解毒祛瘀滋肾方干预TLR9信号通路对MRL/lpr狼疮小鼠肾脏的保护作用

目的 基于对TLR9-MyD88-NF-κB通路的干预作用,阐明解毒祛瘀滋肾方对狼疮鼠肾脏的保护作用。方法 将30只MRL/lpr狼疮鼠随机分为模型对照组、泼尼松治疗组、中药组共3组,对各治疗组进行相应的药物治疗,疗程8周。采用HE染色法、PAS染色法、Masson染色法分别对MRL/lpr小鼠肾脏切片进行病理染色,观察比较3组小鼠病理变化及治疗效果;采用real-time PCR法观察比较各组小鼠TLR-9、MyD88、NF-κB mRNA表达量的差异。结果 与模型组比较,中药组能明显改善MRL/lpr小鼠的肾组织病理损伤。Real-time PCR法结果显示:中药组MRL/lpr小鼠的肾组织TLR-9、MyD88、NF-κB mRNA表达均低于模型组(均为P<0.05)。结论 解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr小鼠肾脏具有保护作用,可对其病理变化产生影响,减轻其肾脏损害,延缓病程,并与解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr小鼠TLR-9-MyD88-NF-κB信号通路的抑制作用相关。     

解毒祛瘀滋肾方干预TLR9信号通路对MRL/lpr小鼠肾脏保护作用

目的：基于对TLR9-MyD88-NF-κB通路的干预作用,阐明解毒祛瘀滋肾方对狼疮鼠肾脏的保护作用。方法：将30只MRL/lpr狼疮鼠随机分为模型对照组、泼尼松治疗组、中药组共3组,对各治疗组进行相应的药物治疗,疗程8周。采用HE染色法、PAS染色法、Masson染色法分别对MRL/lpr小鼠肾脏切片进行病理染色,观察比较3组小鼠病理变化及治疗效果;采用Real-time PCR法观察比较各组小鼠TLR-9、MyD88、NF-κB mRNA表达量的差异。结果：与模型组比较,中药组能明显改善MRL/lpr小鼠的肾组织病理损伤。Real-time PCR法结果显示：中药组MRL/lpr小鼠的肾组织TLR-9、MyD88、NF-κB mRNA表达均低于模型组（均为P<0.05）。结论：解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr小鼠肾脏具有保护作用,可对其病理变化产生影响,减轻其肾脏损害,延缓病程,并与解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr小鼠TLR-9-MyD88-NF-κB信号通路的抑制作用相关。     

中药狼疮定方对MRL/lpr小鼠外周血淋巴细胞凋亡和Bcl-2/Bax基因表达的影响

目的探讨中药狼疮定方对MRL/lpr小鼠外周血淋巴细胞（PBLC）凋亡及其Bcl-2/BaxmRNA表达的影响。方法将80只MRL/lpr小鼠随机分为模型组、中药组、西药组和中西药组,分别以0.9%氯化钠溶液、狼疮定悬液、强的松混悬液、狼疮定悬液联合强的松混悬液灌胃;另取20只正常昆明小鼠以0.9%氯化钠溶液灌胃。连续饲养用药12周后取血,以梯度离心法分离外周血单个核细胞,培养48h后取PBLC悬液,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;另以RT-PCR法检测PBLC中Bcl-2/BaxmRNA的表达水平。结果正常组、中药组、西药组和中西药组PBLC培养0h和48h时凋亡率高于模型组（P〈0.05或0.01）,0h时西药组、正常组与中西药组的PBLC凋亡率无明显差异,但中药组和模型组凋亡率显著低于中西药组（P〈0.05）,48时中药组、模型组和西药组凋亡率明显低于中西药组（P〈0.05或0.01）;正常组、中药组和中西药组PBLC中Bcl-2/BaxmRNA比值水平均明显低于模型组和西药组（P〈0.05或0.01）。结论狼疮定方对MRL/lpr小鼠的PBLC凋亡率及其Bcl-2/Bax比值均可起到调节作用。     

基于NF-κB信号通路探究狼疮定对红斑狼疮MRL/lpr小鼠炎症反应的调节作用

[目的] 研究狼疮定对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)MRL/lpr小鼠炎症反应的影响,并分析其对核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的调节作用。[方法] 将12只MRL/lpr小鼠随机分为模型组(6只)、干预组(6只),另选取C57BL/6小鼠6只为对照组。干预组灌胃给予0.1 mL/10 g狼疮定浓缩液,对照组、模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液,所有动物均干预8周。给药前后分别测定血清炎性因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、α-干扰素(interferon-α,IFN-α)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及NF-κB信号通路相关蛋白NF-κB抑制蛋白α(NF-κB inhibitor ɑ,IκBα)、NF-κB抑制蛋白α p50(NF-κB inhibitor ɑ p50,IκBαp50)、NF-κB抑制蛋白α p65(NF-κB inhibitor ɑ p65,IκBαp65)表达水平,采用扩增阻碍突变系统-聚合酶链式反应(amplification refractory mutation system Real time fluorescence-quantitative polymerase chain reaction,ARMS-q PCR)检测NF-κB信号通路相关mRNA表达情况。通过苏木精-伊红染色检测肾组织损伤情况,采用免疫印迹法检测肾组织中炎性因子表达水平。[结果] 与对照组比较,模型组血清炎性因子IL-6、IFN-α、TNF-α、NF-κB信号通路相关蛋白(IκBα、IκBαp50、IκBαp65)水平、NF-κB信号通路相关mRNA(IκBα、IκBαp50、IκBαp65)水平均显著升高(P<0.05),肾组织中IL-6、IFN-α、TNF-α表达水平升高(P<0.05)。模型组小鼠肾组织损伤明显,主要表现为肾小管扩张,肾小球硬化,结构严重破坏,且肾小球、肾小管周围出现明显的炎症反应。干预后,MRL/lpr小鼠血清各指标水平均出现明显降低(P<0.05),肾组织炎性损伤较模型组减轻。[结论] 狼疮定可抑制MRL/lpr小鼠炎症反应,从而减轻炎性肾损伤,其作用机制可能与下调NF-κB信号通路有关。     

解毒祛瘀滋阴方调节肠道菌群治疗狼疮小鼠的研究

[目的] 探究肠道菌群在解毒祛瘀滋阴方治疗MRL/lpr狼疮小鼠过程中的作用。[方法] 将12周龄MRL/lpr小鼠随机分为模型组(0.9%氯化钠水溶液灌胃)、中药组(0.156 g·10 g-1解毒祛瘀滋阴方灌胃)和粪菌移植组(移植中药组小鼠的粪菌液)，以12周龄C57BL/6小鼠作为空白组。饲养6周后采集小鼠血清样本，采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测小鼠血清抗双链DNA抗体(anti-double stranded DNA antibody，anti-dsDNA)、抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)和白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)表达水平；称量脾脏质量，计算脾脏指数；采用流式细胞术检测脾脏生发中心B细胞和浆细胞百分比；采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色分析肾脏病理变化。[结果] 与模型组比较，中药组和粪菌移植组的菌属Bacteroides和Sutterella丰度均显著上调(P＜0.05)，菌属Prevotella、Oscillospira、Ruminococcus、Odoribacter和Rikenella丰度均显著下调(P＜0.05)。此外，解毒祛瘀滋阴方和粪菌移植均能显著降低MRL/lpr小鼠血清anti-dsDNA、ANA和IL-6水平(P＜0.05，P＜0.01)，降低脾脏指数(P＜0.05)和脾脏浆细胞百分比(P＜0.05)，减少肾脏炎性细胞浸润。[结论] 解毒祛瘀滋阴方可通过调控肠道菌群，发挥治疗系统性红斑狼疮的作用。     

消银解毒方颗粒对Jurkat T细胞内JAK1/STAT3信号通路作用机制的研究

目的探讨消银解毒方颗粒对人急性T淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat T)细胞内酪氨酸激酶1(JAK1)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的调控作用。方法以植物血凝素(PHA)和白细胞介素-6(IL-6)共同诱导Jurkat T淋巴细胞建立血热证银屑病T细胞异常活化病理细胞模型,将模型细胞接种于24孔板,制备消银解毒方颗粒、凉血方颗粒(消银解毒方颗粒拆方)、解毒方颗粒(消银解毒方颗粒拆方)、阿维A(阳性对照)、蒸馏水(阴性对照)的药理血清,择取最佳浓度药理血清及JAK/STAT信号通路阻断剂Filgotinb(GLPG0634)作用于模型细胞48 h,同时设空白细胞组。收集各组细胞,采用蛋白质印迹(Western blot)、实时定量聚合酶链式反应(real-time PCR)法检测JAK1、STAT3、糖蛋白(GP)130的蛋白表达与基因转录水平。结果模型组的JAK1、STAT3、GP130的蛋白和mRNA表达较空白组明显增高(P0.01)。与模型组相比,各实验组磷酸化酪氨酸溶酶(p JAK)1/JAK1、磷酸化信号转号和转录激活因子(p STAT)3/STAT3、GP130蛋白表达量均明显降低(P0.01);与模型组相比,各实验组JAK1、STAT3、GP130的mRNA表达量均降低(P0.05或P0.01)。结论消银解毒方颗粒能够通过抑制JAK1/STAT3信号通路的开放进而抑制T细胞异常活化,以发挥其治疗银屑病的作用。     

滋阴息风方对自发性高血压大鼠肾脏JAK/STAT信号通路的影响?

目的观察滋阴息风方对自发性高血压大鼠血压及肾脏JAK/STAT信号通路的影响。方法随机将40只SHR大鼠分为模型组、中药低剂量组、中药高剂量组和复方罗布麻组,10只具有相同背景的SKY大鼠做正常组。治疗组给予对应药物灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃,连续给药42 d,分别于给药后第0、7、14、21、28、35、42天采用小动物无创血压仪检测各组大鼠收缩压血压变化情况。实验第42天,于灌胃2 h后取材,全自动生化分析仪检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)含量。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肾脏p-JAK1、p-STAT1蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血压、Cr、BUN、UA、IL-6、TNF-α显著升高,经治疗后,各项指标均有显著改善(P0.05、P0.01),以中药高剂量和复方罗布麻效果较为明显。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肾脏p-JAK1、p-STAT1蛋白表达显著升高(P0.01),与模型组比较,各治疗组p-JAK1、p-STAT1蛋白表达均有不同程度下降(P0.05,P0.01)。结论滋阴息风方对自发性高血压大鼠降压作用明显,可明显改善高血压肾脏功能损伤,具体机制可能是通过抑制JAK/STAT信号通路的激活实现。     

抵当汤对糖尿病大鼠心肌组织JAK2/STAT3信号通路的影响

目的 探讨抵当汤及其拆方对糖尿病大鼠肥大心肌细胞JAK2/STAT3信号通路的影响。〖JP〗方法 单次注射链脲佐菌素复制糖尿病大鼠模型,将糖尿病大鼠随机分为模型组、抵当汤组、桃仁大黄组、水蛭虻虫组和缬沙坦组,以正常雄性SD大鼠作为正常对照组。正常对照组和模型组给予蒸馏水灌胃,其余各组大鼠接受相应药物灌胃,连续8周。采用Western blot法检测心钠素（atrial natriuretic peptide,ANP）、心肌组织JAK2和STAT3蛋白表达,采用实时荧光定量PCR法检测JAK2、STAT3 mRNA表达。结果 与正常对照组比较,模型组ANP、JAK2、STAT3蛋白以及JAK2、STAT3 mRNA表达水平均显著上调（P<0.05）。水蛭虻虫拆方和桃仁大黄拆方对糖尿病大鼠心肌组织ANP、JAK2和STAT3蛋白表达的主效应均具有统计学意义（P<0.05）,两者的交互作用均无统计学意义（P>0.05）。水蛭虻虫拆方和桃仁大黄拆方对糖尿病大鼠心肌组织JAK2、STAT3 mRNA表达的交互作用具有统计学意义（P<0.05）。缬沙坦组、抵当汤组及两个抵当汤拆方组ANP、JAK2蛋白及JAK2 mRNA表达水平比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 抵当汤延缓糖尿病大鼠心肌细胞肥大的机制与抑制JAK2/STAT3信号通路有关,其拆方对JAK2、STAT3 mRNA表达的效应存在相互影响。     

雷公藤甲素减轻MRL/lpr 狼疮小鼠肾损伤的作用机制研究

目的 研究雷公藤甲素（TPL） 减轻MRL/lpr狼疮小鼠肾损伤的作用及其机制。方法 选择雌性 C57BL/6正常小鼠作为对照组;将雌性MRL/lpr狼疮小鼠分为模型组、TPL组、JAK1 组、TPL+JAK1 组。给药 9 周后检测各组24 h 尿蛋白、血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN） 水平及血清IP-10、高迁移率族蛋白1 （HMGB1）的质量分数,肾脏IgG、C3的荧光强度、γ干扰素诱导蛋白10（IP-10）、HMGB1的质量分数、磷酸 化Janus激酶1（p-JAK1）、磷酸化信号传导及转录激活蛋白1（p-STAT1）的表达水平。结果 模型组小鼠24 h 尿蛋白、Scr、BUN 及IgG、C3 的免疫荧光强度、IP-10、HMGB1、p-JAK1、p-STAT1 均高于对照组（P < 0.05）;TPL组小鼠24 h尿蛋白、Scr、BUN及IgG、C3荧光强度、IP-10、HMGB1、p-JAK1、p-STAT1均低于 模型组（P <0.05）;TPL+JAK1 组小鼠24 h 尿蛋白、Scr、BUN 及IgG、C3 荧光强度、IP-10、HMGB1、p- JAK1、p-STAT1 均高于TPL 组（P <0.05）。结论 TPL 减轻MRL/lpr 狼疮小鼠肾损伤的分子机制可能是抑制 JAK1/TAT1通路介导的炎症反应。     

解毒祛瘀滋肾方对激素治疗系统性红斑狼疮减毒增效作用的临床研究

目的 观察联合服用解毒祛瘀滋肾方对激素治疗系统性红斑狼疮的疗效及不良反应的影响.方法 以110例中度系统性红斑狼疮患者为研究对象,按随机数字表法分为对照组(55例)和研究组(55例).对照组患者给予醋酸泼尼松治疗,研究组患者予以解毒祛瘀滋肾方辅助醋酸泼尼松治疗.比较2组治疗前后血清ANA、抗ds-DNA、IgA和IgG...     

不同体质MRL/lpr狼疮鼠病情程度及Treg/Th17相关细胞因子表达

目的:区分MRL/lpr狼疮鼠体质,观察不同体质狼疮鼠病情程度及细胞因子水平的差异。方法:将12周龄MRL/lpr狼疮鼠按体质分为寒体组、常体组、热体组。16周龄时,采用CBB法酶标仪检测24 h尿蛋白;HE、PAS、PASM、MASSON染色后观察肾脏组织病理;双抗体夹心ABC-ELISA法检测不同组别狼疮鼠血清细胞因子(IL-6、IL-10、IL-17、IL-23、TGF-β1)水平。结果:16周龄时,寒体组MRL/lpr狼疮鼠24 h尿蛋白定量高于常体组和热体组(P0.05),寒体组肾脏组织病理表现相对严重;寒体组IL-6、TGF-β1表达水平高于常体组和热体组(P0.01),IL-10表达低于常体组和热体组(P0.01),热体组IL-23表达水平高于常体组和寒体组(P0.01),各组间IL-17表达差异无统计学意义(P0.05)。结论:MRL/plr狼疮鼠存在体质差异,寒体组肾脏病变程度在3组中最为严重,不同体质狼疮鼠血清细胞因子水平存在差异。     

安子合剂对ACA阳性流产小鼠母胎界面JAK/STAT3信号通路的影响

目的 观察安子合剂对抗心磷脂抗体(ACA)阳性小鼠母胎界面JAK/STAT3信号通路的影响。方法 以人β2-GPⅠ为诱导剂建立ACA阳性小鼠模型,空白组给予生理盐水,模型组给予人β2-GPⅠ;各治疗组分别给予阿司匹林和高、低两种不同剂量安子合剂,于妊娠第15天处死,计算胚胎吸收率,采用ELISA方法检测外周血ACA;采用免疫组化方法检测胎盘、蜕膜组织JAK、GP130、p-STAT3,以Western blot方法检测STAT3、p-STAT3。结果 安子合剂低、高剂量组、阿司匹林组小鼠的胚胎吸收率明显降低,小鼠血清ACA的滴度也显著降低（P<0.05),母胎界面的JAK、GP130、p-STAT3的表达均增高,其中胎盘的JAK、p-STAT3的表达与模型组比较具有显著差异（P<0.05),蜕膜GP130、p-STAT3的表达与模型组比较具有显著差异（P<0.05)。结论 ACA导致妊娠丢失的病理机制与母胎界面JAK/STAT3信号通路有关,安子合剂发挥治疗作用的机制可能是通过提高胎盘JAK的表达、增强蜕膜GP130的表达,促进胎盘及蜕膜STAT3的活化。      

IL-17调控IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路影响喉癌细胞的侵袭和转移

目的 研究白介素(IL)-17通过IL-6/1L-6R/JAK1/STAT3信号通路调控人源性高分化喉癌细胞(Hep-2)侵袭、转移.方法 以Hep-2细胞为研究对象,设IL-17刺激剂0、1、50、100 ng/ml浓度组,Westem blot法检测不同分组在IL-17的刺激下,Hep-2细胞中IL-6、IL-6R、JAK1、p-JAK1、STAT3、p-STAT3的表达变化.迁移、侵袭实验观察IL-17的刺激对Hep-2细胞侵袭、迁移的影响.结果 Western blot实验中,在IL-17刺激下,1、50、100 ng/ml浓度组较0 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6、IL-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(p＜0.01),50、100 ng/ml浓度组较1 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6、1L-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(P＜0.01),100 ng/ml浓度组较50 ng/ml浓度组Hep-2细胞的IL-6R、p-JAK1、p-STAT3的表达明显增加(P＜0.01);各组间JAK1、STAT3的表达无明显变化.侵袭与迁移实验显示IL-17可以促进Hep-2细胞的侵袭和迁移.结论 IL-17可能通过IL-6/IL-6R/JAK1/STAT3信号通路促进Hep-2细胞的侵袭和转移.     

JAK2/STAT3信号传导通路在瘦素促进子宫内膜癌细胞增殖中的作用

目的 探讨JAK2/STAT3信号传导通路在瘦素促进子宫内膜癌细胞(Ishikawa细胞)增殖中的作用.方法 免疫荧光染色法检测瘦素受体(OB-Rb)在Ishikawa细胞的表达.Ishikawa细胞分别用不同浓度的瘦素(0、10、50、100、150 ng/ml)作用不同的时间(6、12、24 h)后,MTT法检测各组细胞的增殖情况;另应用不同浓度(0、25、50、100 μmol/L)JAK2激酶特异性抑制剂AG490阻断STAT3磷酸化后,采用MTT法检测瘦素对Ishikawa细胞增殖的影响;瘦素(100 ng/ml)作用Ishikawa细胞不同时间(0、20、40、60 min)后,采用免疫印迹法(Western blot)检测细胞STAT3磷酸化水平.结果 免疫荧光染色证实Ishikawa细胞膜存在OB-Rb的表达;瘦素能明显促进Ishikawa细胞的增殖,在0 ～100 ng/ml范围内呈剂量依赖性,于150 ng/ml瘦素作用24 h时细胞增殖效应最大;AG490可明显抑制瘦素对Ishikawa细胞的促增殖作用,呈剂量依赖性;Ishikawa细胞经100 ng/ml瘦素处理后,随时间的延长,STAT3活化程度逐渐增高,至少可持续60 min.结论 瘦素可能通过激活JAK2/STAT3信号传导通路促进子宫内膜癌细胞的增殖.     

基于IL-6、JAK2/STAT3信号通路探讨复方当归注射液在缺血性卒中炎性反应中的作用

目的基于IL-6和JAK2/STAT3信号通路,探讨复方当归注射液在缺血性卒中炎性反应中的作用。方法将大鼠随机分为空白对照组、假手术组和造模组。采用线栓法建立大脑中动脉栓塞致局灶性缺血损伤模型,造模成功后,再将造模大鼠随机分为模型组、复方当归注射液组和依达拉奉组,各组给予相应药物干预7 d,于末次给药24 h后处死取脑组织,采用TTC染色法观察各组大鼠的脑梗死情况;采用HE染色法观察各组大鼠脑组织病理学情况;采用ELISA法检测各组大鼠血浆中IL-6的含量;采用Western Blot法检测各组大鼠脑组织中p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3的表达情况。结果复方当归注射液组可缩小缺血性卒中大鼠的脑梗死区域,减轻脑组织神经元的异常形态变化;复方当归注射液组IL-6的含量及p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3水平均低于模型组(P<0.01)。结论复方当归注射液可通过降低缺血性卒中大鼠IL-6及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3的表达,抑制炎性反应,发挥神经保护作用。     

JAK/STAT信号转导通路在大鼠急性脊髓损伤中的异常激活及意义

目的研究JAK（Janus激酶）/STAT（信号转导和转录激活子）信号转导通路相关基因JAK2、STAT3在大鼠急性脊髓损伤中激活后的表达变化,并探讨其被异常激活的意义。方法采用健康雄性SD大鼠60只,分为假手术组和脊髓损伤组,随机分到4、12、24、72h和168h各个亚组（n=6）。脊髓损伤组应用Allen’s重物坠落法并加改良制作大鼠急性脊髓损伤模型,假手术组只切除椎板不损伤脊髓。术后在相应时间处死取脊髓,HE染色观察脊髓组织形态结构,免疫组织化学检测脊髓组织中P-JAK2（磷酸化JAK2）、P-STAT3（磷酸化STAT3）表达的动态变化。结果免疫组织化学检测显示假手术组大鼠脊髓组织中P-JAK2、P-STAT3阳性细胞较少,在脊髓损伤组各个时间点P-JAK2、P-STAT3的表达量明显高于假手术组（P〈0.01）。损伤后4h迅速上升,12h达峰值（P〈0.01）,而后逐渐下降,168h仍有表达。结论大鼠急性脊髓损伤可异常激活JAK/STAT信号转导通路,它可能在继发性脊髓损伤中起着重要作用。