丝蛋白应用于牙周组织工程的可行性

背景：丝蛋白是有利于表皮细胞、成纤维细胞、成骨细胞、血管内皮细胞、胶质细胞黏附和生长的一种新型生物材料。目的：评估丝蛋白作为支架材料应用于牙周组织工程的可行性。方法：采用组织块法培养人牙周膜细胞,将第5代细胞悬液以2×107L-1的浓度接种到丝蛋白支架材料上复合培养,并以1%,10%,50%,100%的丝蛋白支架浸提液培养,观察人牙周膜细胞在丝蛋白上及在丝蛋白浸提液中生长状况,用MTT法测定浸提液培养人牙周膜细胞的活力。结果与结论：扫描电镜可见人牙周膜细胞在丝蛋白支架上伸展充分,生长旺盛,不同浓度丝蛋白支架浸提液培养对人牙周膜细胞的增殖与碱性磷酸酶活性均无影响。说明丝蛋白材料具有良好的生物相容性、独特的力学性能,可作为人牙周膜细胞黏附生长的理想支架材料较好地应用于牙周组织工程中。     

丝蛋白应用于牙周组织工程的可行性

背景:丝蛋白是有利于表皮细胞、成纤维细胞、成骨细胞、血管内皮细胞、胶质细胞黏附和生长的一种新型生物材料。目的:评估丝蛋白作为支架材料应用于牙周组织工程的可行性。方法:采用组织块法培养人牙周膜细胞,将第5代细胞悬液以2×107L-1的浓度接种到丝蛋白支架材料上复合培养,并以1%,10%,50%,100%的丝蛋白支架浸提液培养,观察人牙周膜细胞在丝蛋白上及在丝蛋白浸提液中生长状况,用MTT法测定浸提液培养人牙周膜细胞的活力。结果与结论:扫描电镜可见人牙周膜细胞在丝蛋白支架上伸展充分,生长旺盛,不同浓度丝蛋白支架浸提液培养对人牙周膜细胞的增殖与碱性磷酸酶活性均无影响。说明丝蛋白材料具有良好的生物相容性、独特的力学性能,可作为人牙周膜细胞黏附生长的理想支架材料较好地应用于牙周组织工程中。     

聚碳酸亚丙酯/壳聚糖纳米纤维复合三维多孔支架的构建与性能

背景:聚碳酸亚丙酯(PPC)具有良好的力学性能和生物相容性,但是也存在合成高分子的共性不足即缺乏生物活性.壳聚糖纳米纤维具有优异的生物活性,但力学性能较差,很难保持稳定的高强度三维结构.目的:将壳聚糖纳米纤维与聚碳酸亚丙酯复合,制备具有优异生物活性和良好力学性能的三维多孔组织工程支架.方法:用溶液浇铸/粒子沥滤法制备PPC多孔支架,再用相分离法原位复合三维壳聚糖纳米纤维制备聚碳酸亚丙酯,壳聚糖纳米纤维复合三维多孔支架(PPC/CSNF).用扫描电子显微镜观察PPC及PPC,CSNF多孔支架微观形态,并测定其压缩模量、孔隙率.用扫描电子显微镜观察PPC/CSNF多孔支架在新西兰大白兔大腿皮下埋植1,2个月后的细胞生长情况.结果:PPC多孔支架孔径分布为200-500 μm且孔连通性好,PPC/CSNF多孔支架中的壳聚糖纳米纤维分布均匀其直径在50～500 nm之间;各种质量浓度的支架孔隙率均为90%以上;各种支架的压缩模量随着PPC浓度的增加而增加,最高可达约15 MPa;体内埋植的实验结果表明PPC/CSNF多孔支架具有良好的生物活性,可促进骨髓基质干细胞向软骨细胞分化.结果提示溶液浇铸/粒子沥滤法与低温相分离法相结合成功制备了力学性能与生物活性优异的PPC/CSNF多孔支架.该支架可促进新西兰大白兔的骨髓基质干细胞向软骨细胞分化.     

醛基化海藻多糖复合材料作为人工肝载体的可行性

背景：三维肝细胞体外培养中肝细胞可在支架孔隙中良好生长,但酶消化脱细胞过程严重影响了细胞获得率和活性。目的：制备大孔三维细胞支架N-聚异丙基丙烯酰胺-醛基化海藻多糖,探索其作为人工肝生物反应器细胞载体的可行性。方法：以海藻酸钠为致孔剂合成大孔N-聚异丙基丙烯酰胺,再交联醛基化海藻多糖,制备出大孔三维细胞支架N-聚异丙基丙烯酰胺-醛基化海藻多糖。测定其孔径及孔隙率。①细胞毒性实验：MTT法检测在新鲜细胞培养液、高密度聚乙烯浸提液、高密度聚氯乙烯浸提液及N-聚异丙基丙烯酰胺-醛基化海藻多糖浸提液中培养小鼠成纤维细胞的肖值。②非酶脱细胞性能实验：将第3代小鼠成纤维细胞接种到盛有N-聚异丙基丙烯酰胺一醛基化海藻多糖支架的6孔板中,实验组通过降温脱附回收细胞,对照组以胰蛋白酶消化回收细胞。结果与结论：大孔三维细胞支架N-聚异丙基丙烯酰胺-醛基化海藻多糖的孔径为（180．23±62．30）Um,孔隙率为（89．67±2．401％。细胞毒性实验证明N-聚异丙基丙烯酰胺-醛基化海藻多糖支架无细胞毒性;培养第15天实验组非酶温控脱细胞与对照组酶消化脱细胞相比细胞获得率增加26．24％。表明大孔三维细胞支架N-聚异丙基丙烯酰胺．醛基化海藻多糖具有适宜细胞生长的大孔结构;温度调控脱细胞性能克服了传统酶消化脱细胞对细胞的损伤,可提高细胞培养的数量和质量。     

松质骨基质材料应用于牙周组织工程的可行性

背景：松质骨基质材料具有骨诱导性和骨传导性双重特性,已被成功应用于骨再生及骨组织工程研究。目的：分析松质骨基质材料的细胞相容性与毒性,探讨其应用于牙周组织工程的可行性。方法：采用改良组织块法体外培养人牙周膜细胞,将其接种于松质骨基质三维支架上复合培养,采用细胞计数方法和扫描电镜观察人牙周膜细胞在松质骨基质支架上的附着、生长情况,并通过MTT测试法和碱性磷酸酶活性检测法观察松质骨基质浸提液对人牙周膜细胞增殖及功能表达的影响。结果与结论：扫描电镜可见松质骨基质具有良好的多孔网状结构,人牙周膜细胞在松质骨基质上贴附紧密,生长旺盛,伸展充分,而人牙周膜细胞在不同浓度材料浸提液中的生长、增殖及碱性磷酸酶活性与阴性对照组相比差异无显著性意义。表明松质骨基质具有良好的三维空间结构和细胞相容性,且无细胞毒性,有望应用于牙周组织再生及牙周组织工程研究。     

珊瑚转化羟基磷灰石应用于牙周组织工程的细胞相容性和细胞毒性

背景:经处理后的珊瑚转化羟基磷灰石具有良好的生物相容性和可降解性,其三维相通的孔隙结构不仅可为种子细胞的黏附、增殖提供足够的内部空间和表面积,而且有利于营养成分的渗透和血管化形成。目的:对珊瑚转化羟基磷灰石进行细胞相容性和细胞毒性的研究,以初步探讨其应用于牙周组织工程的可行性。方法:将体外培养的人牙周膜细胞接种到珊瑚转化羟基磷灰石支架上体外三维复合培养,通过细胞计数方法和扫描电镜观察人牙周膜细胞在珊瑚转化羟基磷灰石支架上的附着、生长情况,并设立阴性对照组和阳性对照组,采用MTT测试法和碱性磷酸酶活性检测法评估稀释浓度分别为100%,50%,10%,1%的珊瑚转化羟基磷灰石浸提液对人牙周膜细胞增殖及功能表达的影响。结果与结论:珊瑚转化羟基磷灰石具有良好的多孔网状结构,人牙周膜细胞在珊瑚转化羟基磷灰石支架上生长旺盛,伸展充分,而不同浓度的材料浸提液对人牙周膜细胞的生长、增殖及碱性磷酸酶活性的影响差异均无显著性意义。提示珊瑚转化羟基磷灰石具有良好的三维空间结构和细胞相容性,且无细胞毒性,有望用作牙周组织工程的支架材料。     

制备软骨组织工程支架的方法

背景：软骨组织工程支架作为软骨细胞外基质的替代物,其外形和孔结构对实现其作用和功能具有非常重要的意义。 目的：回顾目前若干种常用软骨组织工程中三维多孔支架的制备方法。 方法：由第一作者检索2000至2013年PubMed数据库,ELSEVIER SCIENCEDIRECT、万方数据库、中国知网数据库。英文检索词为＂Cartilage tissue engineering;scaffolds;fabrication＂,中文检索词为＂软骨组织工程;制备方法;支架材料;多孔支架＂。 结果与结论：制备软骨组织工程支架的方法有相分离/冷冻干燥法、水凝胶技术、快速成型技术、静电纺丝法、溶剂浇铸/粒子沥滤法及气体发泡法等。目前研究发现,支架中孔径的大小对组织的重建有着直接的影响,孔径为100-250 μm的孔有益于骨及软骨组织的再生。通过溶液浇铸/粒子沥滤法、气体发泡法所制备的支架孔径大小在这一范围内,因此比较适合用于骨、软骨组织工程支架的构建。研究人员通常将多种方法结合起来,以期能制备出生物和力学性能方面更加仿生的组织工程多孔支架。     

人骨髓细胞外基质的制备及其结构成分

背景：细胞外基质可以在体外模拟细胞微环境,使干细胞在体外大量增殖的同时具有良好的干细胞特性。目的：制备人骨髓细胞外基质并分析其结构成分。方法：取第4代人骨髓细胞培养14 d,在最后8 d换成膜诱导液,经脱细胞处理后制备人骨髓细胞外基质。倒置显微镜和扫描电镜观察人骨髓细胞外基质表面形态。免疫荧光染色观察脱细胞处理前后Ⅰ型胶原和二聚糖的变化。将人牙周膜干细胞接种于人骨髓细胞外基质、纤粘连蛋白包被的六孔板和普通培养板,比较不同基质对人牙周膜干细胞细胞形态和黏附的影响。 结果与结论：化学物理联合脱细胞处理可以获得结构完整的人骨髓细胞外基质膜片,Ⅰ型胶原和二聚糖在去细胞处理前后结构和含量无明显差异。接种在细胞外基质上生长的人牙周膜干细胞,按照细胞外基质的轨道有序生长,不同于原有细胞形态;相同时间人牙周膜干细胞在细胞外基质上贴壁数量较多。表明有效的脱细胞处理可以得到结构完整的细胞外基质网状支架,相关蛋白成分未因脱细胞而明显丧失,细胞外基质影响接种细胞的形态、促进细胞黏附。提示可利用细胞外基质模型模拟体内干细胞生长微环境,在体外获得大量高质量的成体干细胞。     

软骨组织工程常用支架制备技术

随着软骨组织工程的发展,如何获得理想的支架已成为这一课题的核心热点和难点.软骨组织工程式支架要求具有特定的物理、生化特性,例如极强的生物相容性、合适的生物降解性、可控的孔径大小、足够的孔隙率队等.而这些性能的获得主要与两方面的因素有关,一是支架材料本身的影响,二是支架制备技术的选择.本综述对三维多孔支架的制备技术进行了较为全在的回顾.主要介绍了溶剂浇铸/粒子沥滤技术、相分离/冻干技术、水凝胶技术、气体发泡技术、静电纺丝技术、快速成型法.通过比较不同支架制备技术对支架结构和性质的影响,总结分析了各种技术的优缺点,同时对软骨组织工程中支架制备技术的发展趋势进行了展望.     

羟基丁酸-羟基辛酸聚合物-胶原骨软骨支架的制备及应用

背景：关节软骨修复的关键是软骨和软骨下骨的整体修复,然而目前尚缺乏理想的一体化支架。目的：制备聚羟基丁酸-羟基辛酸-胶原一体化支架,并分析其基本生物学特性。方法：以聚羟基丁酸-羟基辛酸、Ⅰ型胶原为材料,通过溶剂浇铸-颗粒沥滤法制备聚羟基丁酸-羟基辛酸-胶原一体化支架,观察支架超微结构,支架孔径及孔与孔的连通情况;液体置换法测定支架孔隙率。将乳兔骨髓间充质干细胞接种于聚羟基丁酸-羟基辛酸-胶原一体化支架上,扫描电镜观察细胞在支架上的黏附状态,MTT法测定细胞在支架上的生长曲线。结果与结论：一体化支架呈疏松多孔结构,软骨层孔径80-100μm,骨层孔径200-220μm,孔隙率（80.0±2.3）%。骨髓间充质干细胞在支架上黏附状态良好,增殖迅速。说明聚羟基丁酸-羟基辛酸-胶原骨软骨一体化支架具备适宜的孔隙结构和良好的生物亲和性。