不同方法诱导THP-1细胞分化效果比较

目的优化不同方法刺激THP-1细胞定向分化为M1、M2巨噬细胞及DC细胞,为M1、M2和DC三种体外细胞模型研究奠定基础。方法首先用PMA和GM-CSF/M-CSF两种方法刺激诱导THP-1细胞分化,再分别添加不同细胞因子诱导其分化为M1、M2和DC细胞,观察细胞形态的变化,并用流式细胞术检测细胞表面分子的表达情况。结果两种方法刺激细胞CD分子表达的整体趋势基本一致。THP-1-M1细胞表面CD80和CD86表达量显著增加;THP-1-M2细胞高表达CD163和CD209;THP-1-DC细胞CD14表达量显著降低,高表达CD80、CD86和CD11c。PMA刺激后,M1、M2和DC细胞均贴壁生长;GM-CSF/M-CSF刺激后,只有DC细胞部分贴壁生长,M1和M2细胞仍呈悬浮生长。结论两种方法均能成功地诱导THP-1细胞向不同细胞亚型分化,但是诱导出来的细胞在形态上存在一定差异,可根据实验需求选择刺激方法。     

甲型流感病毒感染后粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对M1样气道单核细胞/巨噬细胞极化的影响

目的探究甲型流行性感冒（流感）病毒感染后粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）对M1样气道单核细胞巨噬细胞极化的影响。方法选取雄性NC/Nga小鼠（8周龄）60只,随机分成甲型流感病毒感染组（对照组,n=30）和GM-CSF过表达组（过表达组,n=30）。评估2组甲型流感感染的发病率和病死率,测定诱导GM-CSF的过表达及纯化对小鼠呼吸力学参数和支气管肺泡灌洗蛋白质（BAL）的影响;观察巨噬细胞的单核细胞分离、分化和极化;利用PCR法测定M1样气道单核/巨噬细胞极化标记基因的表达。结果过表达组的发病率低于对照组（P<0.05）;过表达组的病死率低于对照组（P<0.05）。对照组的呼吸力学参数<过表达组（P<0.05）;对照组的压力容积（PV）曲线的曲率<过表达组（P<0.05）;对照组呼吸系统总阻力和组织或外围气道阻力>过表达组（P<0.05）。过表达组细胞因子CCL17、CXCL9和MMP12的BAL蛋白表达水平高于对照组（P<0.05）。对照组的组织中CD11b+标记气道单核细胞/巨噬细胞极化高于过表达组（P<0.05）。提示正常组织中巨噬细胞以M2型为主,减少炎症反应。对照组中巨噬细胞M1样mRNA水平较高,其中TNF-α、MCP-1、IL-6 mRNA表达水平高于过表达组（P<0.05）。结论 GM-CSF过表达改善了甲型流感病毒感染对肺力学的影响,抑制M1样气道单核细胞/巨噬细胞极化则提示极化以M2样为主,减少炎症反应。     

C型凝集素Dectin-2对动脉粥样硬化M2型巨噬细胞活化和凋亡的作用及机制研究

目的 探究Dectin-2（树突状细胞相关凝集素-2）对动脉粥样硬化进程中巨噬细胞M2型活化和凋亡的功能及机制研究。方法 利用IL-4（白介素4）刺激巨噬细胞M2型活化,WB（蛋白免疫印迹）检测Dectin-2的表达;巨噬细胞敲降Dectin-2,Q-PCR（荧光定量PCR）检测巨噬细胞M2活化标志物Arg1（精氨酸酶1）、FIZZ1（抵抗素样分子α）、Ym1（几丁质酶3）的表达;ox-LDL（氧化修饰低密度脂蛋白）刺激巨噬细胞,流式细胞法检测巨噬细胞凋亡水平;IL-4刺激巨噬细胞0 min、5 min、30 min、60 min检测STAT6（信号传导及转录激活蛋白6）磷酸化变化。结果 IL-4刺激巨噬细胞Dectin-2表达上调,敲降Dectin-2抑制IL-4诱导的巨噬细胞M2型活化标志物Arg1、FIZZ1、Ym1的表达,同时抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡。WB结果显示敲降Dectin-2明显抑制IL-4诱导的STAT6磷酸化水平升高。结论 IL-4刺激巨噬细胞Dectin-2表达上调,抑制Dectin-2表达可以明显抑制巨噬细胞M2型活化以及ox-LDL诱导的凋亡,其作用机制可能是通过调控STAT6的磷酸化水平。     

Nrf2基因敲除对小鼠蛛网膜下腔出血后小胶质细胞／巨噬细胞活化的影响

目的：脑内小胶质细胞／巨噬细胞（ microglia／macrophage, M／M）在蛛网膜下腔出血（ subarachnoid hemor-rhage, SAH）脑组织损伤和修复中具有重要作用。文中研究小鼠 SAH后 M／M活化及Nrf2基因敲除对M／M活化的影响。方法野生型ICR小鼠70只,来源于ICR的Nrf2基因敲除小鼠35只,采用小鼠视交叉注射自体血建立SAH模型。假手术组行同样抽血、钻孔及置针,但不行注血。实验分为4组,野生型假手术组、野生型SAH组、基因敲除假手术组、基因敲除SAH组。 SAH术后第1、3、5天取标本,用Western blot法和免疫组化法检测M／M特异性蛋白Iba1的表达;同时Western blot检测SAH后第3天Iba1蛋白表达,免疫荧光染色检测SAH后第3天CD16／32＋Iba1＋细胞数量。结果 Western blot检测结果显示野生型假手术组、野生型SAH 组第1、3、5天 Iba1蛋白表达灰度值分别为0．491±0．039、0．657±0．069、0．930±0．046和0．926±0．046,而 Iba1蛋白免疫组织化学染色平均光密度值为0．412±0．122、0．625±0．135、0．963±0．213和0．978±0．224,野生型SAH组第1、3、5天Iba1蛋白表达均较野生型假手术组明显增加（P＜0．05）,但野生型SAH组第3天与第5天Iba1表达差异无统计学意义（P＞0．05）;Western blot结果示野生型假手术组、基因敲除假手术组、野生型 SAH 组、基因敲除 SAH 组 SAH 后第3天 Iba1蛋白表达灰度值分别为1．157±0．080、1．162±0．073、1．580±0．171和1．913±0．220,CD16／32＋Iba1＋细胞数量分别为0、0、30．200±6．300和42．800±6．260（个／HP）, SAH后第3天基因敲除SAH组Iba1蛋白表达较野生型SAH组增加（P＜0．05）,且基因敲除SAH组CD16／32＋Iba1＋细胞数较野生型SAH组明显增多（P＜0．05）。结论小鼠SAH后M／M活化增加,Nrf2基因敲除促进了SAH后M／M的活化和M1极化。     

ALD-DNA对巨噬细胞株RAW264.7的刺激作用

目的 体外观察Con A活化淋巴细胞来源的DNA（ALD-DNA）对BALB／c小鼠巨噬细胞株RAW264．7的刺激作用。方法 将ALD-DNA及未活化淋巴细胞来源的DNA（UnALD-DNA）分别与BALB／c小鼠来源的巨噬细胞株RAw264．7孵育48h,然后以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪测定细胞表面分子的表达,ELISA检测白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素12（IL-12）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的分泌情况。结果 ALD—DNA在体外能够明显刺激细胞发生增殖,上调细胞表面主要组织相容性复合体（MHC）Ⅱ类分子以及共刺激分子CD40、CD80和CD86的表达,并能够诱导细胞分泌IL-6、IL-12和TNF-α 。结论 ALD-DNA对RAW264．7细胞具有免疫刺激作用。     

马钱苷对AGEs致巨噬细胞极化的影响

目的 观察马钱苷对晚期糖基化终末产物（AGEs）致巨噬细胞极化的影响。方法 建立AGEs刺激巨噬细胞模型,设置空白对照组,模型组,氨基胍组,马钱苷低剂量组（1 μmol/L）和马钱苷高剂量组（10 μmol/L）。除空白对照组外,加入100 mg/L的AGEs刺激24 h后采用ELISA法检测细胞上清促炎性细胞因子IL-12、TNF-α和抑炎性细胞因子IL-10水平,采用流式细胞仪检测巨噬细胞M1型标记蛋白CD86和M2型标记蛋白CD206表达水平;免疫荧光法检测M1型标记蛋白iNOS和M2型标记蛋白CD206表达;Western blot法检测RAGE和巨噬细胞极化相关蛋白RBP-J、IRF8表达。结果 AGEs可上调IL-12、TNF-α水平（P<0.01）,促进巨噬细胞iNOS、RAGE、RBP-J和IRF8蛋白表达（P<0.01）;而马钱苷预孵能够下调IL-12、TNF-α水平（P<0.01）,上调IL-10水平,抑制RAGE、iNOS、RPB-J、IRF8蛋白表达（P<0.05~0.01）。结论 马钱苷可通过抑制RAGE/RBP-J/IRF8通路,抑制M1巨噬细胞极化,下调促炎因子IL-12、TNF-α水平,上调抑炎因子IL-10分泌,改善肾脏巨噬细胞炎症反应。      

脂多糖对THP-1细胞CD14诱导表达的影响

目的探讨脂多糖(LPS)对THP-1细胞CD14诱导表达的影响。方法应用不同质量浓度(0.1~50 mg/L)的LPS刺激培养48 h的THP-1细胞,并测定其CD14mRNA、肿瘤坏死因子α(TNFα)和白细胞介素6(IL-6)表达的变化。结果正常培养条件下,THP-1细胞CD14表达量极低,而LPS对单核巨噬细胞THP-1具有显著的诱导激活作用,在较低质量浓度剂量刺激下即可被活化,表现为CD14mRNA表达量迅速增加,同时,LPS可诱导THP-1细胞产生TNF-α和IL-6,并在一定范围内呈剂量依赖关系。结论LPS可导致THP-1细胞活化,显著上调CD14mRNA的表达,并诱导产生炎症介质TNF-α和IL-6。     

人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体调控恶性胶质瘤相关巨噬细胞的极化

  目的  探究人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体对肿瘤相关巨噬细胞极化的影响，并初步探讨其对胶质瘤发生发展的影响。  方法  利用试剂盒提取人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体，通过扫描电镜及Western blot 鉴定外泌体。将胶质瘤细胞分为SHG449:SHG449细胞不做特殊处理；SHG449+M0组:SHG449细胞与M0型巨噬细胞共培养；SHG449+M0+exosome组:SHG449细胞与M0型巨噬细胞共培养后，加入标记有PKH-67的外泌体使其进入M0型巨噬细胞。  结果  （1）人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体成功提取，且进入M0型巨噬细胞；（2）外泌体进入胶质瘤细胞SHG449诱导极化的巨噬细胞后细胞形态转化，且M2型巨噬细胞活化标志物Arginase、CD206以及CCL22，TGF-β表达下降（Arginase:P < 0.01，CD206:P < 0.05， CCL22:P < 0.05，TGF-β:P < 0.01），M1型活化标志物iNOS，CD68以及IL-1β，TNF-α表达上升（iNOS:P < 0.01，CD68:P < 0.01，L-1β:P < 0.000 1，TNF-α:P < 0.001）；（3）被外泌体诱导极化的巨噬细胞导致胶质瘤细胞增殖能力下降（P < 0.05），凋亡能力上升（P < 0.000 1）。  结论  人骨髓间质细胞分泌的外泌体可抑制肿瘤相关巨噬细胞向M2表型转化，并诱导其向M1表型转化，调节肿瘤免疫微环境，从而达到抑癌的作用。     

贝壳杉烷型二萜类化合物PV006对THP-1源性巨噬细胞M1型极化的调节作用

目的 利用体外诱导巨噬细胞向M1型极化的模式,初探贝壳杉烷型二萜类化合物PV006对M1型极化的影响。方法 用佛波酯（PMA）联合脂多糖（LPS）及重组人干扰素-γ（rhIFN-γ）刺激人单核细胞株THP-1细胞,促使其向M1型巨噬细胞分化。通过显微镜观察细胞形态学变化,qRT-PCR法检测诱导后的细胞内IL-1β、TNF-α、IL-6以及IL-8 mRNA表达水平,Western blot法检测核转录因子-κB磷酸化P65蛋白（NF-κB p-P65）和磷酸化信号转导与转录激活物1（p-STAT1）蛋白的表达,确认THP-1细胞向M1型极化,同时检测PV006处理后对上述指标的影响。结果 经PMA联合LPS及rhIFN-γ诱导后,THP-1细胞形态由圆形转变为特征的长梭形或纺锤形,IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8 mRNA表达升高,NF-κB p-P65和p-STAT1蛋白表达增强。不同浓度PV006同步处理后,作M1型极化诱导的THP-1细胞未出现特征性的长梭形或纺锤形,大部分细胞仍为圆形。IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8 mRNA表达水平下调（P<0.05）,NF-κB p-P65和p-STAT1蛋白表达减弱。结论 PMA联合LPS及rhIFN-γ可诱导THP-1源性巨噬细胞向M1型极化,PV006有抑制巨噬细胞向M1型分化的作用。     

溶酶体在巨噬细胞极化中的作用研究

目的 探讨溶酶体在巨噬细胞极化中的作用。方法 体外培养小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7,用脂多糖（LPS）100 ng/ml+ 伽马干扰素（IFN-γ）20 ng/ml 诱导其向经典活化型（M1）极化,用白细胞介素4（IL-4）20 ng/ml 诱导其向替代活化型（M2）极化,建立巨噬细胞极化模型。以未诱导细胞作为对照组。通过流式细胞术、ELISA、Western blot 及实时PCR（real-time PCR）法,检测M1 型及M2 型巨噬细胞比例及标志物表达,验证巨噬细胞极化模型是否建立成功。通过Western blot、real-time PCR 及免疫荧光染色检测M1 型及M2 型巨噬细胞中溶酶体标志物表达,包括溶酶体膜相关蛋白1、2（LAMP-1、LAMP-2）及溶酶体整合膜蛋白2（LIMP-2）。给予溶酶体抑制剂氯喹（chloroquine）25 μmol/L 刺激巨噬细胞,流式细胞术检测M1、M2 型巨噬细胞比例。结果 成功建立巨噬细胞极化模型。与对照组比较,溶酶体标志物（LAMP-1、LAMP-2 及LIMP-2）转录及蛋白水平表达在M1 型极化组中降低,而在M2 型极化组中增加。溶酶体抑制剂氯喹处理可降低M2 型极化比例,增加M1 型极化比例。结论 溶酶体参与巨噬细胞极化过程,抑制溶酶体可促进巨噬细胞向M1 型极化。     

白介素12在γδT细胞表达L-选择素中的调控作用

目的观察白介素12（IL-12）对γδT细胞表面L-选择素（CD62L）表达的调控作用。方法人外周血活化γδT细胞经诱导及扩增后,采用Mtb-Ag首次刺激和再次刺激,在细胞分孔培养时分别加入不同的细胞因子（IFN-γ、IL-12＋抗IFN-γ、IL-12＋抗IL-12、IL-12＋IFN-γ）和不同浓度（0、0.1 ng/mL、1 ng/mL）IL-12。收集各组培养第0、3、5、7天的细胞,流式细胞术检测γδT细胞表面CD62L的表达。结果 Mtb-Ag首次刺激和再次刺激后,IL-12组、IL-12＋抗IFN-γ组和IL-12＋IFN-γ组γδT细胞表面CD62L的表达量均较空白对照组显著升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;而IFN-γ组、IL-12＋抗IL-12组的CD62L表达量与空白对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。随着IL-12浓度的增加,γδT细胞表面CD62L的表达量增加,其中Mtb-Ag首次刺激后第3和5天时,0.1 ng/mL和1.0 ng/mL IL-12组CD62L表达量均明显高于阴性对照组（P〈0.05）,且1.0 ng/mL IL-12组明显高于0.1 ng/mL IL-12组（P〈0.05）,具有浓度依赖性;Mtb-Ag再刺激后CD62L的表达量下调,但在加入IL-12后CD62L表达的下调速度减缓,且1.0 ng/mL IL-12比0.1 ng/mL IL-12更能使CD62L表达维持在相对较高水平（P〈0.05）。结论 IL-12在γδT细胞活化时调控CD62L的表达并且具有浓度依赖性。     

人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡对巨噬细胞极化的影响

目的: 探究人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡对巨噬细胞极化的影响。方法: Dil标记神经干细胞微囊泡,流式细胞仪和共聚焦显微镜观察THP-1巨噬细胞对微囊泡的内化;实时荧光定量PCR筛选微囊泡最适浓度;100 ng/mL 脂多糖刺激THP-1细胞6 h后,微囊泡处理12 h,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞炎性因子IL-1β,肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)以及IL-6的mRNA表达水平;微囊泡处理24 h, 蛋白免疫印迹法检测诱导型一氧化氮合酶 (inducible nitric oxide synthase, iNOS)和精氨酸酶1 (Arginase-1, Arg-1)蛋白表达水平;流式细胞术检测THP-1巨噬细胞M1极化表面标志CD86表达。结果： THP-1巨噬细胞在12 h和24 h均能明显内化神经干细胞微囊泡;0.12 μg/mL微囊泡具有最适调控作用;与未处理细胞相比,脂多糖处理后明显增加THP-1细胞IL-1β,TNF-α,IL-6等mRNA和iNOS蛋白,Arg-1蛋白表达差异无统计学意义(P<0.05);经神经干细胞微囊泡处理后THP-1细胞IL-1β,TNF-α,IL-6等mRNA和iNOS蛋白表达明显降低(P<0.05);与未处理细胞相比,脂多糖和微囊泡处理后THP-1巨噬细胞CD86表达差异无统计学意义。结论： 人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡能够减少THP-1细胞炎性细胞因子和iNOS表达,抑制巨噬细胞M1极化。     

rL-hIFN-λ1对THP-1源巨噬细胞极化作用的影响

［摘要］目的: 探讨表达IFN-λ1的重组新城疫病毒rL-hIFN-λ1对巨噬细胞极化的影响。方法: 分别用佛波酯、IFN-γ、脂多糖、IL-4和rL hIFN-λ1刺激人外周血THP-1单核细胞系,构建THP-1 M0、THP-1 M1、THP-1 M2、THP-1 rL-hIFN-λ1型巨噬细胞模型。显微镜下观察M0、M1、M2型巨噬细胞形态特点;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组巨噬细胞 M1/M2相关基因表达;免疫荧光检测细胞表面分子CD86、CD163;ELISA检测分泌因子IL-2、IL-13、IL-10及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平;并采用免疫组织化学法检测不同临床分期肺癌组织中巨噬细胞浸润表型。结果： 诱导得到的M0、M1、M2型巨噬细胞形态差异显著。rL-hIFN-λ1诱导的巨噬细胞中,M1型巨噬细胞标志物表达明显升高,M2型巨噬细胞标志物表达显著降低,同时其可促进M1型巨噬细胞因子释放,抑制M2型巨噬细胞因子释放。随着肺癌临床分期进展,M1型巨噬细胞浸润逐渐减少。 结论： rL-hIFN-λ1可诱导巨噬细胞向M1型巨噬细胞极化。     

小鼠CD4+ T细胞活化后4种microRNAs的表达分析

目的: 研究小鼠脾脏CD4⁺ T淋巴细胞活化后微小RNA(microRNA,miRNA)的表达水平。方法: 采用CD3/CD28 免疫磁珠法刺激培养小鼠脾脏CD4⁺T细胞24 h,应用流式细胞术检测刺激前后CD4⁺T细胞的活化率,使用实时荧光定量PCR技术分别检测培养0 h,6 h,12 h以及24 h后的CD4⁺T细胞中miR-181d、miR-342-3p、miR-9、miR-122-3p的表达水平。结果： CD3/CD28 免疫磁珠法刺激培养24 h后CD4⁺ T细胞活化率由5.2%升高至60.9%,差异有统计学意义（t=22.01,P <0.01）。与培养0 h相比,miR-181d和miR-342-3p在经刺激培养6 h,12 h和24 h后的CD4⁺T细胞中的表达水平均明显降低（P <0.05）,而miR-9和miR-122-3p的表达各组间的差异无统计学意义（P>0.05）。结论： 小鼠脾脏CD4+T细胞活化后,miR-181d和miR-342-3p的表达明显下调。     

穗花杉双黄酮激活PPAR-α/γ抑制THP-1源性巨噬细胞向M1型极化

目的 探讨穗花杉双黄酮调节体外诱导的M1型巨噬细胞极化的相关机制。方法 设实验组、溶媒对照组和无药对照组,实验组：不同浓度的（5、10 μmol/L）穗花杉双黄酮干预用联合脂多糖及重组人干扰素-γ诱导的M1型巨噬细胞;溶媒对照组：溶媒3‰DMSO;无药对照组：不加穗花杉双黄酮处理。显微镜下观察细胞形态学;通过ELISA检测干预后细胞上清液L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β各自的表达水平;通过CCK-8法检测计算出穗花杉双黄酮对细胞的安全浓度;通过分子对接建模确定穗花杉双黄酮的靶蛋白,利用RT-qPCR、Western blot检测L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β、PPAR-α/γ、Arg-1、Fizz1基因和蛋白表达。结果 穗花杉双黄酮干预后可以阻止被诱导引起的THP-1细胞向M1极化;穗花杉双黄酮可下调M1极化时高表达的IL-6、TNF-α的mRNA,上调M2型主要标志细胞因子IL-8和TGF-β的mRNA表达（P<0.05）,同时上调M1极化状态下的细胞内Arg1和Fizz1蛋白的表达（P<0.05）。随着穗花杉双黄酮浓度的增加和作用时间的延长,其抑制细胞的增殖效果增强（P<0.05）,且高浓度具有杀伤作用。穗花杉双黄酮可与PPAR-α/γ关键靶点蛋白活性位点非共价结合并激活该蛋白。结论 穗花杉双黄酮可通激活PPAR-α/γ,恢复Arg-1、Fizz1基因表达,抑制巨噬细胞向M1型分化。     

黄芪甲苷通过促进小胶质细胞/巨噬细胞M2型极化抑制大鼠脑缺血后炎症反应

目的: 研究黄芪甲苷对大鼠脑缺血后小胶质细胞/巨噬细胞M1/M2极化及炎症反应的影响。方法: 将48只大鼠随机分为手术对照组、模型对照组和黄芪甲苷组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞模型。黄芪甲苷组造模后即刻腹腔注射黄芪甲苷（40 mg/kg）,随后1次/d,连续给药3 d。各组术后第1、3天采用改良的神经损伤严重程度评分（mNSS）和角试验进行神经功能评价;术后第3天采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染料（TTC）染色检测脑梗死体积;实时逆转录PCR检测M1型小胶质细胞/巨噬细胞表面标志物CD86、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达,以及M2型小胶质细胞/巨噬细胞表面标志物CD206、精氨酸酶1（Arg-1）、类几丁质酶3样分子1/2（YM1/2）及抗炎因子IL-10、TGF-β的mRNA表达;免疫荧光双标记法检测脑缺血周边区CD16/32/Iba1和CD206/Iba1的表达。结果: 与模型对照组比较,黄芪甲苷组mNSS分值降低、右转次数减少（P < 0.05或P < 0.01）,脑梗死体积减小（P < 0.01）,M1型小胶质细胞/巨噬细胞标志物CD86、iNOS、TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达下调（均P < 0.01）,M2型小胶质细胞/巨噬细胞标志物CD206、Arg-1、YM1/2、IL-10和TGF-β的mRNA表达上调（均P < 0.01）,脑缺血区CD16/32⁺/Iba1⁺细胞数量减少（P < 0.05）,CD206⁺/Iba1⁺细胞数量增加（P < 0.01）。结论: 黄芪甲苷对大鼠脑缺血损伤有保护作用,可能与促进小胶质细胞/巨噬细胞从M1型向M2型转化、抑制炎症反应有关。     

脐带间充质干细胞对小胶质细胞增殖及活化的影响

目的 观察人脐带来源的间充质干细胞(hUC-MSCs)在正常环境和炎症环境下对小胶质细胞活化的调节作用,探讨hUC-MSCs对中枢神经系统炎症反应的免疫调节作用。 方法 将BV2细胞与人脐带间充质干细胞来源的条件培养基(hUC-MSCs-CM)和(或)脂多糖(LPS)共培养24或48 h后利用MTT比色法分析BV2增殖活力的变化,ELISA试剂盒分析BV2细胞上清中TNF-α和IL-6的变化,免疫印迹法检测精氨酸酶1(Arg1)的表达, Real-time PCR分析TNF-α、IL-6、ARG1基因的表达水平。 结果 (1)BV2在LPS长程刺激下表现出明显的增殖效应,而hUC-MSCs-CM可以抑制这种增殖反应;(2)炎症刺激诱导BV2表达TNF-α和IL-6明显增多,而在hUC-MSCs-CM和LPS共刺激时TNF-α和IL-6表达明显低于LPS单刺激组;(3)hUC-MSCs-CM共培养组BV2细胞高表达M2型小胶质细胞标志物Arg1。 结论 脐带间充质干细胞抑制炎症所致的小胶质细胞增殖;脐带间充质干细胞通过旁分泌机制调节小胶质细胞向M2型活化,降低促炎因子表达,这可能是其最终发挥神经保护作用的机制之一。     

SOCS1 受抑的新型肝癌树突状细胞疫苗制备及功效的初步研究

目的探讨抑制SOCS1表达对LIGHT激活的肝癌树突状细胞疫苗效应的作用。方法用重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)体外诱导培养小鼠骨髓单核细胞产生骨髓来源树突状细胞(BMDC),体外负载肝癌细胞HepA可溶性抗原,并用LIGHT和SOCS1反义寡核苷酸(AS1)处理DC,制备负载肝癌抗原DC疫苗;流式细胞仪检测疫苗细胞CD40及CD86表达和ELISA测定其IL-12、IL-1分泌水平以确定DC疫苗细胞的成熟度;通过体外细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性、淋巴细胞增殖反应和IL-6、TNF-β分泌水平测定分析疫苗细胞的抗肿瘤免疫应答。结果负载肝癌抗原DC疫苗在LIGHT和AS1的双重作用下,疫苗细胞的成熟标志CD40、CD86、IL-1和IL-12增高(P<0.01),能增强诱导CTL活性、刺激淋巴细胞增殖和分泌IL-6、TNF-β能力(P<0.01)。结论抑制SOCS1能提高肝癌DC疫苗的成熟度,并增强疫苗细胞诱导抗肿瘤免疫应答。