靶向封闭再生基因Ⅰα对胰腺癌细胞SW1990增殖行为的影响

目的 观察靶向封闭再生基因Ⅰα(REG Ⅰα)对胰腺癌细胞株SW1990增殖行为的影响.方法 设计并体外合成靶向REG Ⅰα的小干扰RNA(siRNA),将其转染到SW1990细胞中,半定量RT-PCR、蛋白质印迹法检测转染前后REG Ⅰα基因表达的变化.采用MTT法检测转染前后细胞增殖能力的改变,流式细胞技术检测细胞周期的变化.结果 REG Ⅰα siRNA转染胰腺癌细胞SW1990后,明显抑制REG Ⅰα基因表达,以200 nmol/L REG Ⅰα siRNA对REG Ⅰα基因表达抑制效果最佳.以该浓度的REG Ⅰα siRNA转染SW1990细胞后,SW1990细胞在siRNA转染后48 hREG Ⅰα mRNA表达抑制率最高,达82%;干扰后SW1990中REG Ⅰα蛋白表达也明显下调.抑制SW1990细胞中REG Ⅰα的表达后,SW1990细胞的增殖能力明显下降,与阴性对照组(转染无关序列的siRNA)及空白对照组(无任何处理)相比,差异有统计学意义(P<0.05).转染细胞的周期分布有明显改变:G1期细胞增加,S期细胞减少.结论 靶向封闭REG Ⅰα基因能明显抑制胰腺癌细胞SW1990在体外的增殖能力,为探索胰腺癌基因治疗提供新的策略.     

斑蝥素抑制胰腺癌sw1990裸鼠移植瘤细胞增殖的研究

目的:探讨斑蝥素对裸鼠移植瘤胰腺癌细胞增殖的影响。方法:在培养人胰腺癌sw1990细胞的基础上建立荷瘤鼠胰腺癌模型并进行移植瘤抑制实验,实验分为对照组、用药组,观测荷瘤鼠移植瘤大小改变和免疫组化方法检测增殖相关基因PCNA蛋白的表达。结果:斑蝥素对荷瘤鼠胰腺癌移植瘤的生长有明显的抑制作用,用药组移植瘤体积增长幅度明显小于对照组;用药组移植瘤重量为(0.6421±0.2193)g,对照组为(0.9541±0.2122)g,差异有显著性(P<0.05)。用药组PCNA蛋白染色的细胞明显减少,表达率显著降低(P<0.05)。结论:斑蝥素可明显抑制裸鼠胰腺癌移植瘤的生长,其机制可能与斑蝥素能抑制肿瘤细胞的增殖相关基因PCNA的表达有关。     

辣椒素对人结肠癌SW480细胞株增殖作用的影响

目的了解辣椒素对人结肠癌SW480细胞株增殖作用的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用MTT检测法,观察终浓度100-400μmol/L的辣椒素作用24、48 h对人结肠癌SW480细胞株生长作用的影响;采用流式细胞仪检测400μmol/L辣椒素作用人结肠癌SW480细胞株后其细胞周期变化和凋亡率。结果辣椒素能抑制结肠癌SW480细胞株增殖,呈浓度、时间依赖性。在400μmol/L辣椒素作用下,结肠癌SW480细胞株停滞于G0/G1期。辣椒素作用24、48 h,SW480细胞凋亡率升高（F=8.73、8.10,q=4.86-7.30,P〈0.01）。结论辣椒素抑制SW480细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能是阻滞细胞周期于G0/G1期。     

组织因子途径抑制物-2对胰腺癌细胞增殖的影响

目的：检测人胰腺癌组织中组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）基因的表达,探讨其对胰腺癌细胞增殖的影响.方法：采用免疫组织化学方法检测43例胰腺癌及9例正常胰腺组织中TFPI-2及Ki-67蛋白的表达.结果：胰腺癌中TFPI-2的表达低于正常胰腺组织,其表达水平与胰腺癌临床分期及转移有关, 于Ⅰ、Ⅱ期及无转移的胰腺癌组织中的表达高于Ⅲ、Ⅳ期及有转移的胰腺癌组织（P＜0.05）.其表达水平与胰腺癌细胞增殖活性呈负相关（rs=- 0.339,P＜0.05）.结论：TFPI-2基因在胰腺癌中呈低表达,能抑制肿瘤细胞的增殖,可能参与了胰腺癌细胞周期的调控.     

5,7-二甲氧基黄酮抑制人胰腺癌PANC-1细胞系胰腺癌干细胞特性的体外研究

[目的]探讨5,7-二甲氧基黄酮(DMF)对人胰腺癌干细胞特性的影响.[方法]体外培养人胰腺癌PANC-1细胞系得到微球细胞,流式细胞仪检测;划痕法分析不同浓度DMF对胰腺癌干细胞自我更新、体外细胞迁移和运动能力影响;Western Blot分析不同浓度DMF干预后PANC-1细胞系胰腺癌干细胞表面标志物CD133、CD44、ALDH1、Bmil、E-cad、N-cad蛋白表达变化.[结果]DMF以浓度依赖方式抑制人胰腺癌PANC-1细胞系胰腺癌干细胞肿瘤球形成能力及抑制细胞体外迁移能力;DMF以浓度依赖方式使胰腺癌干细胞标志物CD133、CD44、ALDH1、Bmi1、N-cad蛋白表达水平降低,而E-cad蛋白水平升高.[结论]DMF以浓度依赖方式显著抑制人胰腺癌PANC-1细胞系胰腺癌样干细胞自我更新、分化后细胞迁移、细胞标志物CD133、CD44、ALDH1、Bmi1、N-cadherin蛋白表达,而增强E-cadherin蛋白表达.     

白藜芦醇对人胰腺癌细胞Capan-1增殖和细胞周期的影响

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)对人胰腺癌细胞Capan-1增殖和细胞周期的影响及变化规律.方法:通过不同浓度(0.128 ～ 500 000 nmol/L)Res作用于增殖期的Capan-1,检测5 d各组细胞增殖率和细胞生长状态;通过增殖率曲线获得其半数生长抑制浓度(IC50)和杀伤浓度(killing concentration),并以此浓度再次作用细胞5 d,检测并分析其细胞周期和细胞凋亡情况.结果:Res在16 nmol/L时增殖率显著升高,而在15 000 nmol/L开始呈现抑制增长表现.Res对Capan-1的IC50为48.33 μmol/L,细胞杀伤浓度为87.40 μmol/L.流式细胞检测结果表明,Res浓度为48.33 μmol/L时,G0/G1期细胞比例显著增高于空白对照组(P ＜ 0.01).当Res浓度为87.40 μmol/L时,G2/M期细胞比例显著低于空白对照组和48.33 μmol/L组(P ＜ 0.01),且细胞凋亡率显著高于其他两组(P ＜ 0.01).结论:Res对Capan-1的增殖影响存在浓度依赖性,分别表现为促进增殖、抑制增殖、促进凋亡3个阶段浓度,其中Res抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用与其对细胞周期的阻断作用有关.     

吉西他滨白蛋白纳米粒对胰腺癌细胞株SW1990体外增殖抑制效应的实验研究

目的：通过体外实验,探讨吉西他滨（GEM）白蛋白纳米粒对人胰腺癌细胞株SW1990体外增殖的抑制效应。方法：以人胰腺癌细胞株SW1990为研究对象,分为5个给药组：110nm GEM纳米粒组、406nm GEM纳米粒组、单纯GEM组、空白纳米粒组和无药对照组;运用MTT法检测给药后48h和72h的增殖抑制率。结果：MTT试验检测提示110nm GEM-NP,406nm-GEM-NP和GEM均具有显著的细胞抑制作用,且72h后406nm-GEM-NP的细胞抑制率在50μg·mL-1GEM浓度时,超过了单纯GEM（P〈0.05）,表明其有显著的药物缓释作用;空白纳米粒对细胞抑制轻微,且不具有时间和浓度依赖性。结论：GEM白蛋白纳米粒,特别是406nm-GEM-NP,对人胰腺癌细胞株SW1990具有显著的体外细胞增殖抑制作用,并且生物相容性良好。     

中晚期胰腺癌术中加体外放射治疗临床观察

目的 分析术中放射治疗(IORT)加体外放射治疗(EBRT)对中晚期胰腺癌患者的疗效。方法 对20例伴有严重背痛和腹痛而又无法手术切除的中晚期胰腺癌患者，进行了IORT加EBRT，观察止痛效果和平均生存期。结果 本组11例患者疼痛完全缓解(55％)，7例患者部分缓解(35％)，平均生存期为8．3个月。同期进行的30例胰腺癌切除术患者平均生存期是7个月。结论 IORT加EBRT能明显缓解患者的疼痛，并延长患者的生存期，是一种较好的中晚期胰腺癌姑息治疗方法。     

不同新生牛血清对胰腺癌BxPC-3细胞增殖的影响

目的观察在其他培养条件相同的情况下,不同类型新生牛血清对胰腺癌BxPC-3细胞体外培养的影响,探讨胰腺癌BxPC-3细胞生长适应的血清类型。方法胰腺癌细胞系BxPC-3细胞分别用含20%无噬菌体低内毒素新生牛血清、20%无支原体新生牛血清的高糖DMEM培养基培养,镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞活力及生长曲线的比较。结果无噬菌体低内毒素新生牛血清对于胰腺癌BxPC-3细胞形态、增殖及生长曲线,无噬菌体低内毒素新生牛血清明显好于无支原体新生牛血清,两组血清培养BxPC-3细胞的增殖有统计学差异(P<0.05)。结论胰腺癌BxPC-3细胞能较好地适应无噬菌体、低内毒素新生牛血清,而不适应无支原体新生牛血清,甚至发生死亡。     

保妇康栓对宫颈癌细胞SiHa体外增殖和凋亡的影响

目的研究中药保妇康栓含药血清在细胞水平对宫颈癌SiHa细胞体外增殖及凋亡的影响,探讨保妇康栓抑制宫颈癌SiHa细胞生长可能的作用机制。方法中药保妇康栓含药血清培养液作用于SiHa细胞24、48、72h,并设立阴性及阳性(西药含药血清)对照组,采用CCK8及流式细胞分析技术进行细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡检测。结果保妇康栓对宫颈癌SiHa细胞增殖具有抑制作用,24h抑制作用最强。与阴性对照组比较,保妇康栓组SiHa细胞中G0/G1期细胞显著增多,S期细胞显著减少,差异均有统计学意义(P0.05)。结论保妇康栓的作用可能是通过阻断细胞从G0/G1期向S期分化,从而抑制宫颈癌SiHa细胞增殖并诱导凋亡来抑制肿瘤生长。     

Apollon siRNA抑制胰腺癌SW1990细胞增殖的研究

目的：研究凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis proteins,IAPs）家族成员 Apollon小干扰 RNA（small interference RNA,siRNA）对人胰腺癌 SW1990细胞增殖的影响,并进一步探讨其作用机制。方法将前期研究的 Apollon siRNA的序列,经脂质体包裹转染胰腺癌（SW1990）细胞48 h后,采用WST-8法检测Apollon siRNA对胰腺癌SW1990细胞增殖抑制作用,并计算 IC50。流式细胞术检测细胞早期凋亡率;RT-PCR检测 Apollon mRNA的相对表达水平,western-blotting检测 Apollon蛋白的表达水平。结果 Apollon siRNA作用于胰腺癌（SW1990）细胞48 h后,能有效抑制 SW1990细胞增殖,并呈现剂量效应关系;流式细胞术检测结果显示：Apollon siRNA能促进胰腺癌（SW1990）细胞凋亡,其早期凋亡率达37.1％;RT-PCR结果显示,Apollon siRNA能显著下调Apollon mRNA及蛋白在胰腺癌细胞中的表达水平。结论 Apol-lon siRNA可抑制胰腺癌细胞的增殖,作用机制可能为共同促进胰腺细胞早期凋亡、下调 mRNA及蛋白的表达有关,为临床上胰腺癌的靶向基因治疗提供理论基础。     

槲皮素对人结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用

目的:观察槲皮素对体外培养的人结肠癌SW480细胞的增殖抑制作用。方法:观察不同浓度(5、10、20、40、80、160μmol/L)的槲皮素及50mg/L的5-Fu(阳性对照组)在不同时间(24、48、72h)对SW480细胞增殖的影响。运用细胞计数试剂盒检测法(CCK-8)检测槲皮素对SW480细胞生长的影响;光学显微镜和电子显微镜下观察槲皮素处理后SW480细胞形态结构的变化;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析槲皮素对SW480细胞的细胞周期分布及凋亡率的影响。结果:CCK-8法检测显示槲皮素对SW480细胞的增殖有抑制作用,其抑制作用随着作用浓度的增加和作用时间的延长而增强(P<0.05);经槲皮素处理的SW480细胞与阳性对照组比较,呈明显凋亡状态;PI染色FCM分析发现槲皮素以浓度依赖方式诱导SW480细胞G2/M期细胞累积,且细胞凋亡率随药物浓度增加而增加(P<0.05)。结论:槲皮素对人结肠癌SW480细胞的增殖有抑制作用,且能诱导SW480细胞凋亡,是一种高效低毒的药物。     

miR-223对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响

目的 观察miR-223对结肠癌SW480细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法 PLL3.7-miR-223和PLL3.7-miR-EV质粒转染SW480细胞,Real-time PCR检测转染24h后miR-223的表达变化,CCK-8试剂盒检测转染12、24、48 h后细胞的增殖能力,流式细胞仪分析转染48 h后细胞周期和凋亡情况,Western blot检测IGF-1R、AKT蛋白表达情况.结果 转染24 h后,Real-time PCR检测结果显示PLL3.7-miR-223转染组miR-223的表达量（6.55±2.04）较PLL3.7-miR-EV（以其miR-223的表达量为1）明显上调（P＜0.01）.与对照EV组相比,SW480细胞在转染miR-223后生长明显受到抑制,细胞周期在G1期发生阻滞[（61.61±4.02）％vs.（35.99±1.62）％],凋亡增加明显[（67.43±4.75）％vs.（44.23±3.11）％],均P＜0.01,并且能够降低生长相关蛋白IGF-1R及细胞凋亡相关蛋白AKT的表达.结论 miR-223可以通过调节IGF-1R和AKT的表达影响结肠癌细胞SW480的增殖、细胞周期和凋亡.     

DPC4基因转染对结肠癌SW480细胞的影响

目的研究DPC4基因转染对结肠癌SW480细胞的影响。方法建了表达DPC4基因的逆转录病毒pLXSN载体,转染SW480细胞和未转染的SW480细胞为对照。Western鉴定DPC4蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖率。结果发现SW480/DPC4细胞较SW480/pLXSN、SW480/-细胞,生长明显减缓,经统计有显著差异(P<0.05)。培养第7天的时候,抑制率达50%左右。结论 DPC4基因具有抑制结肠癌细胞生长的作用,为结肠癌的侯选肿瘤抑制基因。     

和厚朴酚对结肠癌细胞生长影响及Caspase凋亡途径相关蛋白的表达研究

目的:探讨和厚朴酚对人结肠癌(SW480)细胞增殖抑制作用及诱导Caspase凋亡途径的研究.方法:利用MTT检测和厚朴酚在不同浓度和时问下对SW480细胞体外增殖的影响;用流式细胞术、Hoechst33258荧光染色检测及Caspase-3,-8,-9 酶活性检测方法和厚朴酚诱导下结肠癌SW480细胞凋亡指标及路径.结果:MTT结果显示和厚朴酚具明显抑制SW480细胞的体外增殖,其抑制率存在剂量和时间依赖性;药物处理24,48,72 h的IC50值分别是54.36、44.72、36.20 μmol/L.和厚朴酚作用细胞后,G0/G1期的细胞比例随药物浓度增加而逐渐增多(P<0.05),表明和厚朴酚能阻滞细胞于G0/G1期.荧光染料 Hoechst33258染色结果显示.细胞核出现典型的凋亡小体.Caspase家族蛋白酶活性检测结果,胞内Caspase-3,-8,-9酶家族分别被激活.其活性随不同时间点升高(P<0.05).结论:和厚朴酚能明显抑制人结肠癌SW480细胞体外增殖,并诱导大肠癌细胞SW480通过激活Caspase途径发生凋亡.     

熊果酸对人胃癌细胞株MGC-803增殖的影响及机制

目的 观察熊果酸(Ursolic acid, UA)对胃癌细胞株(MGC-803)的抑制增殖作用。方法 培养胃癌细胞株(MGC-803)，以MTT比色法及克隆形成实验测定UA对胃癌细胞株MGC-803抑制增殖的作用。免疫印记法测定p-ERK1/2、Cyclin D1及p21waf/cip1表达。结果 MTT实验及克隆分析法均显示UA明显抑制MGC-803细胞增殖，免疫印记法显示UA抑制p-ERK1/2、Cyclin D1表达，同时上调p21waf/cip1表达。结论 熊果酸可以抑制胃癌细胞株(MGC-803)增殖，机制与影响p-ERK1/2及下游Cyclin D1、p21waf/cip1表达有关。     

二硫代氨基甲酸吡咯烷对肝癌细胞株Hep3B增殖的影响

目的 探讨抗氧化剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrro1idine dithiocarbamate,PDTC)对肝癌细胞株Hep3B增值的影响及作用机制.方法 采用四甲基偶氨唑蓝(MTT)法,检测不同浓度PDTC、吡柔比星(pirarubicin)及PDTC预处理后联合吡柔比星对Hep3B细胞存活率的影响.电泳迁移率变动分析(EMSA)检测核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的活性及PDTC对该活性的影响.结果 MTT结果示:PDTC能有效抑制肝癌细胞株Hep3B的增殖,并有浓度依赖性.不同浓度的PDTC作用后Hep3B细胞存活率差异均有统计学意义(P＜0.01).单用1μg/ml吡柔比星作用后,细胞存活率(87.3土5.4)%,用PDTC预处理后,细胞存活率为(58.6±3.7)%,其差异有统计学意义(t=7.592,P＜0.01),PDTC预处理能明显增强吡柔比星的细胞毒作用.EMSA结果示,PDTC浓度依赖性地抑制NF-κB的激活,不同浓度的PDTC作用两两相比,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 PDTC能抑制肝癌细胞株Hep3B的增殖,增强吡柔比星的细胞毒作用,其主要作用机制是抑制NF-κB的激活.PDTC有望用于肝癌的化学预防,联合化疗药可进一步提高化疗的疗效.     

伊立替康联合热疗抑制人大肠癌细胞LOVO体外增殖作用的研究

目的：探讨伊立替康联合热疗体外抑制人大肠癌细胞增殖的效果，以确定联合方案是否具有协同效应。方法：使用四甲基偶氮唑蓝（Mar）法测定单独或联合应用伊立替康与热疗对人大肠癌LOVO细胞体外增殖的抑制作用，使用流式细胞仪检测不同方案对LOVO细胞凋亡率的影响。根据Veleriote法判断热化疗联合的作用效果；透射电镜观察细胞形态。结果：与伊立替康化疗或单纯热疗作用相比．伊立替康与43℃热疗联合后对LOVO细胞增殖有显著的抑制作用（P〈0．01），24h时流式细胞仪检测LOVO细胞的凋亡情况发现，热疗组、化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高（P〈0．01）。结论：伊立替康与热疗联合对LOVO细胞的增殖抑制具有明显的协同作用，这可能与细胞凋亡的增多有关。