微量血标本酶联免疫吸附试验检测HBV标记物

1978年文献报告按照用抗体覆盖的微量滴定板的类似方法,使用辣根过氧化物酶标记e抗体的IgG用于检测。证实此ELISA(酶联免疫吸附试验)方法的灵敏度近似RIA。近年来,用ELISA法检测血清中HBV标记物,     

感染犬弓首线虫鼠血清抗弓首线虫幼虫抗体和循环抗原检测

采用间接 ELISA 和双抗体夹心 ELISA 检测感染犬弓首线虫小鼠血清抗弓首线虫幼虫抗体和循环抗原。间接 ELISA 用犬弓首线虫幼虫排泄分泌抗原(TES-Ag)包板,二抗用辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠 IgG。夹心 ELISA 用豚鼠抗 TES-Ag 的 IgG 包板,第二抗体用辣根过氧化物酶标记的兔抗TES-Ag 的 IgG。结果表明,感染后第1天血清循环抗原即为阳性,第15天血清抗体出现阳性,第87天实验结束时,血清抗体和循环抗原均是阳性。     

应用酶联免疫吸附试验检测流行性出血热患者尿中抗原方法改进及影响因素探讨

我们应用辣根过氧化物酶标记流行性出血热(EHF)IgG,用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法,检测 EHF 患者尿中抗原,取得满意结果。在实验技术建立的同时,对方法改进及影响因素作了初步探讨。     

PPA-ELISA和PSAHIgG-ELISA检测日本血吸虫病人抗体比较研究

本文报告酶联A蛋白(PPA)和酶联羊抗人IgG-IgG(PSAHIgG)的ELISA间接法,用血吸虫虫卵粗抗原检测血吸虫病人血清抗体的比较研究,探讨PPA-ELISA的特性.两种酶结合物的ELISA结果是相当一致的.检测也吸虫病人的消光值均数约为健康人消光值均数的8倍;血吸虫病人的消光值均高于健康人的消光值正常范围上限值(阈值),与粪检(阳性)结果是符合的.同样条件对肺吸虫病人试验,PPA-ELISA尚未见交叉反应,PSAHIgG-ELISA出现少数交叉反应.目测法和光电比色法的判读结果基本上是符合的.初步认为PPA可以代替PSAHIgG用于ELISA检测人体抗血吸虫抗体的研究.     

应用PPA-ELISA检测实验家兔弓形体抗体的研究

本文首次报告了应用过氧化物酶标记金葡菌 A 蛋白取代酶标第二抗体进行酶联免疫吸附试验(PPA—ELISA)检测实验家兔弓形体抗体的结果。24只感染兔和32只正常兔的阳性和阴性符合率均为100%,与16只爱美尔球虫病兔之间亦无交叉反应现象。采用滤纸血片标本检测,阳性符合率为100%,阴性符合率为96.87%,与间接血凝试验(IHA)比较,前法在弓形体感染后第11天8/11(72.72%)的家兔呈现阳性反应,而后法尚未能检出,提示 PPA-ELISA 较 IHA 具有更高的敏感性。文章叙述了弓形体遣殖子的分离纯化和抗原制备过程,并对胰蛋白酶处理前后的速殖子所制备的可溶性抗原在 PPA-ELISA 中的使用效果进行了比较。     

ELISA一步法检测轮状病毒抗原

用牛轮状病毒(NCDV株,A组)抗原免疫家兔,制备兔抗牛NCDV多克隆抗体。用该抗体与辣根过氧化物酶联结,建立了检测轮状病毒(RV)的ELISA一步法。该法实验过程为: 40孔酶标板用兔抗RV包被,4℃过夜后加入50μl处理过的待测标本和50μl HRP-     

应用PPA—ELISA检测实验家兔弓形虫抗体的研究

目前弓形虫病的诊断较常用的免疫血清学方法为间接荧光抗体试验(IFA)间接血凝试验(IHA)和染色试验(DT).但有些方法操作繁琐,设备复杂,有些要用活的虫体,不易标准化,自动化,不适于大规模普查.近年来,国外试图将ELISA用于该病的诊断获得满意结果,为了简化ELISA所用酶标第二抗体的制备程序,使这一新技术适用于检测多种哺乳动物血清中弓形虫IgG抗体,用于弓形虫病流行病学调查,我们采用过氧化物酶标记金萄菌A蛋白(PPA)取代酶标第二抗体进行酶联免疫吸附试验(PPA—ELISA),对实验感染家兔血清弓形虫抗体进行了检测,现将结果简报如下:     

三种血清学方法检测肺炎支原体抗体的比较

目的:比较三种血清学方法检测肺炎支原体抗体(MP-IgM)的方法,寻求肺炎支原体的快速、准确和特异的检测方法。方法:选择66例社区获得性肺炎(CAP)患者的血清标本,分别用被动颗粒凝集试验(PPA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光法(IIF),检测采用χ2检验比较三种方法的检测结果。结果:三种方法所测MP-IgM以ELISA法阳性率最高(61%,41/66),PPA法次之(56%,37/66),而IIF法最低(43%,29/66)。各方法间仅PPA法与ELISA法所测结果具有显著相关(P<0.001),而PPA法和IIF法、ELISA法和IIF法所测结果缺乏一致性。结论:ELISA法和PPA法联合检测是肺炎支原体病原体诊断的有效方法。     

尿液水通道蛋白-2双抗体夹心ELISA测定法的建立

目的建立较为稳定的定量检测尿液水通道蛋白-2(AQP2)的酶联免疫吸附测定(ELISA)法。方法人工合成AQP2蛋白C-末端的CELHSPQSLPRGSKA多肽片段,并与KLH联接,制备兔抗AQP2多肽片段的多克隆抗体,用辣根过氧化物酶标记部分抗AQP2抗体IgG。建立检测充血性心力衰竭模型大鼠尿液AQP2的双抗体夹心ELISA法。结果双抗体夹心ELISA法成功建立,灵敏度为15.625 pmol/ml,批内及批间变异系数分别为4.65%和14.05%;用该法定量检测左冠状动脉结扎术后不同梗死面积充血性心力衰竭模型大鼠的尿AQP2浓度,其结果与Western blotting半定量检测结果一致。结论双抗体夹心ELISA法可以较好地定量检测充血性心力衰竭模型大鼠的尿AQP2蛋白浓度且较Western blotting更加简便易行,便于临床推广使用。     

单克隆与多克隆双抗体夹心法测定可溶性白细胞介素2受体试剂盒的研制

采用抗白细胞介素2受体(IL-2R)的单克隆与多克隆抗体以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG,建立了高特异性及高灵敏度的双抗体夹心法测定可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)。结果,酶联免疫吸附试验(ELISA)测得兔抗人IL-2R多克隆抗体效价达1:10~4,免疫双向扩散法测得羊抗兔抗体效价高达1:256。本试剂盒检测sIL-2R的特异性强,灵敏度为100U/ml,在28C存放一年,稳定性不变。此方法操作简单,适用于临床和基础研究。     

兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体的制备及初步鉴定

目的狨猴血清中纯化IgG抗体,制备兔抗狨猴抗血清,并纯化抗血清中IgG,HRP(辣根过氧化物酶)标记兔抗狨猴IgG。方法 Hi TrapTMProtein G亲和层析纯化狨猴和兔抗狨猴血清IgG,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行纯度鉴定,免疫琼脂双扩散法(double immunodiffusion assay)测定制备的兔抗狨猴抗血清效价,改良"简易过碘酸钠标记法"制备兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体,酶联免疫吸附测定法(ELISA)及蛋白免疫印迹法(Western blotting)对兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体进行工作浓度测定及特异性鉴定。结果狨猴和兔抗狨猴血清纯化IgG纯度分别大于95%、97%;兔抗狨猴IgG抗血清的效价为1∶64。ELISA和Western blotting鉴定了兔抗狨猴IgG-HRP酶标抗体参考工作浓度为1∶256 000、1∶15 000,特异性明显。结论制备狨猴IgG-HRP标记抗体并初步鉴定,包括ELISA及Western blotting的特异性及使用浓度,为狨猴病原体免疫学检测体系及分子免疫学检测体系储备了资源。     

三种肺炎支原体特异性抗体IgM检测方法结果的比较

目的:比较三种肺炎支原体特异性抗体IgM检测方法的临床诊断效果及应用价值。方法:将采集的疑似MP感染患者血清标本612份,分别进行酶联免疫法(ELISA);被动颗粒凝集法(PPA)及免疫胶体金法(GIA)肺炎支原体特异性抗体IgM平行检测,具体检测方法、结果判断,均严格按照相应试剂盒说明书执行。结果:通过对三种血清学检测方法结果的比较,酶联免疫法(ELISA)在真阳性(TP)、假阳性(FP)、真阴性(TN)、假阴性(FN)等方面与被动颗粒凝集法(PPA)比较,差异无统计学意义(P>0.05);而与免疫胶体金法(GIA)比较有显著性差异(P<0.05);被动颗粒凝集法(PPA)与免疫胶体金法(GIA)之间比较差异明显(P<0.05),在假阳性率(FPR)、假阴性率(FNR)、敏感度(Sen)、特异度(Spe)、阳性似然比(+LR)、阴性似然比(-LR)、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、约登指数(Youden index)及总符合率(Coincidence rate)等10项评价指标方面酶联免疫法(ELISA)与被动颗粒凝集法(PPA)比较无明显优势,但优于免疫胶体金法(GIA)。结论:三种检测方法都具有高敏感度、高特异度且操作简便,均可用于临床早期快速诊断MP,联合应用可为临床提供更客观、更准确的检测结果,提高MP诊断符合率,以减少漏诊率和误诊率的危害。     

免疫酶标抗体法对病毒性肺炎早期诊断方面的初步探讨

<正> 六十年代初,Nakane和Pierce Avrameas和Uriel等开创了辣根过氧化物酶标记抗体的新技术。其后,Mason及Sternberger等又研究成功了免疫过氧化物酶法,称为免疫酶技术。近十多年来,免疫酶技术有了迅速发展,国内外已有许多应用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行细菌学、病毒学等方面的研究。1977年,Bideoell等用ELISA检测风疹巨细     

应用两种免疫组化酶法染大鼠室旁核含神经垂体素1的细胞

以辣根过氧化物酶抗辣根过氧化物酶(PAP)和卵白素生物素辣根过氧化物酶复合体(ABC)法染室旁核内含神经垂体素1(NPI)的细胞。自制PAP的比值为1.58。鼠丘脑下部冰冻切片孵育于NPI抗血清后加入PAP或ABC,再经二氨基联苯胺成色、锇酸和硫卡巴联氨加深。镜下细胞的胞体、轴索和树突显示清楚,呈深棕色。二法均灵敏且久不退色。     

抗HIV-2 gp36基因工程抗原单克隆抗体的制备和鉴定

目的 制备稳定产抗人类免疫缺陷病毒-2gp36基因工程抗原单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb,单抗)的杂交瘤细胞株及相应单抗,鉴定细胞株的生物学特性和单抗的免疫学特性及理化特性;初步探索用所制单抗构建检测gp36酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的适用性.方法 分别用杂交瘤技术和常规免疫制备抗gp36的单抗和多抗(polyclonal antibody,PcAb,多抗).纯化单抗和多抗,并标记辣根过氧化物酶.分别用纯化的单个单抗-单个单抗或单个单抗-多抗建立夹心ELISA.结果 获得9株稳定分泌抗gp36单抗的杂交瘤细胞株.用纯化的8E5单抗和辣根过氧化物酶标记的多抗建立的夹心ELISA可以检测到低至50 μg/L的gp36.结论 为人类免疫缺陷病毒-2感染的检测和研究初步提供了可资应用的单抗.     

RT-RCR产物固相杂交-酶联显色方法检测甲肝减毒活疫苗病毒滴度

目的应用RT-PCR-EIJSA方法检测甲肝减毒活疫苗病毒滴度。方法应用固相杂交一酶联显色方法，将标记有生物素的寡核苷酸引物所扩增的疫苗病毒基因产物，与微孔反应板上的特异性探针进行快速杂交，通过辣根过氧化物酶标记的链亲和素进行酶联显色，读取光密度值(OD值)，判断结果。应用此法检测了11批甲肝活疫苗滴度。并与常规细胞培养法(CCID50)比较。结果证明本方法与细胞培养法(CCID50)的敏感性相仿，具有简便、快速、特异的优点。结论RT-PCR-EIJSA法有望代替常规细胞培养法应用于甲肝减毒活疫苗病毒滴度的检测。     

双抗夹心ELISA法检测骨唾液酸蛋白的初步建立

目的 建立快速检测骨唾液酸蛋白的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法,为试剂盒的研制奠定基础。方法 用鼠抗人骨唾液酸蛋白（BSP）单克隆抗体包被酶标板,兔抗人BSP检测,辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗鼠二抗与兔抗人BSP相结合,初步建立BSP的双抗夹心ELISA检测方法。结果 自建双抗夹心ELISA法检测骨唾液酸蛋白的灵敏度为1.5ng/ml,标准曲线的线性范围为2-100ng/ml,回归方程y=0.2548x+0.0775 (r=0.992);批内批间变异系数分别为4.6％-5.4％和5.2％-7.1％,对人血清做50、25和10ng/ml三个加标浓度的回收率实验,回收率在47.2％-101％之间;4℃有效期至少360天。结论：成功建立双抗夹心ELISA检测BSP的方法。     

一种改良NaIO_4标记法应用于HRP-IgG及其在GSH-Px研究

谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)是体内一种重要的抗脂质过氧化物酶,近年来,免疫酶技术在研究GSH-Px细胞内分布、代谢等方面得到广泛应用。这种技术需要重复性好,效果优良的标记法和高效稳定的酶标抗体。传统的辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体的过碘酸钠法(Nakane法),酶活性显著下降和IgG-HRP大分子聚合物的形成,影响了GSH-Px抗原抗体反应的敏感性,为克服这一缺陷,木文采用一种新的HRP标记IgG过碘酸钠法,将标记物用于GSH-Px的酶联免疫吸附测定(ELISA)法、免疫组化及免疫电镜研究,取得满意结果。     

酶标记免疫吸附试验考核肺吸虫病药物疗效的研究

1979年以来,我们曾用辣根过氧化物酶标记抗人IgG,进行酶标记免疫吸附试验(ELISA)检测肺吸虫患者的特异抗体,证明该法比间接血凝及对流免疫电泳灵敏性高。随后又观察了ELISA对其它疾病患者血清的交叉反应情况,并对影响该法敏感性的有     

用酶联免疫吸附法测定多抗甲素含量的探讨

作者采用酶联免疫吸附测定(ELISA)夹心法及二步竞争法,测定多抗甲素的含量。经实验条件的优化,均采用微滴板上烘干包被兔抗体,结合多抗甲素后,分别加入辣根过氧化物酶标记的免抗体或该酶标记的多抗甲素,再显色测定。除包被一步外,均在4小时内完成测定,比常规补体结合法快速,包被的微滴板4℃储存3个月仍不影响使用。灵敏度:夹心法为0.64～7.4μg/孔;二步竞争法为0.6～1.2μg/孔。