大鼠膈神经传出和传入神经成分在脊髓内的分布

采用HRP追踪法,对成年大鼠膈神经运动纤维的起源和初级传入神经元胞体的位置及在其中枢突脊髓的投射进行了观察。结果表明,膈神经运动纤维在脊髓标记(膈核)主要分布在注射侧C_3-C_5脊髓节段的前角。隔神经感觉纤维初级传入标记的神经元见于注射侧C_3-C_6后根节,其中C_4标记的细胞数最多。     

大鼠迷走神经和膈神经的解剖相关性实验研究

目的 为大鼠迷走神经移位膈神经重建高位颈髓损伤大鼠的膈肌功能提供显微解剖学依据。 方法　10只健康雌性SD大鼠在10倍手术显微镜下解剖双侧膈神经、迷走神经及其分支。用数显卡尺测量迷走神经与膈神经在“膈神经主干起始平面”、“锁骨上平面”、“入膈肌平面”的相对距离,用读数显微镜测量各平面迷走神经和膈神经的直径。 结果　在颈部,迷走神经直径为（0.3284±0.0247）mm,膈神经直径为（0.2267±0.0164）mm,二者的相对距离很接近,无论是在“膈神经主干起始平面”还是“锁骨上平面”,平均都不超过2.5 mm;在“入膈肌平面”平面,迷走神经直径为（0.2912±0.0326）mm,膈神经直径为（0.2794±0.0282）mm,二者的相对距离较颈部远,左侧为（8.71±0.804）mm,右侧为（6.203±0.952） mm。 结论　(1)在颈部,迷走神经与膈神经的直径相差不大,相对距离很接近,二者可直接无张力缝合。(2)在入膈肌平面,迷走神经与膈神经的直径大致相同,相对距离稍远,但将膈神经和迷走神经向上游离一段距离后仍可实现二者的直接无张力缝合。     

大鼠脊髓神经干细胞的鉴定及光镜和电镜观察

本研究应用无血清培养技术对分离的大鼠胚胎脊髓神经干细胞进行体外培养,在倒置显微镜和电镜下观察细胞形态,应用BrdU标记、免疫荧光染色检测细胞增殖、分化情况。免疫荧光显示nestin、MAP2、GFAP以及BrdU/nestin、BrdU/MAP2、Br-dU/GFAP均有阳性表达,说明从大鼠胚胎脊髓可成功分离出神经干细胞,它们分化后可以表达神经元、星形胶质细胞的特异性抗原。脊髓神经干细胞具有自我更新能力,能分化为神经元和星型胶质细胞。     

大鼠脊髓发育过程中神经干细胞的分化

目的:研究正常大鼠脊髓发育过程中神经干细胞的分化规律。方法:应用免疫荧光染色技术,检测Nestin、NeuN、MAP2、GFAP、CNPase阳性细胞在大鼠胚胎期及生后脊髓内的分布及变化情况。结果:胚胎发育早期,脊髓中央管、灰质、白质均可检测到Nestin阳性细胞,生后Nestin阳性细胞数量逐渐减少。大鼠脊髓神经元的发生呈现明显的背腹模式,孕14d(E14)脊髓内可检测到NeuN阳性细胞,E16 NeuN阳性细胞逐渐增多,腹侧NeuN阳性细胞核体积较大,分布较稀疏,背侧神经元细胞核体积较小,分布较密集。MAP2染色结果与NeuN一致。胶质细胞的分化、成熟在生后初期进行,P4可检测到GFAP及CNPase阳性细胞,主要分布于脊髓白质内,P30在脊髓灰质内可检测到GFAP阳性细胞,细胞分支较多且短。结论:正常大鼠脊髓发育中神经干细胞的分化呈现一定规律性,向神经元方向化较早且呈明显的背腹模式,胶质细胞的分化较晚。     

大鼠膈神经移位迷走神经支配心脏的实验解剖学研究

目的：为大鼠膈神经移位迷走神经支配心脏提供显微解剖学依据。方法：20只健康雄性SD大鼠在10倍手术显微镜下解剖双侧膈神经、迷走神经及其分支。用游标卡尺（精确度为0．02mm）测量膈神经分支直径、长度，迷走神经各段的直径、长度及其与膈神经起始端的距离。结果：（1）大鼠膈神经分支有胸骨支、前外侧支、后支，迷走神经分支有咽支、喉前神经、返神经、心支和胸腹腔支。（2）大鼠膈神经主干起始端直径为（0．22±0．04）mm，其与迷走神经咽支、喉前神经、左侧返神经、右侧返神经、心支、锁骨上水平部的距离分别是（8．46±0．06）mm、（35．98±0．06）mm、（25．66±0．04）mm、（22．88±0．06）mm、（42．06±0．04）mm、（2．46±0．82）mm。结论：迷走神经锁骨上水平发出的主干与膈神经主干起始端较接近，可以与膈神经直接缝合。     

大鼠胚胎脑和脊髓神经干细胞分化特性比较

体外分离大鼠胚胎脑和脊髓神经干细胞,经培养传代后,撤除生长因子(bFGF和EGF)并给予 1%胎牛血清促其自然分化,然后比较两者的分化规律,以及传代次数对分化的影响。结果发现:在完全相同的培养条件下,来源于脑和脊髓的神经干细胞均可分化为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞,但两者分化为神经元的能力均随细胞体外传代次数的增加而显著下降 (P<0. 05);此外,脑来源的神经干细胞分化为神经元的能力远高于脊髓来源的神经干细胞 (P<0. 01)。提示,来自中枢神经系统不同部位的神经干细胞在分化潜力上存在差别,体外传代会影响神经干细胞的分化能力。     

炎性痛大鼠脊髓背角内神经激肽B受体的动态变化

目的：观察神经激肽B受体（NK3）与大鼠髓内伤害性信息和调控的可能关系。方法：用免疫组织化学技术观察完全弗氏佐剂（CFA）诱发慢性性大鼠脊髓背角神经激肽B受体的运动变化。结果：炎症侧腰髓氏脊髓背角NKB受体样免疫反应结构的染色强度有明显升高,背角浅层尤为显著。经进观察与图像分析有明,注射CFA2d后脊髓背角内免疫染色强度即开始升高21d左右抵达高峰,28d后渐恢复至正常水平。结论NKB受体可能参与炎性慢性痛状态下伤害性信息在脊髓水平的传递与整合过程.     

家兔膈神经放电实验中常见问题的解决方法以及与膈肌放电、呼吸运动的同步记录

针对机能实验课膈神经放电实验中常见的问题,提出了切实有效的解决方法以及观察呼吸运动调节的综合实验。     

胚胎大鼠脊髓神经干细胞的培养及鉴定

为了探讨胚胎大鼠脊髓神经管神经干细胞体外培养、鉴定的方法,本实验在解剖显微镜下机械性分离11.5 d的胚胎大鼠脊髓神经管,并制备细胞悬液,无血清培养基培养。应用免疫荧光染色方法对原代和传代细胞进行巢蛋白(nestin)鉴定;加入胎牛血清诱导其分化后分别行神经元特异烯醇化酶(NSE)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和髓磷脂碱性蛋白(MBP)鉴定。结果显示:11.5 d胚胎大鼠脊髓神经管来源的神经干细胞经连续传代培养可形成较多克隆球,呈nestin免疫阳性;加入胎牛血清可诱导其分别向神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化。本实验结果提示,利用E11.5的胚胎大鼠脊髓神经管可成功培养出大量稳定增殖并有多向分化潜能的神经干细胞,可用于进一步的研究。     

股神经损伤后脊髓内部P物质和L-脑啡肽的变化

用免疫组织化学PAP技术观察了大白鼠单侧股神经切断以后,脊髓内SP和Enk样免疫产物的变化。一侧股神经切断后,同侧脊髓腰2、3、4节段后角的Ⅰ、Ⅱ板层内SP、Enk样免疫产物的减少开始于术后第10天,SP减少最明显在30天。此后,随着存活时间延长逐渐恢复,两侧差异缩小,一直维持至60—90天,至120天两侧差异已不很明显。术后各时期Enk样免疫产物反应性的两侧自然对比差别没有SP那样明显。本文对SP和Enk样免疫产物的减少和恢复的机制进行了讨论。     

大鼠体神经-内脏神经吻合后脑源性神经营养因子及其受体的表达变化

为了研究大鼠体神经-内脏神经吻合后脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸激酶B(TrkB)在脊髓前角神经元中的表达变化,以正常大鼠为对照,运用RT-PCR技术检测大鼠体神经-内脏神经吻合术后不同时间脊髓腰4(L4)前角神经元中BDNF及TrkB mRNA的表达变化。结果显示,在正常大鼠L4前角神经元中,BDNF及TrkB的mRNA均存在一定水平的表达;体神经-内脏神经吻合术后7d、14d、1m和2m,BDNF和TrkBm RNA的表达均升高,术后7d达到高峰,14d开始下降;2m时BD-NF mRNA的表达量仍显著高于正常组(P<0.01),而TrkB mRNA的表达量到2m时虽仍高,但与正常组相比,其差异已无统计学意义(P>0.05)。上述结果表明,大鼠体神经-内脏神经反射弧建立后,脊髓L4前角神经元的内源性BDNF及其受体TrkB的表达均增高,它们可能作为保护性因子有利于受损神经元的存活和再生。     

舌咽、迷走神经初级传入与三叉神经初级传入在三叉神经脊束间质核的汇聚

三叉神经脊束间质核是位于三叉神经脊束内的一些灰质团块，三叉神经的一些分支和舌咽、迷走神经均有初级传入纤维投射于此核．为了更确切地认识这些传入投射在此核内的分布范围及其相互关系，本文在光学显微镜下详细观察了Nissl引染色和未染色的透明大鼠脑切片，利用计算机图像分析技术首先重塑此核的立体构形，继之又重塑了经HRP跨节追踪方法显示的三叉神经分支的舌神经、眼下神经以及舌咽、速走神经初级传入终末向此核内投射的立体分布状况．结果显示三叉神经脊束间质核在吻尾方向上整体呈连续且中间膨大的桂形佳状结构；投射于此核的各神经的终末量多少、分布区域虽然都不尽相同，但三叉神经躯体初级传入和Ⅸ、X脑神经内脏初级传人终末在此梭形结构中段膨大部呈明显的重叠分布。本文结果为内脏传入和面目部躯体使人信息在三叉神经脊柬问质核神经元的汇聚提供了形态学根据．     

家兔阴部神经在脊髓的定位投射

本实验用8只家兔切断一侧阴部神经,用HRP涂抹近侧断端,逆行追踪脊髓和脊神经节内的标记细胞。结果:运动神经元分布于骶1——骶4节,集中部位在骶2节。在脊髓横断面上主要位于腹角的腹外侧群,少量细胞见于中央群和腹内侧群,标记的细胞多为中,小型多极细胞。阴部神经的感觉神经元位于骶2-骶3节的脊神经节内。标记细胞有大,中,小三种,小型者较多。细胞在节内的分布无明显的局部定位。所有标记的运动和感觉细胞均见于手术同侧。     

胸腰脊神经后根形态计量研究

在15具成人尸体上对胸腰脊神经后根进行了大体解剖和形态计量研究.结果表明:(1)上胸段脊神经后根的囊外段长度、硬膜点横径和脊髓点束数在逐节减少;后根的囊外段与囊长轴之下夹角>90°,囊内段及脊髓点分布长度在逐节增加,交通支最丰富.(2)中胸段脊神经后根的囊外段长度、硬膜点横径和脊髓点束数各节段波动范围较小,下夹角在90°左右,囊内段短,脊髓点分布长.(3)下胸段脊神经后根的脊髓点分布长度转而下降,下夹角<90°,其它指标均逐节增加.(4)腰段脊神经后根的脊髓点分布长度进一步减少,下夹角最小,其它指标达最大值,交通支丰富.根据研究结果进行后根受损危险排序,腰>下胸>上胸>中胸.     

大鼠副神经脊髓核在中枢内的定位

用 HRP 逆行追踪法,研究了大鼠副神经脊髓核在中枢内的定位。在同侧延髓锥体交叉平面至脊髓 C_6 节段内,见到 HRP 标记细胞主要位于 C_2 和 C_3 节段(占61.15%)。标记的副神经脊髓核似为复合体,可细分为4个纵列亚核,即前角外侧核、前角前核、前角背内侧核和前角中央核等。在脊髓前角内,C_1 主要见于前角背内侧核;C_2 和 C_3 见于前角外侧核;C_4、C_5 和 C_6 见于前角前核。自 C_1 至 C_4 节段,标记细胞从内侧趋向外侧分布,C_5、C_6 则又趋向前方。据1例大鼠脊髓连续切片观察,在前角内测量49个标记的副神经脊髓核胞体,其大小约34～68μm。属α运动神经元(直径大于37.5μm)占65.3%;属γ运动神经元(直径小于37.5μm)占34.7%。     

外源性NGF对大鼠坐骨神经切断缝合术后脊髓和背根节CGRP表达的影响

观察外源性神经生长因子(NGF)对坐骨神经切断立即缝合后大鼠脊髓和背根节(DRG)内不同时间点降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响。成年SD雄性大鼠随机分为NGF组、生理盐水(NS)组、假手术组与正常对照组。实验组动物右侧坐骨神经切断后立即缝合,每天给予NGF(400单位/kg腹腔注射),动物分别存活1、3、5、7、14、21、28d,免疫组织化学方法结合图像分析检测相应节段脊髓和背根节内CGRP的表达。结果表明,NGF处理组术侧背根节与脊髓后角内的CGRP表达明显高于同时间点的NS对照组,平均光密度值相比P<0.05。但各组中脊髓前角运动神经元内的CGRP表达没有明显变化(P>0.05)。结果提示外源性的NGF能明显增加损伤后背根节感觉神经元与损伤侧脊髓后角的CGRP表达,对CGRP在脊髓前角运动神经元内的表达没有明显影响。     

大鼠迷走神经初级传入纤维向孤束核投射的定位、定性研究

为了探索迷走神经向孤束核(NTS)投射纤维的性质及分布特征,本文应用(1) 免疫细胞化学技术对NTS及结状神经节(NG)内ENK、SP、CGRP和VIP等四种活性物质的存在及分布进行了普查;(2) 用HRP跨越神经节追踪技术探索了迷走神经初级传入纤维在NTS内的投射定位;(3) 用HRP逆行标记技术和免疫细胞化学双重标记法结合切断实验印证了NG内神经元向NTS投射的纤维性质。结果证明:NST内含有此四种活性物质的阳性纤维和终末,主要分布于连合核及NTS内侧部,即相当于内侧亚核、中间亚核的区域。NTS中段的尾侧及尾段的吻侧阳性纤维和终末密度最高。此四种活性物质以SP样和L-ENK样阳性成分最为密集,VIP样次之,CGRP样密度最低。NG内亦存在含此四种活性物质的阳性神经元,其中L-ENK样阳性神经元是本文首次发现的,跨节追踪证明的迷走神经初级传入纤维向NTS的投射部位与这四种性质的纤维扣终末密集区大体上一致。逆行追踪与免疫细胞化学相结合的结果证明NG内存在此四种性质的双重标记细胞。切断一侧NG中枢端发现在术侧NTS内此四种活性物质的阳性纤维和终末的密集区都出现“脱落现象”,说明NG内含此四种活性物质的神经元都向NTS投射。     

硫酸软骨素酶ABC对大鼠脊髓损伤修复的影响

为了探讨硫酸软骨素酶ABC对脊髓损伤后损伤局部瘢痕形成和脊髓传导功能修复的影响,本研究首先制作大鼠脊髓全横断损伤动物模型,并将其分为脊髓损伤组(A组)和脊髓损伤治疗组(B组)。在观察期内对动物的行为学表现进行BBB评分;用免疫荧光组织化学方法观察损伤4周后硫酸软骨素酶ABC对损伤局部的硫酸软骨素蛋白聚糖(CSPGs)的裂解作用;用辣根过氧化物酶(HRP)示踪法观察损伤8周后神经纤维的再生情况。结果显示:A组与B组之间动物的行为学评分B组优于A组,有显著性差异(P<0.01);B组动物脊髓内硫酸软骨素蛋白聚糖阳性物质的表达明显低于A组,具有显著性差异(P<0.05),而硫酸软骨素核心蛋白的表达无显著性差异(P>0.05);HRP示踪法显示B组脊髓损伤头端可见少量HRP标记的神经元胞体和纤维。本研究结果提示硫酸软骨素酶ABC能够裂解CSPGs中的葡胺聚糖链,减少瘢痕,促进损伤的神经纤维再生。