未成熟卵母细胞体外成熟培养技术研究进展

<正>1935年,Pincus和Enzmanz[1]观察到兔的未成熟卵母细胞在体外培养条件下可以自发完成卵母细胞的成熟过程,自此在生殖领域引入了一个新的概念即卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)。自1991年Cha[2]等报道IVM技术取得第1例妊娠以来,IVM技术已应用于治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的不孕,预     

人未成熟卵母细胞体外成熟的影响因素

人未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)技术已广泛应用于临床,为多囊卵巢综合征(PCOS)患者开辟了一条有效的治疗途径,成为生殖医学领域日益关注的研究热点.     

卵母细胞体外成熟与后继的延迟受精可使非整倍体胚胎增加

受精失败与出现不成熟的卵母细胞是体外受精(IV F)中的常见情况。挽救性的卵母细胞单精子显微(ICSI)注射在此方面可作为一种治疗手段。然而,本研究显示与对照(60.5%)相比,卵母细胞体外成熟与延迟的ICSI(79.7%)可使非整倍体胚胎增加。因此,当患者进行延迟的ICSI时应告知可能存在此种情况的风险。卵母细胞体外成熟与后继的延迟受精可使非整倍体胚胎增加@Emery B.R. @Wilcox A.L. @Aoki V.W.et @D.T. Carrell$Dr. Andrology and IVF Laboratories, Department of Urology, University of Utah School of Medicine, 6…     

颗粒细胞在未成熟卵体外培养时对未成熟卵母细胞发育的影响

目的研究颗粒细胞在未成熟卵母细胞体外培养时对卵母细胞的成熟有何影响。方法实验分实验组和对照组。将拆除颗粒细胞的未成熟卵母细胞作为对照组,不拆除颗粒细胞的未成熟卵母细胞为实验组,观察它们在卵母细胞成熟时间、核成熟率、卵细胞受精率和优质胚胎的生成率等方面是否存在差异。结果实验组在卵母细胞成熟时间和卵细胞受精率上和对照组无明显差别,但是在卵母细胞核成熟率、优质胚胎的生成率等方面与对照组相比有显著性差异。结论颗粒细胞对卵母细胞的核成熟、胞浆成熟和保护其发育潜能有重要的作用。     

人未成熟卵母细胞体外成熟培养在多囊卵巢综合征不孕妇女中的应用

目的：探讨未成熟卵母细胞体外成熟培养-胚胎移植技术（IVM—ET）在多囊卵巢综合征（PCOS）患者不孕症治疗中的临床应用前景。方法：将39例PCOS不孕妇女分未成熟卵母细胞体外成熟培养（IVM）组和常规体外受精／卵胞浆内单精子显微注射（IVF／ICSI）组。IVM组;11例PCOS患者,用小剂量促性腺激素（Gn）刺激后取未成熟卵母细胞体外培养28h,行卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）,继续培养3d后行胚胎移植。IVF／ICSI组：28例PCOS患者,用常规IVF／ICSI技术助孕。结果：IVM组获卵数123枚,体外培养成熟率为82．93％（102／123）,受精率为98．04％（100／102）,卵裂率为92．00％（92／100）,优胚率为39．13％（36／92）,移植10个新鲜胚胎周期,临床妊娠2例,临床妊娠率为2／10,累计妊娠率4／11。与同期28例施行IVF／ICSI的PCOS患者进行比较,其Gn天数、用量、HCG日E2水平、获卵数、优胚率显著低于IVF／ICSI组,差异有统计学意义（P〈0．05）;卵裂率无明显差异（P〉0．05）;种植率、临床妊娠率均低于IVF／ICSI组,但差异无统计学意义（P〉0．05）;IVM组无中重度卵巢过度刺激综合征（OHSS）和自然流产的发生,而IVF／ICSI组中重度OHSS发生率为10．71％（3／28）、自然流产率为3／10,但差异亦无统计学意义（P〉0．05）。结论：IVM技术为PCOS患者的治疗开辟了一条新的途径,同时在减少外源性Gn用量,有效控制卵泡数量和E2水平方面具有明显优势。但对其能否降低OHSS风险以及成功率较低等问题,有待进一步研究。     

三种不同来源人未成熟卵母细胞的体外成熟

目的：探讨三种不同来源的人未成熟卵母细胞体外成熟（IVM）的差异。方法：共获得未成熟卵母细胞1055枚,包括卵丘复合物（OCC）613枚和裸卵（DO）442枚。其中OCC分为自然周期组、孕晚期组和IVM纽;DO分为自然周期组、孕晚期组和超促排卵纽。所有未成熟卵母细胞在IVM培养体系体外培养成熟后,卵母细胞胞浆内单精子注射（ICSI）受精序贯培养,除IVM组行第2或第3天胚胎移植外,其余均培养至囊胚阶段。分别比较OCC和DO各组未成熟卵母细胞的成熟率、成熟卵母细胞的受精率、卵裂率;自然周期组和孕晚期组的囊胚形成率。结果：OCC：自然周期组、孕晚期组及IVM组的未成熟卵母细胞体外成熟率分别为79．5％、74．3％和82．2％,孕晚期组与IVM周期组相比具有统计学差异;3组成熟卵母细胞受精率、卵裂率及自然周期组和孕晚期组的囊胚形成率相比无统计学差异,IVM组的移植周期妊娠率为20％。DO：自然周期组、孕晚期组及超促排卵组未成熟卵母细胞体外成熟率超促排卵组最高（86．0％）,明显高于自然周期组（74．5％）和孕晚期组（72．7％）,（P〈0．05和〈0．01）。3组未成熟卵母细胞的成熟率、成熟卵母细胞的受精率、卵裂率、囊胚形成率相比未见统计学差异。结论：孕晚期来源的未成熟卵母细胞在体外同样具有发育潜能;孕晚期的卵母细胞可作为一种供卵来源。     

HCG刺激对未成熟卵母细胞体外成熟培养的影响

目的:探讨获取未成熟卵母细胞之前使用人绒毛膜促性腺激素（Humanchorionicgonadotropin,HCG）能否改善未成熟卵母细胞在体外培养条件下成熟的时间、体外受精率、2细胞、4细胞发生率。方法:将HCG刺激后或未刺激所获得的小鼠生殖泡（Germinalreside,GV）期卵丘-卵母细胞复合物在培养液中进行体外培养,观察未成熟卵母细胞减数分裂的恢复、核成熟、受精率以及胚胎的发育。结果:体外培养后16hG-PR组生殖泡破裂（Germinalvesiclebreakdown,GVBD）发生率显著高于G-UPR组（P<0.01）。体外培养后20hG-PR组GVBD发生率明显高于G-UPR组（P<0.05）。体外培养后24hG-PR组PBI发生率显著高于G-UPR组（P<0.01）。G-PR组受精率明显高于G-UPR组（P<0.05）。结论:HCG加快了卵母细胞的体外成熟进程,同时也增加了卵母细胞的体外受精率。     

孕晚期人未成熟卵母细胞的体外成熟:一种新的卵母细胞来源

目的 探讨来源于孕晚期、自然周期及Gn刺激周期(包括超促排周期及IVM周期)的人未成熟卵母细胞体外成熟的差异及颗粒细胞对孕晚期卵母细胞体外成熟的影响.方法 共获得未成熟卵母细胞1076枚,包括OCC 633枚和DO 453枚.其中OCC分为孕晚期组、自然周期组和IVM周期组;DO分为孕晚期组、自然周期组和超促排卵周期组;孕晚期来源的未成熟卵母细胞分为OCC组和DO组.所有未成熟卵母细胞体外成熟后,ICSI受精序贯培养,除IVM周期组行胚胎移植外,其余均培养至囊胚阶段.分别比较OCC和DO各组未成熟卵母细胞的成熟率、受精率、卵裂率和孕晚期组、自然周期组和超促排卵周期组的囊胚形成率,统计IVM周期组的移植周期妊娠率;比较孕晚期OCC组与DO组的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率.结果 OCC:孕晚期组、自然周期组及IVM周期组的体外成熟率分别为74.3%、76.9%和82.2%,孕晚期组与IVM周期组相比具有统计学差异;三组受精率、卵裂率相比,孕晚期组和自然周期组囊胚形成率相比均未见统计学差异,IVM周期组移植周期妊娠率为20%.DO:超促排卵周期组体外成熟率最高(86.0%),明显高于自然周期组(72.5%)和孕晚期组(72.7%),P<0.01;孕晚期组受精率、卵裂率、囊胚形成率分别为65.0%、83.3%和38.5%,与其他两组相比均亦未见统计学差异.孕晚期OCC组与DO组的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率无差别.结论 孕晚期来源的未成熟卵母细胞在体外具有同样的发育潜能,孕晚期捐献的卵母细胞可作为一种供卵来源:有无颗粒细胞并不影响孕晚期卵母细胞的发育能力.

Abstract：

Objective To investigate the in vitro maturation of human oocytes (IVM)from pregnant late term,natural cycles and Gn stimulating cycles and the effect of granulose cells on IVM from pregnant late term.Methods A total of 1086 immature oocytes were obtained including 633 oocyte-cumulus complexes(OCCs)and 453 denuded oocytes(DOs).OCCs were divided into pregnant late term group,natural cycle group and IVM group,and DOs were divided into pregnant late term group,natural cycle group and controlled ovarian hyperstimulation(COH) group.All the oocytes were matured in IVM culture system and fertilized by ICSI.The embyos were cultured to blastcyst stage except that those in IVM group were transferred into the utems.The main outcomes were assessed including maturation rate(MR), fertilization rate(FR),cleaverage rate(CR),and blastulation rate(BR)(natural cycle group,pregnant late term group and COH group)and pregnancy rate per transfer cycle(PR) of IVM group.ReslIIts MR of OCCs in pregnant late term group,natural cycle group and COH group was 74.3%,76.9%and 82.2%,respectively,showing statistical difference between pregnant late term cycle group and IVM group.No statistical difference was observed in FR,CR or BR between the three groups.For IVM cycle group,clinical pregnancy rate of 20%per aspiration was achieved.For DOs,MR of COH group(86.0%)was significantly higher than that of the natural cycle group(72.5%)and pregnant late term group(72.7%) (P<0.01).FR,CR and BR showed no statistical difference among the 3 groups.No difference was found in MR,FR,CR and BR between OCCs group and DOs group from pregnant late term.Conclusions The oocytes from pregnant late term have the same development potential as those from natural cycles or Gn stimulating cycles in vitro,and provide a new source of donor oocytes.Granulose ceils do not affect the IVM from pregnant late term.     

卵母细胞体外成熟在体外受精-胚胎移植中的应用

随着辅助生殖技术的发展,体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer, IVF-ET)已经成为治疗不孕症的常规手段,广泛应用于不孕不育症的临床治疗.但目前IVF-ET的临床妊娠率较低,国外报道为28%[1],国内报道为43.3%[2].     

两种未成熟卵母细胞体外成熟培养液的运用效果比较

目的:通过比较自行研配的培养液与商品化培养液在卵母细胞体外成熟中的运用效果,为进一步优化体外成熟培养体系提供依据?方法:分别选择使用自行配制培养液的(IVM-A组)110个周期和使用商品化(IVM-B组)培养液的99个周期,并以同期行ICSI的治疗周期为对照(ICSI-C1和ICSI-C2),比较两组在体外成熟?胚胎发育?胚胎种植?临床妊娠及结局等方面的差异?结果:在两对照ICSI-C1和ICSI-C2各项指标无差异的情况下,IVM-A组体外成熟和胚胎发育等方面均高于IVM-B组,且可移植胚胎率?优质胚胎率明显提高(P < 0.05或P < 0.01),可移植胚胎率已达到ICSI组水平?虽然表面上IVM-A组在胚胎种植率?妊娠率(临床妊娠率)?活产率等指标低于IVM-B组,但不同阶段的对照组其指标明显改变,ICSI-C2(2006年以后)明显好于ICSI-C1?这种差异可能与近年来的临床治疗方案的改善及宫腔镜的使用有关?值得注意的是,IVM-A的流产率只有10.53%,显著低于其他3组,而同期的对照(ICSI-C1)却明显高于ICSI-C2,提示使用自行配制培养液培养的胚胎可显著降低流产的发生?但由于样本量还不够大,结果尚待进一步验证?结论:自行配制的培养液具有较好的运用效果,可能与其中额外添加的mHFF及E2等有关?但系统尚需进一步优化,以保证其高效?安全?价廉?     

表皮生长因子促进小鼠未成熟卵母细胞体外成熟的实验研究

目的 了解表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟、受精及胚胎发育的影响.方法 将生殖泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞分别在EGF浓度为0(对照)、0.5、1、2.5、5、10 ng/ml的培养液中进行体外培养,观察生殖泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)和第一极体(the first polar body,PB1)排出的情况.将达到MⅡ期的卵母细胞进行体外受精,观察原核和胚胎发育情况.结果 EGF浓度为1、2.5、5、10 ng/ml组GVBD发生率高于对照组;EGF浓度2.5、5、10 ng/ml组PB1排出率高于对照组,其中EGF浓度5 ng/ml组的GVBD、PB1发生率最高(P＜0.01).卵母细胞在1、2.5、5、10 ng/ml EGF培养浓度下的退化率低于对照组(P＜0.05,P＜0.01).卵母细胞的体外受精率、2-细胞和4-细胞胚胎的发生率在EGF浓度为5 ng/ml时明显高于对照组(P＜0.01).结论 EGF可促进GV期卵母细胞的成熟,对其受精能力和胚胎发展也有促进作用,也可能有抑制卵母细胞凋亡的作用,而EGF以上作用与剂量有关.     

卵母细胞体外成熟在多囊卵巢综合征中的应用研究

近年来随着辅助生育技术的不断发展 ,控制性超排卵得到越来越广泛的应用 ,在一个控制性超排卵周期获得较多的成熟卵母细胞有助于提高体外受精 胚胎移植的成功机会。但是控制性超排卵所需昂贵的治疗费用及其可能导致的一系列并发症(如中度或重度卵巢过度刺激综合征等 )也已引起人们越来越多的关注和重视[1] 。获取不成熟卵母细胞在体外成熟 (ｉｎｖｉｔｒｏｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ,ＩＶＭ) ,然后将成熟卵母细胞进行体外受精和胚胎移植 ,为人们解决上述问题提供了一条可能的途径。本研究从接受小剂量促卵泡生成素 (ｆｏｌｌｉｃｌｅｓｔｉｍｕ…     

不同浓度雷帕霉素对小鼠卵母细胞体外成熟及发育潜能的影响

目的 探究不同浓度雷帕霉素对小鼠卵母细胞体外成熟(in vitro maturation, IVM)结局的影响及其在最佳浓度下对卵母细胞质量产生的具体效应。方法 收集雌性ICR小鼠的未成熟卵母细胞(GV期)进行IVM,在培养液中添加不同浓度的雷帕霉素(1 nmol/L～10μmol/L),通过比较成熟率和激活率,筛选最佳作用浓度。随后,在处理组的培养液中加入最佳浓度的雷帕霉素,对处理组与对照组中IVM卵母细胞的激活后发育情况、纺锤体组装、染色体排列情况进行比较。结果 10 nmol/L雷帕霉素培养组的卵母细胞在IVM后呈现出较高的成熟率[(84.5±1.6)%]和激活率[(62.4±1.5)%],故选择10 nmol/L作为添加雷帕霉素的最佳浓度。在随后的培养中,10 nmol/L雷帕霉素组激活胚胎的卵裂率和囊胚形成率也较对照组显著升高[卵裂率：(54.9±2.6)%vs.(41.9±2.1)%,P=0.0178;囊胚形成率：(12.5±1.6)%vs.(6.4±1.4)%,P=0.0441]。此外,与对照组相比,10 nmol/L雷帕霉素组的成熟卵母细胞染色体排列异常率降低[染色体异...     

表皮生长因子与卵母细胞、胚胎的体外发育

表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor,EGF)是StanloyCohen于 196 2年从成年雄鼠颌下腺分离提纯出的一种单链多肽。EGF作为一种局部调节因子 ,广泛存在于人体的体液和组织中 ,具有多种生物学效应。近年研究表明 ,EGF在卵母细胞体外成熟、受精及早期胚胎发育等方面有重要意义。1     

促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养中的应用

目的 评价卵泡刺激素和人绒毛膜促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养过程中的应用价值。方法 收集控制性超促排卵周期行单精子显微注射(ICSI)过程中得到的未成熟卵母细胞(MⅠ期和GV期), 随机分为加促性腺激素培养组和不加促性腺激素培养组, 培养24~28 h后成熟卵母细胞进行ICSI授精, 并观察胚胎发育情况, 记录成熟率、受精率、卵裂率和优胚率。结果 对于MⅠ期卵母细胞, 是否使用促性腺激素不影响其24 h成熟率、受精率、分裂率和优胚率(P>0.05)。对于GV期卵母细胞, 培养液中加入促性腺激素能提高优质胚胎率(31.3% vs 4.2%, P<0.05), 但两组的成熟率、受精率和卵裂率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 控制性超促排卵中获得的未成熟卵母细胞进一步体外培养, 无论是否添加促性腺激素都可自然成熟, 在GV期卵母细胞的体外培养过程加入促性腺激素可获得更高的优胚率。     

人成熟卵泡液在卵母细胞体外成熟培养基中的作用

目的 探讨人成熟卵泡液、血清替代物对人未成熟卵母细胞体外成熟及发育的影响。方法 在基本培养液中加入人成熟卵泡液（human follicle fluids,HFF）（A组）、或血清替代物（serum subtitute supplement,SSS）（B组）用于未成熟卵母细胞的体外培养（in vitro maturation,IVM）,观察成熟率及进一步发育能力。结果 两组之间成熟率、受精率差异无显著性,A组的卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率明显高于B组。结论 卵母细胞在两种培养液中均能完成核成熟,但人成熟卵泡液能同时促进卵母细胞的胞质成熟,两者相比HFF效果更好。