支气管哮喘患者白细胞介素-4近侧启动子区克隆和序列分析

目的 探讨哮喘患者白细胞介素-4（IL-4）过度表达的可能调控机制。方法 选取4例有明显家族史的过敏性哮喘患儿和1例正常儿童,采用聚合酶链反应（PCR）扩增IL-4近侧启动子片段,PCR产物经XbaI、HindⅢ限制性内切酶进行双酶切后,回收酶切片段,再与经过相同双酶切的载体Jx2相连接,制备重组质粒,然后经转化、筛选、酶切鉴定得到重组质粒pIL-4-Jx2,最后采用双脱氧终止法对重组质粒进行序列测定。结果 （1）正常儿童IL-4近侧启动子序列与基因库序列相同。（2）1例患儿-229位C被A所替代。该变异恰好位于正性调节元件-I之内,结论 过敏性哮喘患者IL-4近侧启动子区DNA片段被成功克隆,并发现1例患者IL-4调控元件内一未曾报道过的变异位点,这有助于对哮喘者IL-4基因异常表达调控机制的研究。     

发光分析法检测人白细胞介素-2

目的 采用夹心法建立一种发光免疫分析方法,用于检测人白细胞介素－２（ｈＩＬ－２）。方法 根据样品中的发光值,用内插法在标准曲线上查得相应的ｈＩＬ－２的浓度。结果 发光免疫分析法的灵敏度为１５ｎｇ／Ｌ。批内和批间误差分别小于９％和１０％。结论 此方法能快速、稳定、灵敏、特异地检出血浆、体液和细胞培养液中ｈＩＬ－２。     

白细胞介素18及其生物学活性

细胞因子在机体免疫应答、免疫调节以及多种免疫相关疾病的发生、发展、转归中起着非常主要的作用。过去发现IL－12是一个根主要的细胞调节分子,能诱导静止期和活化期T细胞产生IFN一人在T细胞向人1分化过程中发挥了重要作用。最近又发现另一种新的细胞调节因子IL－18是从小鼠及人的肝细胞中克隆到的一种新的细胞因子,经ICE（IL－lpenvertingmp）水解去除其前体蛋白N端的前导序列而被活化,它与IL－12有相似的生物学活性,显著刺激TH细胞产生IFN－y,而且活性比IL－12要高,并能促进IL－2、GM－CSF等细胞因子的产生,增强NK…     

人白细胞介素16的基因克隆及其表达载体的构建

目的通过从人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆编码人IL-16的cDNA基因,构建人IL-16的原核高效表达系统。方法从组胺刺激的正常人外周血单个核细胞中分离总RNA,利用半巢式RT-PCR、T-A克隆等技术得到特异的cDNA片段;将含有IL-16 cDNA的质粒IL-16-PUC18和原核表达载体PMAL-C2经酶切、目的DNA片段的分离、重组连接、筛选、序列分析等系列操作,获得重组质粒PMAI-C2-IL-16,将重组质粒转化至大肠杆菌DH5α,用IPTG诱导表达工程菌,Westem blotting检测表达产物。结果经序列测定证实,所得片段为IL-16cDNA;Western blotting检测重组体中确有抗IL-16抗体的融合蛋白表达。结论成功克隆了中国人IL-16 cDNA,并表达了IL-16融合蛋白。     

人白细胞介素7基因克隆及其真核表达载体的构建

目的：构建人白细胞介素7（hIL-7）的真核表达载体。方法：从人脾脏组织的总RNA中，用RT－PCR方法扩增出编码成熟hIL-7的cDNA，将其克隆于pMD18-T质粒中，并进行序列测定。再将hIL-7cDNA以正义及反义插入真核、原核双重表达载体pBK-CMV质粒，转化至大肠杆菌DH5α。最后将表达的lacz-hIL-7重组蛋白行SDS－PAGE电泳，并作考马斯亮蓝染色分析，western blot鉴定。结果：hIL-7序列测定结果与预期一致。pBK-CMV-hIL-7（正义插入）的无隆表达重组蛋白，western blot证实此蛋白为IL－7。结论：成功构建了hIL-7的真核表达载体，为进一步研究hIL-7的抗肿瘤作用创造了条件。     

可溶性白细胞介素—6受体基因的扩增,克隆及序列分析

从Ｈｅｌａ细胞中提取总ＲＮＡ，以此总ＲＮＡ为模板，应用反转录ＰＣＲ方法扩增可溶性白细胞介素－６受体基因，把得到的基因片段重组到质粒ＰＵＣ１９上，经转化、筛选和鉴定得到含有可溶性白细胞介素－６受体基因的克隆。测定其全部９９９ｂｐ核苷酸顺序，测出的核苷酸顺序与文献报道的顺序有二处不同，据此推导出的氨基酸顺序有二处变化。     

慢性乙型肝炎患者血清白细胞介素16的检测及其意义

目的:本实验通过分析慢性乙型肝炎患者血清中IL-16的变化规律,旨在探索IL-16与肝脏损伤之间的关系。方法:本实验采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定75例慢性乙型肝炎患者及28例正常对照组血清中IL-16的水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(HBV)-DNA。结果:慢性乙型肝炎组和正常对照组血清IL-16水平分别为(1.957±0.402),(1.212±0.316)ng/ml,差异有统计学意义(P<0.05);按HBV-DNA含量将患者分为;<105拷贝/ml为低病毒载量组;105～106拷贝/ml为中病毒载量组;≥107拷贝/ml为高病毒载量组。各组血清IL-16的水平分别为(3.175±2.376),(2.951±2.208),(2.256±1.203)ng/ml;各组间两两比较无统计学意义(P>0.05)。结论:IL-16参与了慢性乙型病毒性肝炎患者的肝损伤过程,而与病毒的复制无关。     

人血小板生成素的基因克隆及序列分析

目的：为获得人血小板生成素全长ｃＤＮＡ克隆。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ技术,以特异性寡核苷酸为上、下游引物自胎肝总ＲＮＡ中扩增目的基因。结果：ＰＣＲ扩增产物克隆至ｐＵＣ１８－Ｔ载体,儿得重组质较ｐＵＣＴ－ＴＰＯＭ。结论：序列分析显示,获得的血小板生成素ｃＤＮＡ序列与国外文献一致。     

白细胞介素16及其与临床疾病的关系

白细胞介素１６及其与临床疾病的关系朱洪新综述刘钟滨傅中滇＊审校（基础医学院微生物与免疫学教研室上海，２０００７０）（＊基础医学院预防医学教研室上海，２０００７０）关键词白细胞介素１６；分子生物学；临床疾病中图号Ｒ９７７．８白细胞介素１６（ＩＬ－１６）...     

白细胞介素-16研究进展

白细胞介素-16(IL-16)是一种具有多种生物学活性的细胞因子,如:将CD4+细胞募集炎症部位、促使Ca2+向细胞内转移、抑制人类免疫缺陷病毒复制以及诱导前炎性细胞因子产生等。近年,越来越受到关注。     

人血小板生成素的基因克隆及序列分析

目的为获得人血小板生成素全长cDNA克隆。方法用RT-PCR技术，以特异性寡核苷酸为上、下游引物自胎肝总RNA中扩增目的基因。结果PCR扩增产物克隆至pUCl8-T载体，获得重组质粒pUCT-TPOM。结论序列分析显示，获得的血小板生成素cDNA序列与国外文献一致。     

抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B2重链可变区基因的体外扩增、克隆及序列分析

目的：分离抗人卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３Ｂ２重链可变区（ＶＨ）基因并测定其序列。方法：用反转录ＰＣＲ扩增抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２ＶＨ基因，将其克隆入ＰＵＣ１９载体，重组子用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧链终止法测定序列，将序列与ＧｅｎｅＢａｎｋ及已发表的抗体序列比较。结果：ＶＨ基因全长３５４ｂｐ，属鼠免疫球蛋白重链混杂亚类（ｓｕｂｇｒｏｕｐｍｉｓｃｅｌａｎｅｏｕｓ），由种系基因的ＶＨ，Ｄｓｐ２．５及ＭＵＳＪＨ４重排而来。该ＶＨ基因序列已被ＧｅｎｅＢａｎｋ收录（ａｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏＡＦ０４５０２３）。结论：该ＶＨ基因为抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２功能性重链可变区基因。     

中国HCV一株NS5区部分基因克隆及序列分析

研究HCVNS5基因的结构与功能，为进一步研制适合我国使用的第3代抗-HCV试剂打下基础。方法：自行设计引物，从河北固安县慢性丙型肝炎患者血中，用逆转录-聚合酶链反应扩增出HCVNS5基因，并将其克隆到载体pKPL-3α，经Dotblot、Southernblot和限制性内切酶分析筛选出阳性克隆pKHC－5α，进行序列测定。结果：核苷酸序列分析表明，克隆的HCVNS5基因与HCVⅡ／1b的核苷酸同源性约90％。结论：所克隆的HCV属于我国常见的HCVⅡ／1b基因型。     

宫颈癌组织中HPV16E6的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的进行人乳头瘤病毒16型相关肿瘤的E6血清学研究。方法采用聚合酶链反应(PCR)从宫颈癌组织DNA中扩增出HPV16E6基因片段,克隆至测序质粒pGEM-T中,并用限制性内切酶将HPV16E6基因切下,克隆至表达质粒pGEMEX-1中,经IPTG诱导表达为融合蛋白,分子量约45KD。结果融合蛋白占菌体总蛋白的25％,免疫印迹检测表明HPV16E6融合蛋白能被抗HPV16E6抗体识别。结论大肠杆菌表达HPV16E6蛋白的获得可为HPV相关性肿瘤的血清学诊断和流行病学研究打下基础。     

庚型肝炎病毒"重庆株"NS3区核苷酸和氨基酸序列分析

目的：研究庚型肝炎病毒(HGV)“重庆株”(CHq)在NS3区与其它一些分离株之间核苷酸和氨基酸序列的同源性。方法：采用RT-套式PCR,从中国重庆市的庚型肝炎患血清中分离出HGV-NS3区基因cDNA并测序,然后经计算机软件对其核苷酸序列及由此推导的氨基酸序列进行分析。结果：HGV“重庆株”NS3区与HGV-l(U44402)、HGV-2(U45966)、GBV-C(U63715)及HGV C964 NS3区之间,核苷酸序列同源性分别为85．96％、83．67％、85．96％和96．28％;氨基酸序列同源性分别为97．4％、97．4％、97．4％和96．6％。结论：在NS3区核苷酸序列方面,“CHq”与HGVC964同源性最高,而在NS3区氨基酸序列方面,“CHq”与其它4株HGV的同源性均在96％以上,无明显差别。提示以NS3蛋白为抗原,对感染不同HGV株的患血清进行免疫学检测,其检出率应无显差异。     

一个新的胎肝发育相关因子cDNA的克隆与序列分析

目的:从胎肝cDNA文库中,分离胎肝发育相关新cDNA。方法:分离纯化胎肝组织RNA,构建cDNA文库、T-A克隆、核酸自动测序及生物信息学分析。结果:分离克隆一个新的cDNA片段,编码71个氨基酸多肽,并且与肝脏生长/分化因子9部分同源。申请加入国际基因库,登录号为:GenbankAF157027。结论:该新cDNA(GenbankAF157027)编码的多肽可能调控肝脏的发育。     

HBeAg、HBeAb双阳性患者血清中病毒前C区基因序列分析

目的　了解乙型肝炎病毒e抗原和e抗体双阳性患者血清中病毒前C区基因的变异情况。方法　采用时间分辨荧光免疫分析方法检测乙肝病毒免疫标志物 ,对HBeAg、HBeAb双阳性患者采用聚合酶链反应 (PCR)扩增其血清中HBVDNA前C区基因 ,然后对阳性样品的PCR产物直接标记测序 ,并和Genbank中登录的代表株进行比较分析。结果　 1 5例HBeAg、HBeAb双阳性患者中有1 1例HBVDNA阳性 ,序列分析显示所有阳性血清中病毒前C区基因均发生了变异 ,其中有 4例存在A1 896变异。结论　在HBeAg和HBeAb血清学转换过程中 ,均伴有HBV前C区基因变异 ,A1 896变异的产生主要在HBeAb产生过程中或产生以后。     

人GDNF基因的克隆

目的：克隆可表达人胶质细胞源性神经营养因子的基因。方法：从脑胶质细胞瘤患者术后的脑瘤组织中提取总ＲＮＡ，以ＲＴＰＣＲ方法扩增出了一段约５５８ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，将这一片段克隆于ｐＵＣ１８载体中，进行全序列分析。结果：证实该研究所克隆的ｃＤＮＡ是编码正确的人ＧＤＮＦ基因。与发表于ＧｅｎｅＢａｎｋ上的序列相比，发现该研究克隆的基因有一段７８ｂｐ的核苷酸序列缺失，但不影响密码子的阅读框。结论：克隆到了编码正确的人ＧＤＮＦ的ｃＤＮＡ全序列，对帕金森病基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。