原发性胆汁性肝硬化患者颗粒溶素的检测及意义

原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一种慢性胆汁淤积性自身免疫性肝病，主要特征为肝内中小胆管的非化脓性进行性炎性损伤。颗粒溶素（granulysin，GNLY）是由自然杀伤细胞和激活的细胞毒性T淋巴细胞选择性表达的细胞毒分子。我们采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）和酶联免疫吸附法检测PBC患者外周血GNLY的表达，研究GNLY表达在PBC发病机制中的作用，为临床诊治提供依据。     

冠心病患者HCMV抗体和HCMV-DNA的测定及其临床意义

目的　探讨人巨细胞病毒 (HCMV)感染与冠心病的关系及 HCMV感染可否作为冠心病的独立危险因子。方法　间接酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定 HCMV- Ig G、HCMV- Ig M和 HCMV- Ig A抗体 ,聚合酶链反应 (PCR)测定 HCMV- DNA。结果　冠心病组的 HCMV- Ig G、Ig M、Ig A抗体阳性率、S/N值 (标本 450 nm吸光度值 /阴性对照 450 nm吸光度值 )和 HCMV- DNA阳性率均明显高于对照组 ,且这些指标不受血清胆固醇、甘油三酯水平及是否伴有高血压和 /或糖尿病的影响 (除 HCMV- Ig M抗体阳性率在是否伴有高血压和 /或糖尿病两组间比较 P<0 .0 5外 ,余均为 P>0 .0 5)。结论　 HCMV感染可能与冠心病有关 ,HCMV感染有可能作为冠心病的独立危险因子。     

急性和慢性白血病survivin基因的表达及临床意义

目的探讨survivin基因在白血病中的表达及对成人急性白血病(AL)患者的预后意义。方法应用RT-PCR检测105例AL和21例慢性粒细胞白血病(CML)患者survivin mRNA的表达水平,15例健康人为正常对照,K562、NIM、Kg-1α、HL-60细胞株为阳性对照。流式细胞术检测AL患者细胞周期分布,分析survivin基因表达与细胞增殖的关系。结果survivin在初治AL中的表达(0.525±0.460)较正常对照组(0.101±0.187)明显升高,治疗缓解后survivin的表达(0.280±0.095)下降,复发时表达水平(0.935±0.343)又复升高;在CML慢性期患者,survivin mRNA表达水平(0.279±0.112)与正常对照无明显差异,而在急变期的患者表达水平(0.653±0.236)明显升高;AL患者中survivin基因高表达组的增殖指数(PI=9.682)较正常表达组的增殖指数(PI=6.899)高,且差异有统计学意义(P＜0.05);在初治AL患者中,survivin表达阳性的患者缓解率低于表达阴性的患者。结论survivin有促增殖、促分裂作用。survivin基因表达的紊乱可能在AL的发病中起着重要作用,并且与AL复发和预后因素密切相关。survivin表达水平的升高是CML患者急变的高危因素。     

氟对大鼠成骨细胞Runx2表达的影响

目的 研究氟对体外培养大鼠乳鼠成骨细胞中Runx2表达的影响.方法 体外培养Wistar大鼠乳鼠成骨细胞,按染氟剂量分为0(对照组)、1、2.4 mg/L 4个水平,分别在48、72 h后,提取RNA,采用反转录聚合酶链反应(RT-PcR)方法检测Runx2 mRNA表达;采用酶联免疫吸附试验(EUSA)方法检测培养液上清中的Runx2蛋白质.结果 Wistar大鼠乳鼠成骨细胞在体外染氟培养48 h后,1、2、4mg/L染氟水平下Runx2的mRNA表达(0.613±0.055、0.773±0.070、0.775±0.070)与对照组(0.482±0.043)比较.差异均有统计学意义(P<0.05);在染氟培养72 h后,1、2,4 mg/L染氟水平和对照组的Runx2 mRNA表达量分别为0.969±0.048、1.229±0.061、1.255±0.063、0.724±0.036,任意两组问比较,差异均有统计学意义(P<0.05).各染氟组Runx2mRNA表达,72 h组均高于铝hm(P<0.05);染氟剂量和染氟时间有交互作用(F=189.20,P<0.05).在染氟培养48 h后,1、2、4 mg/L染氟水平下的Runx2蛋白质表达(0.141±0.007、0.143±0.008、0.143±0.011)与对照组(0.129±0.012)比较,差异有统计学意义(P<0.05);在染氟培养72 h后,1、2、4 mg/L染氟水平下的Runx2蛋白质表达(0.156±0.014、0.168±0.018、0.162±0.010)与对照组(0.137±0.016)比较.差异有统计学意义(P<0.05);各染氟剂量Rung2蛋白质表达.72 h组均高于48 h组(P<0.05),染氟剂量和染氟时间之间无交互作用(F=2.22,P0.05).结论 氟可促进成骨细胞Runx2的mRNA和蛋白质表达,与染氟的剂量以及作用时间有关.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞諸Toll样受体3 mRNA表达水平的研究

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中Toll样受体3(TLR3 mRNA)表达及其与疾病活动性的关系.方法 利用实时荧光定量-反转录-聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)的方法 ,检测55例PBC患者(活动期33例、缓解期22例)、20例肝癌患者(疾病对照组)和24名健康体检者(健康对照组)PBMCs中TLR3 mRNA的表达水平.以△Ct=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的高低.结果 PBC患者活动期TLR3 mRNA的表达水平高于疾病缓解期,差异有统计学意义(P<0.05);同时也高于肝癌患者和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);缓解期TLR3 mRNA的表达水平与健康人和肝癌对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 PBC患者TLR3 mRNA表达异常,可能参与了PBC的发病过程并与疾病的活动性有关.     

狼疮样肾炎鼠白细胞介素-17的表达及其作用研究初探

目的　了解狼疮样肾炎鼠白细胞介素 17(IL 17)的表达及其作用。方法　建立一种狼疮样肾炎动物模型即鼠慢性移植物抗宿主病 (cGVHD)模型 ,用放射免疫法测定尿白蛋白水平 ;用酶联免疫吸附试验 (ELISA)法测定血、尿IL 17水平 ;用免疫组织化学方法检测IL 17蛋白在肾组织的表达 ;用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)分析肾组织IL 17mRNA的表达。结果　模型鼠组较对照鼠组血IL 17水平不高 ,尿IL 17水平明显升高 [(2 2± 6 7) pg/ml比 (3 1± 2 1)pg/ml];肾小球毛细血管襻、部分系膜细胞、肾小管和间质浸润的单个核细胞均有IL 17蛋白表达 ;肾组织IL 17mRNA水平明显升高 (0 34± 0 15比 0 ) ,且肾组织IL 17+ 细胞数明显增多 [Ng :(2 5± 8)cell/gcs比 0 ;Nt:(2 3± 8)cell/mm2 比 0 ];模型鼠肾组织中IL 17+ 细胞数与尿白蛋白和尿IL 17水平呈明显正相关。结论　IL 17在狼疮样肾炎鼠肾组织表达明显增加 ,并在其发病中可能起重要作用。     

Survivin基因在胃癌组织中的表达及临床意义

为研究Survivin基因在胃癌组织中的表达及其与胃癌发生、发展的关系,2003年5月至2004年5月,我们应用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)技术检测胃癌组织中Survivin基因的表达情况,并评价其与临床病理指标的关系。现报告如下。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体mRNA表达水平的研究

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中肿瘤坏死因子受体(GITR)mRNA表达及其与疾病发病机制、疾病活动性的关系.方法 采用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)的方法 ,在Light Cycler Real time PCR检测仪上检测78例PBC患者(活动期44例、缓解期34例)、肝癌患者30例(疾病对照组)、健康体检者30名(健康对照组)PBMCs中GITR mRNA的表达水平和含量.以△Ct=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的高低.结果 活动期PBC患者GITR mRNA表达水平(△Ct=10.5±2.8)明显低于缓解期PBC患者(△Ct=7.2±2.3,P<0.01);活动期PBC患者GITR mRNA表达水平(△Ct=10.5±2.8)明显低于健康对照组(△Ct=7.4±1.1)与肝癌组(△Ct=5.9±1.3,P<0.01);缓解期PBC患者GITR mRNA表达水平与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05);肝癌患者GITRmRNA表达水平明显高于健康对照组及PBC患者(P<0.01).结论 GITR的表达与PBC的发生发展存在定关联性,可能参与了PBC的发病过程并与疾病的活动性有关.     

KLF4、KLF6在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨KLF4、KLF6在胃癌组织中的表达与胃癌临床生物学行为的关系及意义。方法 RT-PCR技术检测36例胃癌手术切除标本癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜内KLF4、KLF6的表达,并分析其与患者临床病理特征的关系,采用SPSS11.5软件进行统计学处理。结果胃癌组织中KLF4、KLF6的表达明显低于正常组织(P0.05);胃癌组织中KLF4的表达在无淋巴结转移组中显著高于淋巴结转移组(P0.05);KLF6的表达随分化程度的增加,TNM分期的增加而显著降低(P0.05),无淋巴结转移组显著高于淋巴结转移组(P0.05,P0.01)。结论 KLF4、KLF6在胃癌组织中低表达可能与胃癌的发生、发展、转移、预后有关。     

原发性胆汁性肝硬化患者淋巴细胞培养上清液中几种细胞因子水平的测定

目的 探讨几种细胞因子[白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α、γ干扰素(IFN-γ)、IL-4]水平变化对原发性胆汁性肝硬化(PBC)的诊断价值.方法 酶联免疫吸附(ELISA)法检测经植物血凝素(PHA)刺激后淋巴细胞培养上清液中IL-2、TNF-α、IFN-γ及IL-4水平.结果 PBC患者淋巴细胞培养上清液中IL-2、TNF-α水平与正常对照组比较均明显升高;IFN-γ水平与正常对照组比较轻度升高;IL-4水平与正常对照组比较无明显变化. 结论 Th1亚群占优势,Th1细胞被激活,介导了自身免疫性损害,导致PBC的发病,推测细胞因子在肝损害中可能起着重要作用.     

原发性胆汁性肝硬化患者自身抗体测定的意义

目的:探讨自身抗体测定对诊断原发性胆汁性肝硬化(PBC)的临床意义.方法:PBC患者52例和非PBC患者202例,其中包括自身免疫性肝炎(AIH)41例,原发性硬化型胆管炎(PSC)18例,乙型肝炎(HBV)89例,丙型肝炎(HCV)54例以及健康体检者40例,采用间接免疫荧光法(IIF)检测抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗线粒体抗体(AMA)、抗心肌抗体(HRA)、抗骨骼肌抗体(ASA)、抗胃壁细胞抗体(PCA)、抗双链DNA(ds-DNA)抗体、抗肝肾微粒体抗体(LKM)、抗可溶性肝抗原(SLA)抗体和抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)等自身抗体,ELISA法检测抗髓过氧化酶抗体(MPO),并对其结果进行回顾性分析.结果:PBC患者中AMA阳性例数最高为46例(88.5%),ANA阳性率为71.2%(37/52);非PBC患者中阳性例数则分别为20例(9.9%)和51例(25.2%),两组比较,有非常显著性意义(P<0.01).AMA、SMA抗体检测在PBC与AIH患者中,均有非常显著性意义(P<0.01).但两组之间的ANA阳性率无显著性意义(P>0.05).PSC患者18例ANA阳性6例,AMA阳性7例均低于PBC患者.HBV,HCV感染患者检测ANA阳性率分别只有9.0%和22.2%;AMA阳性率也只有7.9%和3.7%,与PBC患者比较均有显著性差异(P<0.01).PBC患者及对照组检测ds-DNA,ANCA,LKM,SLA和MPO抗体结果显示PBC患者检测最高的ANCA阳性率为26.9%(14/52),其次是MPO阳性率为25.0%(13/52),与AIH比较,均有非常显著性意义(P<0.01).结论:血清自身抗体的检测对诊断、治疗和阻止原发性胆汁性肝硬化的发展有着十分重要作用.对提高PBC同其他疾病鉴别诊断和治疗有着非常重要的意义.     

肝硬化患者血清可溶性sCD8水平变化及临床意义

探讨肝硬化患者血清可溶性CD8(sCD8)水平变化与肝细胞损伤的关系。采用酶联免疫吸附法测定血清sCD8水平。肝硬化患者血清sCD8水平高于正常对照组 ,其血清sCD8水平与肝功能指标天门冬酸氨基转移酶(AST)水平呈正相关 (r=0 35 4 ,P <0 0 5 ) ,与白蛋白 (A)水平呈负相关 (r=- 0 339,P <0 0 5 ) ,血清sCD8在Child -Pugh分级中差别无统计学意义。肝硬化患者血清sCD8水平增高与肝细胞损伤、肝功能障碍有关 ,血清sCD8水平监测可作为观察肝硬化患者病变的重要免疫学指标之一     

原发性胆汁性肝硬化患者miR-let-7b的异常表达及其意义

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC) microRNA(miR-let-7b)的表达及其临床意义. 方法 以60例PBC患者和35名健康对照者作为研究对象,应用荧光定量RT-PCR方法检测miR-let-7b的表达.分析miR-let-7b与Mayo风险评分及临床分期的相关性.检测PBC患者血清白细胞介素18.总胆红素、碱性磷酸酶、v-谷氨酰转移酶的水平,分析其与miR-let-7b的相关性.独立样本数据比较用非参数Mann-Whitney检验;相关分析采用Spearman相关性检验. 结果 PBC患者的PBMC miR-let-7b的相对表达水平显著低于健康对照者,差异有统计学意义(0.096±0.047与1.000±0.293,Z=-8.101,P＜ 0.01).Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期PBC患者PBMC miR-let-7b的相对表达水平显著低于Ⅰ期患者,与Ⅰ期比较,q值分别为7.697,7.075,12.07,P值均＜0.01;Ⅳ期患者显著低于Ⅱ、Ⅲ期患者,q值分别为6.499和4.423,P值均＜0.01.PBC患者PBMC miR-let-7b的相对表达水平与Mayo风险评分呈负相关(r=-0.4930,P＜0.01),与白细胞介素18 (r=-0.4643,P＜ 0.01)、碱性磷酸酶(r=-4119,P＜0.01)水平也呈负相关,与总胆红素、Y-谷氨酰转移酶无明显相关性.结论 PBC患者PBMC miR-let-7b表达水平显著降低,与疾病进程呈负相关,这为今后PBC的诊断和预防提供了新的线索.     

抗线粒体抗体M2亚型IgG和IgA在原发性胆汁性肝硬化诊断中的作用

目的 评价以新型天然M2抗原和BPO融合蛋白M2-3E(BPO)为靶抗原的酶联免疫吸附(ELISA)法(抗-M2-3E ELISA)检测抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)IgG和IgA抗体在原发性胆汁性肝硬化(PBC)诊断中的敏感性、特异性以及其临床意义.方法 分别用间接免疫荧光法(IFL)、以丙酮酸脱氢酶复合体为靶抗原的ELISA法(抗-PDC ELlSA),抗-M2-3E ELISA法检测107例PBC患者,87例疾病对照患者和26名健康体检者的AMA-M2 IgG和(或)IgA抗体.检测ALT,AST,总胆红素、白蛋白、Y-谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶、血清肌酐、IgG、IgM及IgA.对于符合正态分布的计量数据采用t检验,不符合正态分布者采用秩和检验. 结果 107例PBC患者抗-M2-3E ELISA法AMA-M2 IgG的检出率(90.6%)高于IFL法(81.3%)和抗-PDCELISA法(72.9%),t值分别为4.32和6.03,P值均<0.05.抗M2-3E ELISA法检测AMA-M2 IgA的检出率为55.1%,特异性为97.2%,而总体AMA-M2 IgG和(或)IgA的检出率为92.5%,特异性为95.2%.20例IFL检测AMA-M2 IgG为阴性的PBC患者中,抗-M2-3E ELISA法检出率为45%,AMA-M2 IgG和(或)IgA的检出率为55%,抗-M2-3E ELISA可以在超过一半的IFL阴性的患者中检出AMA-M2 IgG和(或)IgA.AMA-M2 IgG呈阳性的患者(97例)比呈阴性的患者(10例)有更加严重的组织学变化和更高的IgG,IgM和碱性磷酸酶水平.结论 抗-M2-3E ELISA法具有比IFL和抗-PDC ELISA法更高的敏感性和特异性,可作为第一轮AMA-M2的筛查.AMA-M2 IgG阳性可能说明该PBC患者有更加严重的疾病,但是AMA-M2 IgG和IgA都不能单独用于诊断PBC.     

53例原发性胆汁性肝硬化临床和病理分析

目的分析原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者的临床表现、实验室检查及病理特征。方法回顾性分析53例PBC患者的临床表现、实验室检查及病理特征。结果53例PBC患者中女性46例（86．8％），发病至确诊时间（中位数）28个月，主要症状包括反复肝功能异常、乏力、黄疸、瘙痒、肝脾肿大等；53例患者GGT、ALP均有明显升高；73．6％（39／53）患者AMA和（或）AMA-M2亚型阳性，另14例血清AMA和AMA-M2亚型阴性，经病理检查证实为PBC；53例患者中Ⅰ期为13例（24．5％），Ⅱ期20例（37．7％），Ⅲ期16例（30．2％），Ⅳ期4例（7．5％）；Ⅰ期、Ⅱ期（33例）与Ⅲ期、Ⅳ期（20例）患者肝功能等计量资料只有GGT、ALP差异有显著性意义（P〈0．05），病理改变严重者GGT、ALP升高明显。结论临床判断PBC患者病情的轻重应综合分析临床症状、生化改变（尤其是GGT、ALP）、自身抗体检测以及组织学检查等，而不应局限于用黄疸作为衡量指标。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单核巨噬细胞中Notch受体表达情况

目的探讨原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者外周血中巨噬细胞膜Notch受体表达情况及其与巨噬细胞极化的关系。方法随机抽取上海中医药大学附属曙光医院收治的确诊为PBC患者30例和健康体检者15名,分为早期PBC组、晚期PBC组和健康对照组,采集空腹血,流式细胞术法检测外周血M1和M2型巨噬细胞及膜表面Notch受体表达水平。结果早期PBC患者巨噬细胞膜表面Notch1受体表达较对照组高(P<0.05),而Notch2受体和Notch3受体表达水平与健康对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);晚期PBC患者巨噬细胞膜表面Notch1和Notch3受体表达较对照组高(P<0.05),但Notch2受体表达差异无统计学意义(P>0.05)。晚期PBC患者Notch1受体和Notch3受体表达水平较早期PBC患者高(P<0.05)。巨噬细胞极化M2/M1比值与Notch受体表达水平呈线性相关。结论PBC患者外周血巨噬细胞膜表面Notch受体表达异常,且与巨噬细胞极化呈直线相关。     

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者血管内皮生长因子的表达及其意义

目的 观察阻骞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者外周血血管内皮生长因子(VEGF)水平的变化,探讨其与OSAHS及OSAHS相关性心脑血管疾病的关系. 方法 采用多导睡眠呼吸监测对6个OSAHS高发家庭的21例OSAHS患者及48例体检正常者进行睡眠呼吸监测,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及计算机条带分析半定量检测单纯OSAHS组、OSAHS合并心脑血管疾病组以及正常对照组外周血VEGF mRNA表达水平,同时应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分别检测3组的外周血浆VEGF的水平. 结果 (1)单纯OSAHS与正常对照组血浆VEGF含量[(205.75±2.79)ng/L与(168.72±4.64)ng/L]及外周血单个核细胞VEGF mRNA的表达[0.61±0.02与0.47±0.02(灰度面积比值)]比较,差异有统计学意义(均P＜0.01).OSAHS合并心脑血管病组与单纯OSAHS组血浆VEGF含量[(288.74±2.73)ng/L与(205.75±2.79)ng/L]及外周血单个核细胞VEGFmRNA的表达[1.16±0.03与0.61±0.02(灰度面积比值)]比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)OSAHS患者血浆VEGF及外周血单个核细胞VEGF mRNA水平均与其呼吸紊乱指数(AHI)、晨起收缩压、晨起舒张压呈正相关,与最低动脉血氧饱和度(MinSaO2)呈负相关. 结论 OSAHS患者VEGF水平明显增加,考虑VEGF可能参与了OSAHS的病理生理过程,特别是OSAHS相关性心脑血管病的病理生理过程.     

Increased expression of Epstein-Barr virus in primary biliary cirrhosis patients

Peripheral blood mononuclear cells (PBMC, n = 26), formalin-fixed paraffin-embedded liver tissues (n = 11) and saliva (n = 15) of primary biliary cirrhosis (PBC) patients were used for the detection of Epstein-Barr virus (EBV) sequences by polymerase chain reaction (PCR) assay. The semiquantitative analysis of EBV-DNA was also carried out in a reconstructive experiment using an EBV-infected cell line. The PBMCs of PBC patients showed increased levels of EBV-DNA (61%) in contrast to chronic active hepatitis patients (19%), liver cirrhosis patients (14%) and healthy individuals (11%). Furthermore, formalinfixed paraffin-embedded liver tissues, as well as saliva from PBC patients, also demonstrated increased levels of EBV-DNA when compared to healthy individuals and those with other liver diseases. The increased levels of EBV-DNA in the PBMC, liver tissue and saliva of the PBC patients suggest that those patients may have a depressed immune function against EBV infection.     

Gastric myoelectrical activity in patients with primary biliary cirrhosis

Objective  To examine gastric myoelectrical activity in patients with primary biliary cirrhosis (PBC). Materials and methods  The study comprised 11 female PBC patients (average age 53.4 years, range 43–70) and two aged-matched control groups: 11 (53.4 years, range 37–78) healthy women, and 10 female patients with chronic hepatitis C, CHC (53.9 years, range 35–66), who were examined prior to administration of an antiviral therapy. Every subject underwent an electrogastrographic recording comprising a 30-min interdigestive and a 120-min postprandial period. Results  Abnormal electrogastrograms, containing prolonged epochs of tachygastria in the postprandial phase were found in 2 out of 11 (18.2%) patients having both stage IV of the Scheuer’s PBC classification, as well as in 1 patient out of 10 (10%) with CHC at stage F2 according to the METAVIR fibrosis score. Conclusion  Electrogastrographic abnormalities do not seem to be pathognomonic for the PBC as a disease, but rather would be considered an unspecific sequel of a morbid liver affection.