6.9)%]显著增加(P＜0.05),穿膜细胞数目[(11.3±4.1)/个]明显减少(P＜0.05),细胞迁移距离[(245.8±33.7)μm]明显减小(P＜0.05)。提示慢病毒介导siRNA干扰CEP55表达可显著抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、促进其凋亡、降低其侵袭和迁移能力。     

RNAi沉默Plk1对胰腺癌细胞系AsPC-1侵袭转移的影响

目的 探讨RNAi沉默Plk1基因表达与胰腺癌细胞侵袭转移能力的关系.方法 根据Plk1基因特点,设计并用化学方法合成了4个小干扰核糖核酸分子（siRNA） （shplk 1-1、shplk 1-2、shplk1-3、shplk1-4）,脂质体转染法将短链siRNA转入AsPC-1细胞;细胞分为：未处理组为对照组、空质粒组、shplk1-1组、shplk1-2组、shplk1-3组、shplk1-4组.采用RT-PCR和Western blot法检测siRNA对Plk1表达的抑制效果;采用Transwell法检测转染后细胞侵袭能力;采用划痕实验检测转然后细胞迁移能力.结果 RT-PCR和Western blot结果示所设计的4个siRNA均能明显抑制AsPC-1细胞Plk1 mRNA水平,以shplk1-3效果最好,与对照组、空质粒组及其他三组比较,转染shplk1-3组Hk1 mRNA和蛋白的表达水平显著降低（P＜0.01）;以转染shplk1-3处理AsPC-1细胞后与对照组、空质粒组比较,Transwell侵袭实验证实：细胞转染24 h后,正常对照组、空质粒组和shplk1-3组穿过人工基底膜的侵袭细胞数分别为（195±16）、（176±13）、（83±5）个,侵袭能力明显降低,差异有高度统计学意义（P＜0.01）;细胞划痕实验证实：shplk 1-3组迁移能力明显降低.结论 抑制胰腺癌细胞Plk1基因,侵袭迁移能力明显降低,能够为胰腺癌的治疗提供新的策略.     

敲低同源盒A6（HOXA6）抑制HCT116细胞增殖、迁移和侵袭

目的：探讨抑制同源盒A6（homeobox A6,HOXA6）的表达对HCT116结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：构建重组干扰质粒（shRNA1,2,3,4-HOXA6）和阴性对照质粒（shRNA-NC）,脂质体转染,荧光显微镜、RT-PCR和Western blot检测转染效率和表达情况。CCK-8法和克隆形成检测增殖,Transwell检测迁移和侵袭。Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达。结果：荧光显微镜显示各组转染效率均为30%左右;RT-PCR和Western blot结果显示各干扰组HOXA6 mRNA（P=0.003）和蛋白（P=0.000）的表达均低于shRNA-NC组,其中shRNA1-HOXA6组最低（P=0.000）。CCK-8结果显示shRNA1-HOXA6组的吸光度值明显低于shRNA-NC组（P=0.005）;克隆形成结果显示shRNA1-HOXA6组（132±45）克隆形成数较shRNA-NC组（353±45）明显减少（P=0.004）;Transwell迁移和侵袭实验显示shRNA1-HOXA6组[（134±28）、（60±4）]穿出细胞数较shRNA-NC组[（276±94）、（168±50）]明显减少（P=0.025、P=0.008）。Western blot实验显示shRNA1-HOXA6组E-cadherin（0.490±0.025）的表达较shRNA-NC组（0.326±0.032）明显升高（P=0.003）,而N-cadherin（0.112±0.016）和Vimentin（0.886±0.033）较shRNA-NC组[（0.147±0.013）、（1.159±0.040）]明显降低（P=0.037、P=0.001）。结论：敲低HOXA6表达能显著抑制结直肠癌HCT116细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

下调泛素样含PHD和环指域1基因的表达对喉癌Hep-2细胞增殖侵袭能力的影响

目的 探讨下调泛素样含PHD和环指域1(ubiquitin-like protein containing PHD and RING finger domains 1,UHRF1)基因在喉癌Hep-2细胞中的表达后对其增殖,凋亡,侵袭迁移能力的影响.方法 实验分为空白组,阴性对照组和干扰组.利用UHRFl-siRNA干扰UHRF1在喉癌Hep-2细胞中的表达,采用qRT-PCR、Western blot检测UHRF1的表达变化.采用MTT法、流式细胞术、Transwell实验检测下调UHRF1表达后Hep-2细胞的增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的变化.Western blot检测下调UHRF1表达后Hep-2细胞内Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达的变化情况.结果 与空白组和阴性对照组相比干扰组下调UHRF1的表达后可明显抑制喉癌Hep-2细胞的增殖能力(P ＜0.001).空白组,阴性对照组,干扰组凋亡率分别为(5.47±2.77)％,(3.95±0.66)％,(18.95±1.10)％,干扰组凋亡率明显提高(P ＜0.001).空白组,阴性对照,干扰组每视野侵袭细胞数分别为(213.7 ±13.1),(221.3±10.3),(97.7±7.5),干扰组侵袭细胞数明显降低(P＜0.001).空白组,阴性对照,干扰组每视野迁移细胞数分别为(230.7±5.5),(222.7±11.2),(111.7±7.6),干扰组迁移细胞数明显降低(P ＜0.001).干扰组细胞Bax蛋白表达上调(P ＜0.001),Bcl-2蛋白表达下调(P ＜0.001),MMP-2蛋白、MMP-9蛋白表达下调(P ＜0.001).结论 在喉癌Hep-2细胞中下调UHRF1的表达后可明显抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞的侵袭迁移能力.     

中期因子在绒毛膜癌中的表达及其与临床病理特征的关系研究

目的分析中期因子（MK）在绒毛膜癌（以下简称绒癌）中的表达情况,探讨MK表达与绒癌病理特征的关系。方法培养人绒癌细胞株JEG-3、JAR,选择对数生长期的JEG-3、JAR细胞进行实验,采用Matrigel体外侵袭试验检测细胞体外侵袭能力,RT-PCR法检测细胞MKmRNA表达水平,Westernblot法检测MK蛋白表达水平。选取32例绒癌患者的绒癌组织标本,采用免疫组织化学法检测绒癌组织MK蛋白表达情况,分析其与临床病理特征的关系,包括患者年龄、肿瘤临床分期、国际妇产科联盟（FIGO）预后评分等。结果JEG-3细胞穿膜数明显多于JAR细胞（P＜0.05）,即JEG-3细胞体外侵袭能力强于JAR细胞。培养12、24、48h时,JEG-3细胞MKmRNA表达水平均高于低侵袭性JAR细胞（均P＜0.05）。JEG-3细胞MK蛋白表达水平高于JAR细胞（P＜0.05）。绒癌组织中MK蛋白表达阳性率在＜40岁与≥40岁患者间的差异无统计学意义（P＞0.05）,临床分期为Ⅲ~Ⅳ期的患者高于Ⅰ~Ⅱ期的患者（P＜0.05）,FIGO预后评分高危的患者高于低危的患者（P＜0.05）。结论MK在绒癌组织中高表达,且与绒癌细胞侵袭能力有关,其表达阳性率随绒癌分期的升高而增高,可作为判断绒癌恶性程度和预后的重要生物标志物。     

沉默PLK1基因表达对肺腺癌H1792细胞肿瘤生物学行为影响的研究

［摘要］ 〖HTH〗目的〖HTSS〗〖KG*2〗探讨PLK1表达下调对肺腺癌H1792细胞肿瘤生物学行为的影响,并分析相关机制。 〖HTH〗方法〖HTSS〗〖KG*2〗将PLK1 siRNA和control siRNA转染肺腺癌H1792细胞48 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）法检测肺腺癌H1792细胞PLK1 mRNA表达水平;采用Western blot法检测H1792细胞中PLK1、E-cadherin、Vimentin蛋白表达;再通过流式细胞术检测肺腺癌H1792细胞检测周期分布的变化情况;Transwell实验检测H1792细胞侵袭能力的改变。 〖HTH〗结果〖HTSS〗〖KG*2〗PLK1 siRNA组PLK1 mRNA表达水平显著低于control siRNA组（P＜0.05）。PLK1 siRNA组PLK1蛋白和 Vimentin蛋白表达显著低于control siRNA组,E-cadherin蛋白表达显著高于control siRNA组（P＜0.05）。PLK1 siRNA组G2/M期细胞比例显著高于control siRNA组,S期细胞比例显著低于control siRNA组（P＜0.05）。siRNA组穿膜细胞数显著少于control siRNA组（P＜0.05）。 〖HTH〗结论〖HTSS〗〖KG*2〗PLK1在肺腺癌的生长和侵袭转移中发挥重要作用。     

siRNA沉默CEACAM1基因对人胶质瘤SHG44细胞生物学行为的作用

目的 探讨CEACAM1基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对胶质瘤SHG44细胞增殖、体外迁移和侵袭能力的影响. 方法 设计并化学合成针对CEACAM1的3对siRNA,脂质体法瞬时转染SHG44细胞.Western blot检测转染后细胞中CEACAM1、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达水平变化.CCK-8法检测转染后的细胞增殖情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期的变化.通过Transwell小室迁移和侵袭实验,观察下调CEACAM1对SHG44细胞体外迁移和侵袭能力的影响.结果 三组特异性siRNA转染48 h后,Western blot的结果显示,3个siRNA转染组CEACAM1蛋白水平均低于正常对照组和阴性对照组(P＜0.01),以CEACAM1-siRNA3干扰效果最为明显.后续实验表明,与两个对照组相比较,CEACAM1-siRNA组的细胞增殖减慢,β-catenin和Cyclin D1表达水平明显减少(P＜0.05).Transwell小室迁移和侵袭实验表明CEACAM1下调后的SHG44细胞迁移和侵袭能力较正常对照组及阴性对照组明显降低(P＜0.05). 结论 CEACAM 1-siRNA能有效抑制人胶质瘤SHG44细胞CEACAM1蛋白的表达,并抑制细胞增殖,降低细胞的体外迁移及侵袭能力.     

siRNA沉默Gankyrin基因对喉鳞癌Hep-2细胞生物学行为的影响

目的:观察小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默Gankyrin基因对喉鳞癌Hep-2细胞的生物学行为影响?方法:用siRNA沉默喉鳞癌Hep-2细胞中的Gankyrin基因,运用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白印迹法(Western blot)技术检测转染前后Gankyrin mRNA及蛋白的表达?采用CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,细胞划痕损伤实验和Transwell小室实验检测细胞迁移能力,Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测Gankyrin下调后p53蛋白的表达?结果:qRT-PCR和Western blot结果显示,Gankyrin siRNA组Gankyrin mRNA和蛋白的相对表达量均低于对照siRNA组和未处理组(P < 0.001)?CCK-8法显示Gankyrin siRNA组细胞增殖速度明显下降(P < 0.001)?流式细胞仪检测结果表明,Gankyrin siRNA组细胞凋亡率[(7.70 ± 1.12)%]明显高于对照siRNA组[(2.34 ± 0.32)%]和未处理组[(1.82 ± 0.29)%],差异有统计学意义(P < 0.001);与两对照组相比,Gankyrin siRNA组G1期比例增加,S期比例减少,差异有统计学意义 (P < 0.001)?细胞划痕损伤实验和Transwell小室实验显示Gankyrin siRNA组的细胞迁移能力明显减弱(P < 0.01);Matrigel侵袭实验显示Gankyrin siRNA组细胞侵袭能力与对照siRNA组和未处理组比较,差异无统计学意义(P > 0.05)?Gankyrin表达下调增加了Hep-2细胞中p53蛋白的表达,差异有统计学意义(P < 0.001)?结论:Gankyrin表达下调能抑制Hep-2细胞的增殖和迁移,可能与细胞凋亡?细胞周期改变及p53的表达密切相关?     

miRNA⁃199a⁃5p在热损伤人皮肤成纤维细胞中的表达及其功能研究

目的：观察热损伤人皮肤成纤维细胞中miRNA?199a?5p表达量的变化，以及对皮肤成纤维细胞增殖、迁移、侵袭功能的影响。方法：分别用人皮肤成纤维细胞株（HSF）隔水52 ℃水浴30 s、60 s制造细胞热损伤模型，对比观察细胞热损伤状态；用四甲基偶氮唑盐（MTT）检测热损伤24 h、48 h后细胞的增殖率；用qRT?PCR检测热损伤24 h、48 h后细胞miRNA?199a?5p表达量的变化情况；用划痕和Transwell测试细胞的迁移、侵袭功能；用模拟物提高热损伤细胞中miRNA?199a?5p的表达量，检测热损伤细胞的增殖和侵袭情况。结果：52 ℃ 30 s可以很好地制造人皮肤成纤维热损伤模型；与对照组比较，热损伤后miRNA?199a?5p表达量下调［24 h，（2.67±0.35）%，P＜0.001；48 h，（18.42±0.44）%，P＜0.001］，细胞增殖显著受到抑制［24 h，（17.10±3.21）%，P＜0.002；48 h，（25.93±1.74）%，P＜0.001］，细胞的迁移功能显著下降［（35.35±7.07）%，P＜0.001］，侵袭功能亦被显著抑制［（57.14±9.52）%，P＜0.007］。通过模拟物提高热损伤细胞中miRNA?199a?5p的表达量后，细胞的增殖显著上调［（136.55±6.14）%，P＜0.003］，细胞的侵袭能力增强［（196.88±15.63）%，P＜0.003］。结论：热损伤人皮肤成纤维细胞中miRNA?199a?5p的表达量与细胞增殖、迁移和侵袭正相关，提高热损伤细胞中miRNA?199a?5p的表达量可以帮助热损伤细胞快速转归。     

PLK1基因与胃癌AZ521细胞肿瘤生物学行为的研究

［摘要］ 目的观察抑制PLK1基因表达后对胃癌AZ521细胞生长增殖和侵袭转移的影响,探讨PLK1基因作为胃癌基因治疗靶点的可行性及相关机制。 方法应用siRNA干扰技术抑制PLK1基因表达,采用实时荧光定量PCR法检测胃癌AZ521细胞PLK1 mRNA表达水平;采用Western blot法检测AZ521细胞中PLK1、MMP-9、E-cadherin、Vimentin蛋白表达;应用流式细胞仪检测AZ521细胞周期分布的变化;采用Transwell实验检测AZ521细胞侵袭能力的影响。 结果siRNA组PLK1 mRNA表达水平明显低于control组（P＜0.05）。siRNA组PLK1、Vimentin、MMP-9蛋白表达明显低于control组,E-cadherin蛋白表达明显高于control组（P＜0.05）。siRNA组G2/M期细胞细胞表达量明显高于control组,S期细胞表达量明显低于control组（P＜0.05）;2组G0/G1期细胞表达量差异无统计学意义（P＞0.05）。siRNA组AZ521细胞穿膜细胞数明显少于control组（P＜0.05）。 结论PLK1 siRNA可以阻断PLK1的表达和功能,PLK1在胃癌的生长和侵袭转移中发挥了重要作用。     

特异性siRNA沉默TDGF-1基因表达对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响

目的 探讨RNA干扰（RNA interference,RNAi）沉默TDGF-1基因表达对乳腺癌细胞侵袭的影响.方法 根据TDGF-1基因序列特点设计3个小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）后,转染人乳腺癌MDA-MB-468细胞,用荧光实时定量RT-PCR筛选出效果最好的siRNA.以该siRNA转染处理乳腺癌MDA-MB-468细胞后,分别采用实时定量RT-PCR和western blot检测TDGF-1基因mRNA和蛋白水平,以划痕试验方法评测癌细胞迁移能力;用Boyden模型观察癌细胞侵袭能力.结果 根据TDGF-1基因序列特点设计的3个siRNA均能抑制TDGF-1基因mRNA水平,以S1效果最好.S1 siRNA转染组TDGF-1 mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性（P＜0.001,P＜0.001）.体外试验发现,TDGF-1 siRNA转染可有效抑制乳腺癌细胞集落生长、侵袭和迁移能力,且与浓度相关（P＜0.005,P＜0.005,P＜0.005）.结论 TDGF-1在乳腺癌细胞迁移、侵袭中起着重要的作用;采用TDGF-1 siRNA转染可抑制乳腺癌细胞侵袭.     

MTHFD2对人肝癌细胞凋亡的影响及其作用机制研究

目的探讨亚甲基四氢叶酸脱氢酶2（MTHFD2）对人肝细胞癌（HCC）细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将对数生长期的HepG2和SMMC-7721细胞随机分为siMTHFD2#1组、siMTHFD2#2组和siCtrl组3组,分别转染MTHFD2-siRNA#1、MTHFD2-siRNA#2及Ctrl-siRNA。通过siRNA技术构建MTHFD2和p53正向凋亡调节因子（Puma）敲低的HCC细胞模型,分为siMTHFD2+siPuma组（共转染MTHFD2-siRNA和Puma-siRNA）、siMTHFD2组（转染MTHFD2-siRNA）、siPuma组（转染Puma-siRNA）、siNC组（转染阴性对照剂Ctrl-siRNA）。采用流式细胞术和Westernblot法检测敲低MTHFD2表达后细胞凋亡率和凋亡相关信号通路的蛋白表达水平变化情况。通过CCK-8实验和流式细胞术进一步分析MTHFD2和Puma共敲减后细胞增殖能力和凋亡率的变化情况。结果HepG2和SMMC-7721细胞中siMTHFD2#1组和siMTHFD2#2组的MTHFD2表达水平均明显低于siCtrl组（均P＜0.01）。HepG2和SMMC-7721细胞中siMTHFD2#1组和siMTHFD2#2组的细胞凋亡率均明显高于siCtrl组（均P＜0.01）。与siCtrl组比较,siMTHFD2#1组和siMTHFD2#2组HepG2和SMMC-7721细胞的CleavedCaspase3/ProCaspase3、CleavedCaspase7/ProCaspase7比值均明显升高,siMTHFD2#1组和siMTHFD2#2组SMMC-7721细胞的CleavedPARP/ProPARP比值明显升高（均P＜0.05）。与siCtrl组比较,SMMC-7721细胞siMTHFD2#1组和siMTHFD2#2组中Puma表达水平均明显升高（均P＜0.01）,3组Bim、Bid、Bad、Bik、Bak、Bax表达水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。在96h的时间点,siMTHFD2组OD值低于siNC组,而siMTHFD2+siPuma组的OD值则明显高于siMTHFD2组（均P＜0.01）。siMTHFD2组凋亡率高于siNC组,siMTHFD2+siPuma组则明显低于siMTHFD2组（均P＜0.01）。结论抑制MTHFD2的表达能够诱导人HCC细胞发生凋亡,是通过上调Puma表达水平来实现的。     

HtrA4在子痫前期孕妇胎盘组织中的表达及与滋养细胞缺氧的相关性

目的观测高温必需因子A4（HtrA4）在子痫前期（PE）孕妇胎盘组织中的表达情况,探讨其与滋养细胞缺氧和缺氧诱导因子-1琢（HIF-1琢）表达的相关性。方法获取基因表达综合（GEO）数据库中PE孕妇胎盘组织芯片数据,分析差异表达基因（DEGs）及HtrA4表达水平。采用Westernblot和qRT-PCR法验证HtrA4在PE孕妇胎盘组织中的表达水平。Bewo滋养细胞经HtrA4小干扰RNA（siRNA）（HtrA4siRNA干扰组）或阴性对照siRNA（阴性对照组）转染后,分别采用MTT法和Transwell法检测细胞增殖和侵袭活性。按1×106个/孔接种细胞,在37℃、20%O2、5%CO2条件下常规培养48h后,分为HIF-1琢激活组、低氧组和对照组。HIF-1琢激活组：采用含200滋MHIF-1琢激活剂氯化钴的细胞培养基,37℃、20%O2、5%CO2继续培养24h;低氧组：37℃、1%O2、5%CO2继续培养24h;对照组：继续常规培养24h。另设立缺氧条件下的HIF-1琢抑制组,即细胞经HIF-1琢siRNA干扰后,按1×106个/孔接种细胞,常规培养48h,再在37℃、1%O2、5%CO2条件下培养24h。分析HtrA4在缺氧条件下表达量及与HIF-1琢表达的相关性。结果共得到13个DEGs。HtrA4在芯片数据和PE孕妇胎盘组织中表达水平均上调（均P＜0.05）。与阴性对照组比较,HtrA4siRNA干扰组侵袭活性下降（P＜0.05）,但各组间24、48和72h细胞增殖活性比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。与对照组比较,HIF-1琢激活组和低氧组HtrA4和HIF-1α蛋白和mRNA表达水平均上调（均P＜0.05）。与低氧组比较,HIF-1琢抑制组HtrA4和HIF-1琢蛋白和mRNA表达水平均下调（均P＜0.05）。Pearson相关分析发现各组细胞HtrA4与HIF-1琢mRNA表达水平呈正相关（r=0.87,P＜0.01）。结论HtrA4在PE孕妇胎盘组织中表达上调,能促进滋养细胞的侵袭能力,其表达水平与细胞缺氧及HIF-1α表达水平相关,可能在PE发展中起重要作用。