凝血酶对U937细胞uPAR mRNA表达的影响

目的 研究凝血酶通过凝血酶受体（ＴＲ）对细胞ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ表达的影响。方法 在凝血酶、灭活凝血酶、和抗ＴＲ小肽多抗等作用下,以ＲＴ－ＰＣＲ法测定培养Ｕ９３７细胞ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ的表达量。结果 凝血酶增强ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ表达呈现凝血酶剂艇时间的依赖性。其作用机制与凝血酶和细胞膜上ＴＲ间的结合、以及凝血酶的蛋白水解活性有关。高浓度凝血酶或中等浓度凝血酶在延长作用时间长,对Ｕ９３７细胞ｕＰＡＲｍ     

凝血酶对U937细胞uPAR mRNA表达的影响

目的"研究凝血酶通过凝血酶受体(TR)对细胞 uPAR mRNA 表达的影响. 方法"在凝血酶、灭活凝血酶、和抗TR小肽多抗等作用下,以RT-PCR法测定培养U937细胞uPAR mRNA的表达量. 结果"凝血酶增强uPAR mRNA表达呈现凝血酶剂量和作用时间的依赖性.其作用机制与凝血酶和细胞膜上TR间的结合、以及凝血酶的蛋白水解活性有关.高浓度凝血酶或中等浓度凝血酶在延长作用时间时,对U937细胞uPAR mRNA表达有明显抑制效应. 结论"凝血酶对U937细胞uPAR mRNA表达的影响,除通过活化TR外可能还存在其它的途径,其确切机制尚需进一步研究.     

一种检测凝血酶、类凝血酶的新方法—纤维蛋白原平板法

目的：创建一种定量检测凝血酶（Thrombin）、类凝血酶（Thrombin-likeenzymes）活性的新方法—纤维蛋白原平板法。方法：采用纤维蛋白原作为底物,用琼脂糖与纤维蛋白原制作成纤维蛋白原平板,以凝血酶、类凝血酶标准品分别在该平板上的扩散反应,制作相应的标准曲线及回归曲线,并对凝血酶、类凝血酶活性作定量测定。结果：本法制作的凝血酶、类凝血酶检测标准曲线具有良好的线性关系（r=0.9994、r=0.9997）。结论：纤维蛋白原平板法可用于凝血酶、类凝血酶定量测定。具有操作简便、直观、稳定、敏感度高,不受检品浊度或颜色干扰且成本低廉等特点。     

凝血酶研究概况

早在19世纪末期,凝血酶就被一苏格兰的生理学家发现并命名,直到1951年凝血酶被纯化出来,并对其进行测序之后,人们对凝血酶的研究和了解才越来越深入。凝血酶的生理功能与其丝氨酸蛋白酶的活性有关,能裂解纤维蛋白原而形成纤维蛋白凝块,从而促进血液凝块的形成。20世纪中期,人们就开始将凝血酶应用于临床,由于其疗效显著,应用也越来越广泛。后来美英日等国从牛血浆中分离出凝血酶应用于临床,并证明将动物凝血酶应用于人体未出现凝血酶抗原性,口服和局部外用时未产生抗体的过敏反应和其他不良反应等,因而目前所使用的凝血酶制剂大多来源于动物血浆,传统的凝血酶分离纯化技术也趋于成熟。     

凝血酶工艺优化和稳定性的研究

目的进行凝血酶工艺优化和稳定性的研究。方法选用Ca2＋和凝血活酶联合激活系统激活、DEAE-Sephadex A-50吸附法等技术提取出粗凝血酶,采用离子交换层析法,从粗凝血酶中纯化得到凝血酶纯品,对两者纯化效果进行比较。结果优化后的工艺比原生产工艺有明显提高。结论优化工艺应把生产凝血酶时温度控制在25℃,pH=7,从猪血浆的吸附到凝血酶半成品,应在4h内完成,这样才能获得较高纯度的凝血酶。     

不同溶剂溶解凝血酶对凝血酶促凝活性的影响

目的比较凝血酶在不同溶剂中的凝血活性。方法用9种不同的溶剂稀释凝血酶并分为两种浓度、一种为低浓度,另一种为高浓度,低浓度凝血酶和高浓度凝血酶分别在CA1500全自动凝血仪上对同一枸橼酸抗凝血浆进行凝血酶时间（thrombin time,TT）和纤维蛋白原（fibrinogen,Fbg）测定。结果 TT和Fbg均提示：凝血酶在水溶液中的促凝活性最强。0.9%NS和5%葡萄糖溶液具有抑制凝血酶凝血活性的作用,且浓度越高抑制作用越强,以5%GNS对凝血酶的凝血活性抑制作用最强。结论凝血酶作为外用止血时,采用日常生活中极为常见的蒸馏水及纯净水稀释,可能会提高其止血效果     

凝血酶工艺优化及稳定性的实验研究

目的 进行凝血酶工艺优化和稳定性的实验研究.方法 选用Ca2+和凝血活酶联合激活系统激活、DEAE Sphadex A-50吸附法等技术提取出粗凝血酶,采用离子交换层析法,从粗凝血酶中纯化得到凝血酶纯品,对两者纯化效果进行比较.结果 优化后的工艺比原生产工艺有明显提高.结论 优化工艺应把生产凝血酶时温度控制在25℃,pH=7,从猪血浆的吸附到凝血酶半成品,应在4h内完成,这样才能获得较高纯度的凝血酶.     

凝血酶原法检测重组人脑利钠肽制剂中凝血酶的残留量

目的了解重组人脑利钠肽（rhBNP）制剂中凝血酶残留量是否符合产品制剂的安全性要求。方法根据凝血酶的生物学活性建立rhBNP冻干制剂中凝血酶残留量的检测方法,并进行凝血酶活性单位检测,计算每瓶rhBNP产品中凝血酶的残留量。结果三批原液样品的测定均未见凝集现象（〉4分钟）。结论rhBNP样品凝血酶的活性单位低于0.5 U,符合产品制剂的安全性要求。     

凝血酶雾化吸入治疗咯血的体会

目的对比凝血酶雾化吸入和垂体后叶素静脉滴注治疗咯血的疗效和副作用。方法将咯血患者随机分为凝血酶治疗组和垂体后叶素对照组.凝血酶组151例,雾化吸入凝血酶;垂体后叶素组132例,以垂体后叶素静脉滴注。记录用药后的疗效及不良反应。结果凝血酶组的疗效明显优于垂体后叶素组。结论凝血酶雾化吸入治疗咯血是一种简便、安全、有效的方法,值得推广。     

凝血酶治疗上消化道出血103例

目的评估凝血酶在上消化道出血时的疗效。方法采用镜下出血部位喷洒,经胃管冰水洗胃后注入凝血酶,口服凝血酶。结果1例因食管静脉曲张破裂大出血,喷洒凝血酶仍出血不止而转外科手术治疗,其余的102例均达到止血效果。结论凝血酶在治疗上消化道出血方面安全有效,是一种理想的药物,值得推广使用。     

反义凝血酶受体ODNs对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :为研究凝血酶受体在血管平滑肌细胞增殖中的作用 ,探讨反义凝血酶受体ODNs对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响 .方法 :通过培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,以3 H -TdR掺入率作为评价反义凝血酶受体ODNs抑制血管平滑肌细胞增殖的指标 ,用反转录聚合酶链反应检测反义凝血酶受体ODNs 抑制血管平滑肌细胞凝血酶受体mRNA的表达 ,用Western -Blot检测反义凝血酶受体ODNs抑制血管平滑肌细胞凝血酶受体蛋白质的表达 .结果 :反义凝血酶受体ODNs明显抑制血管平滑肌细胞的增殖 (与对照组相比 ,P <0 0 5 ) ,明显抑制血管平滑肌细胞的凝血酶受体mRNA和蛋白的表达 .结论 :反义凝血酶受体ODNs明显抑制血管平滑肌细胞的增殖 ,其抑制血管平滑肌细胞的增殖是通过抑制凝血酶受体基因的表达 ,特别是通过抑制DNA、mRNA和蛋白的表达来完成 .     

凝血酶与神经细胞损伤

凝血酶是凝血酶原的活化形式,是一种损伤处血管内皮细胞产生的多功能的丝氨酸蛋白酶,是参与凝血过程各个环节反应的关键酶.它将纤维蛋白原转化为纤维蛋白,并使纤维蛋白交联形成血栓;也能激活血小板引起血小板聚集和释放各种血小板因子,因此凝血酶也是已知的引起心肌梗死的最重要的诱因之一.目前发现的凝血酶受体有PAR1、PAR2、PAR3和PAR4,研究表明凝血酶受体广泛地存在于各种血液细胞、神经细胞、平滑肌细胞、内皮细胞和骨细胞,其中PAR1、3、4由凝血酶激活,PAR2由胰蛋白酶或胰岛素样蛋白酶激活.每种凝血酶受体有其不同的栓系配体,不同组织的凝血酶受体也不相同,凝血酶通过其受体的介导,发挥广泛的细胞生物学效应.对神经系统而言,凝血酶主要通过PAR1起作用.凝血酶可以特异性地水解细胞膜上的凝血酶受体,在受体外功能区暴露一个栓系配基序列,该配基能与自身受体上的配基袋结合,引起胞内信号传导和细胞活化[1,2].     

采用膜分离法从猪血中分离纯化凝血酶的工艺研究

目的 从猪血中分离纯化凝血酶.方法 根据猪血凝血酶原及其凝血酶的分子量,采用膜分离技术分离纯化猪血凝血酶.结果 采用膜分离技术分离纯化猪血凝血酶,其比活力与活力回收率分别比有机溶剂沉淀法提高了78.5U/pro.mg(6.0倍)和37.1%.结论 膜分离法是分离纯化猪血凝血酶较理想的方法,适宜中、小企业生产.     

凝血酶对食管癌细胞EC109细胞迁移的影响

目的：探讨凝血酶对食管癌细胞EC109细胞迁移的影响。方法：EC109分别接种于96孔培养板各孔,贴壁后划痕,分别加入不同浓度的凝血酶,作用时间12、24、48、72h。同时设置水蛭素组、凝血酶＋水蛭素组及无药组。拍照并测量计算细胞迁移距离。结果：凝血酶组各浓度在不同作用时间的迁移距离与水蛭素组、凝血酶＋水蛭素组和无药组比有统计学意义（P〈0.05）,水蛭素组、凝血酶＋水蛭素组与无药组比无统计学意义,凝血酶组各浓度间比无统计学意义。结论：凝血酶可增强EC109细胞迁移能力。     

支气管结核纤支镜活检后止血方法比较

目的 观察凝血酶治疗支气管结核患者纤支镜活检后出血的临床疗效及安全性.方法 将纤支镜检查确诊的135例支气管结核患者随机分为3组,每组各为45例.凝血酶组在支气管镜活检前后经纤支镜分别注入凝血酶溶液1ml;肾上腺素组在纤支镜活检前后分别注入肾上腺素溶液1ml;而肾上腺素+凝血酶组则在纤支镜活检前注入肾上腺素溶液1ml,活检后再注入凝血酶溶液1ml.结果 凝血酶组、肾上腺素组及两药合用组总有效率分别为97.6%、77.5%和92.5%,3组比较有显著性差异(P<0.01),凝血酶组疗效明显优于肾上腺索组.结论 凝血酶治疗支气管结核患者活检后出血疗效确切,使用安全.     

长白山白眉蝮蛇类凝血酶基因特异片段的制备与分挝

目的分离和纯化长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段,为克隆全长类凝血酶cDNA奠定基础.方法应用RT-PCR方法获得长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段,克隆于pGEM-T载体上,进行测序和NCBI数据库同源性分析.结果获得长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段长度为289bp,该片段与其他种蝮蛇类凝血酶DNA片段有同源性.结论本实验克隆了长白山白眉蝮蛇类凝血酶基因片段.根据不同种属蛋白质家族成员的保守性和同源性设计引物可以有效地克隆家族成员的DNA片段.     

凝血酶对大鼠离体胸主动脉和肺动脉的收缩作用及其可能机制

目的观察凝血酶对离体大鼠胸主动脉与肺动脉血管张力的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法采用Powerlab生物信号采集放大系统记录离体大鼠肺动脉与胸主动脉的张力信号,利用RT-PCR技术检测血管壁凝血酶受体的表达。结果凝血酶对离体大鼠肺动脉及胸主动脉具有明显的收缩作用,且该收缩作用与凝血酶受体-1激动剂的作用相似,不依赖于细胞外钙离子的存在。大鼠肺动脉及胸主动脉血管壁中均有凝血酶受体-1的表达。结论凝血酶对大鼠离体血管具有收缩作用并且可能是通过凝血酶受体-1而起作用,该作用不依赖于细胞外钙离子的存在。     

凝血酶对骨髓来源内皮祖细胞增殖能力的影响

目的:观察凝血酶对骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)增殖能力的影响并探讨其机制。方法:密度梯度离心法从大鼠骨髓分离EPCs,培养7 d后收集贴壁细胞并加入不同浓度凝血酶(10-2,10-1,1,10,100 U/mL)干预一定时间(6,12,24,48 h)。CCK-8试剂盒检测EPCs增殖。实时定量PCR检测凝血酶刺激以及NF-κB抑制剂预处理以后EPCs的VEGF mRNA表达变化,ELISA法检测其分泌量变化。结果:凝血酶干预组的细胞增殖数均高于对照组,10 U/mL凝血酶作用24 h对内皮祖细胞数量影响最为显著(P<0.05)。与对照组相比,凝血酶刺激后VEGFmRNA表达及分泌量均增高,使用NF-κB抑制剂预处理后可以抑制凝血酶的这种作用。结论:凝血酶可以通过NF-κKB途径上调VEGF的表达,促进EPCs增殖。     

凝血酶影响血管内皮细胞通透性的实验研究

目的 :评价凝血酶对血管内皮细胞通透性的影响及其机制。方法 :在体外培养血管内皮单细胞层 ,并测定凝血酶引起的血管内皮单细胞层电阻变化。结果 :凝血酶能够迅速降低血管内皮单细胞层的电阻 ;而肌球蛋白轻链激酶抑制剂 ML- 7能够抑制凝血酶引起的血管内皮单细胞层电阻变化。结论 :凝血酶可以升高血管内皮细胞肌球蛋白轻链的磷酸化水平 ,从而导致血管内皮细胞通透性增高。     

凝血酶生成实验在凝血研究中的应用

凝血酶是凝血系统中的核心组分,凝血酶的过量生成能够导致血栓风险,凝血酶的生成减少则会导致出血风险。临床上常用凝血酶生成实验来监控病人血浆的促凝活性,从而指导制定合适的治疗方案。我们改进了凝血酶生成实验的经典方法,使之适用于基础医学的研究。应用内毒素(LPS)诱导的单个核细胞替代传统刺激剂,激活凝血途径,并通过TC全自动凝血仪检测凝血酶的生成。