螺旋链霉菌U-1941中PKSII型基因在淡青链霉菌tcmK变异株中的克隆(I)

利用螺旋霉素产生菌螺旋链霉菌(S trep tomy ces sp iramy ceticus U-1941)中发现的PK S II型基因,经测序和同源性比较证明在4174bp片段中含有PK S II型K S(K Sα)基因,该基因(pCG 4-K,aspA)由1229bp组成编码432个氨基酸,与产二素链霉菌A lpA和淡青链霉菌T cmK同源性分别为74.4%和69.7%。将含aspA基因的重组质粒pCG 4在四并菌素(tetracenom yc in C)产生菌(S.g laucescens GLA 4-26)tcmK基因缺陷型变异株中进行克隆,TLC分析表明转化子的发酵产物比对照株多一个明显的黄色斑点,该物质经分离、提纯后分析确定为一个含苯式结构的小分子化合物A S-5。     

螺旋链霉菌U-1941中PKSII型基因在淡青链霉菌tcmK变株中克隆(Ⅱ)

将螺旋链霉菌产生菌中的PKSII型KS基因克隆至四并菌素产生菌淡青链霉菌tcmK变株。获得基因克隆转化子，经发酵培养后对转化子发酵产物进行了分离纯化。获得纯品（纯度99％）。经高分辨EI质谱、氢谱以及碳谱分析，确证其分子量为177，分子式C10H11NO2。命名为AS-5。化学名为1-羟基-4-（反式-乙酰胺基-乙烯基）苯。该产物在原株发酵液中不存在，初步抗菌活性检测未发现其具有抗菌活性，但小分子的特点有可能使其成为潜在的先导化合物。     

北里链霉菌(Streptomyces kitasatoensis 2488)启动子和柱晶白霉素抗性基因的克隆

用启动子探针质粒pIJ486作载体,变青链霉菌TK24作受体,克隆来自北里链霉菌SK2488的启动子和柱晶白霉素抗性基因,得到三个转化子其中转化子变青链霉菌TK24(pRL1)中重组质粒插入片段约为10kb,其外源启动活性和柱晶白霉素抗性较低;转化子变青链霉菌TK24(pRL2)中重组质粒插入片段较小,但具有高活性的外源启动子,并有较高的柱晶白霉素抗性;转化子变青链霉菌TK24(pRLX)中未分离得到重组质粒,但它同样具有区别于受体的对新霉素和柱晶白霉素的抗性,而且它在R_2YE平板上能抑制其它转化子生长,其发酵液经薄层层分析发现有不同于供体和受体的新斑点,发酵液经高压液相分析发现有一个吸收峰。但三个转化株发酵液均无抗菌活性,将重组质粒pRL1和pRL2再转化变青链霉菌TK24,抗性稳定。     

在克拉维酸及头霉素C生物合成中的棒状链霉菌变株的分离与生化特性

由棒状链霉菌（Streptomyces clavuligerus)所产生的有效的β-内酰爱酶抑制剂克拉维酸的生物合成，曾经借助于把带标记的前体加至发酵中进行研究，表明β－内酰胺环的3个碳原子（C－5，C－6与C－7），（C3单元）是从丙三醇经由β-羟基丙酸中间体产生的，而克拉维酸的另外5个碳原子（C－2，C－3，C－8，C－9与C－10）（C5单元）则依次由源自精氨酸的鸟氨酸所产生。     

透明颤菌血红蛋白基因(vgb)在那西肽产生菌—活跃链霉菌中的表达

目的将透明颤菌血红蛋白基因(vgb)整合到那西肽产生菌—活跃链霉菌(Streptomyces actuo-sus)的染色体上进行表达,从而提高菌体对溶解氧的利用,提高那西肽的发酵产量。方法采用分子生物学方法构建了携带vgb的重组质粒pZV02,采用接合转移的方法将其导入那西肽产生菌—活跃链霉菌中,采用抗生素抗性标记筛选法获得了基因重组菌株。结果在低溶氧的发酵条件下,重组菌株的那西肽产量显著高于对照菌株。结论 vgb在活跃链霉菌中的表达,可以改善菌体对溶解氧的利用,在低溶氧的条件下可以提高发酵产物那西肽的产量。