抑制补体对内毒素致急性肺损伤的保护作用

目的 探讨抑制补体对内毒素致急性肺损伤的保护作用.方法 采用眼镜蛇毒因子(CVF)去除补体.以脂多糖(LPS)造成大鼠急性肺损伤.将40只健康雄性SD大鼠随机分为LPS损伤组、3个不同时间CVF组和生理盐水对照组.通过大鼠尾静脉注射5 mg/kg LPS,造成急性肺损伤模型.CVF组于注射LPS 前24 h,通过尾静脉注射50 u/kg CVF去除补体.在给予LPS后分别于0.5、2、4 h采集标本.分别测定各组血清补体活性和蛋白含量、肺泡灌洗液(BALF)中蛋白、TNF-α、IL-8、ICAM-1含量及多形核白细胞(PMN)比、计算肺通透指数(LPI )、测定肺湿/干质量比、检查肺组织病理学变化情况等.结果 LPS组肺间质水肿、出血,大量炎性细胞浸润,而CVF组肺组织损伤明显轻于LPS组; CVF组肺湿/干质量比、LPI、PMN比均明显低于LPS组(P<0.05),与对照组比较差异无统计学意义.而CVF各组BALF 中TNF-α、IL-8、ICAM-1浓度均低于LPS组,但差异无统计学意义.结论 补体在内毒素致急性肺损伤早期具有重要作用,抑制补体可以有效减轻肺组织损伤,减少肺组织液渗出和中性粒细胞聚集.     

补体激活对内皮细胞分泌组织型纤溶酶原激活物的影响

目的探讨眼镜蛇毒因子（CVF）激活补体对内皮细胞（Ec）分泌组织型纤溶酶原激活物（t-PA）的影响。方法EC用CVF加入新鲜血清分别处理0小时（对照组）、2小时（实验组Ⅰ）、4小时（实验组Ⅱ）和6小时（实验组Ⅲ）后，再继续培养，用发色底物$2390检测法测定培养液中t—PA的活性。结果CVF加入新鲜血清处理时间越长，培养液中t—PA的活性越低。结论CVF激活补体可引起ECt—PA的分泌减少。     

补体系统激活对兔出血性脑水肿的影响

目的:研究补体激活对兔脑出血性脑水肿的影响.方法:制造兔脑出血模型,随机分为实验组、对照组.实验组注射眼镜毒蛇因子,检测脑组织水含量及不同时点血浆补体C3、神经元特异性烯醇化酶、肿瘤坏死因子浓度,结果与对照组比较.结果:实验组与对照组48 h后脑组织水含量分别为(80.19±0.54)、(79.57±0.44).脑组织水含量、补体C3、神经元特异性烯醇化酶、肿瘤坏死因子浓度两组比较差异有显著性(P＜0.05).结论:脑出血后补体系统激活加重了脑水肿.     

抑制补体激活对脓毒症大鼠肺组织的作用研究

目的观察补体抑制剂眼镜蛇毒因子（CVF）抑制补体激活对脓毒症大鼠肺组织的作用。方法14．4只清洁级雄性SD大鼠（体质量250-300g）被随机分为A、B、C3组，每组48只。A组（假手术组）仅开腹翻动盲肠后关腹，B组（脓毒症组）采用盲肠结扎穿孔术（CLP）复制脓毒症大鼠模型，C组（CVF组）在CLP前24h按50μg／kg注射CVF以耗竭补体，而A组和B组则在术前24h给予等量生理盐水。术后2、4、8、12、16、24h6个时间点处死动物后大体观察各组大鼠肺脏及胸腔积液变化，并采集肺组织标本检测肺组织MPO水平，同时观察肺组织病理学及超微结构变化。结果B组可见肺组织实变区及胸腔积液情况随时间增长逐渐加重，C组明显减轻，A组没有相关表现。A组肺组织MPO水平术后一直处于较低水平，而B组和C组则迅速升高，除2h外，其余时间点均显著高于A组（P〈0.05或P〈0.01），但C组显著低于B组（P〈0．05或P〈0.01）。肺组织病理学及超微结构变化提示B组损伤最严重，C组明显减轻。结论补体抑制剂CVF可以明显减少中性粒细胞在肺内的聚集，并有效减轻脓毒症大鼠的肺损伤，显示出对肺组织良好的保护作用。     

激活补体引起离体豚鼠工作心脏的损伤及CD59的保护作用

目的：探讨激活补体是否会引起心肌缺血损伤，以及膜结合型补体调节蛋白ＣＤ５９对补体引起的心肌缺血损伤有无保护作用。方法：１８只豚鼠离体工作心脏随机分为：Ａ组（对照组），在灌注液中加入体积分数为３％灭活人血浆＋酵母多糖；Ｂ组，在灌注液中加入３％人血浆＋酵母多糖；Ｃ组：在灌注液中加入ＣＤ５９（４５０μｇ）＋３％人血浆＋酵母多糖。记录各组处理前及处理后１５、３０、４５和６０ｍｉｎ的心外膜心电图ＳＴ段变化、     

某些中药成分对豚鼠补体及经CVF处理的豚鼠补体活性的影响

该文研究人参茎叶多糖、田七多糖、绞股兰皂甙、白花蛇舌草煎液对补体及经CVF处理的豚鼠补体活性的影响,发现上述中药成分对正常豚鼠补体水平无明显影响,但对经CVF处理后的豚鼠低补体状态在连续给药5～8天后有一定促进恢复作用。给豚鼠腹腔注射50μg/kg的CVF,CH_(50)下降94％～97％,12天后才恢复正常。此时再次给予同样剂量的CVF,几乎不能再产生降补体作用,可能是由于已产生CVF抗体的缘故。用CVF造成动物低补体状态以研究某些中药成分的药理作用是一新的尝试。     

眼镜蛇毒因子对脓毒症大鼠心肌组织的保护作用

目的:观察补体抑制剂眼镜蛇毒因子(CVF)对脓毒症大鼠心肌组织的保护作用。方法:144只清洁级雄性SD大鼠(体质量250～300 g)被随机分为大鼠假手术组(A组)、脓毒症组(B组)、CVF组(C组)3组,每组48只。A组仅开腹翻动盲肠后关腹并复苏,B组和C组均行经典盲肠结扎穿孔(CLP)制作成脓毒症模型。C组于术前24 h给药,A组和B组则给予等量0.9%氯化钠溶液;各组按照标本采集点的不同又分为术后2、8、16、24 h时间点检测血清补体C3水平、心肌组织髓过氧化物酶(MPO)的变化及观察各组大鼠心肌组织病理学改变。结果:①B组术后血清补体C3浓度最高,C组最低(P<0.05),且一直维持较低水平;②在8、16和24 h时C组MPO活性较B组显著下降(P<0.05),其中以术后16 h最为明显;③C组不同时点心肌损伤均较B组有所减轻,三组不同时间点的差异以术后16 h最为明显。结论:CVF可以明显减少血清补体C3及MPO水平,并有效减轻脓毒症大鼠的心肌损伤,显示出对心肌组织良好的保护作用。     

激活补体引起离体豚鼠工作心脏的损伤及CD59的保护作用

【目的】探讨激活补体是否会引起心肌缺血损伤 ,以及膜结合型补体调节蛋白CD59对补体引起的心肌缺血损伤有无保护作用。【方法】 18只豚鼠离体工作心脏随机分为 :A组 (对照组 ) ,在灌注液中加入体积分数为 3%灭活人血浆 酵母多糖 ;B组 ,在灌注液中加入 3%人血浆 酵母多糖 ;C组 :在灌注液中加入CD59(45 0 μg) 3%人血浆 酵母多糖。记录各组处理前及处理后 15、30、45和 6 0min的心外膜心电图ST段变化、冠脉流量 (CF)、心输出量 (CO)、左心室最大内压 (LVPmax)、左心室内压最大上升速率 (dp/dtmax)和心率 (HR)。【结果】A组处理前后各项观察指标无明显变化 ;B组在接受处理后心外膜心电图出现ST段抬高、HR增加 ,CF、CO、LVPmax和dp/dtmax均下降 ,这些变化以处理后 45min最明显 ;C组除处理后 45～ 6 0min时心率稍增快外 ,其余指标处理前后无明显变化。【结论】　激活补体可直接引起豚鼠工作心脏心肌缺血损伤 ,CD59对补体介导的心肌缺血损伤有保护作用。     

补体激活对创伤失血性休克大鼠血浆内毒素含量的影响

目的观察补体激活对创伤失血性休克大鼠血浆内毒素含量的影响。方法雄性SD大鼠建立创伤失血性休克模型，随机分成对照组和眼镜蛇毒因子（CVF）组，根据观察时间点的不同各组再分为休克前，复苏后1、6、24h时相组。结果对照组大鼠复苏后1h血CH50水平迅速下降，血LPS浓度、TNF—α水平均明显升高，随后二个时间点快速恢复至休克前水平；DAO活性在复苏后1h和6h明显升高，然后快速下降。CVF组大鼠除CH50水平始终〈5％．其余各指标复苏后1h仅略升高，其复苏后各时相组均较埘照组相应时相组明显降低。结论创伤失血性休克大鼠补体早期激活，其可能通过损伤肠道使内毒素移位导致血浆LPS含量增加。     

CVF在大鼠移植心脏缺血再灌注损伤中的保护作用研究

目的 研究中华眼镜蛇毒因子(cobra venom factor, CVF)对同种大鼠移植心脏缺血再灌注损伤的保护作用机制.方法 近交系雄性B/N大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,建立腹腔异位心脏移植模型.实验组术前给予CVF尾静脉注射,观察移植心的存活时间,并设B/N大鼠同系对照组.免疫组化法测定各组术后第1、3、5 天移植心脏的C3沉积,并观察移植心的病理变化.结果 接受CVF 20 μg/kg,2 d 1次,尾静脉给药的大鼠,移植心存活时间明显延长,平均达(11.69±0.72)d,而对照组为(6.65±0.35)d(P＜0.01),组织内C3沉积较对照组同期明显减轻,病理损害程度减轻,优于同期对照组.结论 CVF消耗补体显著延长移植心脏存活时间,能明显减轻近交系大鼠移植心脏缺血再灌注损伤.     

补体介导出血性脑损伤机制及CVF干预的实验研究

目的研究补体成分C9、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在大鼠实验性脑出血后血肿周围的表达情况,探讨C9、TNF-α在脑出血后脑水肿中的作用及应用眼镜蛇毒因子(CVF)干预后的影响。方法采用立体定向技术,将自体不凝血注入大鼠尾状核制备脑出血模型,将动物分为假手术组、出血组和CVF干预组,分别在不同时间断头取脑,连续切片作C9、TNF-α免疫组化染色和HE染色,并进行脑组织含水量测定(干湿重法)。结果脑出血后2h开始表达C9,24 h达高峰;TNF-α24 h表达明显增加,48 h达高峰,各组与假手术组之间比较有差异(P<0.05);TNF-α的表达与C9的表达呈正相关关系(r=0.833,P<0.05);血肿周围脑组织含水量在ICH后2 h开始增加,24~72 h达高峰(P<0.01),此后逐渐回落,1周基本恢复正常水平,对侧半球相应部位及假手术对照组脑组织含水量没有明显变化;经CVF干预后,血肿周围组织C9、TNF-α表达量明显下降,干预组与出血组之间比较有显著差异(P<0.01)。CVF干预组脑组织含水量明显低于常规ICH组(P<0.01)。结论脑出血后补体级联激活C9及TNF-α表达明显增加,CVF干预后,C9及TNF-α表达下降,脑水肿减轻,能达到神经保护作用。     

阿托伐他汀钙对过氧化氢致内皮细胞损伤的保护作用

目的研究阿托伐他汀钙对过氧化氢(H2O2)致人微血管内皮细胞HMEC损伤的保护作用。方法采用H2O2损伤HMEC,研究阿托伐他汀钙对H2O2损伤的保护作用。用倒置相差显微镜观察细胞形态,采用酶活性测定法检测细胞培养上清中的乳酸脱氢酶(LDH),用ELISA法检测培养上清中ICAM-1及P-selectin的含量,MTT法检测细胞活力。结果 H2O2刺激HMEC后,细胞形态明显改变,细胞收缩,间隙变大;LDH释放明显增加(P<0.01);细胞活力明显降低(P<0.01)。用阿托伐他汀钙预处理后,细胞形态改变明显减轻,LDH释放降低(P<0.01),细胞活力增加(P<0.05)。结论阿托伐他汀钙对H2O2所致的内皮细胞损伤有保护作用。     

补体C3mRNA在大鼠脑出血模型中的表达及眼镜蛇毒因子对其表达的影响

目的 探讨补体C3在实验性大鼠脑出血(CH)急性期的作用机制,研究补体C3在CH后脑水肿中的作用以及应用眼镜蛇毒因子(CVF)干预后对血肿周围组织C3mRNA表达及脑组织含水量的影响.方法 采用立体定向技术,将自体不凝血注入大鼠尾状核制备CH 模型,将雌雄各半SD大鼠分为假手术组、常规CH组和CVF干预组,于制模后3 h、6 h、12 h、1 d、3 d、5 d 和7 d 7个时间点处死动物,用干湿重法测量脑含水量(BWC); RT-PCR法检测补体C3mRNA的表达水平.结果 CH后C3mRNA表达从6 h开始出现增强,3 d时达高峰,血肿周围脑组织含水量在CH后3 h开始增加,3 d时达高峰(P＜0.05),此后逐渐回落,7 d时基本恢复正常水平,脑组织含水量与C3mRNA的表达呈正相关(r=0.758,P＜0.05);经CVF干预后,血肿周围组织C3mRNA表达明显下降,干预组与常规CH组之间比较差异有统计学意义(P＜0.05).CVF干预组脑组织含水量明显低于常规CH组(P＜0.05).结论 脑出血后补体系统激活,C3mRNA表达明显增加,通过CVF干预后,C3mRNA表达下降,脑水肿减轻,能达到神经保护作用.     

补体激活在中枢神经系统损伤中的作用

补体系统是机体固有免疫系统的重要组成部分,中枢神经系统的神经元、星形胶质细胞及小胶质细胞可以产生几乎所有的补体系统组分,表达各种补体受体.神经科学研究发现,补体系统在中枢神经系统正常功能及一些疾病中都有重要的作用.补体广泛参与神经系统的发育、突触消除、神经网络的成熟等生理过程.在各种中枢神经系统损伤中,包括脑或脊髓外伤性损伤、脑或脊髓缺血再灌注损伤,补体也参与其病理进程.很多研究表明在发生神经系统损伤时,抑制补体激活具有神经保护作用,这也为预防和治疗中枢神经系统损伤提供了新的思路.     

眼镜蛇毒因子对兔出血性脑水肿影响的实验研究

目的 研究眼镜蛇毒因子（CVF）激活补体系统,对兔脑出血后脑水肿及肿瘤坏死因子（TNF-α）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）的影响.方法 56只日本大耳兔随机分为4组,实验组兔按0.5mg/kg腹腔内注射含CVF的0.9%氯化钠溶液约5ml,对照组兔腹腔注射5m10.9%氯化钠溶液.再设空白组、标准组.4组不同时间点检测血浆补体C3、TNF-α、NSE浓度,以脑（湿-干）/湿检测脑水的含量.结果 兔血浆中补体C3、NSE、TNF浓度,在4组间、组内各时点间比较差异有统计学意义（P〈0.05）.左大脑（湿-干）/湿比重：实验组（80.19±0.54）%,对照组（79.57±0.44）%,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 CVF能有效激活并耗竭补体,补体系统过度激活加重脑水肿的发生.脑出血急性期TNF-α、NSE升高的峰值与脑损伤、脑水肿严重程度可能存在某种联系,TNF-α、NSE水平可在一定程度上可反应脑损伤和脑水肿情况.     

血糖波动致内皮细胞损伤机制及绿茶对内皮细胞的保护作用

糖尿病并发症危害严重,内皮细胞功能障碍可导致其血管并发症的发生。而波动性高血糖比持续性高血糖更能导致内皮损伤。相对于持续性高血糖来说,在血糖波动中,Toll样受体4、蛋白激酶C、c-Jun氨基末端激酶高表达,下游的核因子κB、p53及血管内皮细胞黏附分子等高表达,一氧化氮通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B途径合成减少。绿茶在内皮细胞保护方面研究众多,在防治血糖波动带来的内皮细胞损伤方面有着巨大的潜力。     

草麻黄抗补体组份对血小板变形及内皮细胞损伤作用

目的从草麻黄中分离抗补体组份并观察其抗补体依赖性的损伤作用。方法采用柱层析结合紫外吸收观察的方法分离抗补体组份;采用比浊法观察组份对眼镜蛇毒因子引起的血小板变形的影响;采用MTT法观察组份对异种血清对内皮细胞损伤的影响。结果紫外吸收为196nm的组份具有抗补体作用,麻黄组份能有效抑制眼镜蛇毒因子引起的血小板变形,高、中、低剂量对血小板变形的抑制率分别为49．8％±10．7％、32．8％±4．2％、22．5％±6．2％;麻黄组份能有效减轻异种血清对内皮细胞的损伤,高、中、低剂量对补体致内皮细胞损伤抑制率分别为88．1％±7．1％、79．8％±3．3％、65．0％±4．5％。结论麻黄抗补体组份对补体依赖性损伤有保护作用。     

补体对内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1的影响

目的：为了探讨旁路活化补体能否诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECS）表达单核细胞趋化蛋白1（MCP－1）以及核转录因子kappa B(nF-kB）的调控作用。方法：采用酵母多糖活化人血清（ZAHS）补体直接作用于体外培养的HUVECS单层后，①ELISA法检测MCP－1的表达水平，用原位杂交（ISH）检测胸浆中mRNA水平。②凝胶电泳迁移率（EMSA）方法测定NF－kB的活化。结果：①ZAHS（140μ1／孔）能诱导HUVECS表达MCP－1，表达水平从8小时开始有显增加。ZAHS作用6小时，HUVECS胸浆中MCP－1 mRNA含量明显增加；②ZAHS能激活NF－kB，30分钟时即有活化，60分钟明显增加，120分钟达到高峰；③对照组的HUVECS表达MCP－1水平及胸浆中MCP－1 mRNA含量均明显降低（P＜0.01）；④NF－kB抑制剂PDTC（20μmol/L）预先处理HUVECS单层2小时，可以明显降低MCP－1的表达（P＜0.05）。结论：旁路活化补体能直接在转录水平上诱导HUVECS表达MCP－1，这一过程可能通过NF－kB的活化来调控的。     

L-NAME对内毒素致大鼠肺动脉内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨左旋硝基精氨酸甲酯（L—NAME）是否对内毒素脂多糖（LPS）导致的大鼠肺动脉内皮细胞（RPAECs）损伤具有保护作用。方法利用大鼠肺动脉组织块贴壁法进行细胞原代培养。通过形态观察和Ⅷ因子相关抗原抗血清间接免疫荧光染色对细胞进行鉴定。将细胞分组，LPS、L—NAME与细胞共育24小时，检测各组细胞及培养上清中的硝基酪氨酸阳性细胞百分比（NT％）和乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、内皮素-1（ET-1）的含量。结果L—NAME组中LDH（2237．04±50．32，2104．26±58．57）、MDA（8．36±0．25，7．26±0.24）比LPS组LDH（2553．01±55．75）、MDA（10．95±0．33）明显降低（P〈0．05），SOD（41．09±2．20，50．76±2．66）较LPS组SOD（33．16±2．9）明显升高（P〈0．05），NT％（33．7±1．94％，28．88±1．73％）与LPS组（40．28±2．3％）相比显著下降（P〈0．05），ET-1为（417．98±21．44，467．8±17．94Pg／ml，505．88±20pg／m1）与LPS组ET-1（391．67±14．62pg／m1）相比明显升高（P〈0．05）。结论L—NAME可能通过抗氧化作用来保护大鼠肺动脉内皮细胞。但是L—NAME升高细胞培养上清中的ET-1，单独用药可能导致肺动脉压力的增高。