HBsAg阳性卵巢肿瘤病人卵巢组织HBV DNA检测

目的 通过检测乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)阳性卵巢肿瘤病人卵巢组织中HBV DNA,探讨HBV可否感染人类卵巢组织细胞,为HBV经生殖细胞垂直传递感染提供实验依据.方法 自20例HBsAg阳性卵巢肿瘤病人卵巢组织蜡块中提取DNA,应用聚合酶链反应(PCR)和荧光原位杂交(FISH)方法检测卵巢肿瘤病人卵巢组织细胞中HBV DNA.以20例HBsAg阴性卵巢肿瘤病人卵巢石蜡组织作为对照.结果 HBsAg阳性卵巢肿瘤病人卵巢组织存在HBV DNA,与对照组比较,差异有极显著意义(X2=24.000、21.539,P＜0.01).结论 HBV可以感染卵巢组织细胞,HBV有可能通过卵细胞进行垂直传播.     

~3H-TdR在移植型肝癌小白鼠组织的分布

前言细胞在分裂代谢过程中,需要摄入TdR合成DNA。尤其是恶性肿瘤,其组织细胞的分裂,繁殖比较旺盛,对TdR的摄入量比较显著。本试验用移植型肝癌小白鼠作为动物模型,注入3H—TdR后,用放射自显影方法和测定组织放射性强度的方法,观察其在癌组织细胞和正常肝组织细胞及其它组织细胞的分布。     

PCR法检测血液中白色念珠菌的敏感性研究

目的:探讨PCR法检测血液中白色念珠菌的敏感度.方法:采用 Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒提取白色念珠菌DNA,应用真菌通用引物ITS1和ITS4进行PCR扩增,并采用有限稀释法推测PCR法可检测到的全血中最低白色念珠菌数目.结果:以白色念珠菌DNA为模版,用PCR法扩增得到约为500 bp左右的特异性条带;...     

天麻总DNA提取及聚合酶链反应扩增鉴定

目的：改良常用的植物DNA提取的CTAB，SDS法，以有效去除天麻多糖类杂质。方法：用CTAB法提取天麻鲜品不同部位（块茎、花序轴和胚芽）DNA；用生理盐水浸泡天麻干品之后，在应用CTAB，SDS法提取天麻干品的DNA；通过已知序列的天麻抗真菌蛋白基因片段的聚合酶链反应（PCR）扩增和PCR产物测序鉴定天麻DNA及其质量。结果：提取了44份天麻样本DNA，用CTAB法提取天麻鲜品不同部位的DNA，成功地用于PCR扩增，并通过DNA测序进一步鉴定；应用改良的CTAB，SDS法提取天麻干品DNA可用于PCR扩增，但DNA测序未成功。结论：用CTAB法提取的天麻鲜品各个部位DNA均可用于基因分析，而用天麻胚芽提取DNA的效果最理想；改良CTAB法能有效提取天麻干品DNA。提取的DNA可用于基因扩增。     

金黄色葡萄球菌DNA提取方法的研究

目的:建立一种简易的金黄色葡萄球菌DNA提取方法。方法:用4种不同的细菌DNA提取方法提取金黄色葡萄球菌DNA,用琼脂糖凝胶电泳及PCR检测提取物并比较结果。结果和结论:溶菌酶能有效的降解金黄色葡萄球菌细胞壁,且用溶菌酶破壁后提取的DNA适于PCR实验,本研究成功的得到一种简易的、改良的金黄色葡萄球菌DNA的提取方法。     

用核酸酶自外周血快速抽取DNA

用酚、氯仿、乙醇沉淀等提取和纯化DNA的方法[1]，从不同组织细胞中有效地抽取人基因组DNA，大多数临床实验室不能常规开展。我们参照文献[2，3]，用核酸酶（RNase）提取外周血DNA获得成功，快速，经济，易行，现介绍如下。1材料和方法：取1ml肝素抗凝全血加10mmol／LTris－HC1，1mmol/LEDTANa2（10：0．5）25ml，轻摇3min，置室温15min，1500r／min离心15min，弃上清后，用吸湿纸将管壁吸干，Vortex30秒，加Inil细胞裂解波（5（）n。mol／LTris－HCIpH8，20mnlol／LEDTANa，，2％SDS），反复吹打使均匀，若不均匀，置对℃…     

用样本工作站批量提取全血中DNA方法的建立

目的 建立一种用斯达尔样本工作站提取全血中DNA的方法,并评价DNA的纯度和产量.方法 使用斯达尔样本工作站提取全血DNA;DNA的纯度和含量用紫外分光光度法测定,并与手工提取方法进行比较.结果 斯达尔样本工作站与手工提取的DNA相比,在纯度与得率方面无差异,但更快速、简单.结论 本方法可以快速、高效地从大批量全血中提取较高质量的DNA,所得DNA适用于HLA的分型实验.     

简便快速提取心肌组织总RNA

利用高浓度尿素变性蛋白质抑制RNA酶，氯化锂（LiC1)选择性沉淀RNA，酚／氯仿抽提除去变性的蛋白质，脂类及DNA。结果表明：该法适合大量样品少量组织细胞的RNA提取。     

接触性生物检材提取DNA方法的比较

目的 建立提取接触性生物检材DNA的新方法.方法 用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒提取各类接触性生物检材DNA并STR分型;将检验成功并可以重复的检材各取5份,用Chelex-100法、M48磁珠法和Chelex-100+纯化法3种方法提取接触性检材DNA,洗脱体积为50 μL,用Identifiler Plus复合扩增,并对检验结果分析比较.结果 对于接触性生物检材,采用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒STR分型的成功率最高,并将该方法加以实际应用.结论 PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒是提取接触性生物检材DNA的一种新方法,可应用于法医实际案件检验.     

实验犬心肌细胞NF-κB的快速提取及鉴定

目的　建立实验犬心肌组织细胞核转录因子 (NF -κB)快速提取及鉴定方法。方法　采用液氮快速冷冻使犬心肌组织破碎 ,并优化核蛋白提取鉴定条件 ,参考哺乳动物鼠Igκ轻链基因 ,设计可与犬心肌细胞核转录因子结合的序列 ,在不同的提取和标记条件下 ,通过凝胶阻滞分析NF -κB活性。结果　两种提取及标记条件 ,凝胶阻滞分析结果有明显不同。按优化实验的方法提取和标记NF -κB ,实验结果更为理想。结论　优化提取条件后 ,提取犬心肌细胞NF -κB的方法简便、快速 ;设计的特异DNA探针可与犬心肌组织细胞NF -κB特异结合并显示良好的结合活性 ,为实验犬在急性事件时其心肌组织细胞NF -κB活性的研究提供了可行方法。     

玄参总DNA提取方法的比较研究

目的探讨药材玄参总DNA的最佳提取方法。方法分别采用SDS法和CTAB法提取药材玄参总DNA,并对其进行核酸含量测定和电泳检测。结果采用SDS法提取的总DNA其OD260/OD280=1.83,而采用CTAB法提取的总DNA其OD260/OD280=1.64;DNA电泳检测显示采用SDS法提取的总DNA条带清晰,而采用CTAB法提取的总DNA出现严重的拖尾现象。结论用SDS法提取药材玄参总DNA优于CTAB法。     

两种方法提取的DNA在脆性X综合征基因FMR-I检测中的比较

目的 探索一种更简便、更快速的DNA提取方法用于脆性X综合征的基因检测。方法 用经典的苯酚-氯仿-异戊醇提取的DNA和用饱和盐法提取的DNA用于脆性X综合征的基因检测并进行比较。结果 两种方法提取的DNA在纯度和产量上存在差异，但在脆性X综合征基因检测包括完成PCR和SouthernBlot杂交两种实验时结果均无差异。结论 用饱和盐法提取的DNA可用于脆性X综合征基因的检测，它比传统的苯酚-氯仿-异戊醇提取法更简便、快速和经济，可用于临床上对脆性X综合征的筛查。     

全血标本采集和处理方法对后续试验的影响

目的探讨选择采集和储存血样标本的最佳方案,并讨论不同DNA提取方法的用途方向。方法分别用普通抗凝采血管和DNAgard Blood抗凝采血管采集静脉血5ml,放在室温下2d或-80℃下1周后采用试剂盒法和自配试剂法提取DNA。用核酸定量仪检测纯度和浓度,用凝胶电泳检查完整度,用PCR评估质量和对后续实验的影响。用χ2检验对比不同收集方法、提取方法血样中DNA的效果和质量,并对比用于后续试验的结果。对比工作所消耗的资源和费用。结果二种方法在提取DNA效率上差异无统计学意义;用普通采血管室温放置2d,提取DNA为0;普通采血管-80℃冻存7d和用DNAgardBlood采血管室温放置7d,在DNA提取纯度和提取效率差异均无统计学意义。各种情况下采用二种方法提取的DNA完整性和对PCR试验结果无明显差异。在费用支出和适用强度上,若不计算冰箱储存费用,DNAgard Blood采血管购买价是普通抗凝采血管的10倍;若计算低温保存、运输、采血组织等费用,用DNAgard Blood采血管的总费用是普通采血管费用的50%。结论 DNAgard Blood采血管对全血中DNA有较好的保护作用,实用性好。在有冰箱设备的医院,用普通采血管更容易被接受。     

从人血凝块中提取基因组DNA

目的从人血凝块中提取基因组DNA。方法室温自然解冻,机械磨碎,高盐、高EDTA提取液处理,消化液消化,酚氯仿抽提。结果用改良酚氯仿法从人血凝块中成功提取基因组DNA,提取的DNA浓度为:(32±10)mg/L,且光吸收比值A260/A280>1.8。结论用改良法提取的基因组DNA的总量较高,提取效率高,PCR扩增效果好,可很好的用于血凝块基因组DNA的提取。     

嗜麦芽黄单胞菌基因组DNA快速提取方法

目的　建立一种快速简便提取嗜麦芽黄单胞菌 (X anthomonas maltophilia)基因组 DNA的方法。方法　用去污剂 SDS和 CTAB破坏细胞膜结构 ,使胞内核酸释放 ,用酚 /氯仿 /异戊醇去除蛋白质 ,异丙醇沉淀DNA,TE溶解 DNA。结果　提取的 DNA琼脂糖电泳图谱与 Hauben及 Dufresne方法提取的 DNA图谱相同 ,DNA含量为 34 2～ 388μg/ m l,OD2 60 / OD2 80 为 1.88～ 1.90。 DNA能被 Eco R 酶切消化。结论　本方法能快速简便提取 X.maltophilia DNA,提取的 DNA含量较高、纯度较好 ,可用于酶切分析、构建文库及 PCR操作。     

3种方法对临床菌血症样本细菌DNA提取的比较

目的寻找一种简单、有效的提取临床菌血症样本细菌DNA的方法．方法分别用碱液加热裂解法、溶菌酶法和商品DNA提取液法提取细菌DNA,用临床常见病原菌特异性引物,进行PCR扩增．结果（1）商品DNA提取液法提取革兰阴性菌DNA,经PCR扩增后得到特异性目的片段,但未扩增出革兰阳性菌的特异性目的片段;（2）碱液加热裂解法、溶菌酶法提取革兰阴、阳性菌DNA,经PCR扩增后均得到特异性目的片段,但碱液加热裂解法比溶菌酶法能扩增到更低浓度的细菌DNA目的片段．结论碱液加热裂解法是3种方法中最简单有效的细菌DNA提取方法,适用于临床病原菌基因组DNA提取．     

用几种市售洗涤剂提取DNA并检测乙型肝炎病毒

目的：试验几种洗涤剂提取DNA的效果。方法：用4种固体洗衣粉（奥妙、白猫、雕牌、汰渍）和1种液体洗涤剂（开米）,从血清中提取DNA,用聚合酶连锁反应（PCR）技术检测乙型肝炎病毒（HBV）。结果：5种洗涤剂都能从血清中提取乙型肝炎病毒DNA,PCR结果良好。结论：这5种洗涤剂都可用于提取HBV DNA。     

天麻总DNA提取的研究

目的：寻找快速便捷的天麻总DNA的提取方法.方法：采用天麻干品为材料,用CTAB,SDS 2种提取法及液氮、玻璃砂2种研磨方法提取干天麻总DNA,并进行了比较.结果：2种不同的研磨法和2种不同的提取方法,均可从天麻中提取到一定纯度的DNA,其中CTAB法提取的DNA纯度较好,产率较高;SDS法提取的DNA纯度较低且不稳定,产率较低.结论：从天麻干品中采用CTAB法提取DNA用于分子生物学研究是可行的,用玻璃砂研磨能取得与液氮相近的结果.     

固相载体法提取胰腺癌患者外周血循环DNA

目的:建立简便快速、稳定的提取胰腺癌患者外周血循环DNA的固相载体法。方法:异硫氰酸胍-硅胶法提取DNA,并利用灵敏度极高的新型低毒荧光染料SYBR GreenⅠ对所提取的DNA进行显示。结果:异硫氰酸胍-硅胶法可用于提取血清DNA,且重复性好,SYBR GreenⅠ染色显示胰腺癌患者外周血循环DNA片段大小主要包括完整的基因组DNA、2000bp左右片断或两者兼而有之(而正常者几乎没有)。结论:胰腺癌患者外周血中存在较高水平的循环DNA,异硫氰酸胍-硅胶法提取及SYBR GreenⅠ染色显示外周血循环DNA简便实用,具有较大的临床开发价值。     

PCR及Real-time PCR评价细菌DNA提取方法

目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法.方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100 NP40、Chelex-100 TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提取不同浓度的大肠杆菌DNA,进行PCR和实时荧光定量PCR扩增,比较灵敏度.结果:5种方法提取细菌DNA,其中Chelex-100 NP40 法纯度(OD260/280=1.79±0.03)最高,此方法所提取的DNA产物进行PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,其灵敏度为10个/ml细菌浓度.结论:Chelex-100 NP40的细菌DNA提取方法纯度及灵敏度高,且适应于PCR及Real-time PCR.