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目的探讨微小核糖核酸101(miRNA-101)在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达及其对MDAMB-231 细胞增殖的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺上皮细胞MCF-10A 中miRNA-101 的表达。采用Lipofectamine TM 2000 将miRNA-101-mimic/inhibitor/NC 分别转染至MDA-MB-231 细胞中,通过qRT-PCR检测miRNA-101 的转染效率,CCK-8 实验检测MDA-MB-231 细胞的增殖。结果miRNA-101 在MDA-MB-231 细胞中的表达水平低于正常乳腺细胞MCF-10a( p<0.01)。转染miRNA-101 mimic 后MDA-MB-231 细胞的增殖能力减弱(p <0.05),而转染miRNA-101 inhibitor后细胞的增殖能力增强(p <0.05)。结论miRNA-101 在乳腺癌细胞MDA-MB-231中低表达,转染miRNA-101 mimic后乳腺癌细胞MDA-MB-231 的增殖减弱。 相似文献
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【摘要】 目的 探讨miR-384对乳腺癌MCF-7细胞多西他赛(DOC)敏感性的影响。 方法 乳腺癌MCF-7细胞分成Control组(空白对照)、miR-NC组(转染模拟物阴性对照)、miR-384组(转染miR-384模拟物)、miR-NC+DOC组(转染模拟物阴性对照,DOC处理)、miR-384+DOC组(转染miR-384模拟物,DOC处理),MTT测定细胞增殖,克隆形成实验测定细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡。在线靶基因预测软件预测性别决定区Y框蛋白4(SOX4)可能是miR-384的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。Western blot测定细胞中SOX4蛋白表达。pcDNA3.1-SOX4和miR-384模拟物共转染,以DOC处理,检测SOX4对上调miR-384联合DOC对乳腺癌MCF-7细胞增殖、克隆和凋亡的影响。 结果 与miR-NC组比较,miR-384组和miR-NC+DOC组细胞中miR-384表达水平升高,细胞增殖和克隆能力降低,细胞凋亡率升高(均P<0.05)。与miR-NC+DOC组比较,miR-384+DOC组细胞增殖和克隆能力降低,细胞凋亡率升高(均P<0.05)。miR-384靶向抑制SOX4蛋白表达。pcDNA3.1-SOX4能够逆转上调miR-384联合DOC对乳腺癌MCF-7细胞增殖、克隆和凋亡的影响。 结论 miR-384靶向调控SOX4,增加乳腺癌MCF-7细胞DOC敏感性。 相似文献
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目的 探讨miRNA-506对三阴性乳腺癌癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法 qRT-PCR检测三阴性乳腺癌患者癌组织、癌旁正常组织、乳腺良性病变组、三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231以及正常乳腺上皮细胞系HBL-100中miRNA-506表达情况;转染miRNA-506mimics后CCK-8检测细胞增殖情况;Transwell小室法检测MDA-MB-231细胞侵袭情况。结果 乳腺癌组织中的miRNA-506表达水平低于癌旁正常组织以及乳腺良性病变组织(P <0.01);人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞内的miRNA-506低于人正常乳腺上皮细胞系HBL-100细胞(P <0.01);转染miRNA-506mimics可显著抑制MDA-MB-231细胞增殖和侵袭(P <0.01)。结论 miRNA-506在三阴性乳腺癌低表达以及其可抑制三阴性乳腺癌的增殖、侵袭生物学行为。 相似文献
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目的探讨microRNA-143(miR-143)对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭、迁移和增殖的影响。方法在脂质体介导下将miR-143抑制剂(miR-143 inhibitors)转染入MCF-7细胞,以inhibitor negative control(inhibitor NC)作为阴性对照。通过MTS试剂盒检测细胞增殖能力,以Transwel 侵袭实验和迁移实验分别检测细胞侵袭能力和迁移能力。结果(1)miR-143 inhibitors组与inhibitor NC组间细胞增殖活性无明显差异(P>0.05);(2)Transwel 侵袭及迁移实验显示转染miR-143 inhibitors后,MCF-7细胞的侵袭及迁移能力均明显增强(P<0.05)。结论 miR-143对人乳腺癌MCF-7细胞的侵袭及迁移能力存在负性调控作用,可能成为乳腺癌治疗的潜在靶点。 相似文献
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目的:探讨抑制TRIM24基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响,阐明TRIM24基因在乳腺癌发生发展中的作用。方法:以脂质体法转染TRIM24 siRNA和阴性对照NC-siRNA至MCF-7细胞作为si-TRIM24组和NC-siRNA组,以未转染的MCF-7细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blotting法检测转染48 h后各组MCF-7细胞中TRIM24 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测各组MCF-7细胞增殖能力,流式细胞术检测各组MCF-7细胞凋亡率,Transwell实验检测各组MCF-7细胞侵袭和迁移数。结果:与对照组和NC-siRNA组比较,si-TRIM24组MCF-7细胞中TRIM24 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),MCF-7细胞增殖能力降低(P<0.05),MCF-7细胞凋亡率明显升高(P<0.05),MCF-7细胞侵袭和迁移数明显减少(P<0.05)。结论:抑制TRIM24基因表达能够明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、侵袭和迁移,且能够诱导细胞凋亡。 相似文献
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目的探讨miRNA-1271对人乳腺癌细胞增殖的影响。方法采用RT-PCR法检测80例乳腺癌组织及癌旁正常组织中miRNA-1271的表达。采用脂质体转染法将miRNA-1271模拟物转染至乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231中,应用CCK-8实验、克隆形成实验、流式细胞术、动物实验等探究miRNA-1271对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响。结果乳腺癌组织中miRNA-1271相对表达量较癌旁正常组织明显降低(P<0.05)。miRNA-1271表达上调后,MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞的吸光度值明显降低(均P<0.05),克隆形成数明显减少(均P<0.05),细胞凋亡率明显增高(均P<0.05)。动物实验结果显示,miRNA-1271在体内亦能抑制MCF-7乳腺癌细胞的增殖。结论miRNA-1271在乳腺癌组织中低表达;上调miRNA-1271表达,能抑制乳腺癌细胞的增殖,促进凋亡的发生,具有抑癌作用。 相似文献
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目的:探讨 miRNA-4465的过表达对乳腺癌 MDA-MB-231细胞迁移侵袭能力的影响及机制。方法将 miR-NA-4465的模拟物(minics)转染入 MDA-MB-231细胞,通过实时定量 PCR 检测 miRNA-4465的表达变化;运用 Transwell实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的改变。采用生物信息学技术预测 miRNA-4465的潜在靶基因,并通过荧光报告载体实验及 Western blot 加以证实。结果与阴性对照组相比,转染 miRNA-4465 minics 组 miRNA-4465表达水平明显升高(P =0.001)。Transwell 迁移实验结果显示转染 miR-NA-4465 minics 组细胞迁移能力减弱(P =0.001);Transwell侵袭实验结果显示转染 miRNA-4465 minics 组细胞侵袭能力降低(P =0.010)。通过生物信息学技术预测了 EZH2为miRNA-4465的潜在靶基因;荧光报告载体实验结果显示转染 miRNA-4465 minics +psiCHECK2-EZH23’UTR(野生型)后荧光素酶活性较转染阴性对照序列(NC)+psiCHECK2-EZH23’UTR(野生型)降低66%(P =0.001)。此外将 miR-NA-4465转染入 MDA-MB-231细胞后 EZH2蛋白表达降低。结论 miRNA-4465能降低 MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力,这个过程可能是通过调控 EZH2基因的表达实现的。 相似文献
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目的 探讨miR-4443对乳腺癌转移的影响。方法 使用高通量测序技术测定检测3例乳腺癌患者原位癌组织及其配对的癌旁组织中miR-4443的表达。使用TCGA数据库验证miR-4443在乳腺癌组织以及正常乳腺组织中的表达水平。以MCF-7细胞(低侵袭性乳腺癌细胞)和MDA-MB-231细胞(高侵袭性乳腺癌细胞)为研究对象,采用RT-qPCR验证miR-4443在这两种细胞株中的表达水平。通过电转染法将miR-4443 mimics(miR-4443模拟物)、mimics-NC(miR-4443模拟物的对照物)或miR-4443inhibitors(miR-4443抑制物)、inhibitors-NC(miR-4443 抑制物的对照物)转染至不同的细胞株,利用RT-qPCR检测miR-4443在转染前后的表达水平,使用流式细胞分析仪分析 miR-4443 表达水平的变化对乳腺癌细胞凋亡的影响,使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-4443表达水平的变化对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。使用生物信息学软件预测miR-4443潜在的靶基因,并进一步使用双荧光素酶报告基因系统验证。采用RT-qPCR和Western blot分别检测不同细胞株中PEBP1(重组人磷脂酰乙醇胺结合蛋白1)在mRNA和蛋白水平的表达。结果 高通量测序技术检测发现在乳腺癌组织中miR-4443的表达远高于癌旁组织(P<0.01)。TCGA数据分析显示,与正常乳腺组织想比,miR-4443在乳腺癌组织中的表达升高(P<0.01)。RT-qPCR显示,与MCF-7细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-4443的表达升高(P<0.01)。与转染mimics-NC相比,MCF-7细胞转染miR-4443 mimics后,miR-4443的表达上调(P<0.01);而转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞,其表达下调(P<0.01)。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照差异无统计学意义(P>0.05),并且转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照亦差异无统计学意义(P>0.05)。划痕实验及Transwell侵袭实验显示转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力减弱(P<0.01)。相反的,转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞迁移及侵袭能力加强(P<0.01)。生物信息学软件预测发现PEBP1可能是miR-4443的潜在靶基因且与转移的相关程度最高。进一步行双荧光素酶报告基因实验,验证PEBP1是miR-4443的靶基因(P<0.01)。RT-qPCR和Western blot显示,MDA-MB-231细胞中PEBP1在mRNA及蛋白中的水平均低于MCF-7细胞(P<0.01)。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均低于对照(P<0.01);转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均高于对照(P<0.01)。结论 miR-4443通过抑制PEBP1的表达水平促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力,而抑制乳腺癌细胞中miR-4443的表达可能是未来潜在的治疗方法。 相似文献
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目的 探讨TSPAN15 mRNA在乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移中的作用。方法 选取正常乳腺上皮细胞MCF-10A(对照组1)、乳腺癌细胞系MCF-7(MCF-7组)和MDA-MB-231(231组),分别采用空白质粒psilencer 2.1和TSPAN15-ShR3质粒转染MCF-7组(对照组2和沉默组1)和231组细胞(对照组3和沉默组2)。采用细胞计数试剂盒、Transwell侵袭实验和划痕实验检测TSPAN15对乳腺癌细胞增殖、侵袭以及迁移能力的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time fluorescence polymerase chain reaction, RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting, WB)比较不同组细胞转染后的TSPAN15 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 RT-qPCR和WB实验结果显示,MCF-7组和231组的TSPAN15表达水平高于对照组1,差异有统计学意义(P <0.05)。沉默组1和沉默组2肿瘤细胞的增殖能力、侵袭能力、迁移能力、肿瘤N-cadherin的mRNA水平... 相似文献
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目的探讨miR-99a对乳腺癌细胞侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7中miR-99a的表达。运用脂质体介导的转染方法分别将miR-99a模拟物(miR-99amimics)、miR-99a抑制物(miR-99ainhibitors)以及相应对照miRNA转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,通过Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕实验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-99a的靶基因,并对靶基因进行验证。结果(1)高转移潜能的MDA-MB-231细胞中miR-99a表达明显低于低转移潜能的MCF-7细胞,划痕实验中转染miR-99amimics的与转染controlmimics的MDA-MB-231细胞比较迁移能力显著减弱(P<0.05),而MCF-7细胞转染miR-99ainhibitors后迁移能力明显增强(P<0.01)。(2)Transwell的侵袭及迁移实验显示,转染miR-99amimics后MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力明显减弱(P<0.01);MCF-7细胞转染miR-99ainhibitors后迁移能力增强(P<0.01),而侵袭能力基本不变(P>0.05)。(3)生物信息学方法预测微管相关蛋白(MTMR3)是miR-99a的靶点,实时定量PCR和3′UTR荧光素酶报告基因实验验证了该靶点。(4)干扰了MTMR3后MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。结论(1)miR-99a对乳腺癌细胞的侵袭及迁移发挥负向调控作用。(2)miR-99a可能通过靶向于MTMR3发挥其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的调控作用。 相似文献
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目的 研究miR-671-3p对乳腺癌细胞增殖、侵袭生物学功能的影响及其可能的作用机制。方法 以实时荧光定量PCR方法检测正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)与乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3)中miR-671-3p表达情况;检测miR-671-3p 在MCF-7细胞中的转染效率;通过CCK-8法检测miR-671-3p对MCF-7细胞增殖的影响;通过Transwell实验、划痕实验检测miR-671-3p对MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响;Targetscan预测miR-671-3p的靶基因,并通过双荧光素酶法和Western blot法对靶基因DEPTOR进行验证,并检测DEPTOR的表达。结果 miR-671-3p在乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3的表达量低于乳腺正常上皮细胞MCF-10A的表达。通过mimics、inhibitor分别促进、抑制miR-671-3p在MCF-7细胞中的表达后,结果显示miR-671-3p对乳腺癌细胞的增殖有抑制作用(P<0.05),对肿瘤细胞的侵袭和迁移有抑制作用(P<0.05)。双荧光素酶结果
显示DEPTOR蛋白为miR-671-3p的直接作用靶点,过表达miR-671-3p可直接抑制DEPTOR蛋白的表达。结论 miR-671-3p直接靶向作用于DEPTOR蛋白从而抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。 相似文献
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目的探讨miRNA-4429靶向结合髓样细胞白血病-1(MCL1)对食管鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。方法采用qRT-PCR法检测食管鳞状细胞癌细胞系和食管正常上皮细胞中miRNA-4429的相对表达量。采用脂质体转染法分别将miRNA-4429模拟物和模拟物对照转染至食管鳞状细胞癌EC9706细胞,分为实验组和对照组。应用CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术和Transwell小室实验等探究miRNA-4429对食管鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。构建MCL1的3''非编码区(3''UTR)野生型和突变型荧光素酶报告基因载体,应用荧光素酶报告基因实验验证MCL1是否为miRNA-4429的靶基因。采用Westernblot法检测实验组和对照组MCL1蛋白的表达水平。结果4株食管鳞状细胞癌细胞中miRNA-4429相对表达量均明显低于食管正常上皮细胞(均P<0.01);而与对照组比较,实验组细胞中miRNA-4429相对表达量显著上调(P<0.01)。实验组细胞OD值在72、96h均明显低于对照组(均P<0.01);与对照组比较,实验组细胞集落形成数明显降低(P<0.01)。与对照组比较,实验组细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。实验组细胞迁移数及侵袭数均明显低于对照组(均P<0.01)。miRWalk、miRDB和miRTarBase预测结果表明,MCL1是miRNA-4429的作用靶基因。荧光素酶报告基因实验的结果表明,共转染MCL13''UTR-野生型荧光素酶报告载体后,与对照组比较,实验组荧光素酶相对活性降低(P<0.05);而共转染MCL13''UTR-突变型荧光素酶报告载体后,实验组与对照组荧光素酶相对活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。实验组MCL1蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.01)。结论食管鳞状细胞癌细胞株中miRNA-4429相对表达量降低,上调miRNA-4429表达可减弱食管鳞状细胞癌EC9706细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡,其作用机制可能与靶向结合调控MCL1的表达有关。 相似文献
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目的 探讨miRNA-375 靶向磷脂酰肌醇激酶-3 催化亚单位α(PIK3CA)对宫颈癌细胞增殖和
迁移的影响。方法 选取宫颈癌细胞系SiHa,分别转染miRNA-375 模拟基因、miRNA-375 抑制剂、对照模拟
基因及对照抑制剂,采用RT-PCR 法检测miRNA-375 表达,Western blot 检测PIK3CA 蛋白表达,MTT 法检
测细胞增殖活性,划痕实验检测细胞迁移能力。双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-375 与PIK3CA 的靶向
关系。结果 转染miRNA-375 模拟基因后miRNA-375 表达上调,PIK3CA 蛋白表达降低(P <0.05);转染
miRNA-375 抑制剂后miRNA-375 表达降低,PIK3CA 蛋白表达增强(P <0.05)。转染miRNA-375 模拟基
因后SiHa 细胞增殖活性、迁移能力降低(P <0.05);转染miRNA-375 抑制剂后SiHa 细胞增殖活性、迁移
能力增强(P <0.05)。miRNA 靶基因预测软件检测结果显示,miRNA-375 能作用于PIK3CA 3''-UTR。与转
染对照模拟基因比较,共转染miRNA-375 模拟基因与PIK3CA-WT 可使SiHa 荧光素酶活性降低(P <0.05)。
结论 miRNA-375 可抑制宫颈癌细胞增殖及迁移,其机制可能与靶向调控PIK3CA 有关。 相似文献
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YB-1表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响 总被引:1,自引:1,他引:1
目的:观察Y-盒结合蛋白-1(YB-1)对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响.方法:通过脂质体介导的方法将YB-1 shRNA重组载体转染入人类乳腺癌MCF-7细胞,经G418筛选及克隆化培养后获得稳定转染株.运用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测MCF-7细胞中YB-1 mRNA和YB-1蛋白的表达水平,运用划痕实验和Transwell小室法检测细胞运动、迁移和侵袭能力的变化,同时运用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测细胞中MMP-2的表达水平,并用明胶酶谱法检测MMP-2蛋白的活性.结果:稳定转染YB-1 shRNA的细胞中YB-1的表达明显低于转染随机片段的细胞和未转染组细胞,且细胞的运动、迁移和侵袭能力以及MMP-2的表达及活性也较后两组细胞明显下降.转染随机片段的细胞和未转染组细胞间无明显差异.结论:YB-1 shRNA可以沉默乳腺癌MCF-7细胞中YB-1的表达,并降低细胞的迁移和侵袭能力以及MMP-2的表达及活性. 相似文献
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目的探讨miR-191在人乳腺癌细胞中的表达情况,研究其对乳腺癌细胞的增殖、侵袭的影响。方法 real-time PCR检测乳腺癌细胞[MDA-MB-231(雌激素受体阴性,ER-)、MCF-7(雌激素受体阳性,ER+)]和正常乳腺上皮细胞(HBL-100)中miR-191表达水平的差异;利用Lipofectamine2000将miR-191抑制体瞬时转染乳腺癌MCF-7,并用real-time PCR检测转染效果;分别用CCK-8法检测MCF-7细胞增殖,流式细胞术检测MCF-7细胞的细胞周期,Transwell法检测MCF-7细胞的侵袭能力。结果与正常乳腺细胞相比,miR-191在乳腺癌细胞中高表达(P<0.01),且在ER(+)乳腺癌细胞MCF-7中的表达水平高于ER(-)乳腺癌细胞MDA-MB-231(P<0.01),转染miR-191抑制体后,MCF-7细胞增殖能力(0.65±0.04)较阴性对照组(1.18±0.05)明显受到抑制(F=122.238,P<0.01),侵袭能力(56.67±2.58)较阴性对照组(82.5±5.79)减弱(F=18.734,P<0.01),G0/G1期的细胞比例(73.39±1.10)%较阴性对照组(69.28±2.11)%增加(F=61.060,P<0.01),S期细胞比例(20.9±1.17)%较阴性对照组(25.48±1.19)%减少(F=46.937,P<0.01)。结论 miR-191在人乳腺癌细胞中,特别是ER(+)乳腺癌中高表达,转染miR-191抑制体后,MCF-7细胞增殖、侵袭能力明显受到抑制。 相似文献
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高砚春 《中国比较医学杂志》2016,26(11):55-60
目的探讨miR-34a通过靶向调控Notch1表达影响乳腺癌细胞的增殖。方法乳腺癌细胞MCF-7转染miR-34a mimics及miR-34a NC,RT-PCR法检测细胞中miR-34a表达,MTT,克隆形成实验,Hoechst染色及流式细胞术分别检测miR-34a mimics对乳腺癌MCF-7细胞活力、克隆能力、凋亡情况及细胞周期的影响;通过双荧光素酶报告基因实验,western blot及RT-PCR检测Notch1是否是miR-34a的下游靶基因。结果与miR-34a NC比较,miR-34 mimics组中miR-34a表达量上调,细胞活力降低(P0.01),细胞凋亡率显著提高(P0.01),细胞克隆数目减少(P0.01),细胞周期阻滞在G1期(P0.01),Notch1蛋白及mRNA表达量都显著降低(P0.01),同时荧光素酶报告基因实验也证实miR-34a mimics能与报告基因结合。结论 miR-34a mimics能通过负性调控Notch1表达,从而显著的抑制MCF-7乳腺癌细胞增值,并诱导细胞凋亡。 相似文献