2006年全国淋巴细胞免疫表型分析室间质量评价的分析

目的分析总结室间质量评价（简称质评）结果，发现和改进实验室检测过程中存在的问题，以提高实验室的检测质量和优化质控程序。方法选择、分装质评物，用单因素方差分析评价质评物中CD3^-、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋和CD3^-CDl6^＋CD56^＋淋巴细胞的均匀性；设计质评回报表，将其与质评物一同寄到参加质评单位；分组统计回报表中的信息，计算及格率。结果质评物中各项目检测结果瓶问差异无统计学意义（P〉0．05）；回报表信息统计显示，应用室内质控物的参加单位仅为18％，检测中使用CD45-SSC设定淋巴细胞群方案的实验室占29％，进行绝对计数的实验室占14％。检测结果统计显示，各组间CD3^＋细胞百分比变化在1．06％-4．65％，CD^3-CDl6^＋CD56^＋细胞百分比差异较大，为0．99％-12．66％；4个项目的分组质评结果间差异无统计学意义（P〉0．05），及格率在86．0％一100．0％之间。结论本次质评活动所用质评物是均匀的，符合中国合格评定国家认可委员会要求，参评实验室组间检测结果的一致性涉及室内质量管理的完善程度、操作的规范性、质控物存放时间、标记和检测过程中的技术熟练程度等因素。做好室间质评是保证和了解实验室检测能力和水平的有效方法，需要质评检测和被检双方不懈努力才能做好。     

淋巴细胞免疫表型质控品的初步研究

目的研究液氮冻存对外周血单个核细胞（PBMCs）CD4^＋T和CD8^＋T百分比的影响，探索冻存PBMCs作为淋巴细胞免疫表型质控品的可行性。方法收集健康成人抗凝全血，用淋巴细胞分离液分离PBMCs后液氮冻存。定期复苏PBMCs检测CD4^＋T和CD8^＋T百分比，计算细胞存活率、回收率。并分析不同厂家试剂、复苏方法、固定时间等因素对CD4^＋T和CD8^＋T百分比的影响。结果液氮冻存0～12个月、12～24个月的PBMCs CD4^＋T和CD8^＋T百分比均保持在稳定水平。冻存12个月PBMCs CD4^＋T和CD8^＋T百分比的平均变异系数（CV）分别为14．5％和9．8％，细胞存活率为85．4％～94．3％，回收率33．3％～97．8％；冻存12-24个月PBMCs的CD4^＋T和CD8^＋T百分比的平均CV值分别为7．1％和6．5％，细胞存活率为88．3％～98．5％，回收率52．3％～101％。不同复苏方法和检测试剂的结果相对稳定，CD4^＋T和CD8^＋T百分比的平均CV值分别为8．1％和6．4％。复苏后的PBMCs经多聚甲醛固定可在48h内检测。结论液氮冻存的PBMCs有望作为淋巴细胞免疫表型测定的质控品。     

抗凝蛋白活性检测质控物的研制及初步评价

目的 利用新鲜冰冻血浆制备抗凝血酶、蛋白C、蛋白S活性检测质控物,评价其均匀性和稳定性,并试用于室内质控.方法 依据ISO Guide35及CNAS-GL03的要求,对2个批次自制质控物的均匀性和稳定性进行评价.将质控物试应用于室内质控,同时检测商品质控物作为对照.结果 均匀性评价结果显示质控物样品间均匀性良好,差异无统计学意义(P＞0.05),AT、PC和PS的瓶间均匀性不确定度ubb的分布范围分别为0.30％～2.39％,0.16％～2.45％和0.19％～3.62％;复融后在室温和冷藏条件下3种抗凝蛋白活性稳定时间分别为24 h和24 h、8h和12h、3h和12h.第1批次质控物长期稳定性评价结果显示正常和异常浓度水平的AT和PC质控物的稳定时间为24周,正常浓度的PS质控物稳定时间为19周,异常低浓度的PS质控物稳定时间为12周;3个项目的长期稳定性不确定度ults范围分别为2.45％～3.68％、1.32％～3.19％和3.97％～10.17％.室内质控试应用结果显示3个项目第1批次各批号质控物检测结果的CV均小于厂商规定的批间不精密度,与商品质控物具有可比性.结论 质控物的均匀性、稳定性符合相关指南要求,可应用于室内质控.     

不同试剂检测北京地区健康献血者淋巴细胞CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋百分比参考值调查

目的探讨北京地区健康献血者CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋百分比的参考值范围，并对国产和进口的淋巴细胞免疫表型双染试剂进行比较。方法收集北京地区500例健康献血者全血标本，分别使用进1：3和国产的CD3FITC／CD4PE和CD3FITC／CD8PE双染试剂，应用同一台流式细胞仪进行检测，并对不同性别、民族和年龄段的结果以及不同试剂的结果进行比较。结果进口试剂检测的北京地区健康献血者CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋百分比以及CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋的范围（95％可信限）分别为22．92～49．96、14．86～41．70、0．37～2．47，不同年龄段（18-29、30～39与40岁以上组）各项指标均值的差异有统计学意义（P〈0.05），而不同性别的比较仅CD3^＋CD4^＋（％）的差异有统计学意义（P〈0.01），比较汉族（n=484）与少数民族（n=16）中各项指标的差异均无统计学意义（P〉0.05）。国产与进口试剂的检测结果显著相关，CD3^＋CD4^＋（％）、CD3^＋CD8^＋（％）以及CD3^＋CD4^＋／cD3^＋CD8^＋的r值分别为0．970、0．953、0．967。u检验结果显示CD3^＋CD4^＋（％）的差异无统计学意义（P〉0．05），而CD3^＋CD8^＋（％）、CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋的差异有统计学意义（P〈0．01）。结论初步建立北京地区健康献血者CD3^＋CD4^＋（％）、CD3^＋CD8^＋（％）的参考值，参考值受年龄、性别、民族、检测试剂和仪器等多种因素的影响。国产和进口淋巴细胞免疫表型双染试剂检测结果基本一致，相关性具有显著性。     

网织红细胞计数质控物的均匀性和稳定性评价

目的对制备的网织红细胞计数质控物进行均匀性和稳定性评价。方法依据ISO Guide 35《标准物质／标准样品的定值一通用原则和统计原理》对自制质控物的网织红细胞计数百分比进行均匀性、稳定性评价。随机抽取足够数量的样本,用单因素方差分析评价质控物的均匀性,用一元线性回归分析方法评价质控物的稳定性,并根据评价结果进行不确定度的计算。结果均匀性评价结果显示样品内和样品间的差异无统计学意义（P〉0．05）,两个批号的自制质控物均匀性的不确定度分别为0．372％、0．039％。稳定性数据的回归分析结果显示,质控物网织红细胞计数百分比随储存时间变化的线性趋势无统计学意义（P〉0．05）,两个批号质控物长期稳定性的不确定度分别为0．069％、0．031％。结论自制网织红细胞计数质控物的均匀性和稳定性符合要求。     

自制红细胞沉降率检测参考物质的评价与初步应用

目的对自制红细胞沉降率检测参考物质进行评价,并试用于室内质量控制。方法以新鲜动物血为原料,对红细胞进行洗涤和固定,与模拟血浆混合配制成6个批号(ESR01～ESR06)不同沉降率水平的参考物质。参照ISO Guide35和CNAS-GL03的要求,对自制参考物质和2个批号进口质控物(QC01～QC02)进行均匀性和稳定性评价,并选择3个批号的自制参考物质应用于不同检测系统的室内质量控制,整个过程同时检测进口质控物并进行比较。结果均匀性评价结果显示,各批号自制参考物质和进口质控物均匀性良好,瓶间差异无统计学意义(P0.05),沉降率相近的自制物质和进口质控物瓶间均匀性不确定度分别是0.2～1.0 mm/h和0.8～1.5 mm/h。参考物质检测后分别置于室温和冷藏条件,4周内多次重复检测的结果均无趋势性变化(P0.05),在室温放置时,沉降率随时间变化偏差均在评价标准允许范围内,但在冷藏条件放置时,ESR02、ESR03,ESR04和QC02批号物质沉降率变化的相对偏差分布范围均超出评价标准。自制物质在冷藏条件长期保存,在观察期25周内,自制参考物质和进口质控物检测结果无趋势性变化(P0.05),沉降率相近的自制和进口质控物长期稳定性不确定度分别是0.1～3.0 mm/h和1.0～2.9 mm/h,沉降率随时间变化的偏差均在评价标准允许范围内。室内质量控制应用结果显示,自制参考物质与沉降率相近的进口质控物检测结果的CV接近。结论自制血沉参考物质均匀性、稳定性良好,室内质量控制试应用效果良好。     

造血干细胞计数全血质控物的研制与评价

目的评价自制造血干细胞计数全血质控物的均匀性及稳定性。方法依据CNAS-GL03及ISO Guide 35的要求,对两个批号自制质控物的均匀性、稳定性进行评价,同时检测进口质控物作为对照。结果均匀性评价结果显示两批号自制质控物样品间差异均无统计学意义（P〉0.05）;稳定性评价结果显示20111101、2011111批号自制质控物随保存时间的延长均无线性趋势变化（P〉0.05）;各批号自制质控物及进口质控物长期稳定性的不确定度分别为0.023%、0.015%和0.012%。结论自制造血干细胞计数质控物的均匀性及稳定性良好。     

胃癌患者肿瘤组织和外周血中细胞毒性T细胞的相关性分析

目的研究胃癌患者肿瘤浸润淋巴细胞CD8^＋CD28^＋细胞及CD8^＋CD28^-细胞数量与外周血CD8^＋CD28^＋细胞及CD8^＋CD28^-细胞数量的相关性。方法采用流式细胞术对60例胃癌患者的肿瘤浸润淋巴细胞及外周血淋巴细胞的CD8^＋CD28^＋细胞及CD8^＋CD28^-细胞进行检测，采用直线相关分析两者的相关性。结果胃癌患者外周血淋巴细胞CD8^＋CD28^-、CD8^＋CD28^＋细胞分别为（26．13±8．17）％和（8．15±4．00）％；肿瘤组织中肿瘤浸润淋巴细胞CD8^＋CD28^-、CD8^＋CD28^＋细胞分别为（36．98±15．30）％、（6．02±4．37）％。两者之间具有正相关性（r分别为0．602、0．387，P〈0．01）。结论胃癌患者外周血CD8^＋CD28^-、CD8^＋CD28^＋细胞的检测对了解患者的免疫状况具有一定的价值。     

酶法测定镁离子的方法学研究

目的建立一个适合临床实验室作为常规应用的镁的酶法测定。方法对文献报告的四种镁的酶法测定的方法作了比较，选择HK—G6pDH法并对其作了某些改进，使其适合自动分析。结果本法的线性范围为0．05～3．40mmol／L：精密度：低值和高值标本的批内CV分别为2．23％和1．45％；总CV分别为3．34％和2．18％；准确度：低值质控品的测定偏差为-4．08％，中值质控品的测定偏差为1．00％和-1．05％。高值质控品的测定偏差为2．98％和0．00％；本法（y）与Xylidyl Blue法（x）比较，相关良好，回归方程y=0．9769x＋0．0066。γ^2=0．9886。结论本法的各项技术指标均较好，加之本法的特异性较好，体系温和．适合临床实验室作为常规应用。     

酶法测定镁离子的方法学研究

目的建立一个适合临床实验室作为常规应用的镁的酶法测定。方法对文献报告的四种镁的酶法测定的方法作了比较，选择HK—G6pDH法并对其作了某些改进，使其适合自动分析。结果本法的线性范围为0．05～3．40mmol／L：精密度：低值和高值标本的批内CV分别为2．23％和1．45％；总CV分别为3．34％和2．18％；准确度：低值质控品的测定偏差为-4．08％，中值质控品的测定偏差为1．00％和-1．05％。高值质控品的测定偏差为2．98％和0．00％；本法（y）与Xylidyl Blue法（x）比较，相关良好，回归方程y=0．9769x＋0．0066。γ^2=0．9886。结论本法的各项技术指标均较好，加之本法的特异性较好，体系温和．适合临床实验室作为常规应用。     

冷冻分离技术在肿瘤标志物质控品研制中的应用

目的采用冷冻分离技术进行肿瘤标志物室内质控品的制备,并对其性能进行评价。方法收集常规检测标本中无传染性的剩余血清,采用冷冻分离技术制备不同水平的甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、总前列腺特异性抗原(TPSA)质控品,并根据CNAS-GL03标准对自制质控品的稳定性和均匀性进行分析。结果稳定性分析结果表明,自制质控品的稳定时间可达12个月,各样品间差异无统计学意义(P>0.05);均匀性分析结果表明,自制质控品的样品间和样品内测定结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用冷冻分离技术所研制的肿瘤标志物质控品具有良好的均匀性及稳定性,在临床实验室可用于室内质控。     

血沉质评物的均匀性和稳定性评价

目的 对制备的血沉质评物进行均匀性和稳定性评价。方法 质评物制备完成后，依据《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》和ISOGuide35标准随机抽取足够的样本，采用单因子方差分析评价质评物的均匀性；用一元线性回归分析评价质评物的稳定性。结果 均匀性评价结果表明样品内和样品间差异无统计学意义（P〉0．05）；稳定性数据的回归分析结果显示，质评物血沉值随贮存时间变化的线性趋势无统计学意义（P〉0．05）。结论 制备的血沉质评物均匀性、稳定性较好，符合标准。     

沙眼衣原体聚合酶链反应测定质控物的构建及其应用研究

目的 研制能够模拟真实临床样本且无生物传染危险性的沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)PCR检测质摔物,并进行稳定性研究.方法 在充分查阅文献的基础上,明确国内外已有文献报道的CT:PCR检测的靶序列,选择最普遍应用的CT质粒序列,采用重叠(overlap)PCR、分子克隆等技术构建含有所选择的常用检测目的 CT质粒序列的重组真核表达载体,即pTARGETTM-CT 质粒.然后,将载体以脂质体转染的方式转染入宫颈上皮细胞(HTB-SiHa细胞)中,收集细胞,经含20%小牛血清的细胞培养液稀释,即成为能模拟CT检测临床样本的细胞质控物.最后观察得到的质控物对目前国内常用商品试剂盒的适用性及在4℃、37℃及室温条件下的稳定性.结果 成功构建了含CT质粒(178-610)、(1219-1993)、(2471-3260)、(5239-5864)、(6722-7499)等5个片段的重组真核表达载体,并转入HTB-SiHa细胞中,得到了可模拟临床样本的CT PCR检测的质控物.采用深圳匹基生物工程有限公司、中山大学达安基因股份有限公司商品CT PCR检测试剂盒对转染后样本进行检测,得到阳性结果;定量为3.21×108拷贝/ml;倍比稀释后较高浓度样本检测结果呈梯度下降、10倍稀释循环阈值相差约3.3;对不同浓度稀释后在4℃、37℃及室温条件下保存1个月的样本的检测结果进行随机区组的两因素方差分析后发现,在各温度下保存的样本经检测后的结果问差异无统计学意义,所构建的质控样本至少可以稳定保存1个月.结论 利用重叠PCR与双酶切的方法,建立了一种将多间隔片段连接并构建入同一载体的简便有效的方法.成功地得到了可模拟临床标本的CT PCR检测质控物.     

红细胞比容国家一级标准物质的研制李臣宾简

目的 研制红细胞比容国家一级标准物质,作为红细胞比容检测结果溯源的标准.方法 新鲜血经稳定化处理、调整浓度后分装成待评价的标准物质;参照ISO Guide 35（2006版）和《一级标准物质技术规范》的要求进行均匀性和稳定性评价,使用直接溯源至参考方法的标准仪器对标准物质进行定值;对标准物质的均匀性、稳定性和定值过程引入的不确定度进行评定,计算合成标准不确定度和扩展不确定度;将一级标准物质与二级标准物质的不确定度进行比较.结果 标准物质的均匀性评价方差分析结果显示P＞0.05,表明标准物质是均匀的;瓶间均匀性的标准不确定度ubb为0.22％.12周内稳定性评价趋势分析结果显示P＞0.05,表明该期限内标准物质是稳定的;长期稳定性的标准不确定度ults为0.27％.定值结果的标准不确定度uchar为0.59％;合成并扩展不确定度后,定值结果的表达式为（38.7±1.4）％.一级标准物质的相对不确定度（3.6％）小于国家二级标准物质（4.8％）.结论 标准物质的均匀性和稳定性良好,定值方法可靠.     

醇类消毒剂中乙醇含量标准物质研究

摘要 目的 研究醇类消毒剂中乙醇含量标准物质。方法 采用7家实验室合作气相色谱（GC）法,对制备的乙醇标准物质进行定值。对均匀性、稳定性及定值引入的不确定度进行评价。结果 所制备的标准物质的特性量值为（69.8±2.1）%。均有良好的均匀性和24个月内的稳定性。结论 本研究制备的醇类消毒剂中乙醇含量标准物质符合标准物质要求,可用于醇类消毒剂乙醇含量测定。     

结直肠癌Septin9基因甲基化检测质控品制备及其应用

目的制备可模拟临床标本的血浆Septin9基因甲基化(mSEPT9)质控品并用于室间质量评价。方法选择Septin9区域已发生/未发生甲基化的HeLa/Jurkat细胞进行培养,收集并抽提细胞基因组DNA,经mSEPT9试剂盒检测,依据检测Ct值用阴性血浆稀释分装成含有不同浓度的质控品,对质控品均匀性和稳定性进行评价后,将5个样品随机编号后发送至参评实验室,分析评价回报结果。结果抽提得到的细胞基因组DNA纯度和浓度均可满足使用需求,且可用作mSEPT9检测的质控品。均匀性和稳定性均符合中国合格评定国家认可委员会对能力验证样品要求。部分参评实验室出现假阳性和假阴性情况,仅有约55.6%实验室的检测结果(Ct值)呈良好线性相关。9家参评实验室中,7家实验室(77.8%)成绩优秀,1家实验室(11.1%)成绩合格,1家实验室(11.1%)成绩不合格。结论成功研制血浆mSEPT9检测的质控品并应用于室间质评,有利于评估并提升临床实验室检测能力。     

尿有形成分质控品的研制和观察

目的制备一种重复性好、稳定期长的尿有形成分质控品,有助于日常检验工作中对尿中有形成分进行质量控制。方法按美国临床实验室标准化协会（CLSI）GP16-A3文件要求收集不同肾病患者的尿液,固定后分装保存。使用具备流式细胞术、显微摄影法和染色技术原理的设备,观察红细胞（RBC）、白细胞（WBC）、上皮细胞、管型和细菌存在与否和形态保持情况;按CLSIEP25文件要求观察各类有形成分的稳定性;同时配制高、中、低3种不同浓度质控品进行精密度检测。结果有形成分质控品中所含RBC、WBC、上皮细胞、管型和细菌等有形成分的形态保持良好,易于辨认。重复性较好,RBC变异系数（CV）为4．4％-7．8％,WBC为4．3％～14．3％,上皮细胞为4．8％～14．4％,管型为16．9％～23．3％;稳定期可达130d。结论制备的尿有形成分质控品含有RBC、WBC、上皮细胞、管型和细菌等有形成分,且有较好的重复性和稳定性,适用于临床尿有形成分质控之用途。