微小核糖核酸101异常表达与乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的关系

目的探讨微小核糖核酸101（miRNA-101）在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达及其对MDAMB-231 细胞增殖的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺上皮细胞MCF-10A 中miRNA-101 的表达。采用Lipofectamine TM 2000 将miRNA-101-mimic/inhibitor/NC 分别转染至MDA-MB-231 细胞中,通过qRT-PCR检测miRNA-101 的转染效率,CCK-8 实验检测MDA-MB-231 细胞的增殖。结果miRNA-101 在MDA-MB-231 细胞中的表达水平低于正常乳腺细胞MCF-10a（ p<0.01）。转染miRNA-101 mimic 后MDA-MB-231 细胞的增殖能力减弱（p <0.05）,而转染miRNA-101 inhibitor后细胞的增殖能力增强（p <0.05）。结论miRNA-101 在乳腺癌细胞MDA-MB-231中低表达,转染miRNA-101 mimic后乳腺癌细胞MDA-MB-231 的增殖减弱。     

环状RNACdr1as/miR-7/SP1轴调控乳腺癌细胞侵袭和转移的研究

目的探讨环状RNACdr1as/miR-7/SP1轴调控乳腺癌细胞发生侵袭和转移的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR技术检测乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞转染miR-7模拟物、sh-Cdr1as、转录因子SP1siRNA前后,正常乳腺MCF-10A细胞及乳腺癌组织中环状RNACdr1as、miR-7、SP1mRNA的表达水平;MDA-MB-231、MCF-7细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）及波形蛋白（Vimentin）mRNA的表达水平;采用Transwell实验分析MDA-MB-231、MCF-7细胞的侵袭和迁移能力;Westernblot法检测MDA-MB-231、MCF-7细胞中E-cadherin及Vimentin蛋白的表达情况。结果与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231、MCF-7细胞环状RNACdr1as表达上调,miR-7表达下调,SP1mRNA表达上调（均P＜0.05）。与转染前相比,MCF-7、MDA-MB-231细胞转染sh-Cdr1as后,miR-7表达上调（均P＜0.05）,SP1mRNA表达下调（均P＜0.05）;而转染miR-7mimics后,SP1mRNA表达下调（均P＜0.05）。与转染前相比,MDA-MB-231、MCF-7细胞转染sh-Cdr1as后,侵袭细胞数明显减少（均P＜0.05）。与乳腺导管原位癌患者相比,乳腺浸润性导管癌环状RNACdr1as表达上调（P＜0.05）;与无腋窝淋巴结转移患者相比,有腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者环状RNACdr1as表达上调（P＜0.05）;Pearson相关性分析显示环状RNACdr1as与miR-7的表达存在负相关（r=-0.541,P＜0.05）,miR-7与SP1mRNA的表达也存在负相关（r=-0.467,P＜0.05）。MDA-MB-231、MCF-7细胞转染SP1siRNA后,E-cadherinmRNA、蛋白表达均上调（均P＜0.05）,VimentinmRNA、蛋白表达均下调（均P＜0.05）。结论乳腺癌细胞环状RNACdr1as表达上调,通过环状RNACdr1as/miR-7/SP1调控轴促使癌细胞发生上皮间质转化,使乳腺癌细胞发生侵袭和转移。环状RNACdr1as可能成为乳腺癌治疗的新靶点。     

miRNA-506在三阴性乳腺癌中的表达及对其增殖和侵袭作用的研究

目的 探讨miRNA-506对三阴性乳腺癌癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法 qRT-PCR检测三阴性乳腺癌患者癌组织、癌旁正常组织、乳腺良性病变组、三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231以及正常乳腺上皮细胞系HBL-100中miRNA-506表达情况;转染miRNA-506mimics后CCK-8检测细胞增殖情况;Transwell小室法检测MDA-MB-231细胞侵袭情况。结果 乳腺癌组织中的miRNA-506表达水平低于癌旁正常组织以及乳腺良性病变组织（P <0.01）;人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞内的miRNA-506低于人正常乳腺上皮细胞系HBL-100细胞（P <0.01）;转染miRNA-506mimics可显著抑制MDA-MB-231细胞增殖和侵袭（P <0.01）。结论 miRNA-506在三阴性乳腺癌低表达以及其可抑制三阴性乳腺癌的增殖、侵袭生物学行为。     

微RNA-375在三阴性乳腺癌中的表达及生物学效应

目的 探讨微RNA-375(miRNA-375)在三阴性乳腺癌中的表达及生物学效应。方法 采用Real-time PCR技术检测62例三阴性乳腺癌患者的癌组织及其癌旁正常组织中miRNA-375的表达,分析miRNA-375表达与临床病理学特征的关系。对乳腺癌细胞株MDA-MB-231和乳腺纤维腺瘤细胞株MCF-10A中miRNA-375的表达进行检测;将miRNA-375前体转染MDA-MB-231,CCK-8法和Transwell实验检测细胞增殖和侵袭力的变化。结果 三阴性乳腺癌组织中miRNA-375表达显著低于癌旁正常组织(P<0.001),miRNA-375的表达与肿瘤的大小和是否存在腋窝淋巴结转移有关(P<0.001)。与MCF-10A比较,MDA-MB-231中miRNA-375的表达显著降低(P=0.021)。miRNA-375前体转染后,MDA-MB-231内miRNA-375表达显著上调,细胞增殖能力和侵袭力减弱。结论 三阴性乳腺癌组织和MDA-MB-231中miRNA-375的表达下调。miRNA-375对三阴性乳腺癌发生和发展具有一定的抑制作用。     

长链非编码RNAAC003973.4对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响研究

目的检测长链非编码RNAAC003973.4在人乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,探讨其对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测20例乳腺癌组织及配对的癌旁组织,以及检测乳腺癌细胞株（BT-549、MDA-MB-231、MCF-7、T47D）和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A中AC003973.4的表达。取AC003973.4表达水平最低的乳腺癌细胞株转染过表达质粒以上调AC003973.4的表达,分别采用MTS法、Transwell迁移和侵袭实验检测AC003973.4对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;生物信息学法预测AC003973.4互补结合的miRNA及下游靶基因,qRT-PCR法检测miRNA和下游靶基因mRNA的表达,Westernblot检测相关蛋白的表达。结果乳腺癌组织AC003973.4表达水平明显低于癌旁组织（P＜0.01）。乳腺癌细胞株AC003973.4表达水平明显低于人正常乳腺上皮细胞（均P＜0.05）,MCF-7细胞中AC003973.4的表达水平最低（P＜0.01）。上调MCF-7细胞AC003973.4的表达后,细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱（均P＜0.05）。AC003973.4可互补结合miR-224-5p,miR-224-5p可互补结合PTEN。上调MCF-7细胞AC003973.4的表达后,miR-224-5p的表达均下调（P＜0.01）,PTENmRNA和蛋白的表达均上调（均P＜0.01）,细胞增殖相关蛋白CDK4、CyclinD1与细胞迁移相关蛋白Zeb-1、N-cadherin表达均下调（均P＜0.01）。结论乳腺癌组织和细胞株中AC003973.4表达水平降低,上调AC003973.4表达可减弱乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其作用机制可能与调节miR-224-5p与PTEN基因的表达有关。     

VCAN通过PI3K/AKT信号通路调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖

目的 探讨多能蛋白聚糖（VCAN）通过PI3K/AKT 信号通路对乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖的影响。方法 利用Western Blot 和qRT-PCR 检测VCAN 在正常人乳腺细胞MCF-10A 和三株乳腺癌细胞中的表达水平。选取VCAN 高表达细胞株MDA-MB-231 为实验对象,实验分组为NC 组、siRNA1-VCAN 组和siRNA2-VCAN 组。采用MTT 法及克隆形成法检测转染后的乳腺癌细胞增殖变化。Western Blot 检测p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K 的蛋白相对表达水平。结果 与正常人乳腺细胞相比,VCAN 在乳腺癌细胞中的表达量显著上升（P＜0.05）。下调VCAN 表达量,MDA-MB-231 细胞的增殖显著被抑制（P＜0.05）。同时,下调VCAN 表达量,p-AKT、p-PI3K 蛋白水平显著下降（P＜0.05）。结论VCAN 在乳腺癌MDA-MB-231 细胞中,可能通过PI3K/AKT 信号通路调控细胞增殖能力。     

MiR-4443通过抑制PEBP1的表达促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-4443对乳腺癌转移的影响。方法 使用高通量测序技术测定检测3例乳腺癌患者原位癌组织及其配对的癌旁组织中miR-4443的表达。使用TCGA数据库验证miR-4443在乳腺癌组织以及正常乳腺组织中的表达水平。以MCF-7细胞（低侵袭性乳腺癌细胞）和MDA-MB-231细胞（高侵袭性乳腺癌细胞）为研究对象,采用RT-qPCR验证miR-4443在这两种细胞株中的表达水平。通过电转染法将miR-4443 mimics（miR-4443模拟物）、mimics-NC（miR-4443模拟物的对照物）或miR-4443inhibitors（miR-4443抑制物）、inhibitors-NC（miR-4443 抑制物的对照物）转染至不同的细胞株,利用RT-qPCR检测miR-4443在转染前后的表达水平,使用流式细胞分析仪分析 miR-4443 表达水平的变化对乳腺癌细胞凋亡的影响,使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-4443表达水平的变化对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。使用生物信息学软件预测miR-4443潜在的靶基因,并进一步使用双荧光素酶报告基因系统验证。采用RT-qPCR和Western blot分别检测不同细胞株中PEBP1（重组人磷脂酰乙醇胺结合蛋白1）在mRNA和蛋白水平的表达。结果 高通量测序技术检测发现在乳腺癌组织中miR-4443的表达远高于癌旁组织（P<0.01）。TCGA数据分析显示,与正常乳腺组织想比,miR-4443在乳腺癌组织中的表达升高（P<0.01）。RT-qPCR显示,与MCF-7细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-4443的表达升高（P<0.01）。与转染mimics-NC相比,MCF-7细胞转染miR-4443 mimics后,miR-4443的表达上调（P<0.01）;而转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞,其表达下调（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照差异无统计学意义（P>0.05）,并且转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照亦差异无统计学意义（P>0.05）。划痕实验及Transwell侵袭实验显示转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力减弱（P<0.01）。相反的,转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞迁移及侵袭能力加强（P<0.01）。生物信息学软件预测发现PEBP1可能是miR-4443的潜在靶基因且与转移的相关程度最高。进一步行双荧光素酶报告基因实验,验证PEBP1是miR-4443的靶基因（P<0.01）。RT-qPCR和Western blot显示,MDA-MB-231细胞中PEBP1在mRNA及蛋白中的水平均低于MCF-7细胞（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均低于对照（P<0.01）;转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均高于对照（P<0.01）。结论 miR-4443通过抑制PEBP1的表达水平促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力,而抑制乳腺癌细胞中miR-4443的表达可能是未来潜在的治疗方法。     

UBE2T-siRNA对乳腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的 探讨沉默泛素结合酶E2T(UBE2T)对乳腺癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响.方法 体外培养人乳腺正常细胞系MCF-10A及乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7、MDA-M B-468、HCC1937,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各细胞系中UBE2T mRNA的表达水平.将乳腺癌MDA-MB-231细胞系进行UBE2T-siRNA转染,并分为对照组、阴性转染组、UBE2T-siRNA组.qRT-PCR检测各组细胞中UBE2T mR-NA的表达.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率.流式细胞术检测各组细胞周期及凋亡情况.Transwell检测各组细胞侵袭情况.Western blot检测各组细胞蛋白细胞周期素D1 (CyclinD1)、β-cate-nin、神经型钙黏蛋白(N-cad)、上皮型钙黏蛋白(E-cad)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的表达.结果 与MCF-10A比较,HCC1937、MCF-7、MDA-MB-468、MDA-MB-231细胞中UBE2T mRNA表达均升高,其中MDA-MB-231细胞升高最明显.与对照组和阴性转染组比较,UBE2T-siRNA组细胞UBE2T mRNA的表达明显降低(P＜0.05);细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、G2/M期细胞百分比明显升高,G0/G1期细胞百分比、细胞侵袭数目明显降低(P＜0.05);细胞蛋白CyclinD1、β-catenin、N-cad表达明显降低,E-cad、caspase-9的表达明显升高(P＜0.05).结论 沉默UBE2T能够促进乳腺癌细胞的凋亡,抑制其增殖和侵袭,UBE2T可能是乳腺癌治疗的潜在研究靶点.     

三黄煎剂调节Aurora激酶A促进乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的?探讨三黄煎剂对乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞凋亡的影响及Aurora激酶A（Aurora A）蛋白表达及功能的影响,并探讨其内在机制。方法?采用CCK-8法检测三黄煎剂对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231增殖的影响。AnnexinV-FITC/PI法检测MCF-7、MDA-MB-231细胞凋亡率。q-PCR法检测MCF-7、MDA-MB-231细胞Aurora A、p53的mRNA表达水平。Western Blot法检测MCF-7、MDA-MB-231细胞凋亡相关蛋白的表达及Aurora A蛋白的表达。结果?三黄煎剂对MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖抑制率呈浓度梯度依赖增长（P<0.05）,给药48?h疗效好于24?h（P<0.05）,与给药72?h无统计学差异（P>0.05）。三黄煎剂能够诱导MCF-7、MDA-MB-231细胞凋亡,并上调c-PARP、c-Caspase 3、Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达,呈浓度梯度依赖。三黄煎剂能够下调Aurora A蛋白及mRNA的表达、上调p53蛋白及mRNA的表达。结论?三黄煎剂能够通过下调Aurora A蛋白及mRNA的表达,抑制Aurora A的生物活性,抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞增殖,诱导其凋亡。      

THBS1在乳腺癌细胞中的表达及对生物学行为的影响

目的 探讨THBS1基因对乳腺癌细胞生物学行为的影响.方法 生物信息学分析THBS1在乳腺癌组织与癌旁组织中的表达差异.利用si-RNA沉默人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231中THBS1基因,检测细胞的增殖、侵袭能力和凋亡率变化.结果 THBS1在乳腺癌组织中表达量高于癌旁组织(P<0.05);与si-NC组...     

miR-99a对乳腺癌细胞侵袭和迁移的负向调控机制研究

目的探讨miR-99a对乳腺癌细胞侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7中miR-99a的表达。运用脂质体介导的转染方法分别将miR-99a模拟物（miR-99amimics）、miR-99a抑制物（miR-99ainhibitors）以及相应对照miRNA转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,通过Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕实验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-99a的靶基因,并对靶基因进行验证。结果（1）高转移潜能的MDA-MB-231细胞中miR-99a表达明显低于低转移潜能的MCF-7细胞,划痕实验中转染miR-99amimics的与转染controlmimics的MDA-MB-231细胞比较迁移能力显著减弱（P＜0.05）,而MCF-7细胞转染miR-99ainhibitors后迁移能力明显增强（P＜0.01）。（2）Transwell的侵袭及迁移实验显示,转染miR-99amimics后MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力明显减弱（P＜0.01）;MCF-7细胞转染miR-99ainhibitors后迁移能力增强（P＜0.01）,而侵袭能力基本不变（P＞0.05）。（3）生物信息学方法预测微管相关蛋白（MTMR3）是miR-99a的靶点,实时定量PCR和3′UTR荧光素酶报告基因实验验证了该靶点。（4）干扰了MTMR3后MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。结论（1）miR-99a对乳腺癌细胞的侵袭及迁移发挥负向调控作用。（2）miR-99a可能通过靶向于MTMR3发挥其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的调控作用。     

SMC4对人乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其机制研究

目的 探讨敲低染色体结构维持蛋白4(SMC4)基因的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响及其可能的机制.方法 用定量PCR(qPCR)法检测20例乳腺癌患者乳腺癌组织及对应癌旁组织中SMC4的表达情况,并用qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测人乳腺上皮细胞(MCF10A)及人乳腺癌细胞(MDA-MB-231、T47D、SK-BR-3、MCF7、MDA-MB-468)中SMC4的表达情况.用小分子干扰RNA(siRNA)特异性干扰MDA-MB-231中SMC4的表达后,用qPCR及Western blot检测干扰效果,用CCK8及平板克隆实验检测其增殖与克隆形成能力,Transwell小室检测其迁移及侵袭能力,用Western blot检测可能影响的通路蛋白表达情况.结果 SMC4在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(t=3.265,P＜0.05).SMC4在乳腺癌细胞系中的表达明显高于MCF10A.在成功用siRNA干扰SMC4表达后,MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力均明显下降(P＜0.05),且磷酸化蛋白激酶B (p-AKT)及磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)的表达同样明显降低(P＜0.05),而AKT及PI3K的表达则无明显影响.结论 干扰SMC4基因的表达可抑制MDA-MB-231的增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与PI3K/AKT信号通路的激活相关.     

沉默Smad4基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究降低Smad4表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞中Smad4 mRNA表达水平;Smad4-shRNA与Scramble-shRNA质粒分别稳定转染Smad4高表达MCF-7细胞,实验分为未转染MCF-7细胞组（正常对照组）,采用Smad4基因沉默组和Scramble组（阴性对照组）;采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR（Real-time PCR）法检测增殖相关基因CDKN1A、CDK1和CDK2以及凋亡相关基因Suvivin、bcl-2、caspase3和caspase9 mRNA表达水平。结果：各组细胞增殖能力比较差异无统计学意义（P > 0.05）,各组细胞CDKN1A、CDK1和CDK2 mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P > 0.05）;与正常对照组和阴性对照组比较,Smad4基因沉默组细胞凋亡率明显降低（P < 0.01）,Smad4基因沉默组细胞Suvivin和bcl-2 mRNA表达水平明显升高（P < 0.01）,caspase3和caspase9 mRNA表达水平明显降低（P < 0.05）。结论：Smad4可以通过下调Suvivin和bcl-2的表达、上调caspase3和caspase9表达引起细胞凋亡。     

miR-384增加乳腺癌MCF-7细胞多西他赛敏感性

【摘要】 目的 探讨miR-384对乳腺癌MCF-7细胞多西他赛（DOC）敏感性的影响。 方法 乳腺癌MCF-7细胞分成Control组（空白对照）、miR-NC组(转染模拟物阴性对照）、miR-384组(转染miR-384模拟物）、miR-NC+DOC组（转染模拟物阴性对照,DOC处理）、miR-384+DOC组（转染miR-384模拟物,DOC处理）,MTT测定细胞增殖,克隆形成实验测定细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡。在线靶基因预测软件预测性别决定区Y框蛋白4(SOX4)可能是miR-384的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。Western blot测定细胞中SOX4蛋白表达。pcDNA3.1-SOX4和miR-384模拟物共转染,以DOC处理,检测SOX4对上调miR-384联合DOC对乳腺癌MCF-7细胞增殖、克隆和凋亡的影响。 结果 与miR-NC组比较,miR-384组和miR-NC+DOC组细胞中miR-384表达水平升高,细胞增殖和克隆能力降低,细胞凋亡率升高（均P＜0.05）。与miR-NC+DOC组比较,miR-384+DOC组细胞增殖和克隆能力降低,细胞凋亡率升高（均P＜0.05）。miR-384靶向抑制SOX4蛋白表达。pcDNA3.1-SOX4能够逆转上调miR-384联合DOC对乳腺癌MCF-7细胞增殖、克隆和凋亡的影响。 结论 miR-384靶向调控SOX4,增加乳腺癌MCF-7细胞DOC敏感性。     

微小RNA-148b在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨微小RNA(miRNA)-148b在乳腺癌中的表达及意义。方法选取2008年3月—2010年3月我院肿瘤外科乳腺癌患者手术切除标本80例(乳腺肿瘤组织)、乳腺癌旁组织标本80例及正常乳腺组织标本20例。采用real-time PCR技术检测miRNA-148b水平;乳腺肿瘤细胞培养,分为空白对照组不加任何药物,阴性对照组加入安慰剂处理细胞,抑制剂组加入5-氟尿嘧啶10μg/ml预先处理细胞48 h,进行MDA-MB-231细胞培养与转染。结果正常乳腺组织、乳腺癌旁组织、乳腺肿瘤组织中miRNA-148b表达量比较,差异有统计学意义(P<0.001);其中乳腺肿瘤组织中miRNA-148b表达量较正常乳腺组织和乳腺癌旁组织均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。转染24 h后,空白对照组、阴性对照组、抑制剂组中miRNA-148b表达量比较,差异有统计学意义(P<0.001);其中抑制剂组中miRNA-148b表达量较空白对照组和阴性对照组均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。3组转染24 h后MDA-MB-231细胞增殖比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组转染48、72 h后MDA-MB-231细胞增殖比较,差异均有统计学意义(P<0.01);其中转染48、72 h后抑制剂组较空白对照组和阴性对照组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 miRNA-148b在人乳腺癌组织及MDA-MB-231细胞株中的表达较正常及癌旁组织低,并且在高表达水平的同时也伴有细胞增殖升高的特点。通过转染miRNA-148b抑制剂后,miRNA-148b表达水平明显上调,细胞增殖现象下降。miRNA-148b可能在乳腺癌的发生及发展阶段都发挥着重要的作用。     

GP73通过p53信号通路调节乳腺癌细胞MCF-7的增殖和凋亡

目的 探讨高尔基蛋白73(GP73)对乳腺癌细胞MCF-7的增殖、凋亡的影响及相关机制.方法 利用干扰及过表达GP73质粒转染乳腺癌细胞MCF-7,并利用CCK-8检测处理后细胞的增殖能力,利用流式细胞术方法检测处理组细胞的凋亡水平,利用qRT-PCR和Western印迹法测定GP73和p53 mRNA和蛋白的表达.采用qRT-PCR测定20例临床乳腺癌和癌旁组织中GP73和p53的mRNA水平,并分析乳腺癌组织中GP73和p53的mRNA水平的相关性.结果 过表达GP73后MCF-7较对照组增殖能力上升(P＜0.05),凋亡水平下降(P＜0.05);干扰GP73后MCF-7增殖能力下降(P＜0.05),凋亡率升高.同时过表达GP73和p53的乳腺癌细胞较单独过表达GP73的MCF-7细胞的增殖能力下降,凋亡水平上升.乳腺癌组织中GP73和p53 mRNA表达也呈负相关(r=-0.528,P＜0.01).结论 GP73可能通过p53信号通路调节乳腺癌细胞MCF-7的增殖和凋亡.     

驱动蛋白家族成员15在非特殊型浸润性乳腺癌中的表达及意义

目的:探讨驱动蛋白家族成员15(KIF15)在非特殊型浸润性乳腺癌(IC-NST)中的表达及意义。方法:免疫组织化学法检测126例IC-NST癌组织及配对癌旁组织、80例导管内癌组织中KIF15的表达。蛋白质印迹法检测正常乳腺细胞(MCF-10A)和乳腺癌细胞(MDA-MB-231和MCF-7)中KIF15蛋白的表达。分析KIF15与临床预后的关系。采用RNA干扰技术沉默MDA-MB-231和MCF-7细胞中KIF15的表达,观察细胞增殖、侵袭、凋亡及Notch1信号通路相关蛋白(hes1、hes5、NICD)的变化。CCK-8法检测细胞增殖活力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Annexin-V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡。结果:IC-NST癌组织中KIF15阳性表达率为70.63%(89/126),高于导管内癌组织[38.75%(31/80),P<0.05]和癌旁组织[23.01%(29/126),P<0.05]。乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞的KIF15蛋白表达水平分别为1.89±0.34、1.33±0.21,均高于正常乳腺细胞MCF-1...     

丹参酮ⅡA抗乳腺癌作用机制的实验研究

目的 观察丹参酮ⅡA对雌激素受体(ER)阳性和阴性的乳腺癌细胞(MCF-7和MDA-MB-231)的生长抑制作用及其对凋亡相关基因p53、bcl-2及cerBb-2的蛋白表达的影响,并探讨其作用机制.方法 采用MTT比色法检测丹参酮ⅡA对MCF-7和MDA-MB-231的增殖抑制作用;Brdu掺入实验、流式细胞术检测丹参酮ⅡA对两种乳腺癌细胞的DNA合成和凋亡的影响;免疫组化法检测丹参酮ⅡA对两种细胞P53、CerbB-2及Bcl-2蛋白表达的影响.结果 丹参酮ⅡA处理后,MCF-7和MDA-MB-231增殖活性均有降低 (P<0.05),半效抑制浓度(IC50)均为0.25 μg/mL,且抑制作用在两系细胞均呈剂量和时间依赖关系;Brdu标记指数两种细胞均降低 (P<0.05);细胞凋亡率均升高(P<0.001); 细胞免疫组织化学结果 显示,丹参酮ⅡA处理两种细胞后,其P53表达均上调(P<0.05);MCF-7表达CerbB-2增强(P<0.05),而MDA-MB-231表达CerbB-2无明显变化(P>0.05),两种细胞Bcl-2的表达均无明显影响.结论 丹参酮ⅡA体外对ER阳性乳腺癌细胞MCF-7和ER受体阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231具有生长抑制、诱导凋亡的作用,其作用机理可能与抑制DNA合成有关,而与P53、CerBb-2和Bcl-2的表达水平无关.     

HPK1过表达对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：构建造血祖细胞激酶1（HPK1）慢病毒载体,探讨HPK1过表达对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的作用,阐明其可能的机制。方法：通过过表达HPK1的慢病毒感染细胞,获得稳定表达HPK1的细胞系（MCF-7-HPK1和MDA-MB-231-HPK1）,将2个细胞系分别分为3组,即空白组、对照组（空载体组）和过表达组;分别采用RT-PCR法和Western blotting法检测乳腺癌细胞中HPK1 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,Transwell法分析细胞的迁移能力,Western blotting法检测caspase 3、PTEN、MMP-9、MMP-2、Ki-67和HPK1蛋白表达水平。结果：与空白组和对照组比较,乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞过表达组中HPK1 mRNA和蛋白表达水平升高（P < 0.05）,细胞增殖率明显降低（P < 0.05）,细胞凋亡率明显升高（P < 0.05）,穿越Matrigel的细胞数明显减少（P < 0.05）,MCF-7细胞周期阻断在G₁期;过表达组细胞中caspase 3、PTEN蛋白表达水平上调（P < 0.05）,MMP-9、MMP-2、Ki-67蛋白表达水平降低（P < 0.05）。结论：HPK1过表达可抑制乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖及迁移并诱导凋亡,其可能与caspase 3、PTEN蛋白的表达上调及MMP-9、MMP-2和Ki-67蛋白的表达降低有关。     

Hsa_circ_0001946/miR-7/KLF4轴调控乳腺癌进展的研究

目的探讨环状RNAhsa_circ_0001946在乳腺癌组织中的表达情况及hsa_circ_0001946/miR-7/Kruppel样因子4（KLF4）轴调控乳腺癌细胞发生侵袭和转移的机制。方法收集2018年6月至2019年8月在温州医科大学附属第三医院切除的乳腺癌组织标本及其癌旁正常乳腺组织标本91例。采用实时荧光定量PCR法检测乳腺癌及其癌旁正常组织中hsa_circ_0001946、miR-7、KLF4mRNA表达情况及乳腺癌细胞株MCF-7中hsa_circ_0001946、miR-7、KLF4、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）mRNA表达情况;采用细胞侵袭实验分析乳腺癌MCF-7细胞株的侵袭能力;采用Westernblot法检测乳腺癌细胞株MCF-7中E-cadherin及N-cadherin蛋白表达情况。结果与癌旁正常乳腺组织比较,乳腺癌组织中hsa_circ_0001946和KLF4mRNA表达水平均升高,miR-7表达水平下降（均P＜0.05）。与正常乳腺组织、乳腺导管原位癌组织比较,乳腺浸润性导管癌组织中hsa_circ_0001946mRNA表达水平升高（均P＜0.05）。分析82例乳腺浸润性导管癌患者发现,有淋巴结转移者hsa_circ_0001946mRNA表达水平高于无淋巴结转移者（P＜0.05）。Pearson相关显示,乳腺癌组织中hsa_circ_0001946mRNA的表达与miR-7的表达呈负相关（r=-0.418,P＜0.05）,miR-7的表达与KLF4mRNAmRNA的表达呈负相关（r=-0.340,P＜0.05）。与阴性对照组相比,转染sh-hsa_circ_0001946组MCF-7细胞中miR-7表达升高,KLF4mRNA表达下降（均P＜0.05）;与阴性对照组相比,转染miR-7mimics组MCF-7细胞中KLF4mRNA表达下降（P＜0.05）;与阴性对照组相比,转染sh-hsa_circ_0001946组侵袭细胞数减少（P＜0.05）;与阴性对照组相比,转染KLF4siRNA组MCF-7细胞中E-cadherinmRNA及蛋白表达水平均升高,N-cadherinmRNA及蛋白表达水平均下降（均P＜0.05）。结论Hsa_circ_0001946在乳腺癌细胞中表达升高,可通过miR-7/KLF4调控轴使癌细胞发生上皮-间质转化,促进癌细胞的侵袭和转移。