苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响

目的探讨苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响及可能机制。方法大鼠行单侧输尿管结扎（UUO）建立肾小管间质纤维化模型。实验分为假手术、UUO及苦参素治疗组。治疗组在UUO的基础上每天以苦参素100mg/kg腹腔注射。各组于术后第7、14、21天分别处死5只大鼠,分别检测大鼠血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）及24h尿蛋白定量。用PAS及Masson染色法观察肾脏病理改变。用免疫组织化学法观察转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad3、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅰ型胶原（ColⅠ）的表达。用RT-PCR法测定肾组织TGF-β1及α-SMA mRNA水平。结果与UUO组比较,苦参素治疗组肾脏TGF-β1、Smad3、α-SMA及ColⅠ的表达明显减少,肾小管损害和肾间质纤维化的程度也明显减轻。治疗组TGF-β1 mRNA及α-SMA mRNA表达显著低于对应时间点的UUO组。结论苦参素可下调TGF-β1、ColⅠ的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化及肌成纤维细胞的活化与增殖,其作用途径可能是通过下调Smad3的表达,从而干预Smad3介导的细胞内信号转导,最终减轻肾间质纤维化。     

“黄芪-丹参”对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化及低氧诱导因子-1α表达的影响

[目的] 通过单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型探讨“黄芪-丹参”对于肾间质纤维化和肾小管上皮细胞转分化（EMT）的作用以及缺氧诱导因子（HIF）-1α表达的影响。[方法] 将大鼠分为假手术组、模型组、芪参低剂量组、芪参中剂量组、芪参高剂量组、氯沙坦组。采用UUO模型并灌胃、取材。Masson染色法观察大鼠肾脏组织病理改变;免疫组化法检测大鼠肾脏组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达;PCR法检测大鼠肾脏组织1型胶原蛋白（Col1）、纤连蛋白（FN）mRNA表达;蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测大鼠肾脏组织HIF-1α蛋白表达。[结果] Masson染色：模型组与假手术组比较,胶原容积升高,差异具有统计学意义（P＜0.001）;芪参中、高剂量与模型组比较出现下降,差异具有统计学意义（P＜0.01）;氯沙坦组与模型组比较下降,差异具有统计学意义（P＜0.001）。免疫组化：大鼠模型组与假手术组比较,α-SMA蛋白表达升高,差异具有统计学意义（P＜0.001）;芪参中、高剂量以及氯沙坦组与模型组比较,α-SMA均下降,差异具有统计学意义（P＜0.01）。实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测：模型组对比假手术组,Col1、FN表达水平升高（P＜0.001）,药物组与模型组比较Col1、FN表达降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。Western Blot检测：模型组与假手术组比较,HIF-1α表达升高,差异具有统计学意义（P＜0.001）;芪参中剂量较模型组有下降,差异具有统计学意义（P＜0.01）。[结论] “黄芪-丹参”药对可以通过抑制细胞外基质的生成以及减轻肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化两个方面延缓肾间质纤维化,其机制可能与抑制HIF-1α表达有关。     

肾病I号方醋酸乙酯提取物对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的 探讨肾病I号方醋酸乙酯提取物（ethyl acetate extract of Shenbingyihao Decoction,EASD）对肾纤维化大鼠转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、洛丁新（洛丁新片1.67 mg/kg）组、肾病I号方（生药18.75 g/kg）组、EASD（EASD,300 mg/kg）组,除假手术组外,其他各组采用单侧输尿管结扎的方法制备单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型。各组ig给药14 d后处死大鼠,采集血清,检测尿素氮（BUN）和血肌酐（Scr）水平,取肾组织行HE和Masson染色评价肾小管间质纤维化损伤程度,采用免疫组织化学染色方法和实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测TGF-β₁、a-SMA蛋白及mRNA的表达情况。结果 与假手术组比较,模型组和3个给药组大鼠血清Scr、BUN升高（P<0.05）,间质纤维化程度加重（P<0.05）,肾组织TGF-β₁、a-SMA表达明显增多（P<0.05）。与模型组比较,3个给药组大鼠的血清Scr、BUN下降（P<0.05）,肾组织TGF-β₁、a-SMA表达下降（P<0.05）。结论 肾病I号方及EASD能够延缓肾纤维化的发生发展,其作用机制可能是通过下调TGF-β₁、a-SMA的表达,从而达到保护肾脏的作用。     

槲皮素对1型糖尿病肾病肾小管上皮细胞间质转分化的作用

[目的] 研究槲皮素在1型糖尿病肾病（T1DN）肾小管上皮细胞间质转分化中的作用。[方法] 30只雄性SD大鼠随机分为3组：对照组、T1DN组和槲皮素组,每组10只。除对照组以外,其他大鼠空腹注射100 mg/kg链脲佐菌素,构建T1DN模型。槲皮素组大鼠灌胃100 mg/kg槲皮素,对照组和T1DN组大鼠灌胃同剂量的生理盐水,每日1次,持续8周。通过Masson和天狼星染色检测肾组织病理学变化;采用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和蛋白质免疫印记法（Western blot）检测肾皮质中转化生长因子-β（TGF-β）/Smad信号通路、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Snail和E-钙黏蛋白（E-cadherin）和基因的表达。[结果] 天狼星染色结果显示,对照组的肾组织结构完整,肾间质未见胶原纤维沉积,T1DN组肾组织结构破坏,间质胶原纤维沉积明显增加,槲皮素改善肾组织损伤,间质胶原纤维减少。Real-time PCR和Western blot结果显示,与对照组比较,T1DN组的TGF-β、Smad2/3、α-SMA、Snail蛋白和mRNA表达显著增加（P<0.05）,E-cadherin的表达显著减少（P<0.05）。与T1DN组比较,槲皮素组的TGF-β、Smad2/3、α-SMA、Snail蛋白和mRNA表达显著降低（P<0.05）,E-cadherin的表达显著增加（P<0.05）。[结论] 槲皮素可能通过降低TGF-β、Smad2/3、α-SMA、Snail的表达,促进E-cadherin的表达,从而抑制肾小管上皮细胞间质转分化和肾间质纤维化的发生发展。     

止消通脉宁对转化生长因子-β_1诱导的人肾小管上皮细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤连蛋白mRNA表达的影响

目的探讨止消通脉宁含药血清对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）Ⅰ型胶原（ColⅠ）、Ⅲ型胶原（ColⅢ）和纤连蛋白（FN）mRNA表达的影响。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12（1∶1）培养基培养,分为空白对照组、TGF-β1诱导组（TGF-β110 ng/mL）、空白血清对照组（TGF-β110 ng/mL＋10%空白血清）、干预1组（TGF-β110 ng/mL＋10%低剂量止消通脉宁含药血清）、干预2组（TGF-β110 ng/mL＋10%中剂量止消通脉宁含药血清）、干预3组（TGF-β110 ng/mL＋10%高剂量止消通脉宁含药血清）。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达。结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达显著上升,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。经止消通脉宁含药血清干预后,其表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。空白血清无此作用。结论止消通脉宁在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化作用。     

水苏碱对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织蛋白激酶R样内质网激酶表达的影响

目的 探讨水苏碱对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）表达的影响。方法 建立单侧输尿管梗阻诱导大鼠肾间质纤维化的动物模型;将大鼠随机分为假手术组,模型组,依那普利组,水苏碱高、中、低剂量组;于术后第14天处死大鼠收集血清测定血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）;采用HE染色观察肾脏的病理改变及评定肾小管损伤指数;Masson染色观察肾间质胶原沉积的面积,判断肾间质纤维化程度;采用免疫组织化学方法检测肾组织中PERK、激活转录因子4（ATF4）、C/EBP 同源蛋白（CHOP）的表达。结果 各治疗组与模型组比较,BUN、Scr均明显降低,肾小管损伤程度明显减轻,肾间质胶原相对面积和PERK、ATF4、CHOP的表达显著降低（P<0.05、0.01）。与依那普利组比较,水苏碱高剂量组的抗肾间质纤维化作用更为显著（P<0.05）。结论 水苏碱能够抑制PERK信号通路介导ATF4蛋白表达水平升高及ATF4激活CHOP的蛋白表达,阻止细胞凋亡,从而减缓了肾间质纤维化的发生和发展。     

抗纤灵二号方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质细胞外基质的调节

目的：通过观察抗纤灵二号方对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质转化生长因子-β1（TGF-β1）、纤维连接蛋白（FN）以及纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）表达的影响,探讨其对细胞外基质（ECM）沉积与降解的调节。方法：建立大鼠UUO模型,90只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、代文组和抗纤灵二号方低、中、高剂量组,于治疗4周后收集24h尿液检测N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）、B2-广微球蛋白（B2-MG）,取术侧肾组织,HE、Masson染色观察肾小管间质病变,免疫组织化学染色观察TGF-β1、FN及PAI-1在。在间质的表达,并应用图像分析系统进行半定量分析。结果：抗纤灵二号方能够显著减少UUO大鼠尿NAG、β2-MG的排泄．减轻肾间质胶原纤维的积聚．降低TGF-β1、FN及PAI-1在肾间质的表达。结论：抗纤灵二号方可能通过减轻肾小管损伤,减少胶原纤维积聚,下调TGF-β1、FN及PAI-1表达,抑制ECM沉积,促进ECM降解,从而达到改善肾间质纤维化的作用。     

大黄（庶虫）虫丸加减对大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制

目的：探讨大黄（庶虫）虫丸加减对梗阻性肾病大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制。方法：采用单侧输尿管结扎（UUO）致大鼠肾间质纤维化模型,将50只SD大鼠随机分为5组,分别为假手术组,模型组,依那普利组（0.001 g·kg^-1）,大黄（庶虫）虫丸加减大、小剂量组（19,9.5 g·kg^-1）。术后第15天处死各组大鼠,收集血清,酶法测定血肌酐（SCr）,尿素氮（BUN）水平,收集24 h尿液,连苯三酚红钼终点法测定24 h尿蛋白量（24 h-Upro）;留取结扎侧肾组织行苏木素-伊红（HE）染色,马松（Masson）染色;采用免疫组化法（IHC）检测转化生长因子-β₁（TGF-β₁）,纤连蛋白（FN）,α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测TGF-β₁,p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）,磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）蛋白表达。结果：与假手术组比较,模型组大鼠24 h-Upro,SCr,BUN含量明显增高（P<0.01）,光镜下肾组织损伤严重,TGF-β₁,FN,α-SMA含量明显升高（P<0.05）,TGF-β₁,p38 MAPK,p-p38 MAPK蛋白表达明显升高（P<0.05）;与模型组比较,大黄（庶虫）虫丸加减大、小剂量组24 h-Upro,SCr,BUN明显降低（P<0.05）,肾脏组织损伤减轻,TGF-β₁,FN,α-SMA含量明显降低（P<0.05）,TGF-β₁,p-p38 MAPK蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论：大黄（庶虫）虫丸加减方可通过降低FN,α-SMA的高表达,下调p38 MAPK信号通路中的p-p38 MAPK,TGF-β₁表达,减少细胞外基质过度沉积和肾脏固有细胞损伤来改善肾间质纤维化。     

益肾降糖饮对糖尿病肾脏病大鼠TGF-β1/SMAD2/3信号通路的调节作用※

目的 观察益肾降糖饮对糖尿病肾脏病（DKD）大鼠TGF-β1/SMAD2/3信号通路的调节作用。方法 随机将30只大鼠分为对照组、模型组、益肾降糖饮低剂量组、益肾降糖饮高剂量组、达格列净组,以柠檬酸缓冲液溶解的1%链脲佐菌素（STZ）经腹腔注射建立DKD大鼠实验模型。经8 w治疗后,检测并比较各实验组大鼠禁食状态下的血糖、24 h尿蛋白、肾组织病理的变化,以及转化生长因子-β1（TGF-β1）/SMAD2/3信号通路、纤维粘连蛋白（FN）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况。结果 与模型组比较,益肾降糖饮低剂量组、益肾降糖饮高剂量组大鼠的肾重指数、空腹血糖、 24 h尿蛋白、TGF-β1、SMAD2/3、纤维粘连蛋白（FN）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达及肾纤维化程度均明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论 益肾降糖饮可通过干预TGF-β1/SMAD2/3信号传导,从而延缓DKD大鼠肾纤维化的进展。     

扶肾方对尿毒症大鼠腹膜间充质TGF-β1、E-cadherin和α-SMA表达的影响

[目的]探讨扶肾方对尿毒症大鼠腹膜间充质转化生长因子-β1（TGF-β1）、E-钙黏素（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响。[方法]采用SD大鼠切除5/6肾脏+1.5%百特腹透液的方法复制大鼠腹膜纤维化模型。扶肾方干预6周后,检测血清学指标肌酐和尿素氮的含量;苏木精-伊红（HE）染色观察腹膜病理改变;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组腹膜间皮标志物E-cadherin和α-SMA的表达;酶联免疫吸附（ELISA）法检测TGF-β1含量的变化。[结果]扶肾方干预后,各组血清肌酐及尿素氮均呈现下降趋势,尤其以高剂量组最为明显（P<0.05）;扶肾方组腹膜间皮细胞变性、脱落,炎症细胞浸润以及血管新生现象明显减少;RT-PCR检测结果显示,模型组E-cadherin较正常组表达下降,差异有统计学意义（P<0.05）,TGF-β1、α-SMA较正常组表达上调,差异有统计学意义（P<0.01）,与模型组相比,扶肾方干预后的各组E-cadherin表达均有所上调,且以高剂量组上调最为明显（P<0.01）;TGF-β1、α-SMA中、高剂量组有统计学差异（P<0.05或P<0.01）,其他组较正常组有下调趋势,低剂量组结果无统计学意义,中、高剂量组结果有统计学差异（P<0.05）。[结论]扶肾方很可能通过抑制TGF-β1,调节E-cadherin和α-SMA表达,从而抑制腹膜间皮细胞间质转化的发生。     

基于AngⅡ/AT1R/NOX4信号通路探讨加味真武汤延缓慢性肾功能衰竭肾间质纤维化机制

目的 通过观察加味真武汤对腺嘌呤诱导慢性肾功能衰竭（CRF）大鼠血清及肾组织中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）、还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶4（NOX4）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、Ⅰ型胶原蛋白（COL1A1）、Ⅲ型胶原蛋白（COL3A1）表达的影响,探讨加味真武汤延缓CRF肾间质纤维化的可能作用机制。方法 将50只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组10只、造模组40只,将大鼠适应性饲养1周后采用腺嘌呤150 mg·kg^-1·d^-1灌胃的方法建立实验性CRF大鼠模型。造模完成后随机选取正常组和造模组大鼠各3只取材,检测造模是否成功。造模成功后,将造模组大鼠按照随机数字表法分成模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、盐酸贝那普利组各6只,进行药物灌胃,每日1次,治疗4周。于实验第1周末、第13周末、第17周末检测24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）,第17周各组大鼠麻醉后取材,腹主动脉取血后离心取上清检测血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清AngⅡ表达水平;苏木素-伊红（HE）、马松（Masson）染色法观察肾组织病理改变;免疫组织化学（IHC）法观察AT1R、NOX4、TGF-β₁、COL1A1、COL3A1表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）观察AT1R、NOX4、TGF-β mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测AT1R、NOX4、TGF-β₁表达水平。结果 ①与正常组比较,模型组实验大鼠24 h-UTP显著增高（P<0.01）;模型组实验大鼠Cr、BUN含量水平显著升高（P<0.01）,TP、ALB含量水平显著降低（P<0.01）;模型组实验大鼠血清AngⅡ含量显著升高（P<0.01）;模型组实验大鼠肾小球球囊间隙明显增宽,可见坏死肾小球,肾间质明显增宽伴有大量炎细胞浸润,大量肾小管管腔有褐色沉淀物阻塞,无规整肾小管,肾间质有大量胶原纤维沉积,肾脏血管周围、肾小囊壁层囊壁外、肾小球基底膜和肾小管基底膜胶原纤维明显增多;模型组实验大鼠AT1R、NOX4在肾小球、肾小管表达明显增强,TGF-β₁在肾小管表达明显增强,COL1A1、COL3A1在肾间质表达明显增强;模型组实验大鼠AT1R、TGF-β₁ mRNA表达显著增强（P<0.01）,NOX4 mRNA表达显著减弱（P<0.01）;AT1R、NOX4、TGF-β₁蛋白表达显著增强（P<0.01）。②与模型组比较,加味真武汤干预后,24 h-UTP显著降低（P<0.01）;Cr、BUN含量水平显著降低（P<0.01）,TP、ALB含量水平显著升高（P<0.01）;AngⅡ含量显著下降（P<0.01）;肾脏病理损害减轻;AT1R、NOX4、TGF-β₁、COL1A1、COL3A1在肾小球、肾小管、肾间质达减弱;AT1R、TGF-β₁ mRNA表达显著下降（P<0.01）,NOX4 mRNA表达显著升高（P<0.01）;AT1R、NOX4、TGF-β₁蛋白表达显著减弱（P<0.01）;中药组表现出明显的量效趋势。结论 加味真武汤可能通过降低CRF大鼠血清及肾组织中AngⅡ、AT1R、NOX4、TGF-β₁表达,延缓肾间质纤维化进展,从而减轻肾脏病理损害,减少蛋白尿,保护肾功能,达到延缓CRF进展的目的,且中药组具有量效趋势。     

黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子β1表达的影响

目的:动态观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾小管间质纤维化的拮抗作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响,初步探讨其可能的分子作用机制.方法:SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组和黄芪治疗组.在造模后3,7,14 d处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化方法检测肾组织中TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠TGF-β1 mRNA和α-SMA mRNA表达量.用westem blot检测大鼠TGF-β1蛋白表达量.结果:与假手术组相比,各时间点的UUO大鼠肾脏病理损害进行性加重,TGF-β1和α-SMA mRNA和蛋白表达随梗阻时间延长逐渐增高:黄芪治疗后可明显减轻UUO大鼠肾组织的肾小管损伤及.肾间质纤维化,使UUO大鼠肾组织中高表达的TGF-β1和α-SMA降低(p<0.05).结论:黄芪可能通过从核酸和蛋白水平抑制TGF-β1的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化,减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化.     

益肾健脾泻浊中药对慢性肾脏病妊娠大鼠肾脏NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路及细胞焦亡的影响＊

目的 观察益肾健脾泻浊中药对慢性肾脏病妊娠大鼠肾脏NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路及细胞焦亡的影响。方法 将雌性Wistar大鼠随机分为6组，分别为对照组（Sham）、对照组 + 妊娠组（SP）、单侧输尿管结扎组（UUO）、UUO + 妊娠组（UP）、UUO + 妊娠 + 益肾健脾泻浊中药组（TCM）、UUO + 妊娠 + 依普利酮组（EPL）。UUO各组采用结扎单侧输尿管的方法复制慢性肾病模型，治疗组分别给予依普利酮100 mg?（kg?天）^-1和益肾健脾泻浊方3.11 g?（kg?天）^-1治疗。8周后妊娠各组大鼠按动情周期与雄鼠合笼，妊娠第19天处死母鼠。检测各组肾功能，醛固酮含量，采用SABC法及Western blot法检测核因子κB（Nuclear factor-kappa B，NF-κB）、核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3 NOD［nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3］、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白1［Caspase-1］、白介素1β（Interleukine-1 beta，IL-1β）的表达，TUNEL法检测肾细胞DNA损伤情况。结果 与UUO组比较，UP组血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）和24 h尿蛋白及醛固酮含量较Sham组显著升高（P < 0.05），治疗后，两给药组Scr、BUN、24 h尿蛋白、醛固酮显著降低（P < 0.05）。与Sham组比较，SP组大鼠肾组织NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达明显升高（P < 0.05），TUNEL阳性细胞少量增加（P < 0.05）。NLRP3炎症小体主要表达于浸润巨噬细胞及肾小管上皮细胞；Caspase-1和IL-1β主要表达于肾小管上皮细胞胞浆；TUNEL阳性细胞主要见于远端小管上皮细胞。与UUO组比较，UP组大鼠肾组织NF-κB、NLRP3、Pro-caspase-1、Caspase-1、Pro-IL-1β、IL-1β指标表达也明显升高（P < 0.05），TUNEL阳性细胞明显增多（P < 0.05）。与UP组比较，EPL、TCM组大鼠肾组织上述指标表达明显降低（P < 0.05），TUNEL阳性细胞明显减少（P < 0.05）。两个给药组间各项指标无明显差异。结论 益肾健脾泻浊方及依普利酮可缓解慢性肾病妊娠大鼠肾脏炎症损伤，下调肾脏NLRP3炎症小体信号通路分子表达，从而抑制细胞焦亡，减轻肾脏炎症损伤。     

大黄泄浊方调控ROS/TXNIP/NLRP3通路对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的影响

目的 通过观察大黄泄浊方对5/6肾切除大鼠肾脏病理变化，肾组织活性氧（ROS）/硫氧还蛋白互作蛋白（TXNIP）/NOD样受体蛋白3（NLRP3）通路表达的变化，研究其保护肾功能，延缓肾间质纤维化的作用机制及可能性。方法 90只健康SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、大黄泄浊方低、中、高剂量（6.825、13.65、27.30 g·kg^-1）组和尿毒清颗粒（2.60 g·kg^-1）组。除假手术组外其余5组均采用5/6肾切除术复制CRF大鼠模型。造模成功后，各给药组分别给予相应剂量的药物混悬液灌胃，每日1次，连续8周。给药结束后，检测大鼠血清中肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）水平和24 h尿蛋白定量（UTP）水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测硫氧还蛋白（TRX）、TXNIP和NLRP3蛋白的表达情况；免疫组化法检测NLRP3、TRX、TXNIP、接头蛋白凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、转化生长因子-β（TGF-β）、Ⅳ型胶原蛋白（Collagen Ⅳ）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和调纤连蛋白（FN）的表达。结果 与假手术组比较，模型组大鼠血SCr、BUN、24 h UTP水平明显增高（P<0.05），TRX、TXNIP、NLRP3、ASC、TGF-β、Collagen Ⅳ、α-SMA和FN蛋白显著增高（P<0.01），肾间质发生显著纤维化；与模型组比较，大黄泄浊方各剂量组和尿毒清颗粒组血SCr、BUN、24 h UTP水平均有不同程度降低（P<0.05），TRX、TXNIP、NLRP3、ASC、TGF-β、Collagen Ⅳ、α-SMA和FN蛋白显著降低（P<0.01），肾间质纤维化不同程度改善。结论 大黄泄浊方可保护慢性肾衰竭大鼠肾功能、延缓肾间质纤维化。     

红花黄色素对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化的影响

目的：探讨红花黄色素对大鼠肾间质纤维化的影响。方法：将40只SD雄性大鼠随机分为假手术（SO）组、单侧输尿管梗阻（UUO） 组、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂厄贝沙坦组（IRB组） 和红花黄色素组（SY组） 。大鼠肾组织行苏木精-伊红和Masson染色,计算肾间质纤维化的相对面积。免疫组化技术检测I型胶原（Col I）和纤维连接蛋白（FN）在肾组织中的表达。结果：SY治疗组和IRB治疗组能有效改善UUO大鼠的肾脏间质纤维化,SY组和IRB组中各时间点Col I和FN蛋白的表达均低于UUO组（P0.05）。结论：红花黄色素可减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度,延缓肾脏间质纤维化。     

培元固肾方含药血清对已转染HBV质粒的HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、E-cadherin蛋白的影响

[目的] 通过培元固肾方含药血清对已转染乙型肝炎病毒（HBV）质粒的人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2细胞）的干预,观察其对转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-cadherin蛋白表达的影响,探讨培元固肾方抗肾间质纤维化的作用机制。[方法] 体外培养HK-2细胞,应用脂质体转染法,将扩增、鉴定后的质粒转染至HK-2细胞。将细胞分为7组,分别为：Mock组（常规培养的HK-2细胞组）;Control组（转染空载质粒pHY106的HK-2细胞组）;HBV组（转染空质粒与HBV复合物（PHY106-HBV）的HK-2细胞组）;HBV+ACEI组（贝那普利组）;HBV+PYGS Low组（培元固肾方低剂量组）;HBV+PYGS Middle组（培元固肾方中剂量组）;HBV+PYGS High组（培元固肾方高剂量组）,实验分3个独立样本（n=3）。经HBV转染6 h后,予各组相应的药物进行干预。药物干预48 h后,应用酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测各组细胞裂解液中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）及TGF-β1的表达量;应用免疫细胞化学法检测α-SMA、E-cadherin的表达。[结果] 培元固肾方各干预组对TGF-β1表达均有下调（P<0.001）,对α-SMA蛋白表达明显下调,差异有统计学意义（P<0.001）,对E-Cadherin蛋白表达上调,差异有统计学意义（P<0.05）。[结论] 培元固肾方可能通过抑制促纤维化因子TGF-β1的表达抑制乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV-GN）肾小管上皮细胞的表型转化,对上皮细胞标志性蛋白E-cadherin的表达具有上调作用,对肌成纤维细胞标记蛋白α-SMA的表达具有下调作用,从而防治HBV-GN肾小管间质纤维化。     

怡肾丸Ⅰ号对单侧输尿管梗阻大鼠生化指标及FN、ColⅣ的影响

目的:观察怡肾丸Ⅰ号对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠生化指标及纤维结合蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的影响。方法:将50只UUO SD大鼠按照完全随机的方法分为空白组、假手术组、模型组、怡肾丸组和依那普利组,分别干预14d后,观察各组大鼠的肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿蛋白定量及FN、ColⅣ改变情况。结果:与模型组比较,各组大鼠的生化指标及FN、ColⅣ均明显降低(P0.05),怡肾丸组对大鼠肌酐、尿蛋白定量优于依那普利组(P0.05)。结论:怡肾丸Ⅰ号对UUO大鼠的Scr、BUN、尿蛋白定量及FN、ColⅣ有明确改善作用。     

加味真武汤对肾间质纤维化大鼠TGF-β及FN表达的影响

目的: 探讨加味真武汤对肾间质纤维化大鼠转化生长因子(TGF-β)及纤维连接蛋白(FN)表达的影响。 方法: 大鼠随机分为假手术组、模型组及治疗组,采用单侧输尿管梗阻(UUO)模型,术后7,14,21 d分别处死大鼠,测定肾脏指数、血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN);肾组织HE及Masson染色,观察肾脏病变;免疫组化法比较各组TGF-β及FN的表达。 结果: 术后随时间的延长,模型组和治疗组大鼠可见明显的肾间质纤维化改变,肾间质TGF-β,FN的表达明显高于假手术组(P<0.05)。治疗组大鼠肾间质纤维化程度及TGF-β,FN的表达均低于模型组(P<0.05)。 结论: 加味真武汤可降低UUO模型大鼠血Cr,BUN水平,抑制TGF-β表达,减少FN形成,对肾间质纤维化有积极的治疗意义。     

广防己提取物致大鼠慢性肾间质纤维化的机制研究

目的：探讨广防己提取物（RAFE）所致的大鼠慢性肾间质纤维化的作用机制。 方法：用广防己提取物（200 mg·kg^-1·d^-1）和马兜铃酸（AA,10.0 mg·kg^-1·d^-1）给予大鼠间断灌胃22周,造成大鼠慢性间质纤维化模型,通过免疫组化方法观察肾小管上皮细胞转分化标志性蛋白角蛋白(CK)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白(Vimentin)以及致纤维化因子-转化生长因子（TGF-β₁）在大鼠肾小管间质的表达。 结果：经图像分析, RAFE和AA组肾小管上皮细胞CK较对照组表达减弱,而α-SMA在肾小管上皮细胞及肾间质细胞呈弱阳性表达、Vimentin表达较对照组明显增多；同时RAFE和AA组大鼠肾小管TGF-β₁表达较对照组明显增多,各项指标统计学均有显著性差异。 结论：RAFE参与了肾小管上皮细胞转分化,促进了大鼠慢性肾小管上皮纤维化的发生,其中TGF-β₁对肾小管上皮细胞转分化起到重要作用。RAFE所致大鼠慢性肾小管上皮细胞转分化机制与AA作用相似。     

黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:动态观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响,初步探讨其抗纤维化分子作用机制.方法:SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、UUO组和UUO AM治疗组(AM组).在造模后7、14天处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化方法检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)和胶原Ⅰ(col Ⅰ)表达.用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠α-SMA mRNA表达量.用Westemblot检测大鼠α-SMA蛋白表达量.结果:与假手术组相比,UUO术后大鼠肾脏病理损害进行性加重,α-SMA、FN和col Ⅰ表达显著增高(P<0.05);AM治疗后可明显减轻UUO大鼠肾组织的肾小管损伤及肾间质纤维化,使UUO大鼠肾组织中高表达的α-SMA、FN和col Ⅰ明显降低(P<0.05).结论:黄芪可能通过抑制肾小管上皮细胞转分化,减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化.