细胞毒素相关基因A及细胞毒素相关蛋白A研究进展

细胞毒素相关基因A及细胞毒素相关蛋白A是幽门螺杆菌重要的毒力因子,具有遗传基因多态性和地区分布的差异,与消化道溃疡、胃炎、胃癌及一些非胃肠道疾病的发生发展密切相关,并影响胃损害的严重程度及最终临床结局。其致病机制主要与影响多条细胞信息传递通路有关。     

黄芪对大鼠肾小球系膜细胞增生水平的影响

目的：探讨黄芪注射液(AM)对大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增生作用的影响。方法:实验分三组，空白对照组，脂多糖组(LPS)，综合组(LPS十AM)。采用MTT掺入方法，于24、48小时，观察三组GMCs增生水平。结果：综合组于48小时GMCs增生的抑制最为显著，且GMCs增生水平明显低于脂多糖组(P＜0．01)和空白对照组(P＜0．05)。结论：AM能抑制大鼠GMCs增生。     

L-EGCG对脂多糖诱导的大鼠系膜细胞增生影响

目的 :探讨L ( ) 表没食子基儿茶素没食子酸酯 (L epigallocatechinsgallicacidester,L EGCG)对大鼠肾小球系膜细胞 (glomerularmesangialcells ,GMCs)增生影响及可能的机制。方法 :首先应用不同剂量 (1 0 0 ,2 0 0 ,5 0 0mg/L)EGCG观察其在不同时间 (2 4 ,4 8,72h)对GMCs增生的影响 ,筛选出EGCG对GMCs增生影响的最佳剂量与最佳时间 ;在此基础上 ,将GMCs分为LPS组、对照组、EGCG组、激素组与激素 +EGCG组分瓶培养 ,实验末收集培养细胞 ,涂片 ,应用免疫组化法检测GMCs的增生细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)阳性表达率 ,TUNEL(terminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabeling,TUNEL)法检测GMCs有效凋亡率 ;应用生化法对培养上清进行 OH ,MDA(malonydialdehyde ,MDA)及SOD (superoxideDismutase ,SOD)活性测定。结果 :2 0 0mg/LEGCG对GMCs增生的抑制效果在 4 8h最佳 ;EGCG组细胞上清中 OH ,MDA较LPS组降低 (P <0 .0 1 ) ,SOD活性较LPS组增高 (均P <0 .0 1 ) ;EGCG组培养细胞PCNA阳性率低于脂多糖组 ,有效凋亡率高于脂多糖组 (P <0 .0 1 )。PCNA阳性率与 OH ,MDA呈正相关 ,与SOD活性呈负相关 (P <0 .0 1 )。结论 :EGCG可能通过减轻 OH对SOD的活性抑制 ,降低MDA的过     

L—EGCG对脂多糖诱导的大鼠系膜细胞增生影响

OBJECTIVE: To determine the effect of L-epigallocatechins gallic acid ester (L-EGCG) on glomerular mesangial cells (GMCs) proliferation, and to make clear the possible mechanism. METHODS: We investigated the effect of different doses of L-EGCG on GMCs proliferation at 24 h, 48 h and 72 h respectively, and screened the best dosage and time point. GMCs were divided into 5 groups: control, L-EGCG group, LPS group, dexamethasone group, and L-EGCG plus dexamethasone group. At the end of the experiments, the cultured GMCs and its suspension were collected, the positive rate of proliferating cell nuclear antigen(PCNA) was taken count of by immunohistochemical assay, the rate of effective apoptosis of GMCs by terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick endlabeling (TUNEL) assay, and -OH, malonydialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD) by biochemical assay. RESULTS: L-EGCG of 200 mg/L had the most strong inhibitory effect on GMCs at 48 h. The levels of -OH, and MDA in the L-EGCG group was significantly lower than those in the LPS group (P < 0.01), while the level of SOD in the L-EGCG group was significantly higher than that in the LPS group (P < 0.01); the PCNA positive rate of GMCs in the L-EGCG group was significantly lower than that in the LPS group (P < 0.01), and the effective apoptosis of GMCs in the L-EGCG group were significantly higher than that in the LPS group (P < 0.01). The PCNA positive rate of GMCs was positively correlated with the level of -OH and MDA, while negatively correlated with the level of SOD. CONCLUSION: The suppressive effect of L-EGCG on the abnormal proliferation of GMCs might be that L-EGCG could weaken the suppressive effect of -OH on the SOD activity, decrease the accumulation of MDA, and increase the apoptosis of GMCs.     

熊果酸对刀豆蛋白A诱导小鼠T细胞增殖与激活的影响

目的研究熊果酸(Ursolic acid,UA)对小鼠T细胞活化和增殖的影响,并探讨其免疫调节机制。方法以刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠T细胞活化和增殖,用MTT法测定细胞增殖,利用流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69、中期活化标志CD25与晚期活化标志CD71的表达情况。结果在ConA刺激下48 h后,小鼠T淋巴细胞MTT吸收度显著高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。熊果酸(10～40μM)组与ConA组比较显著降低了MTT吸收度,差异具有统计学意义(P<0.01)。在ConA刺激淋巴细胞18 h后,小鼠T细胞CD3 CD69 表达率显著高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),ConA刺激36 h后,T细胞CD3 CD25 表达率显著高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),ConA刺激48 h后,T细胞CD3 CD71 显著高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。熊果酸组在浓度为10～40μM时与ConA组比较,均能显著降低CD25、CD69、CD71的表达率,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论熊果酸可以显著的抑制多克隆刺激剂ConA介导的小鼠T细胞的活化和增殖。     

蟾蜍灵对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的:探讨蟾蜍灵(bufalin)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)凋亡的影响.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞.分为对照组、LPS刺激组和蟾蜍灵干预组,应用台盼蓝拒染法检测蟾蜍灵对GMC的细胞毒性作用,应用透射电镜观察系膜细胞超微结构的变化,采用逆转录PCR检测Bax和Bcl-2基因mRNA的表达.Western blot法检测Bax和Bcl-2的蛋白表达.结果:透射电镜观察蟾蜍灵干预组可见凋亡早期形态学改变.逆转录PCR和Western blot结果显示蟾蜍灵组较脂多糖组Bax表达增多,Bcl-2表达减少,差异均具有统计学意义(P＜0.01),蟾蜍灵干预后,Bax较Bcl-2表达过量.结论:蟾蜍灵可能通过调节Bax和Bcl-2的相对表达量而诱导脂多糖作用后肾小球系膜细胞发生凋亡.     

蟾蜍毒素诱导结肠腺癌细胞HT-29凋亡中对相关蛋白的影响

目的 探讨蟾蜍毒素诱导结肠癌细胞株HT-29凋亡及其机制.方法 MTI检测蟾蜍毒素对结肠腺癌细胞HT-29增殖抑制;瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化;流式细胞术分析细胞凋亡;Western-Blot检测livin、Bcl-2、Bax及Capase-3蛋白的表达.结果 蟾蜍毒素抑制HT-29细胞增殖,呈时间、剂量依赖关系;蟾蜍毒素诱导HT-29细胞凋亡,形态学观察到典型的凋亡小体;流式细胞仪检测到明显亚二倍体凋亡峰;蟾蜍毒素诱导细胞凋亡过程中下调livin、Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,并活化Caspase-3蛋白.结论 蟾蜍毒素诱导HT-29细胞凋亡可能与下调livin、Bcl-2蛋白、上调Bax蛋白表达并活化Caspase-3有关.     

ERK通路抑制剂对PDGF-BB诱导的大鼠系膜细胞细胞外基质合成的影响

目的:探讨ERK通路在血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质(ECM)合成中的作用.方法:将体外培养大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)分为7组:对照组;PDGF-BB刺激组(终浓度分别为10、25和50 ng/ml);PDGF-BB和ERK通路抑制剂UO126共刺激组(PDGF-BB 25ng/ml UO126 5 μmol/ml,PDGF-BB 25 ng/ml UO126 10 μmol/ml);UO126 10 μmol/ml刺激组.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)和纤连蛋白(FN)mRNA的相对表达量.结果:PDGF-BB能剂量依赖性的上调 PAI-1和FN mRNA的表达(P＜0.05),同时下调MMP-2 mRNA的表达(P＜0.05).U0126则呈剂量依赖性地抑制PDGF-BB诱导的肾小球系膜细胞PAI-1和FN mRNA的表达(P＜0.05),促进MMP-2 mRNA的表达(P＜0.05).结论:PDGF-BB可能通过ERK通路作用于大鼠肾小球系膜细胞,抑制细胞外基质的降解,促进其FN的合成,从而参与肾小球硬化的过程.     

依普利酮对大鼠系膜细胞凋亡的影响

目的 探讨醛固酮受体拮抗剂依普利酮对大鼠系膜细胞凋亡的影响.方法 体外培养大鼠永生系膜细胞,分为3组:对照组(A组)、醛固酮(10-7 mol/L)组(B组)、醛固酮(10-7 mol/L)+依普利酮(10-7 mol/L)组(C组).各组细胞加药培养24 h后,应用流式细胞术及Hoechst 33258染色检测细胞凋亡.应用casepase-3活性检测试剂盒检测系膜细胞casepase-3活性.结果 与对照组相比,醛固酮组系膜细胞凋亡率明显增加,casepase-3活性明显增加(P＜0.05).与醛固酮组相比,醛固酮+依普利酮组细胞凋亡率明显降低,casepase-3活性明显降低(P＜0.05).结论 依普利酮可以通过caspase途径抑制醛固酮诱导的大鼠系膜细胞凋亡.     

FTO对小鼠肾小球系膜细胞m6A修饰及增殖能力的影响

目的：构建表达脂肪与肥胖相关（fat mass and obesity associated,FTO）基因的重组质粒,并检测其对小鼠肾小球系膜细胞（mice mesangial cell,MMC）N6?甲基腺嘌呤（m6A）修饰及增殖能力的影响。方法：PCR法扩增FTO基因片段,并将其插入表达载体 pCMV?MCS?EGFP质粒中以构建重组质粒pCMV?FTO。将目的质粒pCMV?FTO及对照质粒pCMV分别转染MMC,采用qRT?PCR法检测FTO mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测细胞FTO蛋白和相关增殖标志物的表达,CCK8法检测细胞增殖,m6A RNA甲基化定量试剂盒检测m6A含量。结果：菌落PCR鉴定以及测序结果证实重组质粒pCMV?FTO构建成功。RT?qPCR及蛋白印迹结果显示转染目的质粒pCMV?FTO后FTO表达明显增加。过表达FTO后,m6A含量、细胞增殖水平及细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）蛋白水平均显著下降。结论：FTO可以降低 MMC中m6A修饰水平及抑制细胞增殖。     

姜黄素对脂多糖诱导的系膜细胞单核细胞趋化蛋白1基因及蛋白表达的影响

目的：进一步探讨姜黄素对LPS诱导的系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法：采用不同浓度姜黄素处理体外培养的人肾小球系膜细胞，分别收集上清液及细胞，应用ELISA的方法测定上清液中MCF-1蛋白表达量，逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法测定系膜细胞MCP-1基因的相对表达量。结果：LPS可显著上调系膜细胞MCP-1基因表达，同时刺激系膜细胞分泌MCP-1蛋白；姜黄素则呈浓度依赖性地抑制LPS诱导的系膜细胞MC-1基因及蛋白表达。结论：姜黄素能抑制LPS诱导的肾小球系膜细胞MCP-1基因和蛋白的表达。     

螺内酯对醛固酮诱导的大鼠肾小球系膜细胞MCP-1表达的影响

目的 观察螺内酯(Spi)对醛固酮(Ald)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(RMCs)表达单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响,探讨其肾脏保护机制.方法 体外培养RMCs,分组如下:NG组(葡萄糖浓度5.6 mmol/L),Ald组(Ald 10-7 mol/L),A组(Spi 10-7 mol/L + Ald 10-7...     

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A与溃疡病的关系

目的　探讨幽门螺杆菌 (Hp)细胞毒素相关蛋白A(CagA)与溃疡病的关系。方法　采用ELISA方法对 98例溃疡病患者进行血清CagA -Hp -IgG抗体检测 ,治疗后半年再次检测。结果　 5 0例十二指肠球部溃疡 (DU)阳性率为10 0 % ,4 8例胃溃疡 (GU)阳性率为 83.3% ;半年后复检DU阳性率为 10 % ,GU阳性率为 7.5 % ,治疗前后两者阳性率具有显著性差别 (P <0 .0 1)。结论　CagA与溃疡病密切相关。     

黄芪对大鼠失神经早期骨骼肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白活性的影响

目的:对黄芪对大鼠失神经早期骨骼肌细胞凋亡以及凋亡相关蛋白活性的影响进行分析探讨,为今后的实验研究提供可靠的参考依据。方法:抽取SD大鼠69只,建立右下肢腓肠肌神经支配模型,随机分成3组,分别定义为失神经对照组、失神经黄芪干预组和阴性对照组,对术后2、14、28天时大鼠腓肠肌骨骼肌细胞凋亡细胞核以及凋亡的相关蛋白水平进行检测,并对检测结果进行对比分析。结果:失神经对照组、失神经黄芪干预组大鼠细胞凋亡较阴性对照组发生显著增加(P0.05);术后14天和28天时黄芪干预组大鼠的腓肠肌湿重较同时期失神经组发生显示升高(P0.05),然而凋亡细胞核、凋亡相关蛋白Caspase-8,Caspase-9活性则较失神经对照组发生显著降低(P0.05)。结论:由以上研究可证实黄芪具有对大鼠失神经早期骨骼肌细胞凋亡产生显著的延缓作用,并且对Caspase-8,Caspase-9活性也能够产生一定的抑制效果,值得关注。     

金雀异黄素对TGF-β1诱导大鼠肾系膜细胞CTGF表达的影响

目的了解金雀异黄素（genistein，Gen）对转化生长因子（TGF）β1诱导大鼠肾系膜细胞（MCs）结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。进一步探讨金雀异黄素抑制肾纤维化的机制。方法将体外培养的MCs分为4组：正常对照组，未加任何刺激因素；Gen组，Gen的终浓度分别为50、100μmol／L；TGF-β1组，终浓度为5ng／mL；TGF-β1＋Gen组，TGF-β1和Gen的终浓度分别同前。刺激MCs24h后，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测细胞内CTGFmRNA的水平，Westernblot法测定细胞内CTGF蛋白的表达。结果与对照组比较，Gen组CTGFmRNA的水平和蛋白的表达无显著性差异（P〉0．05），而TGF—β1组CTGFm—RNA的水平和蛋白的表达明显增加（P〈0．01）；与TGF-β1组比较，50μmol／L和100μmol／L的Gen能明显抑制TGF—β1诱导的CTGFmRNA的水平和蛋白表达，以100μmol／LGen效果最显著（P〈0．01）。结论Gen能部分抑制TGF—β1诱导CTGF的基因和蛋白的表达，提示金雀异黄素可能通过阻抑CTGF表达减少细胞外基质的积聚，具有潜在的抗肾纤维化作用.     

高糖对大鼠系膜细胞NADPH氧化酶的影响

目的 探讨高糖对大鼠系膜细胞NADPH氧化酶表达及活性的影响.方法 高糖体外培养大鼠系膜细胞,RT-PCR技术检测系膜细胞内NADPH氧化酶亚基p22phox mRNA的表达,流式细胞术检测超氧离子(.O2-)和过氧化氢(H2O2)反映NADPH氧化酶活性.结果 高糖(10mM)培养3天及5天组,p22phox mRNA表达较正常组和培养1天组升高(P<0.05).随着葡萄糖浓度升高和作用时间的延长随着葡萄糖浓度升高和作用时间的延长,.O2-和H2O2的表达增多(P<0.05).结论 高糖使系膜细胞NADPH氧化酶表达增多、活性增强.     

茶多酚对大鼠系膜细胞摄取脂蛋白a的影响

目的 探讨茶多酚对大鼠系膜细胞摄取脂蛋白a（LPa）的作用.方法以LPa刺激体外培养的大鼠系膜细胞,同时用不同浓度茶多酚干预,测定系膜细胞内总胆固醇（TC）含量;油红-O染色光镜观察细胞形态.结果LPa刺激下的系膜细胞TC含量及油红-O染色阳性细胞比例均较无LPa刺激的对照系膜细胞增高.随培养液茶多酚浓度由40ng/L～40mg/L递增,LPa刺激的系膜细胞TC含量及油红-O染色阳性细胞比例递减,呈剂量依赖性关系.结论40ng/L～40mg/L茶多酚可呈剂量依赖性抑制大鼠系膜细胞摄取Lpa.     

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A及细胞空泡毒素A与胃及十二指肠疾病的关系

<正> 自1983年Warren和Mashall发现幽门螺杆菌(HP)以来,普遍认为HP与慢性胃炎及消化性溃疡密切相关,近来更认为HP是致胃癌的强危险因子。在人群中约有一半的人受到HP感染,不少人发展为慢性胃炎。然消化性溃疡及胃癌的发生毕竟为少数,这除了与人类的个体差异等因素有关外,还与HP感染的类型有关,即某些菌株可产生细胞毒素。在HP诸多的致病因素中,细胞毒素相关蛋白A(CagA)及细胞空泡毒素A(VacA)备受关注。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠系膜细胞葡萄糖转运蛋白1表达的影响

目的　研究血管紧张素Ⅱ (ANGⅡ )、高糖及血管紧张素Ⅱ 1型受体拮抗剂 (AT1RA)对于大鼠系膜细胞 (MCs)上葡萄糖转运蛋白 1(GLUT1)表达及MCs所合成的系膜区细胞外基质 (ECM )的影响。方法　采用免疫组化法检测大鼠系膜细胞上GLUT1蛋白的合成 ,半定量聚合酶链式反应 (RT PCR)测定系膜细胞GLUTmR NA水平 ,ELISA法测定细胞培养上清液中纤连蛋白 (FN)的表达。结果　ANGⅡ作用后能显著增加大鼠MCs GLUT1的转录及蛋白合成 (P <0 .0 5 ) ,这种作用具有浓度及时间依赖性且能被AT1RA伊贝沙坦 (Irbesartan)所阻断。高糖 (2 7.8mm1/L)作用 4h后未能增加MCsGLUT1的转录及表达。ANGⅡ能使培养的MCs上清液中FN含量显著增加 (P <0 .0 0 1) ,Irbesartan能使增加的FN降低 5 0 .5 4%。结论　ANGⅡ能从转录水平刺激MCs上GLUT1的表达 ,增加ECM的合成 ,ANGⅡ的这种作用通过AT1受体介导并能被AT1RA阻断。ANGⅡ可通过上调GLUT1的表达参与糖尿病肾病 (DN)的发生及发展。