RGD肽对猪去细胞心脏瓣膜表面修饰的研究

目的 检测促黏附分子RGD肽(精-甘-天冬氨酸)表面修饰去细胞瓣天然支架可行性.方法 应用酶和去污剂法制备猪去细胞主动脉瓣,固相法合成含RGD短肽GRGDSPC.实验组采用化学交联剂Sulfo-LC-SPDP使GRGDSPC肽与之结合,去细胞瓣直接混合短肽和单纯去细胞瓣两组作对照.X射线光电子能谱法(XPS)支架材料表面分析.结果 XPS法显示,对照组未检出硫元素,实验组检出硫元素电子结合能中间峰位在163.1～165.7eV,提示二硫键形成,证明Sulfo-LC-SPDP使GRGDSPC肽成功固定于去细胞瓣表面.结论 通过化学交联法实现RGD肽对去细胞瓣表面修饰,有望促进组织工程心脏瓣膜构建.     

丹参抑制转化生长因子-β1诱导的肌源性干细胞向肌成纤维母细胞分化

目的 观察丹参对失神经骨骼肌肌源性干细胞(MDSCs)向肌成纤维母细胞分化的抑制作用.方法 采用差速贴壁法分离出大鼠失神经骨骼肌MDSCs,加入转化生长因子-β1(TGF-β1)和丹参进行干预,将细胞分为3组:A:对照组;B:10 μg/L TGF-β1组;C:10 μg/L TGF-β1+ 150 mg/L丹参组.荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞在干预后5个时间点α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白(Vimentin) mRNA和蛋白表达.结果 与A组比较,B组和C组细胞α-SMA、Vimentin的mRNA在干预后第2、3、5、7天均明显升高(P＜0.05),其蛋白表达在干预后第3、4、6、8天亦显著升高(P＜0.05);与B组比较,C组细胞α-SMA、Vimentin的mRNA和蛋白在对应时间点均明显降低(P＜0.05).结论 丹参能抑制TGF-β1诱导的失神经骨骼肌MDSCs向肌成纤维母细胞的分化.     

丹酚酸B对输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨丹酚酸B对输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化影响及作用机制.方法:雄性SD大鼠,建立单侧输尿管梗阻模型(UUO).设假手术组、模型组、治疗组(丹酚酸B 30 mg·kg-1·d-1)术后第9天处死各组大鼠.采用光镜观察肾间质纤维化、炎细胞浸润,免疫组化观察肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Vimentin蛋白表达的变化.结果:(1)治疗组大鼠肾间质纤维化程度较模型组明显减轻;(2)UUO模型第9天时大鼠肾组织TGF-β、α-SMA和Vimentin表达明显增强,炎细胞浸润明显增加.采用丹酚酸B治疗后,肾组织TGF-β1、α-SMA和Vimentin表达的异常增强能得到有效抑制,炎细胞浸润明显减少.结论:丹酚酸B具有减轻肾组织纤维化的作用,而这一作用与其能有效抑制炎细胞浸润和TGF-β1过度表达,进一步阻押肾小管上皮细胞转分化(EMT)有关.     

PPARγ特异配体抑制肝星状细胞的活化

目的 研究不同浓度的过氧化物酶体增殖物活化的受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)特异配体罗格列酮对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)生物学特性的影响,以探究其在肝旱状细胞活化中的作用.方法 设立对照组,3μM罗格列酮组,10μM罗格列酮组,20μM岁格列酮组.用MTT法检测细胞的增殖情况;采用RT-PCR方法检测其中PPARγ、TGF-β1及Ⅰ型前胶原mRNA表达;用Western blot法检测PPARy、Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白表达;用免疫细胞化学方法测定α-SMA表达的变化;ELISA法检测细胞培养上清中的Ⅰ型胶原表达的变化.结果 (1)RT-PCR:20μM罗格列嗣组或10μM罗格列酮组与3 μM罗格列酮组或对照组相比,PPARY mRNA表达显著增高(P＜0.01),Ⅰ型前胶原mRNA表达显著降低(P＜0.01);20 α-SMA罗格列酮组与10 α-SMA罗格列酮组之间,3 α-SMA罗格列酮组与对照组之间,PPARγ和Ⅰ型前胶原mRNA的表达差异无显著件(P＞0.05).而各组之间的TGF-β1 mRNA的差异无显著性意义(P＞0.05).(2)Western blot:PPARγ及TGF-β1蛋白表达所得结果与RT-PCR结果相一致.Ⅰ型胶原表达与RT-PCR Ⅰ型前胶原mRNA表达结果相一致.各组之间的Ⅲ型胶原表达差异无显著性意义(P＞0.05).(3)免疫细胞化学:20α-SMA罗格列酮组或10 α-SMA罗格列酮组与3 α-SMA罗格列酮组或对照组相比,α-SMA表达明显降低(P＜0.05).20 α-SMA岁格列酮组与10 α-SMA罗格列酮组之问,3 α-SMA罗格列酮组与对照组之间,差异无显著性(P＞0.05).(4)ELISA:20 α-SMA罗格列酮组或10 α-SMA罗格列酮组与3α-SMA罗格列倒组或对照组相比,细胞的培养上清中Ⅰ型胶原表达明显降低(P＜0.01).20 α-SMA罗格列酮组与10 α-SMA罗格列酮组之问,3 α-SMA罗格列酬组与对照组之间,差异无显著性(P＞0.05).结论 PPAR?配体罗格列酬能够在促进PPAR?的合成表达的同时,抑制细胞的增殖及胶原合成,抑制α-SMA的表达,减少细胞分泌Ⅰ型胶原,对肝星状细胞的活化有明显的抑制作用.     

多肽修饰的聚己内酯-左旋聚乳酸与犬骨髓基质干细胞生物相容性的研究

目的 探讨精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)修饰的聚己内酯-左旋聚乳酸共聚物(PCL-b-PLLA)与犬骨髓基质干细胞(BMSCs)的生物相容性.方法 应用密度梯度离心法及贴壁筛选法分离培养犬BMSCs,观察细胞形态及超微结构,流式细胞仪鉴定其表面标记物.将第3代犬BMSCs接种于RGD纳米胶束修饰的PCL-b-PLLA膜L培养,作为实验组,对照组为BMSCs与未修饰的PCL-b-PLLA膜复合培养,3 d后Hoechst 33342荧光染色、倒置显微镜及扣描电镜观察细胞形态,MTT法检测细胞毒性.分别于2、4、6 h细胞计数仪计数检测黏附的细胞数,计算黏附率.结果 原代及传代培养的BMSCs呈梭形外观,具有较强的增殖能力.BMSCs超微结构显示其胞体较小,细胞核/浆比例大,胞浆少,染色质较疏松.细胞表而扰原CD29、CD44表达阳性,CD34表达阴性.Hoechst 33342荧光染色示实验组细胞核形态正常,核质均染,细胞数较对照组明显增多,未见明显凋亡及坏死细胞.扫描电镜示实验组较对照组细胞数量多,延展好,伪足相互接触紧密.两组材料对细胞均无毒性作用.随时间延长两组材料上细胞黏附率逐渐增高,各时间段实验组细胞黏附率显著高于对照组(P＜0.01).结论 RGD修饰的PCL-b-PLLA不仅与犬BMSCs具有良好的生物相容性,而且可显著促进BMSCs黏附、生长,是一种较为理想的组织工程支架材料.     

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽联合环氧氯丙烷改良去细胞猪瓣研究

断裂强度[(621.2±7.9)、(628.4±5.3)g/mm2,P＜0.05]和贴壁率[(0.41±0.10),(0.47±0.14),P＜0.05];光镜和电镜观察RGD+EC组种植效果优于RGD组和单纯去细胞组.结论 RGD肽联合EC改良去细胞瓣,可以提高支架的力学性能和生物学性能.     

LINC00667调控NF-κB信号通路对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT的影响

目的:探讨LINC00667对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)及核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将人肾小管上皮细胞HK-2分为正常对照(NC)组、高糖(HG)组、HG+si-con组、HG+si-LINC00667组、HG+si-LINC00667+PBS组、HG+si-LINC00667+TNF-α组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LINC00667的表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测白细胞介素1β(IL-1β)和转化生长因子(TGF-β_1)含量;蛋白质印记(Western blot)检测钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果:与NC组比较,HG组HK-2细胞LINC00667、Vimentin和α-SMA表达升高,E-cadherin表达降低,细胞培养液上清中IL-1β和TGF-β_1含量升高,NF-κB信号通路激活(P0.05)。与HG+si-con组比较,HG+si-LINC00667组HK-2细胞Vimentin和α-SMA表达降低,E-cadherin表达升高,细胞培养液上清中IL-1β和TGF-β_1含量降低,NF-κB信号通路受到抑制(P0.05)。与HG+si-LINC00667+PBS组比较,HG+si-LINC00667+TNF-α组HK-2细胞NF-κB信号通路激活,Vimentin和α-SMA表达升高,E-cadherin表达降低,细胞培养液上清中IL-1β和TGF-β_1含量升高(P0.05)。结论:沉默LINC00667可抑制高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT,抑制炎症反应,其机制与抑制NF-κB信号通路有关。     

西红花苷通过TGF-β1和NF-κB通路抑制草酸引起的肾小管细胞上皮间质转化

目的研究西红花苷是否能通过转化生长因子β1(TGF-β1)和核因子-κB(NF-κB)通路抑制草酸引起的肾小管细胞上皮间质转化(EMT)的发生。方法 MDCK培养后分为3组(空白对照组、草酸组、草酸+西红花苷组)分别予以相应干预。运用Western blot蛋白印迹分析检测E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、TGF-β1、NF-κB的表达。分别检测不同组细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)的表达。结果草酸会使TGF-β1、Ncadherin、Vimentin、NF-κB表达量增加,使E-cadherin表达下降。西红花苷会降低草酸引起的细胞ROS的增加。结论西红花苷通过TGF-β1和NF-κB通路抑制上皮间质转化。     

合并前列腺炎症的良性前列腺增生组织中Integrinα_2β_1/CD133表达及其意义

目的:探讨合并前列腺炎症的良性前列腺增生(BPH)组织中Integrinα2β1/CD133表达及其意义。方法:收集56例行经膀胱前列腺摘除手术的BPH患者的前列腺标本,常规HE染色后观察其合并炎症情况,其中单纯BPH(24例)为A组,合并前列腺炎症的BPH(32例)为B组。采用免疫组化SP法及Western印迹法检测Integrinα2β1/CD133在两组前列腺组织中表达差异。Image-ProPlus 6.0图像分析软件对结果进行分析。结果:免疫组化Mattern积分结果显示:两组中Integrinα2β1/CD133表达有显著差异(P<0.05)。Western免疫印迹显示:B组Integrinα2β1平均相对光密度值高于A组[(0.29±0.18)vs(0.04±0.03)],P<0.05;B组CD133平均相对光密度值高于A组[(0.08±0.07)vs(0.002 0±0.001 8)],P<0.05。提示B组中Integrinα2β1/CD133表达较A组显著升高。结论:炎症可以促进BPH组织中Integrinα2β1/CD133蛋白表达表达。     

LeftyA真核表达载体的构建及其对转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 构建pcDNA3.1-LeftyA真核表达载体,观察其对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化(EMT)的影响.方法 基因克隆技术构建pcDNA3.1-LeftyA真核表达载体,将其瞬时转染HK-2细胞,TGF-β1(10μg/L)刺激后,观察细胞形态变化,检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因及蛋白的表达.结果 TGF-β1刺激后HK-2细胞内E-cadherin mRNA和蛋白时间依赖性表达下调,α-SMA mRNA和蛋白时间依赖性表达上调,同时E-cadherin表达变化早于α-SMA;LeftyA蛋白可以显著抑制E-cadherin蛋白的下调表达(P＜0.05),其表达比同时间点单纯刺激组高17.6%;同时可逆转α-SMA蛋白的上调表达(P＜0.05),其蛋白表达比单纯刺激组低14.0%.结论 LeftyA蛋白可以抑制TGF-β1所致的EMT.

Abstract：

Objective To construct the eukaryotic expression vector for LeftyA and study the effects of LeftyA on epithelial to mesenchymal transition of human proximal tubular epithelial cells induced by transforming growth factor-β1 ( TGF-β1 ). Methods The pcDNA3. 1-LeftyA was constructed by recombinant DNA technique. After transfection with pcDNA3. 1-LeftyA HK-2 cells were stimulated by TGF-β1( 10 μg/L). The morphological changes, and the expression of E-cadherin, α-SMA and LeftyA mRNA and protein were observed and detected, respectively. Results TGF-β1 could markedly decrease the expression of E-cadherin mRNA and protein in HK-2 cells induced, and dramatically increase the expression of α-SMA mRNA and protein in a time-dependent manner. Forced expression of exogenous LeftyA led to a blockage of TGF-β1 -induced E-cadherin ( 17.6% ) suppression and α-SMA induction ( 14. 0% ). Conclusion Disruption of cell adherence is the beginning stage of EMT, and overexpression of LeftyA can suppress EMT induced by TGF-β1, which suggests a alprostadil role for LeftyA in TGF-β1-induced tubular EMT and renal fibrosis.     

乳酸-转化生长因子-β1途径促进肺成纤维细胞活化介导机械通气相关性肺纤维化的机制研究

目的探讨机械通气促进肺成纤维细胞活化及肺纤维化的机制,明确乳酸-转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)途径在该过程中的作用。方法①将C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为假手术组(Sham组)和机械通气组(MV组),每组12只,其中Sham组仅行麻醉插管处理并保持自主呼吸,MV组采用20 ml/kg潮气量和70次/min通气频率行单次2 h机械通气,观察7 d后取材。采用H-E染色、Masson染色观察肺组织的损伤程度和纤维化程度,采用Western blot法检测肺组织Ⅰ型胶原蛋白α1链(collagen typeⅠalpha 1 chain,COL1A1)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和TGF-β1的蛋白表达情况,采用比色法检测小鼠肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)和血清的乳酸浓度。②将人胚肺成纤维细胞MRC-5采用随机数字表法分为4组(每组3个孔):PBS对照组(Con组)、1 mmol/L乳酸组(Lac1组)、10 mmol/L乳酸组(Lac_(10)组)和20 mmol/L乳酸组(Lac_(20)组),于乳酸刺激MRC-5细胞24 h后采用ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1含量,同时采用细胞免疫荧光观察α-SMA的表达情况;于乳酸刺激MRC-5细胞72 h后采用Western blot法检测不同分组细胞COL1A1和α-SMA的表达情况,并通过ELISA法检测细胞培养上清液Ⅰ型前胶原羧基肽(procollagen type I carboxyl peptide,PICP)的含量变化。③另取MRC-5细胞采用随机数字表法分为3组(每组3个孔):PBS对照组(Con组)、20 mmol/L乳酸组(Lac_(20)组)和20 mmol/L乳酸+TGF-β1受体抑制剂(SB431542)组(Lac_(20)+SB组),处理24 h后采用Western blot法检测不同分组细胞COL1A1和α-SMA的表达情况。结果①与Sham组比较,MV组小鼠肺泡间隔增厚、胶原蛋白沉积、肺纤维化程度加重,伴有COL1A1、α-SMA和TGF-β1表达水平升高(P<0.05),血清和BALF乳酸浓度升高(P<0.05)。②与Con组比较,Lac_(10)组和Lac_(20)组细胞培养上清液中TGF-β1、PICP含量升高(P<0.05),细胞中COL1A1和α-SMA表达水平升高(P<0.05),免疫荧光观察到α-SMA在细胞内表达增多(P>0.05)。③与Lac_(20)组比较,Lac_(20)+SB组细胞COL1A1和α-SMA表达水平降低(P<0.05)。结论机械通气可以通过乳酸-TGF-β1途径活化肺成纤维细胞,引起胶原蛋白分泌,促进机械通气相关性肺纤维化进程。     

含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽白细胞介素-24突变体蛋白对肝癌细胞抑制作用

目的 观察含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽模体的白细胞介素(IL)-24突变体蛋白(RGD-IL-24)对肝癌细胞的抑制作用.方法 肝癌HepG2细胞分别加入各10μl的RGD-IL-24(8 mg/L)、IL-24(8 mg/L)和磷酸盐缓冲液(PBS),噻唑蓝(MTT)比色法检测HepG2细胞生长抑制作用;DAPI染色检测HepG2细胞凋亡;免疫印迹法检测HepG2细胞bax、bcl-2及Caspase-3蛋白表达;黏附实验检测与HepG2细胞的靶向黏附.结果 RGD-IL-24、IL-24治疗4 d后HepG2细胞存活率分别为(0.219±0.015)、(0.397±0.009),与对照组(0.823±0.013)比较差异有统计学意义(P<0.01).RGD-IL-24、IL-24治疗组细胞凋亡率分别为(0.631±0.027)、(0.472±0.031),与对照组(0.082±0.013)比较差异有统计学意义(P<0.01).RGD-IL-24抑制HepG2细胞生长、诱导凋亡效果均比IL-24显著增强(P<0.05).与IL-24治疗组比较,RGD-IL-24治疗组HepG2细胞促凋亡蛋白bax增加、抗凋亡蛋白bcl-2减少、活化Caspase-3蛋白量增加.黏附实验证实RGD-IL-24与HepG2细胞的靶向结合作用增强.结论 含RGD肽模体的IL-24蛋白能通过与肝癌HepG2细胞的靶向结合增强其凋亡诱导作用.     

n-3多不饱和脂肪酸预防同种异体移植血管硬化的作用

目的研究n-3多不饱和脂肪酸预防同种异体移植血管硬化的作用。方法SD和Wistar大鼠各240只,随机配对成240对建立颈总动脉同种异体移植血管模型,并随机平均分成4组,每组60对。对照组:术前、术后未喂食n-3多不饱和脂肪酸;A组:术前2周始喂食n-3多不饱和脂肪酸600mg/kg(以EPA含量计,下同),直至摘取标本;B组:喂食300mg/kg;C组:喂食150mg/kg。分别于术后1、7、14、21和28d摘取受者移植血管,观察移植血管在活体的搏动情况,HE染色光学显微镜下观察移植血管的组织学病理改变,电子显微镜观察移植血管的超微结构变化,免疫组织化学染色检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)和细胞核因子κB(NF-κB)在移植血管的表达。结果对照组术后7d移植血管开始有病理改变,28d时最为明显,管腔已基本堵塞;A组、B组、C组移植血管的病理改变均较对照组迟缓,管腔通畅率优于对照组。对照组ICAM-1,VCAM-1,NF-κB的表达较A组、B组和C组明显增强(P<0.05)。移植术后1d、7dICAM-1、VCAM-1、NF-κB的表达A组、B组、C组间比较差异无统计学意义(P>0.05),移植术后14、21和28d的表达C组较A组、B组明显增强(P<0.05),而A组与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论n-3多不饱和脂肪酸能够预防同种异体移植血管硬化,表现为移植血管病理改变发生迟缓,管腔通畅率高,ICAM-1,VCAM-1和NF-κB的表达减弱,n-3多不饱和脂肪酸以300mg/kg用量达到的效果最佳。     

Wnt-7a蛋白抑制单侧输尿管梗阻小鼠肾脏上皮细胞-间充质细胞转分化

目的 观察Wnt-7a蛋白对单侧输尿管梗阻(UUO)模型小鼠肾脏纤维化的拮抗作用.方法 18只雄性C57BL/6小鼠按随机数字法分为假手术组、UUO模型组和Wnt-7a蛋白治疗组,每组6只.于术后7d处死小鼠,留取梗阻侧肾组织,行Masson染色观察肾间质纤维化程度;免疫组化染色检测肾组织E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白( α-SMA)、波形蛋白的表达;Western印迹法测定肾皮质中E-钙黏蛋白和 α-SMA的表达.结果 术后第7天,与假手术组相比,模型组体质量显著下降(P＜0.05),肾组织间质纤维化相对面积显著增多(P＜0.05),肾组织α-SMA及波形蛋白的表达显著增加(P＜0.05),E-钙黏蛋白表达显著减少(P＜0.05).与模型组相比,Wnt-7a蛋白治疗组体质量无明显改变(P＞0.05),肾组织间质纤维化相对面积显著减少(P＜0.05),α-SMA及波形蛋白的表达显著减少(P＜0.05),E-钙黏蛋白表达显著增高(P＜0.05).结论 Wnt-7a蛋白可以抑制肾脏上皮细胞,间充质细胞转分化的发生而减轻肾脏纤维化.     

去骨瓣减压术对大鼠缺血缺氧性脑损伤后核因子-κB表达及细胞凋亡的影响

目的 观察去骨瓣减压术对大鼠缺血缺氧性脑损伤后核因子(NF)-κB表达及细胞凋亡的影响.方法 将60只SD大鼠随机分3组:脑缺血(IS)组、脑缺血+去骨瓣减压(IS+DC)组、去骨瓣减压(DC)组,每组20只.不同时间点取脑,三苯基氯化四氮唑(TTC)染色观察脑梗死范围,电镜观察半暗区神经元超微结构变化,免疫组织化学测定NFκB表达,TUNEL法检测细胞凋亡变化.结果 与单纯脑缺血组比较,(IS+DC)组脑梗死范围减小,半暗区神经元损伤减轻,NF-κB表达降低(0.0621±0.0101,P＜0.05),细胞凋亡数量减少(10.93±3.54,P＜0.05).结论 去骨瓣减压术通过降低缺血半暗区脑组织NF-κB基因表达,减少细胞凋亡,起到脑保护作用.     

血清对神经干细胞分化的影响北大核心CSCD

目的探讨血清对神经干细胞分化过程的影响。方法取孕14 d SD大鼠胚胎脑组织,分离培养神经干细胞并传代。取第3代细胞倒置相差显微镜下观察细胞形态,并行巢蛋白(Nestin)免疫细胞化学染色鉴定。将鉴定后的细胞分为A、B、C 3组,各组细胞培养基除FBS浓度不同(分别为5%、1%、0)外,其余成分均一致。培养第8天,行活/死细胞染色观察细胞生长情况;培养第4、8天,行免疫细胞化学染色以及实时荧光定量PCR检测,观察胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、Ⅲ型β神经元微管蛋白(β-Ⅲ Tubulin)表达。结果经细胞形态及免疫细胞化学染色鉴定培养细胞为神经干细胞。培养第8天,活/死细胞染色示A、B、C组细胞均无死亡现象。免疫细胞化学染色示,培养第4、8天,A、B、C组GFAP蛋白表达随FBS浓度降低而逐渐减弱,但β-Ⅲ Tubulin表达逐渐增强;各组第8天时染色均较第4天时增强。实时荧光定量PCR检测示,培养第4天和第8天3组间GFAP mRNA及β-ⅢTubulin mRNA相对表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血清能促进神经干细胞向胶质细胞分化,并减缓其向神经元分化速度,且血清浓度越低,该影响越小。     

PRP及RGD联合修饰表面改性后仿生基质对ADSCs生物学行为的调控

目的 评估富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)及精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)联合修饰表面改性后支架的细胞生物学特征,验证优化界面整合的方法.方法 兔脂肪基质干细胞成骨诱导化,nβ-TCP/Cs/PCL仿生基质Nd:YAG激光处理,表面改性及细胞接种:A组(PRP凝胶加RGD修饰表面改性基质加ADSCs)、B组(RGD修饰表面改性基质加ADSCs)、C组(表面改性基质加ADSCs)、D组(未表面改性基质加ADSCs);第1、4、8、12、16、20、24、28天,显微镜和电镜、共聚焦技术观察和检测细胞的存活率、增殖活力、Westen blot测定碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原蛋白表达活性,分析Runx2与OPG表达.结果 A组细胞生长旺盛、细胞外基质丰富,存活率高于其它组(88.16±1.29,P＜0.05),增殖活力、碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原水平均高于其它组(0.92±0.13,87.27±3.08,93.27±3.91,P＜0.05),Runx2和OPG表达显著.结论 PRP及RGD修饰联合支架表面改性能促进细胞增殖,为理想的骨整合方法.     

白介素-1β诱导和激活许旺细胞的实验研究

目的研究白介素-1β对许旺细胞的诱导和激活及其最佳作用浓度。方法取3～4dSD乳鼠坐骨神经，纯化培养许旺细胞，A组加入含10％胎牛血清的DMEM／F12培养基，B组加入自体神经匀浆激活的巨噬细胞条件培养基；C组加入细胞培养级生物制剂白介素-1β(2．0ng/ml)，分别培养许旺细胞6d倒置显微镜观察许旺细胞的形态，抗S—100蛋白免疫组化染色鉴定许旺细胞，MTT法筛选出白介素-1β促许旺细胞分裂增殖作用的最佳浓度，methyl-^3H掺入法检测A、B、C组对许旺细胞的促增殖情况，ELISA法检测A、B、C组对许旺细胞NGF分泌量影响。结果B、C组均比A组更能促进许旺细胞发生分裂增殖并高表达NGF，但以C组的作用最强。结论许旺细胞自身能够表达NGF，而2．0ng/ml白介素-1β能更好的促进许旺细胞的分裂增殖促进对NGF的高表达.     

增生性瘢痕中CD90表达与TGF-β1和α-SMA表达的相关性分析

目的 研究CD90、转化生长因子β1(TGF-β1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在增生性瘢痕中的表达,并分析CD90表达与TGF-β1、α-SMA表达的相关性.方法 自2008年9月至2009年6月,随机选取18例增生性瘢痕患者,应用免疫组化技术分别检测CD90、TGF-β1、α-SMA在18例增生性瘢痕(A组)、18例增生性瘢痕与正常皮肤交界处(B组)、18例正常皮肤(C组)标本中的表达水平,并行统计学分析.结果 免疫组化结果 显示,CD90、TGF-β1、α-SMA在A、B组中有较高的阳性表达,两组相比其差异无统计学意义(P>0.05);而在C组中仅有少量的阳性表达,与A、B两组相比其差异均有统计学意义(P<0.05);统计显示,在A组中CD90的表达和与TGF-β1、α-SMA的表达具有显著正相关性.结论 CD90可能是瘢痕异常增生的特异表型,且CD90与TGF-β1、α-SMA在增生性瘢痕中存在一定的正相关性.     

碳化二亚胺交联去细胞猪肺动脉带瓣管道物理性能的研究

目的研究碳化二亚胺（carbodiimide,EDC）交联去细胞猪肺动脉带瓣管道体外的物理性能。方法在相对无菌条件下取得20个猪带瓣肺动脉,沿肺动脉瓣膜交界处纵向剪开分成3份（每份样本都由肺动脉管壁及其瓣膜组织组成）。将3份样本用抽签法随机分为3组：A组为对照组,为新鲜猪肺动脉带瓣管道样本,不再进一步处理;B组为去细胞组织样本,采用胰蛋白酶＋去污剂Triton X-100对猪带瓣肺动脉样本进行去细胞处理;C组为EDC交联去细胞组织样本,即在B组处理的基础上进一步行EDC交联处理。测试肺动脉组织含水量、厚度、抗张强度和热皱缩温度,评价所有样本的物理性能。结果胰蛋白酶＋去污剂能完全去除猪肺动脉带瓣管道组织的内膜层内皮细胞和管壁及瓣膜组织的细胞和部分基质成分,保留比较完整的纤维支架成份。与A组相比,B组肺动脉壁样本含水量增加（P=0.000）,肺动脉瓣膜含水量变化不明显,肺动脉壁（P=0.000）和瓣膜（P=0.000）的厚度减少、抗张强度下降（P〈0.01）、热皱缩温度无明显变化。与B组比较,C组肺动脉管壁样本含水量减少（P=0.000）,肺动脉瓣膜样本含水量变化不明显。肺动脉管壁和瓣膜样本的厚度变化不明显、抗张强度增加（P〈0.01）、热皱缩温度增加（P=0.000,0.000）。与A组相比,C组肺动脉壁和瓣膜含水量变化不明显,肺动脉壁和瓣膜的厚度减小（P=0.000,0.000）,抗张强度无明显差别,热皱缩温度增加（P=0.000,0.000）。结论 EDC交联去细胞方法能够加强去细胞肺动脉带瓣管道的抗张强度、降低去细胞肺动脉管壁的含水量。