基质血管成分细胞与脂肪来源干细胞在全厚皮片移植中的作用比较

目的观察研究自体基质血管成分细胞(stromal vascular fraction, SVF)与同种异体脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)在全厚皮片移植中的效果。方法取大鼠两侧腹股沟脂肪提取SVF及ADSCs,再取大鼠背部全厚皮片原位移植;于皮片和创面基底间分别添加SVF、ADSCs及PBS缓冲液,于3、7、14 d观察皮片大体成活、HE染色、Masson染色、CD31及VEGF免疫荧光等指标。结果 SVF组皮片成活率最佳,ADSCs组次之,且两组差异具有统计学意义(P0.05)。观察镜下SVF组皮片HE及Masson染色结构优于其余两组;术后7、14 d CD31及VEGF表达,SVF组较ADSCs组及PBS组更为明显。结论使用自体SVF或异体ADSCs于皮片下注射均能提高全厚皮片移植的成活率,但自体SVF较异体ADSCs的效果更好。     

bFGF对促进大鼠移植缺血皮瓣血管化的实验研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠移植皮瓣成活作用的影响.方法 Wistar大鼠48只,按月龄随机分为A、B、C、D四组,每组12只.制作移植皮瓣模型.A、C组的大鼠多次多点每点注射bFGF 60 U(0.015 ml);B、D组给予等量生理盐水作为对照.分别于5 d、14 d观察皮瓣的存活率,分别取相同部位皮瓣组织块行病理组织学检查,并采用计算机图像分析系统和免疫组化方法计算血管密度和血管内皮生长因子(VEGF)阳性血管数.结果 大鼠缺血皮瓣血管密度及VEGF阳性表达的血管数A组[(分别为(134.21±4.86)个/mm~2,(14.63±2.25)条]多于B组[分别为(118.48±2.31)个/mm~2,(7.45±1.43)条],C组[分别为(128.67±4.58)个/mm~2,(11.39±1.61)条]多于D组[分别为(115.32±2.18)个/mm~2,(6.96±1.35)条],差异均有统计学意义(P<0.05);A组和C组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 在不同月龄大鼠移植皮瓣内注射bFGF蛋白可促进皮瓣血管新生,改善移植皮瓣缺血状态,提高皮瓣成活率.     

pcDNA3.1(+)载体携带血管内皮生长因子治疗大鼠缺血皮瓣

目的 观察注射真核表达载体pcDNA3.1(+)携带血管内皮生长因子(VEGF)基因后对大鼠缺血皮瓣存活的影响.方法 构建重组质粒pcDNA3.1(+)-VEGF,将SD大鼠随机分成3组,每组10只.pcDNA3.1(+)-VEGF组:于背部皮肤皮下多点注射pcDNA3.1(+)-VEGF 30 μg/100μl;VEGF组:多点注射VEGF蛋白100 ng/100μl;生理盐水(NS)组:注射生理盐水100μl,注射2d后在其背部形成7 cm×3 cm的全厚随意型皮瓣,48 h后按原设计掀起皮瓣并原位缝合.术后10 d测量皮瓣的成活面积,计算成活面积百分比,并行免疫组织化学检测.结果 皮瓣成活面积百分比:pcDNA3.1(+)-VEGF组为(79.1±3.5)％,VEGF组为(62.2±2.7)％,NS组为(59.9±3.1)％,pcDNA3.1(+)-VEGF组皮瓣成活面积明显高于其他两组(P＜0.05).结论 皮下注射pcDNA3.1(+ )-VEGF可促进新生血管的形成,比单纯注射VEGF蛋白更能提高皮瓣的成活率.     

局部移植人脐带间充质干细胞治疗大鼠皮瓣缺血再灌注损伤

目的 探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUGMSCs)在受体内分化为血管内皮细胞、治疗皮瓣缺血再灌注损伤从而促进皮瓣成活的可能性.方法 体外增殖培养HUC-MSCs,并用流式细胞技术鉴定,以5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)标记HUC-MSCs后,移植于皮瓣缺血再灌注损伤的大鼠腹部皮瓣术区局部(治疗组),设PBS为对照组.术后每天观察皮瓣的颜色、皮纹、厚度、毛发生长、坏死范围及针刺出血情况等,并于术后7d处死大鼠,比较2组皮瓣的成活率,切取皮瓣组织行常规病理组织切片,分别进行免疫组织化学染色检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达,EdU染色检测供体细胞在受体皮瓣组织内的分布或分化.结果 术后7d治疗组大鼠皮瓣成活率为(97.58±3.41)％,对照组为(54.37±8.78)％,治疗组高于对照组(P＜0.05).治疗组大鼠VEGF的表达密度为138.27±8.67,明显高于对照组的56.17±14.13(P＜0.05).在成活皮瓣的部分小血管内皮可见EdU阳性细胞连续分布.结论 HUC-MSCs在体内可以分化为血管内皮细胞,直接参与生成新血管,建立新的微循环,并能增加皮瓣局部VEGF的表达,促进血管形成,修复缺血再灌注损伤的皮瓣,减轻皮瓣坏死,促进皮瓣成活.     

VEGF、bFGF低频超声透皮给药系统对猪超长筋膜皮瓣存活的影响

目的应用VEGF和bFGF,以透皮低频超声导入的无创给药方法,比较单一药物和联合用药对猪超长宽比例筋膜皮瓣成活率及其微循环的影响,为扩大超长宽比例筋膜皮瓣的临床应用奠定实验基础。方法选用10只猪为实验动物。在猪背部两侧设计3 cm×15 cm的筋膜皮瓣,分为空白超声对照组、超声导入VEGF组、超声导入bFGF组、注射VEGF+bFGF联用组、超声导入VEGF+bFGF联用组等5组。术后10 d,测量皮瓣成活面积,测定毛细血管密度以及表达指数,并进行定量分析。结果超声导入VEGF+bFGF联用组皮瓣成活率、毛细血管密度及表达指数等,均明显优于其他4组,差异有显著性(P0.01)。结论VEGF和bFGF经皮联合低频超声介导给药应用于猪超长宽比例筋膜皮瓣,可显著提高皮瓣的成活率。     

重组人生长激素对大鼠随意皮瓣成活的影响

目的探讨重组人生长激素(rhGH)对大鼠随意皮瓣成活的影响。方法将24只健康的Wistar大鼠随机分为两组,每组12只。在其背部制作随意皮瓣后,分别在皮瓣的皮下注射0.25ml(0.1IU/kg)的rhGH(实验组)和0.25ml的生理盐水(对照组),观察两组皮瓣的成活面积及成活率,并行免疫组化检查。结果实验组的皮瓣成活率及皮瓣的中段、远段的血管密度和VEGF的表达均较对照组高,实验组皮瓣血管的再生明显多于对照组。结论rhGH能直接或间接地促进皮瓣血管的生成,提高随意皮瓣成活的面积。     

碱性成纤维细胞生长因子联合血管内皮细胞生长因子促进自体脂肪移植成活的动物实验研究

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(1bFGF)联合血管内皮细胞生长因子(VEGF)对大鼠自体脂肪移植血管新生及成活的影响。方法建立大鼠自体脂肪移植模型,将腹股沟处脂肪组织与生长因子蛋白溶液或生理盐水混合移植于大鼠背部。大鼠背部随机注射脂肪组织与生理盐水或0.5μg bFGF、1.0μg bFGF、2.0μgbFGF、0.5μg bFGF+0.5μg VEGF、1.0μg bFGF+1.0μg VEGF。12周后,对移植物进行成活率分析、组织学观察以及CD31免疫组织化学染色。结果向0.3 ml脂肪组织中添加2.0 Pg bFGF可显著提高移植物成活率及微血管密度。0.5μg bFGF组及1.0μg bFGF组与生理盐水组相比,差异无统计学意义(P0.05);但分别联合应用0.5μgVEGF和1.0μgVEGF以后,可显著升高移植物成活率,差异具有统计学意义(P0.05)。1.0μg bFGF+1.0μg VEGF联合应用组的移植物成活率和血管密度亦高于2.0μg bFGF单添加组。结论相比单独应用bFGF,VEGF与bFGF联合应用可刺激更多的血管生成,从而提高移植脂肪的成活率。     

脂质体介导血管内皮生长因子对不同时间断蒂大鼠随意型皮瓣的影响

目的 通过血管内皮生长因子基因对大鼠随意型皮瓣的转染,探讨基因治疗对不同时间断蒂的大鼠随意型皮瓣成活的影响.方法 以SD大鼠为实验模型制作背部随意型皮瓣,实验组注入脂质体包裹的PcDNAVEGF165(目的 基因组),对照组分别注入PcDNA(空白质粒组)和生理盐水(生理盐水组),于用药后1、3、5、7 d,每组每时相点分别随机选取10只断蒂,断蒂后7 d处死大鼠,观察下述指标:①皮瓣成活率.②皮瓣组织标本行常规HE染色检测平均微血管数目及内径.③行VEGF免疫组织化学染色检测VEGF表达情况.④取皮瓣组织标本在电镜下观察超微结构.结果 ①皮瓣成活率:1、3、5、7 d断蒂实验组皮瓣成活率分别为(45.45±12.24)%、(82.95±3.81)%、(85.00±3.38)%、(85.96±3.25)%.1 d断蒂实验组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),3、5、7 d断蒂各实验组明显高于相应对照组(P<0.05),3、5、7 d断蒂各实验组则随着断蒂时间的延迟差异无统计学意义(P>0.05).②平均微血管数目及内径:各实验组与相应对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).③各实验组VEGF染色深度明显高于对照组(P<0.05).④超微结构:实验组内有新生血管形成,内皮细胞内可见较多粗面内质网,线粒体等结构,组织内成纤维细胞增多,细胞合成代谢旺盛.结论 皮下注射脂质体介导VEGF基因可提高皮瓣成活率,促进早期断蒂,是一种简单,高效,经济,相对安全的基因治疗方法.     

血管内皮祖细胞和血管内皮生长因子促进预构皮瓣血管新生作用的比较

目的 比较血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在促进预构皮瓣血管新生作用上的差异,探讨EPCs移植提高预构皮瓣存活面积的可行性.方法 分离雄性Wistar大鼠(45只)一侧股血管柬,转位植入腹部皮下,建立预构皮瓣实验模型.将体外诱导分化的EPCs(组Ⅰ,n=15)和VEGF(组Ⅱ,n=15)分别注射于皮瓣局部,对照组仅注射PBS溶液(组Ⅲ,n=15).4周后形成以植入血管为蒂的岛状皮瓣,原位缝合;术后7 d对皮瓣存活率、血管密度计数进行检测.结果 组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ的皮瓣存活率分别为(87.26±10.13)%、(66.13±9.9)%、(55.59±13.06)%,组Ⅰ分别与组Ⅱ和组Ⅲ比较,差异均有统计学意义(P<0.001);微血管密度分别为:(38.67±9.52)个/mm~2、(25.83±6.33)个/mm~2、(26.5±5.61)个/mm~2(P<0.05).结论 EPCs促进预构皮瓣血管新生的作用优于VEGF,局部应用骨髓来源的EPCs可以有效地提高预构皮瓣存活面积.     

腺病毒载体介导人VEGF cDNA促进随意型皮瓣成活的实验研究

目的探讨以腺病毒载体局部应用血管内皮细胞生长因子基因对大鼠缺血随意型皮瓣成活的影响。方法30只SD大鼠随机分成3组,每组10只,于鼠背设计蒂在尾侧髂嵴水平的随意型皮瓣,面积为2cm×8cm,A组皮瓣远端23顺皮瓣长轴分10个点真皮下注入1012PFU的携带人血管内皮细胞生长因子基因的腺病毒(AdCMVVEGF),B组同法注入同剂量的携带β半乳糖苷酶基因的腺病毒(AdCMVGal),C组注入1ml的生理盐水,3d后掀起皮瓣并原位缝合,术后7d观察实验结果。结果每组皮瓣成活面积的百分比分别为A组(8591±254)%,B组为(5956±118)%,C组为(6148±109)%,A组成活率显著高于B组和C组,差异有非常显著性意义(P<001),B组与C组比较差异无显著性意义(P>005)。原位杂交、免疫组化显示,应用AdCMVVEGF治疗的成活皮瓣中,VEGF有表达,组织学切片显示,AdCMVVEGF治疗皮瓣中肉芽组织增生,新生血管大量形成。结论以腺病毒为载体局部应用VEGF基因能增加缺血皮瓣的成活面积,该法具有高效的特点。     

bFGF微球对大鼠背部任意皮瓣存活的影响

目的：研究局部注射碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）复合明胶微球对SD大鼠背部任意皮瓣存活的影响。方法：采用改良的乳化冷凝法交联制备复合bFGF明胶缓释微球,将其注射于大鼠背部任意皮瓣,24只SD大鼠随机分为bFGF微球组（A组）、bFGF治疗组（B组）和对照组（C组）,术后7天分别进行皮瓣存活率、新生血管计数的检测。结果：术后7天皮瓣的存活率分别为（65.42±2.19）%,（54.38±4.52）%,（45.43±2.71）%,微球组存活率显著高于对照组（P〈0.05）且存活质量最好;皮瓣内新生血管计数分别为28.75±2.36,21.28±3.82,18.68±5.44,具有显著性差异。结论：bFGF缓释微球可以促进缺血皮瓣的血管新生,提高皮瓣存活率。     

水蛭素对大鼠随意型皮瓣存活的影响

目的 研究水蛭素对大鼠背部超长随意型皮瓣存活的影响.方法 采用改良大鼠"McFarlane flap"模型,将实验动物随机分为水蛭素实验组(水蛭素组)和生理盐水对照组(生理盐水组),水蛭素组局部注射3 ml(30 ATU)水蛭素,生理盐水组则注射3 ml生理盐水,连续注射7 d后分别检测两组皮瓣的存活面积百分比,并取皮瓣近、中、远段(即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ区)组织做光镜观察,免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞因子(bFGF)的表达.结果 术后7 d,水蛭素组皮瓣的存活面积百分比为(69.52±3.23)%,生理盐水组为(50.36±2.37)%,水蛭素组显著高于生理盐水组,差异有统计学意义(P＜0.01);水蛭素组皮瓣坏死与存活并存的Ⅱ区,组织水肿、炎性细胞浸润情况明显比生理盐水组轻.水蛭素和生理盐水组皮瓣Ⅱ区的新生血管计数分别为(28.24±4.23)个/mm2和(17.45±5.43)个/mm2,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).通过计算累积吸光度A值(IA),得到水蛭素和生理盐水组VEGF阳性量分别为9262.23±896.99和4938.05±1623.67,bFGF阳性量分别为5122.83±1176.12和2779.45±472.00,水蛭组VEGF及bFGF的表达均高于生理盐水组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 水蛭素可能通过体内一系列复杂的调控通路,最终增加VEGF、bFGF表达,促进皮瓣新生血管增生,改善皮瓣血供,减轻炎性反应,降低缺血皮瓣的坏死率,从而提高大鼠随意型皮瓣的存活.

Abstract：

Objective To investigate the effect of Hirudin on random skin flap survival in rats.Methods 24 SD rats were randomly divided into control group and experimental group. The "McFarlane flap(3 cm ×9 cm)" rat models were established on the rat dorsum. 3 ml Hirudin (30 ATU) was injected into the flap in the experimental group, while 3 ml saline in the control group. The injection was performed for 7 days. The flap survival area in the two groups was measured. The tissue samples were taken from proximal( Ⅰ ), middle( Ⅱ ) and distal( Ⅲ ) portions of flaps for histologic study. The VEGF and bFGF expression was also detected with immunohistochemistry method. Results 7 days after operation, the flap survival rate was ( 69.52 + 3.23 )% in the experimental group, while ( 50.36 ± 2.37 )% in control group,showing a significant difference between the two groups ( P ＜ 0.01 ). In the middle portion, tissue edema and infiltration of neutrophils in experimental group was markedly slighter than that in control group. The VEGF and bFGF expression and neovascularization was enhanced markedly in experimental group.Conclusions Hirudin can increase the survival of random pattern skin flaps. It may increase the VEGF,bFGF expression through a series of complex regulatory pathway. Then flap neovascularization is promoted and the flap blood supply is increased.     

疏血通注射液对大鼠随意型皮瓣存活的影响

目的研究疏血通注射液对大鼠背部随意型皮瓣存活的影响。方法采用改良的大鼠McFarlane皮瓣制作方法,将Sprague Dawley大鼠随机分为疏血通实验组和生理盐水对照组,实验组每只每天腹腔注射疏血通注射液1．5mL／kg,对照组每只每天腹腔注射生理盐水1．5mL／kg。术后第7天处死大鼠分别进行皮瓣存活面积比的检测,并取皮瓣近、中、远区组织切片光镜下观察,免疫组化法检测血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果术后7d,实验组皮瓣的存活面积比为（72．52±2．23）％,对照组皮瓣的存活面积比为（50．36±2．37）％,实验组存活面积比显著高于对照组（P〈0．01）。实验组中区皮瓣的组织水肿、炎症细胞浸润情况明显比对照组减轻,并且出现大量的新生血管,中区新生血管密度（27．42±4．21）个／mm^2,与对照组（17．45±5．43）个／mm^2差异有统计学意义（P〈0．05）。实验组VEGF表达量为4731．24±448．99,对照组为2466．01±801．67,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论疏血通注射液可能通过增加VEGF表达等途径,促进皮瓣新生血管增生,改善皮瓣血供,减轻炎症反应,从而改善大鼠随意型皮瓣的存活。     

地塞米松及碱性成纤维细胞生长因子联合应用防治超长任意型皮瓣缺血坏死的实验研究

目的：探讨联合应用地塞米松和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对大鼠背部超长任意皮瓣成活的影响,并进一步探讨大鼠血清中TNF-α及皮瓣中内皮细胞的细胞间粘附分子1（ICAM-1）发挥作用的机制。方法：采用大鼠背部皮瓣模型,术后即刻腹腔内一次性大剂量注射地塞米松,皮瓣下均匀滴注bFGF,术后24h内观察TNF-α及ICAM-1的变化,术后7天观察皮瓣成活率及组织学变化。结果：皮瓣成活率联合用药组（58.2±5.2）%〉bFGF组（50.5±3.9）%〉地塞米松组（48.7±4.2）%〉对照组（39.5±3.7）%,（F=32.08,P〈0.01）;联合用药组与地塞米松组较对照组及bFGF组血清中TNF-α含量达高峰时间更晚,峰值更低,且各组均于术后24h下降明显;各组于术后4h皮瓣组织的上皮细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞的胞浆中均呈现ICAM-1的mRNA表达,并均于术后8h呈现ICAM-1阳性蛋白表达高峰,对照组及bFGF组明显高于联合用药组和地塞米松组（P〈0.01）,之后缓慢下降,术后12h仍保持较高水平。结论：地塞米松和bFGF均能促进皮瓣成活,且地塞米松＋bFGF促进皮瓣成活优于单用地塞米松和单用bFGF。地塞米松能够延迟血清中TNF-α达到峰值的时间,显著降低其峰值含量,并通过抑制皮瓣中ICAM-1,干预炎症反应起始过程,从而减轻皮瓣炎症反应。     

骨髓单个核细胞与骨髓间充质干细胞促进大鼠皮瓣存活率的比较

目的比较来源于等量骨髓的单个核细胞与经扩增的间充质干细胞,促进大鼠随意皮瓣成活率的效果。方法取等质等量的大鼠骨髓,一半直接离心获得骨髓单个核细胞,一半经体外培养获得骨髓间充质干细胞,注射相等数量(n=6)的大鼠随意皮瓣。术后测量并计算皮瓣成活面积,取材,行组织学检测,计数CD31阳性血管数量。结果未经培养的骨髓单个核细胞组皮瓣的平均存活率为(71.6±8.4)%,培养的骨髓间充质干细胞组平均存活率为(66.2±3.1)%,这两组存活率均显著高于注射平衡液的对照组(55.9±3.4)%;注射细胞组之间平均存活率没有统计学差异。组织学血管密度计数显示,骨髓单个核细胞组和骨髓间充质干细胞组的微血管数量分别是(58.2±6.8)和(42.7±5.1),都显著高于PBS对照组(22.8±3.1),而骨髓单个核细胞组也显著高于骨髓间充质干细胞组。结论与不经培养的骨髓单个核细胞相比,通过体外扩增的骨髓间充质细胞,未能显著提高大鼠随意皮瓣的成活率。     

VEGF促进预构皮瓣血管新生的实验研究

目的探讨VEGF重组蛋白促进大鼠预构皮瓣血管新生、提高皮瓣存活面积的可行性。方法建立大鼠腹部预构皮瓣模型;30只Wistar大鼠随机分为两组;局部应用VEGF165（组Ⅰ）、PBS（组Ⅱ）;4周后形成以植入血管为蒂的岛状皮瓣,原位缝合;术后7d对皮瓣存活、血管新生情况进行检测。结果组Ⅰ、组Ⅱ的皮瓣存活率分别为66．13％±9．9％,55．59％±13．06％（P〈0．05）;组Ⅰ与组Ⅱ比较,微血管显影血管网更丰富,范围更广,分支更粗,内含墨汁的血管在皮瓣的表皮真皮、皮下层均有分布;微血管计数组Ⅰ、组Ⅱ分别为25．83±6．33条／mm^2,26．5±5．61条／mm^2（p〉0．05）。结论VEGF可以促进预构皮瓣的血管新生,提高存活率。     

腺病毒-VEGF基因重组体促进预构皮瓣成活的实验研究

目的：应用大鼠预构皮瓣模型,探讨基因治疗技术产生的血管内皮生长因子促进预构皮瓣血管新生和皮瓣存活的可能性,为临床上寻找加速预构皮瓣成熟的新方法提供实验依据。方法：20只SD大鼠每只腹部两侧各构建一个预构皮瓣,共构建40个皮瓣,每只大鼠两侧皮瓣按随机原则进行不同的处理,分别归于实验组或对照组,每组各20个皮瓣。于大鼠腹部两侧各标记3cm×2cm矩形预构区,短边平行于腹股沟韧带,自尾侧短边中点向后纵向切开后肢皮肤,剥离出长约2cm的股动静血管束,远端结扎切断。在两侧预构区域的中轴线上,于真皮与肉膜层间各制作一皮下隧道,实验组的隧道壁皮下组织内注射携带有VEGF基因的腺病毒,同法向所有对照组的隧道壁软组织内注射等量生理盐水。将已剥离好的血管束向颅侧翻转置入相应皮下隧道内。所有已植入股血管的预购区域2周后均被制成以植入血管束为蒂的岛状皮瓣,从两组中各取一个皮瓣进行免疫组化染色,观察有无VEGF生成,其余岛状皮瓣均缝回原处。形成岛状皮瓣后第七天观察皮瓣存活及血管新生情况。结果：实验组与对照组的皮瓣平均存活率分别为（90．48±1．89）％、（69．75±2．36）％,其差异有统计学意义（P〈0．01）;血管放射显影图上,实验组植入血管周围见广泛白色显影,尤以血管两端明显,而对照组新生血管显影仅局限于植入血管周围;组织学切片显示实验组植入血管周围新生血管丰富,以毛细血管为主,并见肉芽成份,对照组新生血管相对较少,两组间新生小血管管腔大小则无明显差异;免疫组化检测显示仅实验组皮瓣中有VEGF表达。结论：腺病毒-VEGF基因重组体能通过促进预构皮瓣的血管新生,增加预构皮瓣的存活率。     

骨髓血管内皮祖细胞移植提高缺血皮瓣存活率的研究

目的：探讨大鼠骨髓来源的血管内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）移植促进缺血皮瓣的血管新生,从而提高皮瓣存活率的可能性。方法：在Wistar大鼠背部形成2cm×8cm蒂部位于双侧髂棘连线上的随意型超比例皮瓣,建立缺血皮瓣模型。采用密度梯度离心法从Wistar大鼠骨髓中分离出骨髓单个核细胞,并在专有的诱导培养基（EG-M2MV）中培养,贴壁筛选法分离,诱导分化为EPCs;对细胞的形态、表型、功能加以鉴定。将EPCs注射移植于iWstar大鼠背部的缺血皮瓣,大体观察皮瓣的存活率,vWF免疫酶染色法检测皮瓣毛细血管密度。以缺血皮瓣单纯注射磷酸盐缓冲液（PBS）的Wistar大鼠作为对照组。结果：骨髓中分离培养的EPCs呈现典型的＂铺路石＂样外观,表达CD34、Flk-1及CDl 33表型,能够摄取DIL-ac-LDL和特异性结合FITC-UEA-1。注射EPCs组的缺血皮瓣存活率以及毛细血管密度显著高于对照组（P〈0.05）。结论：骨髓中的EPCs在体外培养后注射移植于皮瓣内,可以促进缺血性皮瓣的血管新生,提高缺血性皮瓣的存活率。     

肝细胞生长因子对大鼠背部超长任意皮瓣存活率影响的实验研究

目的：探讨肝细胞生长因子对大鼠背部超长任意皮瓣血管生成的作用及皮瓣存活率的影响。方法：建立大鼠背部超长任意皮瓣8.0cm×2.0cm动物模型,直接皮下注射50ng/ml肝细胞生长因子溶液,术后7天观察皮瓣颜色、质地、毛细血管回流、坏死范围、切割皮瓣出血情况;计算皮瓣的存活面积;免疫组化染色后在显微镜下计算毛细血管平均密度。通过自身前后对照、与生理盐水组对照,比较两者的差异。结果：肝细胞生长因子组皮瓣的存活率81.45%±2.74%,与对照组的42.82%±7.03%比较,差别有统计学意义（P〈0.05）;实验前实验组和对照组毛细血管数分别为12.70±1.35、12.31±1.22,两者差别无统计学意义（P〉0.05）;实验后实验组和对照组毛细血管数分别为39.67±4.83、21.50±1.87,两者差别有统计学意义（P〈0.05）;实验组及对照组实验后毛细血管密度高于实验前,差别有统计学意义（P〈0.05）。结论：肝细胞生长因子能促进皮瓣血管内皮细胞的生成,提高皮瓣的存活率。