HPLC-MS-MS法测定牛黄降压丸中芍药苷的含量

目的：建立HPLC-MS-MS法测定牛黄降压丸中芍药苷的含量。方法：采用HPLC-MS-MS法对牛黄降压丸中芍药苷进行含量测定,选用Agilent 20RBA×SB-C₁₈反相柱（2.1 mm×30 mm,3.5 μm）为色谱柱,流动相为甲醇-5 mmol·L^-1甲酸铵（75：25）,流速0.4 mL·min^-1,柱温25℃。质谱条件：电喷雾离子源（ESI）,检测方式为多离子反应监测（MRM）,负离子模式,用于定量分析的离子为m/z 525~449。结果：芍药苷的线性范围为20~2 000 mg·L^-1（r=1.000 0）;样品平均加样回收率为99.56%,RSD 0.86%。结论：该方法操作简便,快速,准确度好,能有效控制牛黄降压丸的质量。     

冬虫夏草产地土壤中耐砷细菌的分离、鉴定及耐砷能力测定＊

目的 分析冬虫夏草产地土壤中的耐砷细菌，为研究冬虫夏草砷超富集机制提供依据。方法 对西藏、四川五个冬虫夏草产地土壤中耐砷细菌进行分离、纯化，筛选出一批耐砷细菌，对其中两株优势菌株XB和XNQ进行形态、生理生化、16S rRNA鉴定，并利用硝酸银溶液（AgNO₃）与三价砷As（Ⅲ）、五价砷As（Ⅴ）的颜色反应，检测两株细菌对砷的氧化还原性，最后对菌株的耐砷能力进行测定。结果 通过菌落形态特征分析，菌株XB和XNQ均为革兰氏阴性菌，主要脂肪酸均为C18:1 ω9c、C16:0、Summed Feature 3（C16:1 ω7c /C16:1 ω6c）和C12:0；通过16S rRNA基因的序列分析，菌株XB的16S序列与已知种Acinetobacter guillouiae 的序列APOS01000028相似性为99.72%，菌株XNQ与已知种Acinetobacter nosocomialis的序列APOP01000014相似性为99.86%；定性硝酸银染色实验证明菌株XB、XNQ具有砷还原性，都是As（Ⅴ）还原细菌；菌株XB和XNQ对As（Ⅲ）的耐受性为20 mmol?L^-1，对As（Ⅴ）的耐受性为70 mmol?L^-1。结论 分离鉴定的两株优势细菌XB和XNQ分别为不动杆菌属的A. guillouiae和A. nosocomialis，均为革兰氏阴性菌，为砷还原细菌，对As（Ⅲ）和As（Ⅴ）的耐受性相同，对As（Ⅴ）的耐受性略高于As（Ⅲ）。     

基于16S rDNA序列分析研究根腐病三七根内可培养细菌的多样性

目的 分析根腐病三七根内可培养细菌的多样性。方法 用牛肉膏蛋白胨培养基分离根腐病三七根内的细菌,经细菌通用引物27F/1492R扩增16S rDNA后,分别用Rsa I和Hin6 I限制性内切酶对扩增产物进行酶切,结合限制性片段长度多态性（RFLP）分析方法和DNA测序技术,对分离自根腐病三七根内的细菌进行初步鉴定。结果 根腐病三七根内的细菌分属于8个类群,依占总菌数的比例分别是芽孢杆菌属Bacillus 22.47%、无色杆菌属Achromobacter 5.62%、寡养单胞菌属Stenotrophomonas 5.62%、类芽孢杆菌属Paenibacillus 4.49%、鞘氨醇杆菌属Sphingobacterium 1.12%、苍白杆菌属Ochrobactrum 1.12%、不动杆菌属Acinetobacter 1.12%及肠杆菌科的一些属58.43%。结论 泛菌属和芽孢杆菌属是根腐病三七根中的两大优势细菌类群。     

牛黄甘油搽剂质量标准研究

目的:建立牛黄甘油搽剂的质量标准。方法:采用紫外分光光度法测定本制剂人工牛黄中胆红素含量,对制剂中人工牛黄成分胆酸、猪去氧胆酸、牛胆粉进行了薄层鉴别。结果:胆红素在2.01～6.43μg·mL^-1范围内线性良好,Y=0.1162X-0.0016(r=0.9999)。平均回收率为99.77%,RSD=1.36%(n=6);薄层色谱鉴别斑点清晰,无干扰,易分辨。结论:该法简便、快速、准确、重复性好,可用于牛黄甘油搽剂的质量控制。     

牛黄清胃丸的主要药效学研究

目的：观察牛黄清胃丸对动物胃肠功能的影响,验证其临床清胃解毒,通便止痛的功效,为临床应用提供指导。方法：牛黄清胃丸小鼠(0.83,1.67,3.33 g·kg^-1)和大鼠(0.59,1.18,2.36 g·kg^-1)灌服(ig)给药2次,通过小鼠胃排空试验,大鼠胃液分析, 观察其对胃功能的影响；采用小鼠炭末排出全胃肠推进运动试验,记录炭末排出时间和排便频数,观察其对肠道功能的影响；用醋酸扭体法,观察其镇痛作用。结果：牛黄清胃丸能降低大鼠总胃蛋白酶活性和胃蛋白酶排出量(P<0.01,P<0.05),并呈量效关系,中、高剂量能减少大鼠胃液分泌量(P<0.01,P<0.05),高剂量能降低胃酸分泌总量(P<0.01),而对胃液酸度及正常小鼠胃排空无明显影响；牛黄清胃丸能缩短小鼠炭末排出时间,增加排便频数(P<0.01,P<0.05)；高剂量能减少醋酸所致的扭体次数,疼痛抑制率达40.0%。结论：牛黄清胃丸能促进全胃肠蠕动,降低胃酸分泌和胃蛋白酶活性,并有一定程度的通便和镇痛作用,与临床治疗胃热证相符。     

药用植物内生菌对乌苏酸的微生物转化筛选

 目的 从药用植物蛇足石杉分离纯化内生菌,并筛选可以转化乌苏酸的菌株,以期探究利用药用植物内生菌对乌苏酸进行结构修饰和改造的可行性。方法 通过组织块法分离内生菌;用薄层色谱检测转化反应的发生;用CTAB法提取转化菌株的基因组DNA,PCR技术对其ITS rDNA进行扩增,再经Blast比对鉴定菌株。结果 从药用植物蛇足石杉的茎和叶中分离得到内生菌52株,用30株对乌苏酸进行转化筛选。有4株内生菌具有转化乌苏酸的能力,经表观形态及分子生物学的方法鉴定转化菌株,分别是Pestalotiopsis microspora,Colletotrichum gloeosporioides,Fusarium chlamydosporum,Arthrinium. sp。结论 从转化产物的结构可以得出结论,利用药用植物内生菌对天然活性成分乌苏酸进行微生物转化,可以丰富乌苏酸的结构类型,为获得活性更好的衍生物提供技术和方法基础。     

牛黄蛇胆川贝液的鉴别及总胆酸含量测定研究

 目的:为控制牛黄蛇胆川贝液的质量,建立了人工牛黄、蛇胆汁及薄荷脑的鉴别及总胆酸含量测定方法?方法:鉴别采用TLC方法,总胆酸的含量测定采用紫外分光光度法?结果:胆酸浓度在0.004～0.02mg·ml^-1之间线性关系良好,相关系数r=0.9996,回收率为98.95%,RSDM=1.34%?结论:本法简便、准确、灵敏,重现性好,可用于牛黄蛇胆川贝液的质量控制?由本法测定结果表明,6批样品的总胆酸含量差异明显?     

体外培育牛黄对人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠病证结合模型的效用特点

目的 研究药物—体外培育牛黄对人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证动物模型的药理作用特点。方法 按体质量等级将48只Balb/c小鼠随机分为6组,分别为空白组,人冠状病毒229E感染组,寒湿组,人冠状病毒肺炎疫毒袭肺复合模型组,体外培育牛黄高、低剂量组,每组8只。采用寒湿环境诱导+人冠状病毒229E感染形成复合动物病证结合模型,在感染当天给予体外培育牛黄（0.128,0.064 g?kg^-1）,灌胃给药,连续3 d,观察小鼠一般状态,小鼠肺指数和肺指数抑制率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测小鼠肺组织病毒载量;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测小鼠血清胃动素（MTL）,胃泌素（GAS）含量,以及小鼠肺组织细胞因子白细胞介素（IL）-10,IL-6,肿瘤坏死因子（TNF）-α及γ-干扰素（IFN-γ）含量;采用流式细胞术检测小鼠血中CD4⁺ T淋巴细胞,CD8⁺ T淋巴细胞及B淋巴细胞。结果 体外培育牛黄高、低剂量组可明显改善模型小鼠的一般状态,与空白组比较,模型组小鼠肺指数显著升高（P<0.01）,小鼠肺组织核酸表达显著升高（P<0.01）,小鼠血清中MTL含量显著增高,GAS含量明显降低（P<0.05,P<0.01）,肺部组织细胞免疫因子TNF-α,IL-10和IL-6均显著增高（P<0.01）,小鼠外周血淋巴细胞CD4⁺ T细胞,CD8⁺ T细胞及B细胞均显著降低（P<0.01）;与模型组比较,体外培育牛黄高、低剂量组小鼠肺指数均显著降低（P<0.01）,小鼠肺组织核酸表达显著降低（P<0.01）,MTL含量显著降低（P<0.01）,小鼠肺组织中IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ含量均显著降低（P<0.01）,体外培育牛黄高剂量组可显著升高CD4⁺ T细胞（P<0.05）,体外培育牛黄可一定程度减轻模型小鼠肺组织炎性渗出,肺间质水肿及瘀血等病理表现。结论 体外培育牛黄对人冠状病毒感染致疫毒袭肺证小鼠复合模型的药理作用有明显的改善效用,可显著改善小鼠行为及排泄物状态、降低模型小鼠肺指数、提高肺指数抑制率、降低小鼠肺组织核酸表达、减轻肺组织病理损伤、调节免疫机能和抑制炎性因子释放等作用环节发挥作用,为临床用药提供依据。     

筛选和选育3-苯基缩水甘油酸己酯拆分菌株

 目的 筛选和选育拆分3-苯基缩水甘油酸己酯生产（2R,3S）-3-苯基缩水甘油酸己酯的菌株。方法 菌株生理生化鉴定,用紫外线和亚硝基胍诱变。结果 筛选得到类产碱假单胞菌,诱变的一株正突变株对映体过量值达100%,产率达82%的菌株。 结论 类产碱假单胞菌高效拆分3-苯基缩水甘油酸为ABT-770中间体的生产提供了一条新途径。     

6种胆酸类成分的HPLC-ELSD测定法及在两种牛黄中的含量比较

 目的 建立HPLC-ELSD同时测定6种胆酸类成分的分析方法,并比较两种牛黄中胆酸类成分的含量。方法 采用HPLC-ELSD法,以甲醇和0.1%的醋酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,漂移管温度85 ℃,气体流速2.0 L·min-1。结果 石胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸、胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸线性范围分别为6.05~96.65,5.37~85.85,4.69~75,6.77~108.35,5.32~85,5.42~86.65 mg·L-1;检测限分别为0.75,0.74,0.65,0.63,0.63,1.05 ng·mL-1;加标回收率分别为99.43%,101.2%,100.4%,102.0%,101.7%,100.0%。结论 本法操作简便,结果准确,重现性好,可用于牛黄及其各种制剂中胆酸类成分的质量控制。     

基于~1H-NMR代谢组学牛黄解毒片中人工牛黄、石膏、冰片对雄黄配伍减毒作用的研究

目的利用~1H-NMR为基础的代谢组学研究牛黄解毒片中人工牛黄、石膏、冰片3味中药对雄黄的配伍减毒作用。方法 42只大鼠随机分成6组:A组(对照组)、B组(雄黄组)、C组(牛黄解毒片组)、D组(牛黄解毒片去人工牛黄组)、E组(牛黄解毒片去石膏组)、F组(牛黄解毒片去冰片组)。对各组大鼠尿液及血清样品~1H-NMR谱图进行模式识别分析。结果雄黄组大鼠样品代谢轮廓和对照组差异明显,其他各组大鼠代谢轮廓同对照组相似,向对照组回归。结论牛黄解毒片中人工牛黄、石膏、冰片3味中药对雄黄配伍减毒作用不明显。     

基于对照制剂的牛黄清胃丸全处方鉴别研究和等级初评价

目的对牛黄清胃丸进行全处方鉴别和等级初评价。方法对现行标准规定的显微特征进行总结,新建了番泻叶、石膏的显微鉴别方法和人工牛黄、大黄、冰片的薄层鉴别方法,改进了薄荷的显微鉴别方法,实现了17个药味的全处方鉴别。研制牛黄清胃丸对照制剂,将其作为随行对照应用于样品的全处方鉴别,对制剂的质量等级进行初评价。结果 18个厂家的48批样品的等级初评价结果为10批优质,37批合格,1批不合格。结论所建方法准确、简便、客观,可更加全面地控制牛黄清胃丸的质量,并为进一步建立药品等级标准提供了研究思路和实验基础。     

白术内生细菌AM14的分离鉴定及其对宿主根腐病的防效研究

目的筛选得到能够防治白术Atractylodesmacrocephala根腐病的内生细菌。方法采用传统分离法从白术健康组织中分离内生细菌,以白术根腐病菌尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum,茄病镰刀菌F.solani和半裸镰刀菌F.incarnatum为指示菌,采用平板划线法和滤纸片法筛选拮抗细菌;制备拮抗菌菌悬液,采用灌根法进行盆栽白术根腐病防效试验;通过细菌形态特征、生理生化检测及16SrRNA技术对拮抗细菌进行菌种鉴定。结果从白术组织中共分离得到246株内生细菌,平板对峙筛选得到抗根腐内生细菌18株,其中AM14对3种病原菌生长均具有显著抑制作用(P<0.05),平均抑菌率达80.68%;盆栽试验进一步表明AM14对白术根腐病具有较好的防治效果,防治效果达70.49%;经鉴定AM14为芽孢杆菌属细菌Bacillus sp.。结论内生细菌AM14具有良好的白术根腐病生防潜力。     

《圣济总录·诸风门》神志病证病机及用药特点分析

目的:探析《圣济总录·诸风门》神志病病机及用药规律。方法:以诸风门记载医论为理论基础,分析神志病的病因病机;借助中医传承辅助系统软件(V2.5)中的方剂分析模块,总结神志病用药规律。结果:药物分类使用频次排在前3位的为补虚药、安神药、解表药,高频药物排名前11位的有人参、炙甘草、茯苓、防风、远志、朱砂、桂枝、牛黄、茯神、麝香、冰片,关联规则分析得到常用配伍有人参配伍茯神、茯苓、远志、炙甘草,朱砂配伍麝香、冰片、牛黄。结论:"五脏虚损,风邪乘之"是诸风门神志病证的核心病机。安精神,定魂魄,首选人参;补五脏,安神益智,人参配炙甘草、远志、茯苓;补肝气,助升发,桂枝配干姜;散风邪,疏肝气,佐以防风;窍闭神昏,开窍醒神,朱砂配麝香、冰片、牛黄。     

抗草甘膦半夏的获得及其草甘膦筛选体系的建立

目的 将抗草甘膦突变基因(aroA-M12)转入半夏,获得草甘膦抗性植株.方法 用携带植物表达载体pASM12的根癌农杆菌LBA4404对半夏进行叶盘法转化;在选择培养基中加入10 mg/L草甘膦进行筛选,获得草甘膦抗性的再生植株;对再生植株进行PCR检测和草甘膦抗性实验.结果 PCR检测表明幼叶的转化频率达23%,叶柄的转化频率达33%,对PCR阳性植株进行草甘膦抗性实验,多数植株在不同程度上表现出对草甘膦的抗性.结论 本实验建立了半夏的遗传转化方法及草甘膦筛选的转化体系.为培育抗除草剂的半夏新品种及草甘膦筛选体系在半夏基因工程中的应用奠定了基础.     

川麦冬内生真菌分离和鉴定及抑菌活性初步研究

目的深入研究川麦冬内生真菌分布的多样性和特异性,并考察其抑菌活性。方法分别对野生川麦冬和大田栽培川麦冬的根部和叶部利用组织块法分别进行分离纯化,利用形态学和ITS序列聚类分析等分子生物学方法对所得内生真菌进行鉴定,利用菌饼法对其抑菌活性进行初步研究。结果从川麦冬中共分离得到27株内生真菌,其中野生麦冬内生真菌(22株)明显较大田栽培麦冬内生真菌(5株)丰富,根部内生真菌(17株)明显较叶部内生真菌(10株)丰富。此外镰刀菌属和曲霉菌属为麦冬优势菌属,且镰刀菌属有根部专一定植特性,曲霉菌属却广泛分布于根部和叶部。同时,40%的麦冬内生真菌对白色念珠菌具有抑制活性,对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和粪肠球菌抑制菌株较少。结论川麦冬具有丰富的内生真菌多样性,并且其内生真菌分布具有明显的环境和部位特异性。所分离的内生真菌具有一定的抑菌活性,其中H5、031p和H8 3株菌表现出较强抑菌活性,值得进一步研究。     

体外培育牛黄与天然牛黄指纹图谱的比较研究

目的：研究、比较体外培育牛黄与天然牛黄的指纹图谱。方法：利用TOFMS、HPIEJMS技术研究、比较体外培育牛黄与天然牛黄中肽类、胆汁酸类和胆红素类3类成分的指纹图谱。结果：体外培育牛黄与天然牛黄3类成分的指纹基本一致，但各成分间的相对含量有差异。结论：10批体外培育牛黄的指纹图谱有较好的一致性，说明体外培育牛黄的质量稳定。4批天然牛黄的指纹图谱，尤其是胆汁酸类成分的指纹图谱差异明显，说明天然牛黄由于来源不同，导致质量不够稳定.     

千金子制霜前后提取物对大鼠肠道菌群的影响

目的研究千金子制霜前后提取物对正常大鼠肠道菌群的影响,为进一步阐明千金子制霜减毒机制提供参考。方法大鼠ig高、中、低剂量的千金子生品和霜品提取物,采用平板菌落计数法考察千金子制霜前后大鼠粪便中4类代表性肠道菌群双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌、肠球菌的数量变化。结果平板菌落计数实验结果表明,ig千金子生品与霜品提取物后大鼠出现菌群失调现象,且千金子霜品较生品引起的菌群紊乱程度低,在低剂量给药时可使条件致病菌肠球菌和大肠杆菌的数量减少。结论千金子制霜前后提取物均会影响肠道菌群的生物多样性,影响肠道菌群平衡,且千金子制霜后对4类肠道菌群的作用减弱,引起肠道菌群紊乱程度减小,这与千金子霜品泻下作用缓和的研究结果相一致,表明从肠道微生态角度考察千金子制霜前后对肠道菌群的干预作用,可揭示制霜与肠道菌群数量变化可能存在相关性。     

杜仲叶和果实中内生真菌的分离及抑菌活性

目的从杜仲Eucommia ulmoides叶和果实中分离具有抑菌作用的内生真菌。方法采用平板培养法从杜仲叶片和果实中分离内生真菌,通过对峙法和生长速率法考察这些内生真菌的抑菌活性,并通过HPLC法考察其具有代谢产生杜仲有效活性成分的能力。对具有良好抑菌效果和能够代谢杜仲活性成分的内生真菌进行ITS序列测定,鉴定其归属。结果从健康叶片和果实中分离到52株内生真菌,其中2个菌株的提取液中含有绿原酸,11个菌株至少对4种病原菌具有抑制作用,其中29号菌株(链格孢属Alternaria sp.)对芽孢杆菌Fusarium graminearum的抑制效果最好,其抑制率高达82.6%。通过与Gen Bank数据比对,这些内生真菌分别属于链格孢属Alternaria、黑孢属Niqrospora和座囊菌纲(Dothideomycetes)。结论从杜仲叶和果实中分离到11株具有抑菌作用的内生真菌,这些具有抑菌作用的内生真菌可用于生物制药和农业产业。     

一株冬虫夏草来源真菌的鉴定及抑菌活性检测

目的:对分离自青海省果洛州冬虫夏草子座内的一株真菌(Cs-ZZ23)进行鉴定,并对其抑菌活性作初步探究。方法:利用形态学和多基因系统分析相结合的方法进行鉴定,同时采用对峙法和改进的菌块法测定了该菌株对6株供试菌的抑制作用。结果:形态特征表明,该菌株与被孢霉属(Mortierella sp.)中的高山被孢霉(Mortierella alpina)的特征一致,多基因序列分析显示本菌株与多个高山被孢霉菌株同源性在99%,因此确定该菌株为高山被孢霉,而且对大肠埃希菌(Escherichia coli),枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)有抑制作用。结论:菌株Cs-ZZ23为高山被孢霉,其次级代谢产物具有重要研究价值。