胶体金标记免疫层析法检测大肠杆菌O157

目的 应用抗大肠杆菌O157(E.coli O157)单克隆抗体,制备一种简便快速的胶体金标记免疫层析(GICA)条用于检测标本中E.coli O157.方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗E.coli O157单克隆抗体,以硝酸纤维膜作为抗E.coli O157单克隆抗体的包被载体,制成GICA检测条.标本中E.coli O157与检测条上金标记抗体(Au-Ab)结合后,利用硝酸纤维膜的层析作用移动,与膜上的固相抗体结合形成可见的红色条带.结果 GICA检测条灵敏度可达105 cfu/ml.用GICA检测了1750份不同食品和人畜粪便标本中E.coli O157,GICA检测条阳性份数43份,后经分离培养检出29株大肠杆菌O157;另14份标本经鉴定,其中12份标本可疑为弗劳地枸橼酸杆菌.结论 GICA条检测标本的E.coli O157,特异性较高,不需任何仪器设备,较简便快速,易于判断结果,故可对标本进行快速筛查,适合各级疾控中心和临床检验部门使用.     

E.coli O157：H7 LAMP检测方法的建立

目的建立检测E.coli O157：H7环介导的等温扩增方法（LAMP）。方法选取E.coli O157：H7的rfbE基因设计LAMP引物,优化建立LAMP检测体系。并用该体系和国标法对76份人工污染样品进行了检测。结果所建立的E.coli O157：H7 LAMP体系具有良好的特异性,用该体系对9属13种41株菌进行检测,结果只有E.coli O157：H7的扩增产物电泳结果为阶梯状条带,非E.coli O157：H7均未产生扩增产物,灵敏性为2.7×101CFU/mL。样品及培养基对反应体系没有影响或影响很小。对76份样品进行了检测,E.coli O157：H7 LAMP检测方法与国标法的总符合率为96.1%,2h内即可完成检测。结论本研究建立的E.coli O157：H7的LAMP法不但解决了分子生物学检测对实验室仪器设备的高要求问题,而且检测方法简便、快捷,非常便于基层实验室和现场检测使用。     

免疫PCR技术检测肠出血型大肠埃希菌O157:H7

目的 通过检测肠出血型大肠埃希菌O157:H7菌株,确定免疫PCR技术的检测灵敏度和特异性,探讨该方法用于检测食品和临床标本的可行性。 方法 免疫PCR技术检测O157:H7标准菌株和自食品、临床标本分离的菌株。 结果 免疫PCR最少可检测101/ml O157:H7细菌,临床和食品分离的O157:H7菌株检测结果均为阳性,而非O157:H7菌株检测结果均为阴性。 结论 免疫PCR技术具有较高的检测灵敏度、特异性及操作简便等特点,可作为食品和临床标本检测O157:H7方法。     

胶体金标记免疫层析试纸条在儿童HbsAg检测中的应用评价

目的 :寻求一种灵敏快速易懂的儿童血检法。方法 :试用一种胶体金标记免疫层析 (CIA)试纸条 ,一步法快速、定性检测 196 5例儿童未梢全血中乙型肝炎病毒表面抗原 (HbsAg)。结果 :胶体金标记免疫层析试纸条与全血中的HbsAg具有特异性的结合能力 ,阳性检出率达 95 .0 0 % (5 7/ 6 0 )。对HbsAg灵敏度高达 2ng/ml,不出现前带现象 ,接近EIA法。经胶体金标记免疫层析试纸条检出的 6 7例阳性儿童 ,再行静脉抽血用EIA法进行第二次复查比较 ,6 7例标本HbsAg全部呈阳性 ,阳性符合率达 10 0 %。结论 :胶体金标记免疫层析试纸条特异性强 ,灵敏度高 ,简便快速 ,结果易懂 ,无需特殊仪器设备 ,适合广大基层门诊 ,尤其大面积的儿童HbsAg的普查 ,街头无偿献血等过筛应用。     

心肌肌钙蛋白Ⅰ免疫层析试纸条的研制

目的制备人心肌肌钙蛋白Ⅰ免疫层析试纸条,建立一种快速检测人心肌肌钙蛋白I的检测方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记肌钙蛋白I单克隆抗体,喷于玻璃纤维纸上制成胶体金结合物垫。将另一株肌钙蛋白I单克隆抗体和抗鼠二抗分别喷于试纸条的检测线和质控线处,组装成试纸条并进行灵敏度、特异性及临床样品测定。结果该试纸条检测灵敏度为1μg/L,15min内可判断结果;与C-反应蛋白、人心肌脂肪酸结合蛋白、肌酸激酶、人心肌肌红蛋白无交叉反应;测定健康人血清样本40例,结果均为阴性;测定14例心肌梗死患者血清,结果均为阳性,且T线显色程度与发光法测定值呈正相关。结论该试纸条灵敏度高、特异性强、操作简便,结果判断直观,可用于急性心肌梗死的早期筛查。     

肺炎支原体快速检测方法的建立及应用评价

目的制备抗肺炎支原体(MP)的特异性单克隆抗体,利用单克隆抗体建立MP胶体金快速检测方法。方法采集急性呼吸道感染患儿咽拭子标本,分离培养并鉴定MP,纯化MP抗原,制备抗MP单抗,利用单抗建立MP胶体金检测试纸条。取疑似MP感染患者的咽拭子标本,分别使用荧光定量PCR法和胶体金快速检测法对其进行检测,观察并统计检查结果。结果成功分离培养出MP菌株,灭活并纯化出MP抗原,利用该抗原免疫小鼠,通过杂交瘤技术制备出抗MP单克隆抗体19株,从中选出效价高、特异性较好的两株单克隆抗体(MP-5和MP-19)作为原材料制备MP胶体金快速检测试纸条。胶体金试纸条最低检测限为20ng。分别采用胶体金试纸条和荧光定量PCR法对临床标本进行检测,结果显示,本研究制备的MP胶体金快速检测法的灵敏度为88.2%,特异度为82.6%。结论制备出抗MP的特异性单克隆抗体,已初步建立MP胶体金快速检测法,并为临床MP感染患者的快速诊断提供帮助。     

胶体金免疫层析法测定尿HCG的评价

目的对胶体金免疫层析测定试条检测随机尿HC-G的结果进行分析与评价.方法采用胶体金免疫层析测定法和放射免疫分析法对120份育龄妇女随机尿HCG进行测定.结果胶体金免疫层析试条对随机尿HCG的检测范围为120.0～427,570mIU/ml,灵敏度为120.0mIU/ml,当尿HCG浓度大于427,570mIU/ml时,该试条出现带现象,与尿中LH无交叉反应.结论胶体金免疫层析试条具有操作简单、快速等优点,与放射免疫法相比,存在灵敏度低和带现象问题,在日常应用中应加以注意.     

O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒试纸条的研制

目的本研究旨在建立一种准确、快速、简便的O139群霍乱弧菌检测方法。方法以荧光纳米颗粒为标记物,采用双抗体夹心法模式制备O139群霍乱弧菌免疫层析检测试纸条。在紫外灯下观察试纸条上质控线和检测线上的荧光信号强度作为结果判定依据。结果用所制备的O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条对9属20种105株菌进行检测,所有20株O139群霍乱弧菌检测结果呈阳性,其余85株非O139群霍乱弧菌均呈阴性反应;用该试纸条检测人工污染的海鱼样品,灵敏性为3．5×10^4CFU／mL。用自制试纸条和标准法同时检测77份样品（均为水产品）,两种方法的总符合率为85．7％。结论O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条的研制成功为O139群霍乱弧菌的快速检测提供了一个极好的检测方法,便于野外检测的开展,具有广阔的应用前景。     

幽门螺杆菌IgG抗体免疫层析分型方法的建立

目的建立1种检测血清中抗幽门螺杆菌(Hp)抗体的胶体金免疫层析(GICA)方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记SPA,将Hp重组抗原VacA、CagA和UreaA、UreaB抗原包被于硝酸纤维素膜NC上,制成免疫层析检测试纸条.血清中的抗Hp抗体与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的酒红色线条。结果用GICA与免疫印迹试剂盒对比检测了180份血清标本中抗Hp抗体,显示本方法检测敏感度、特异度分别为95.4%和96.3%,两法总符合率为96.1%。结论用这种免疫层析GICA分型方法检测血清中抗Hp抗体,灵敏度高、特异性强、简便快速,有着广泛临床应用前景。     

布鲁氏菌血清 IgM,IgG 抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及初步临床应用

目的　应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测布鲁氏菌 IgM,IgG 抗体的方法,并进行初步的性能验证。方法　采用枸椽酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗重组布鲁氏菌抗原,将鼠抗人 IgG 抗体、鼠抗人 IgM 抗体和兔抗布鲁氏菌抗体喷在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,对 pH 值和抗体浓度等条件优化;评估试剂盒灵敏度、特异度、交叉反应、准确度、精密度和干扰实验;用该方法对临床的 400 份血清进行检测,试管凝集试验验证其准确性。结果　该试纸条最佳胶体金标记的 pH 值为 7.5,标记重组抗原质量浓度为 30?g/ml。方法的灵敏度和稳定性较好且与其他病原菌无交叉反应。血清总胆红素、血脂和血红蛋白浓度的增高会使试纸条显色结果减弱。对400份临床样本进行检测,其结果与试管凝集试验的符合率为 93.75%。结论　该试验建立的布鲁氏菌 IgM/IgG 抗体的胶体金免疫层析检测方法具有较好的特异度和稳定性,整个检测过程可在 15min 内完成,能够快速检测样品血清,适用于现场快速检测。