热带假丝酵母菌致尿路感染1例

<正>患者,男,75岁。主因间断发热伴尿频、尿痛7周于2011年3月11日入院。患者于入院7周的,因左侧股骨颈骨折行髓内针固定术,术前曾行保留导尿,术后出现发热伴尿频、尿痛、尿道烧灼感等,体温38.7℃,尿白细胞(++),抗生素治疗1周后,好转出院,上述症状间断发作,遂来我院入院体检:T37.8℃,P 86次/min,R 20次/min,BP 160/90 mmHg。神清,体质消瘦,腹部耻骨联合上轻度压痛,余无阳性体征。实验室检查:血常规、肝肾功能均正常,尿白细胞(+++),空腹血精     

两种中药复方体外对白假丝酵母菌生物膜形成的影响

目的：观察两种中药复方体外对白假丝酵母菌生物膜形成的影响。方法：采用结晶紫染色法和MTT法评价白假丝酵母菌生物膜的体外生长动力学,微量稀释法检测两种中药复方对白假丝酵母菌悬浮菌及其生物膜的抑制作用以及药物包被对白假丝酵母菌生物膜形成作用。结果：生物膜内白假丝酵母菌数量随培养时间延长而增加。两种中药复方对白假丝酵母菌悬浮菌的最低抑菌浓度50%（MIC50）分别为3.725、3.925mg/mL,对生物膜的SMIC50与SMIC80分别是3.725和7.725mg/mL,3.925和7.85mg/mL。两种中药复方包被浓度分别在3.322、2.269mg/mL以上时对其生物膜形成的抑制作用有显著性。结论：两种中药复方对体外白假丝酵母菌生物膜具有明显的抑制作用。     

两性霉素B对假丝酵母菌与乳杆菌生物膜作用的研究

目的 研究两性霉素B对假丝酵母菌与乳杆菌生物膜的作用。方法 选取2022年7月至8月在首都医科大学附属北京妇产医院就诊患者阴道来源的4株假丝酵母菌及4株乳杆菌,测定其不同时期生物膜形成能力,并观察其生物膜形成情况。分别测定两性霉素B对假丝酵母菌及乳杆菌的最小抑菌浓度（MIC）及最小抑制生物膜浓度（MBIC）,并在扫描电镜下观察两性霉素B对上述菌生物膜的作用。结果 白假丝酵母菌及卷曲乳杆菌生物膜形成能力48 h高于24 h(P<0.05),7号乳杆菌生物膜形成能力48 h高于72 h(P<0.05)。两性霉素B对白假丝酵母菌的MIC值为0.125 00μg/ml;1、3、4号假丝酵母菌在两性霉素B浓度为2μg/ml时生物膜形成能力低于阳性对照组（两性霉素B浓度为0μg/ml时）（P<0.05）,均与后续各浓度差异无统计学意义（P>0.05）,两性霉素B对白假丝酵母菌的MBIC值为2μg/ml。两性霉素B对卷曲乳杆菌无抑制作用;除7号乳杆菌在两性霉素B浓度为1、8、16μg/ml时生物膜形成能力高于阳性对照组（P<0.05）外,其余各卷曲乳杆菌在各浓度生物膜形...     

盐酸氨溴索对体外白色假丝酵母菌成熟生物膜的抑制作用及其形态学的影响

目的研究盐酸氨溴索对体外白色假丝酵母菌(Candida albicans)成熟生物膜(biofilm,BF)的影响。方法用微孔板法建立体外白色假丝酵母菌ATCC 90028 BF模型;采用甲基四氮盐(the abated tetrazolium salt,XTT)减低法定量评价盐酸氨溴索对白色假丝酵母菌成熟BF的抑制作用;银染后,倒置显微镜下观察该药对白色假丝酵母菌成熟BF的形态学影响。结果在96孔微量细胞培养板上成功建立白色假丝酵母菌BF模型;1.25、2.5、5、7.5 mg/ml的盐酸氨溴索作用白色假丝酵母菌成熟BF 12 h后,XTT减低法D(450)值分别为(0.63±0.05)、(0.52±0.08)、(0.31±0.05)和(0.11±0.03),分别与空白对照组(0.71±0.07)比较,差异有显著性(P<0.05);0.625 mg/ml的盐酸氨溴索作用白色假丝酵母菌成熟BF后,D(450)值为(0.67±0.04),与空白对照组比较,差异无显著性(P>0.05);不同浓度的盐酸氨溴索作用白色假丝酵母菌成熟BF,组间比较,均有显著性差异(P<0.05)。结论盐酸氨溴索对体外白色假丝酵母菌成熟...     

热带假丝酵母菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及临床应用初步评价

目的建立、优化快速检测临床标本中热带假丝酵母菌的实时荧光定量PCR方法 ,并对其临床应用进行初步评价。方法用自行设计的高效引物、探针检测5种临床标本中的热带假丝酵母菌,对该方法的敏感性、特异性进行评价,并与真菌培养法进行比较。结果检测临床标本中热带假丝酵母菌的灵敏度可达10 copies/ml,与人类基因组、细菌及其他真菌无交叉阳性反应。与真菌培养法的检测一致性好(Kappa值为0.916,P<0.01)。结论实时荧光定量PCR检测热带假丝酵母菌灵敏度高、特异性强,可直接用于各种临床标本中热带假丝酵母菌的检测,而且可大大缩短报告时间,为临床诊断提供可靠依据。     

鱼腥草素钠诱导临床耐药白假丝酵母菌生物膜细胞凋亡

目的 观察鱼腥草素钠对临床耐药白假丝酵母菌生物膜细胞凋亡的影响。方法 利用DAPI染色观察耐药白假丝酵母菌生物膜细胞核的形态;利用FITC-VAD-FMK染色观察耐药白假丝酵母菌生物膜细胞metacaspase活性;分别在JC-1染色和DCFH-DA染色下,采用流式细胞仪检测耐药白假丝酵母菌生物膜细胞内线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;利用Annexin Ⅴ-FITC/PI染色和流式细胞仪检测耐药白假丝酵母菌生物膜细胞的凋亡率。结果 一定浓度的鱼腥草素钠作用下,临床耐药白假丝酵母菌生物膜细胞内ROS水平、生物膜细胞凋亡率、metacaspase酶活性明显升高,MMP水平明显降低,生物膜细胞核出现碎裂和皱缩。结论 鱼腥草素钠能够诱导耐药白假丝酵母菌生物膜细胞凋亡。     

RVVC阴道假丝酵母菌及其药敏情况分析

目的检测引起RVVC的阴道假丝酵母菌的构成及其药敏谱。方法应用科玛嘉假丝酵母菌显色培养基和API20CAUX鉴定分离菌株,应用纸片扩散法进行体外药敏试验。结果培养分离的123株菌中白假丝酵母菌占78．5％,光滑假丝酵母菌占14．8％,热带假丝酵母菌占3．0％,近平滑假丝酵母菌占2.3％、克柔假丝酵母菌占1．4％：123株白假丝酵母菌药敏率由高到低依次是制霉菌素、克霉唑、伊曲康唑、咪康唑、氟康唑、酮康唑。结论不仅根据药敏结果实施个体化治疗方案,还要继续加深RVVC发病机制的认识,才有可能更有效治疗RVVC。     

假丝酵母菌阴道病

目的 外阴阴道假丝酵母菌病不同治疗方法的疗效.方法 选择外阴阴道假丝酵母菌病患者,研究患者的感染途径以及患病机制.结论 治疗原则是积极去除假丝酵母菌阴道炎的诱因;规范化应用抗真菌药物.     

假丝酵母菌阴道病

假丝酵母菌阴道病(vaginal carididiasis)曾被称为霉菌性阴道炎.是由假丝酵母菌感染引起的阴道炎症,是最常见的妇女阴道炎症之一,常合并外阴炎同时存在,也称外阴阴道假丝酵母菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC).外阴阴道假丝酵母菌病是妇女最常见的外阴阴道炎症,也称外阴阴道念珠菌病,多由白色假丝酵母菌所致.正常情况下,妇女阴道内有此菌寄生,但菌量少呈酵母相,并不引起症状,当全身或阴道内菌群失调、妊娠、糖尿病、大量应用免疫抑制剂及广谱抗生素,阴道局部组织细胞免疫力降低时,假丝酵母菌大量繁殖呈菌丝相时才出现症状.     

光滑假丝酵母菌氟康唑耐药机制研究

目的探讨光滑假丝酵母菌CDR1、CDR2、SNQ2和ERG11基因mRNA表达差异以及ERG11基因突变在氟康唑耐药形成中的作用。方法采用罗丹明6G试验比较氟康唑耐药组与敏感组的外排泵作用,Rea1—TimePCR检测外排相关基因CDR1、CDR2、SNQ2和ERG11表达情况。同时,对ERG11基因进行PCR扩增和测序,比较耐药组和敏感组的突变位点。结果耐药组光滑假丝酵母菌外排泵功能明显强于敏感组,差异有统计学意义（P〈0．01）。耐药组的CDR1和CDR2mRNA表达水平显著高于敏感组（P〈0．01,P〈0．05）;但两组间SNQ2和ERG11mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P〉0．05）。检测到ERG11基因4个突变位点,均为同义突变,其中3个突变位点在耐药组和敏感组中均出现,1个突变位点只在敏感组中出现。结论外排泵功能在光滑假丝酵母菌氟康唑耐药过程中起重要作用。ERG11基因序列存在多态性,但未发现与氟康唑耐药相关的突变位点。     

白色念珠菌生物膜的形成及其机制的研究进展

深部真菌感染较难治愈,且研究发现深部真菌多伴随有真菌生物膜的出现,影响深部真菌的治疗效果。了解生物膜形成过程的特点及其机制对治疗深部真菌感染具有重要意义。本文综述了白色念珠菌生物膜的形成及其分子生物学机制和耐药机制的最新进展,为白色念珠菌的研究及临床防治策略提供参考。     

氟康唑对近平滑念珠菌生物膜的影响

目的研究近平滑念珠菌不同时期生物膜对氟康唑的药物敏感性及氟康唑对其生物膜生成的影响。方法甲基四氮盐（XTT）减低法检测不同阶段生物膜对氟康唑的敏感性及生物膜的生成量。结果对氟康唑敏感的近平滑念珠菌在生物膜生成12 h后即对氟康唑耐药。在12、24和48 h时间点,治疗浓度为8μg/mL的氟康唑均可显著抑制氟康唑耐药株生物膜的生成;浓度0.5μg/mL的氟康唑可显著抑制氟康唑敏感株生物膜形成,但要抑制耐药株生物膜的形成则需更高浓度的氟康唑（≥1μg/mL）。结论近平滑念珠菌不同阶段生物膜对氟康唑耐药性不同,氟康唑可显著抑制近平滑念珠菌敏感株和耐药株生物膜的生成。     

大蒜素对白假丝酵母菌生物被膜的抑制作用

目的：研究大蒜素对白假丝酵母菌生物被膜（BF）内真菌的抑制作用。方法用FITC-conA标记白假丝酵母菌BF的多糖成分,利用荧光显微镜从形态学上观察大蒜素对白假丝酵母菌BF形成过程的影响。将标本分为5组,分别是对照组（大蒜素浓度为0）、大蒜素0．25 mg/mL组、大蒜素0．5 mg/mL组,大蒜素1．0 mg/mL组、大蒜素2．0 mg/mL组。应用XT T减低法定量检测大蒜素对白假丝酵母菌BF中真菌的杀灭作用。结果在荧光显微镜下可见大蒜素2．0 mg/mL组大蒜素干预白假丝酵母菌BF后的荧光强度较大蒜素0．5 mg/mL组及对照组的荧光强度减弱。大蒜素0．5、1．0、2．0 mg/mL作用于白假丝酵母菌BF 5 h后,XT T减低法光密度（OD）450的值分别为1．87±0．31、1．64±0．25和1．30±0．29,分别与对照组的2．11±0．26比较,差异均有统计学意义（P＜0．05）;0．25 mg/mL的大蒜素作用白假丝酵母菌BF后,OD450值为1．93±0．31,与对照组比较,差异无统计学意义（P＞0．05）。结论大蒜素能杀灭白假丝酵母菌BF内的真菌,对BF有抑制作用。在一定浓度范围内,随着大蒜素浓度的增加,其对BF的抑制作用逐渐增强。     

Syringomyelia associated with post-meningitic spinal arachnoiditis due to Candida tropicalis.

A 63 year old man who suffered from syringomyelia related to post-meningitic spinal arachnoiditis caused by Candida tropicalis is reported. The clinical syndrome of syringomyelia developed gradually and a definite diagnosis was delayed for more than 10 years. The patient has partially recovered after surgical treatment. This form of fungal infection and its delayed neurological complication in the form of syringomyelia has not been reported previously, to our knowledge.     

金黄色葡萄球菌生物膜形成规律及清开灵颗粒对其影响研究

目的观察金黄色葡萄球菌生物膜形成规律以及清开灵颗粒对金黄色葡萄球菌生物膜的抑制作用和破坏作用。方法倍比稀释法测定清开灵颗粒最小抑菌浓度(MIC),结晶紫染色法测定同时加入菌液和药液对生物膜的抑制作用,结晶紫染色法测定清开灵颗粒对金黄色葡萄球菌生物膜的破坏作用。结果15 h左右生物膜形成较好。生物膜抑制实验和破坏实验表明在3.9~62.4 mg·m L-1浓度范围内清开灵颗粒具有良好的作用,且与阴性对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论清开灵颗粒对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌效果,对其生物膜的形成具有抑制和破坏作用,且呈浓度依赖性。     

厚朴煎剂对白色念珠菌及其生物膜影响的初步研究

目的 观察厚朴煎剂对白色念珠菌(Candida albicans)芽管形成、早期黏附基因及成熟期生物膜的影响。方法 采用芽管形成试验检测厚朴煎剂对白色念珠菌芽管形成的影响;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测厚朴煎剂作用后,凝集素样序列1(agglutinin-like sequencefamily1,ALS1)、ALS2、ALS3基因的表达情况;荧光显微镜及扫描电镜观察厚朴煎剂对白色念珠菌成熟期生物膜的影响;共聚焦显微镜观察厚朴煎剂对生物膜中菌活性的影响。结果 芽管形成试验结果显示,厚朴煎剂可抑制白色念珠菌的芽管形成且抑制作用具有浓度依赖性(P＜0.05)。厚朴煎剂能使ALS1、ALS2、ALS3基因表达下调且具有浓度依赖性(P＜0.05)。荧光显微镜下空白对照组生物膜以菌丝为主,厚朴煎剂作用24、48及72 h后生物膜结构被破坏。扫描电镜结果也提示厚朴煎剂可以破坏生物膜的结构。共聚焦显微镜下空白对照组白色念珠菌以活菌为主,15.625 mg/L厚朴煎剂作用48 h后死菌数量明显增加。结论 厚朴煎剂可通过下调ALS1、ALS2、ALS3基因抑制白色念珠菌早期黏附,同时可通过破坏成熟期生物膜的结构促进药物进入生物膜内抑制芽管形成和发挥杀菌作用。     

Multilocus sequence typing indicates diverse origins of invasive Candida tropicalis isolates in China

Background According to data from the China Hospital Invasive Fungal Surveillance Net (CHIF-NET) 2010, Candida tropicalis (C. tropicalis) is the third most common pathogen causing invasive candidiasis. Moreover, the majority of fluconazole-resistant C. tropicalis isolates were from a single hospital. Therefore, a molecular epidemiological survey is necessary to investigate the genetic relatedness of C. tropicalis isolates in China.

Methods In this study, 48 C. tropicalis isolates causing invasive fungal infections from four tertiary hospitals in China were studied. All the isolates were identified by sequencing the internal transcribed spacer region. Antifungal susceptibility to triazoles, amphotericin B, and caspofungin was determined by the Clinical and Laboratory Standards Institute standard broth microdilution method. Multilocus sequence typing (MLST) was performed, and phylogenetic analysis was further performed by the eBURST and maximum parsimony (MP) methods to characterize the genetic relatedness of isolates.

Results MLST discriminated 40 diploid sequence types (DSTs) among 48 isolates, including 36 novel DSTs, and the XYR1 gene showed the highest discriminatory power. The DSTs obtained from this study were compared with those of previously reported C. tropicalis isolates, and there was poor type alignment with regional strains. Nine groups and 11 singletons were identified by eBURST, whereas two groups and 10 subgroups were clustered by MP analysis. Generally, there were no obvious correlations between clonal clusters generated and the specimen source or hospital origin. Seven fluconazole-resistant isolates were confirmed and assigned to three distinguishable branches.

Conclusions The results suggested diverse origins of invasive C. tropicalis isolates in China. Although most invasive C. tropicalis strains in the mainland of China were clustered with previously characterized Asian isolates, major C. tropicalis clusters identified in this study were genetically distinct from those of other geographic regions.

     

铜绿假单胞菌脂多糖对白色念珠菌生物膜的影响

目的研究铜绿假单胞菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对白色念珠菌生物膜形成的抑制作用。方法甲基四氮盐[(2,3-bis-(2-methoxy-4-nitro-5-sulphophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide,XTT]减低法用于检测铜绿假单胞菌LPS对白色念珠菌生物膜形成不同阶段生成量的影响,同时,利用倒置显微镜观察生物膜形态学改变;实时定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测铜绿假单胞菌LPS对白色念珠菌生物膜菌丝特异基因(hypha specific genes,HSGs)表达的影响。结果铜绿假单胞菌LPS可以抑制白色念珠菌生物膜的形成,以及使菌丝特异基因HWP1、ALS1、ALS3、ECE1和SAP4的表达分别下调8.3~12.8、1.1~3.0、2.0~4.6、1.3~3.8和6.2~7.6倍。结论铜绿假单胞菌LPS可以通过抑制白色念珠菌菌丝的形成从而抑制其生物膜的形成。     

白念珠菌IFD6基因高表达促进生物被膜形成

目的考察白念珠菌IFD6基因对生物被膜形成能力的影响。方法构建白念珠菌IFD6基因高表达质粒,将IFD6基因开放阅读框(ORF)置于pCaEXP高表达载体中MET3启动子的控制下,醋酸锂法转染白念珠菌CAI4,PCR鉴定IFD6基因的原位整合,real-timePCR筛选IFD6基因表达量明显升高的菌株。利用XTT法和激光共聚焦显微镜测定并观察IFD6基因高表达前后生物被膜形成能力的变化,利用细胞表面疏水性实验考察白念珠菌细胞表面疏水性的变化。结果通过酶切和测序验证IFD6基因高表达质粒构建正确;通过PCR验证IFD6基因高表达菌株构建正确,并通过real-timeRT-PCR筛选得到1株IFD6基因表达量相对较高的菌株。XTT法和激光共聚焦显微镜观察的结果一致显示IFD6基因高表达菌形成生物被膜的能力增强,细胞表面疏水性增加。结论 IFD6基因高表达能增加白念珠菌细胞表面疏水性,从而使白念珠菌生物被膜的形成能力增强。     

去甲亚精胺对白色念珠菌生物膜形成的抑制作用

目的：研究去甲亚精胺对白色念珠菌生物膜形成的作用及可能的机制。方法：通过结晶紫染色、甲基四氮盐（XTT）检测、菌落形成单位（CFU）计数、扫描电镜（SEM）成像和qRT-PCR分别检测或观察去甲亚精胺对白色念珠菌生物膜生物量、代谢活性、菌落数、真菌形态和毒力相关基因表达的影响。结果：结晶紫染色结果显示不同浓度去甲亚精胺对白色念珠菌生物膜形成的抑制作用不同;XTT检测结果表明去甲亚精胺能显著抑制白色念珠菌生物膜的代谢活性;CFU计数结果显示去甲亚精胺能显著减少生物膜中白色念珠菌的菌落数;SEM结果显示去甲亚精胺能显著抑制生物膜形成,高浓度的去甲亚精胺能促进酵母相形成;qRT-PCR结果显示去甲亚精胺能显著抑制白色念珠菌毒力相关基因hwp、als3、csh1的表达。结论：去甲亚精胺能显著抑制白色念珠菌生物膜形成的作用并抑制毒力基因的表达,是一种潜在的抑制白色念珠菌生物膜的多胺类药物。