龙胆苦甙后处理对心脏缺血再灌注损伤的防治作用

目的 观察龙胆苦甙（GPS）后处理对离体心肌缺血/再灌注损伤（I/R）的防治作用及其可能的机制.方法 将30只C57BL6小鼠分为三组,即假手术组（只开胸不结扎冠状动脉左前降支）,I/R组以及I/R＋GPS后处理组（I/R＋GPS组）.采用小鼠在体模型,小鼠麻醉后,开胸短暂结扎冠状动脉左前降支模拟缺血,缺血30 min后松开线结进行再灌注,再灌注前10 min腹腔注射给药.分别于再灌注2h（Western blot法检测Caspase-3、Bax、Bcl-2）以及24 h（心脏超声测定EF值、TTC伊文氏蓝双染色检测心肌梗死面积以及经颈动脉取血行LDH活性检测）后处死动物.结果 与假手术组比较,I/R组EF值降低,心肌梗死面积增加,血清中LDH含量增高,Caspase-3、Bax表达增高,Bcl-2表达降低（P均＜0.01）.与I/R组相比,I/R＋GPS组的EF值升高,心肌梗死面积减少,血清中LDH含量降低,Caspase-3、Bax表达降低,Bcl-2表达增高（P均＜0.01）.结论 GPS后处理可以明显降低缺血再灌注对心脏的损伤,增加心脏收缩能力,增强抗凋亡分子Bcl-2的表达,抑制Bax以及Caspase-3所介导的心肌细胞凋亡.     

肢体缺血后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠Caspase-3和细胞凋亡的影响

目的探讨肢体缺血后处理(Lpost)对大鼠局灶性脑缺血再灌注区半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3和细胞凋亡的影响。方法健康雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、肢体缺血后处理组(Lpost组),I/R组、Lpost组均行缺血2 h再灌注24 h局灶性脑缺血再灌注模型。Lpost组再灌注前实施肢体缺血后处理(缺血15 min,灌注15 min)3个循环。各组大鼠神经功能评分,采用四氮唑红(TTC)染色确定脑缺血半暗带位置,TUNEL测定细胞凋亡,免疫组化测定Caspase-3的表达变化。结果 Sham组神经缺损评分为0分;与Lpost组(1.20±0.41)比较,I/R组神经功能缺损较重(2.40±0.51,P<0.05);TTC染色证实缺血半暗带位于大脑矢状裂至外侧裂上1/3的皮质组织。与Sham组相比,I/R组、Lpost组缺血半暗带内凋亡细胞数、Caspase-3表达均明显增加(P<0.05),且I/R组表达明显增强,高于Lpost组(P<0.05)。结论肢体Lpost可减轻脑缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡,缓解神经细胞的坏死,其作用机制可能与减少Caspase-3表达有关。     

腺苷后处理对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的 研究腺苷后处理对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl2和Bax蛋白的影响.方法 32只Wistar大鼠随机分为4组(每组8只):假手术组(Ⅰ组):开胸只穿线不结扎血管,麻醉维持150 min;缺血再灌注组(I/R组):结扎30 min,再灌注120 min;腺苷预处理组(Ⅱ组):缺血前5 min,股静脉缓慢输注腺苷305 μg/(kg* min),持续5 min,而后再按I/R组操作;腺苷后处理组(Ⅲ组):缺血30 min后,股静脉缓慢滴注腺苷305 μg/(kg* min),持续5 min,而后再灌注120 min.采用TUNEL法观察各组心肌细胞凋亡,应用免疫组化SP法观察 Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 与I/R组比较,Ⅱ组及Ⅲ组心肌梗死范围均明显减小,心肌细胞凋亡率降低(P＜0.05),Bax表达水平明显降低,Bcl-2表达水平明显升高(P＜0.05),而Ⅱ组和Ⅲ组间差异无统计学意义.结论 腺苷后处理可以减轻再灌注心肌细胞的凋亡,这一过程可能是通过上调Bcl-2表达和下调Bax表达而实现的.     

重组人脑钠尿肽后适应对兔急性缺血/再灌注心肌的保护作用

目的:探讨重组人脑利钠肽(rhBNP)后适应对兔急性缺血/再灌注（I/R）心肌的保护作用及其机制。 方法: 将36只健康日本大耳白兔随机分为3组（每组12只）。即假手术组、I/R组（缺血40 min后再灌注180 min）及BNP+I/R组（I/R前5 min以0.01 μg/kg静脉给予BNP）。假手术组开胸于左室支下穿线但不结扎,观察180 min结束;I/R组及BNP+I/R组:缺血40 min,分别再灌注180 min后处死。进行心肌酶学CK-MB含量检测,观察心肌HE染色后病理形态变化及BCI-2、Bax表达的检测。结果: 与假手术组相比,I/R组和BNP+I/R组CK-MB的水平均显著增高（P<0.01)。与I/R组相比,BNP+I/R组明显减少这些心肌酶的升高（P<0.01)。与假手术组相比,I/R组及BNP+I/R组均可见到凋亡细胞,但BNP+I/R组凋亡细胞明显减少。与假手术组相比,I/R组Bax的表达增加,Bcl-2的表达降低。与I/R组相比,BNP+I/R组 Bax的表达明显降低,而Bcl-2的表达明显升高。结论: 重组人脑钠尿肽可减少梗死后心肌的损伤;可以增加梗死后心肌细胞抑制凋亡基因（Bcl-2）的表达,从而减少心肌细胞的凋亡。     

缺血后处理对大鼠骨骼肌缺血再灌注肾损伤ICAM-1表达的影响及其意义

目的 通过观察骨骼肌缺血再灌注肾损伤中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的变化,探讨缺血后处理对骨骼肌缺血再灌注肾损伤的影响及其意义.方法 将24只雄性Wister大鼠随机分为4组,Ⅰ组仅进行常规麻醉,不阻断后肢血流;Ⅱ组为缺血4 h无再灌注组;Ⅲ组为缺血4 h后再灌注6 h组;Ⅳ组为缺血3 h 57min于再灌注前给予1 min灌注1 min缺血,重复3次后继续再灌注5 h 57min.分别检测血清中尿素氮(BUN)含量、肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)含量及肾组织中ICAM-1蛋白表达情况.结果 Ⅰ组ICAM-1表达不明显;Ⅱ、Ⅲ组ICAM-1 表达呈上升趋势;Ⅳ组表达下调;其余三组与Ⅰ组比较有显著性差异(p0.05),Ⅳ组与Ⅲ组比较,有显著性差异(P<0.05).BUN和SOD含量:Ⅱ、Ⅲ组逐渐升高,Ⅲ组较Ⅱ组升高明显(P<0.05);Ⅳ组二者含量均相应下降,与Ⅲ组比较有显著性差异(P<0.05).结论 骨骼肌缺血再灌注后肾组织中ICAM-1的表达明显上调,缺血后处理可明显抑制ICAM-1的表达,降低BUN、SOD含量,对骨骼肌缺血再灌注肾损伤有明显的保护作用.     

缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的研究

目的研究缺血再灌注诱导体外培养大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达.方法采用体外培养新生大鼠心肌细胞,随机分为正常对照组(Ⅰ组)、模拟缺血2h组(Ⅱ组)、缺血2h后再灌注1h组(Ⅲ组)以及持续缺血3h组(Ⅳ组).TUNEL法检测心肌细胞凋亡,荧光显微镜观察心肌细胞凋亡的形态学特征、免疫组织化学法检测Bcl-2/Bax基因表达.结果心肌细胞I/R后,TUNEL法检测到阳性凋亡细胞,且持续缺血3h组与再灌注组凋亡指数明显高于缺血2h组.荧光显微镜观察到典型的细胞凋亡超微结构;免疫组织化学检测发现Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调.结论缺血和缺血再灌注均能诱导心肌细胞凋亡,且心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax基因表达有密切关系.     

丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注神经细胞凋亡的影响

目的观察丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注（I/R）后大脑皮质缺血灶周围区Caspase-3、Survivin的时相表达及对神经细胞凋亡的影响。方法将Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、丹红注射液治疗组（治疗组）时检测,应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）再灌注模型。假手术组于术后,模型组、治疗组于缺血2 h后再灌注6 h2、4 h、48 h、72 h时检测,应用免疫组化技术和原位末端标记法（TUNEL）检测不同时相各组缺血灶周围脑区Caspase-3、Survivin和TUNEL阳性细胞的表达。结果大鼠I/R后在缺血灶周围区各个时间点均可见到Caspase-3、Survivin和TUNEL阳性细胞的表达,治疗组与模型组比较,两组Caspase-3、Survivin和TUNEL阳性细胞的表达趋势基本一致,Caspase-3和TUNEL阳性细胞的表达高峰在I/R后24 h,Sur-vivin的表达高峰在I/R后48 h。治疗组各时间点Caspase-3和TUNEL阳性细胞的光密度值较模型组明显降低（P〈0.05）,Sur-vivin的光密度值较模型组明显升高（P〈0.05）。结论丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用,其作用机制可能与丹红注射液促进Survivin的表达,抑制Caspase-3表达,减轻迟发性神经元的凋亡有关。     

芹菜素与老年大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的相关性

目的对芹菜素与老年大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、半胱天冬酶(Caspase)-3表达相关性进行研究。方法选取选择健康的老年大鼠60只,随机分为正常组、假手术组、心肌缺血再灌注组和不同剂量芹菜素组各10只。制作缺血再灌注模型采用结扎左冠状勤脉前降支,心肌缺血30 min,再灌注2 h。假手术组只穿线不结扎,余各组在缺血前10 min股静脉分别注射生理盐水、聚乙二醇、低剂量、中剂量、高剂量芹菜素,检测缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3表达。结果正常组和假手术组的凋亡细胞数极少;心肌缺血再灌注组的凋亡细胞数量明显的增多,芹菜素低剂量(1 mg/kg)组:Apil1、芹菜素中剂量(2 mg/kg)组:Apil2、芹菜素高剂量(4 mg/kg)组:Apil4的凋亡的凋亡细胞数下降,其中芹菜素高剂量(4 mg/kg)组:Apil4的凋亡细胞数下降明显。心肌缺血再灌注组的Bcl-2、Bax、Caspase-3、AR与正常组、假手术组、芹菜素高、中、低剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。芹菜素低剂量组Bcl-2、Bax、Caspase-3、AR与正常组、假手术组、心肌缺血再灌注组、芹菜素高剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。芹菜素中剂量组Bcl-2、Bax、Caspase-3、AR与正常组、假手术组、心肌缺血再灌注组、芹菜素高剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。且芹菜素低剂量组的Bax、AR与芹菜素中剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论芹菜素与缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3表达存在相关性,且芹菜素可以减轻心肌损伤。     

青藤碱对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl-2和caspase-3表达的影响

目的 探讨青藤碱(Sin)对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl-2及caspase -3蛋白表达的影响.方法 采用高脂高糖饮食加腹腔注射小剂量链佐菌霉素建立糖尿病大鼠模型,造模成功后将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、Sin低剂量治疗组和Sin高剂量治疗组.线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型.Sin低(30 mg/kg)、高剂量(60 mg/kg)治疗组于术前30 min分别给予大鼠腹腔注射.用免疫组化法观察缺血90 min再灌注24 h大鼠额顶部皮质Bcl-2和caspase-3蛋白表达,并进行TTC染色和HE染色观察脑梗死体积及病理形态学变化.结果 ①糖尿病大鼠脑缺血再灌注24 h,缺血再灌注组Bcl-2和caspase-3表达与假手术组比较增加(均P<0.05);与缺血再灌注组比较,Sin高、低剂量治疗组Bcl-2表达均显著增加,caspase-3表达减少,高、低剂量组之间差异亦具有显著性(P<0.05).②Sin治疗组脑梗死体积较缺血再灌注组减小,高、低剂量组之间差异亦具有显著性(P<0.05).③Sin高、低剂量治疗组脑组织缺血损伤病理学改变明显轻于缺血再灌注组,Sin高剂量治疗组缺血改变亦轻于低剂量治疗组.结论 Sin对糖尿病大鼠缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与增加Bcl-2蛋白表达同时降低caspase-3蛋白表达有关.     

促红细胞生成素抑制caspase-3蛋白表达对缺血再灌注大鼠的心脏保护作用

目的 研究促红细胞生成素(EPO)对大鼠缺血再灌注(I/R)心肌缺血及梗死面积、心肌细胞凋亡和caspase-3蛋白表达的影响.方法 采用在体大鼠心肌I/R模型,将24只健康SD大鼠按随机数字表法随机分成3组:(1) 假手术组,以6-0号丝线在冠状动脉左前降支下穿过,不予以结扎;(2) I/R组,以6-0号丝线在冠状动脉左前降支下穿过,并结扎,在结扎线中埋置松解线,45 min后,松解结扎线,实现再灌注24 h;(3) EPO组,手术过程同I/R组,在再灌注开始即刻,给大鼠腹腔内注射重组人EPO(rhEPO),5 000 U/kg.再灌注24 h后用伊文蓝和氯化四唑(TTC)进行心肌染色,测量心肌缺血范围和梗死范围;采用原位缺口末端标记(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;采用Western印迹法检测心肌caspase-3蛋白p17亚基的表达.结果 经过45 min缺血和24 h再灌注:心肌染色显示:假手术组心肌无缺血区和梗死区;与假手术组比较,I/R组和EPO组心肌有明显缺血区和梗死区,其缺血范围和梗死范围均显著增大(P<0.01);与I/R组比较,EPO组缺血范围略为缩小,其差异没有显著性(P>0.05),但梗死范围显著缩小(P<0.01).TUNEL结果显示:与假手术组比较,I/R组和EPO组心肌细胞凋亡显著增加(P<0.01);与I/R组比较,EPO组心肌细胞凋亡显著减少(P<0.01);Western印迹法结果显示:与假手术组比较,I/R组和EPO组caspase-3蛋白p17亚基表达水平显著升高(P<0.01);与I/R组比较,EPO组caspase-3蛋白p17亚基表达水平显著下降(P<0.01).结论 EPO显著缩小I/R大鼠心肌缺血和梗死范围,减少心肌细胞凋亡,对I/R心肌具有明显的保护作用,其机制可能与下调caspase-3蛋白表达相关.     

Continuous glucose monitoring in normal mice and mice with prediabetes and diabetes

It is well established that the key to minimizing diabetes-associated complications, in both type 1 and type 2 diabetes, is tight regulation of blood glucose levels. Currently the major approach to regulating blood glucose levels in patients with diabetes relies on external blood glucose monitors. However, poor patient compliance usually results in limited insights into the dynamic range of blood glucose levels (i.e., hyperglycemia vs. hypoglycemia), and inadequate prediction and control of blood glucose levels in these patients. Implantable glucose sensors hold promise for controlling blood glucose levels, but currently these sensors have only limited in vivo life span. Recently we have developed an extremely robust murine model for implantable glucose sensors. In the present study, we have extended this model by developing a complete system for real-time continuous glucose monitoring in normal mice and mice with prediabetes and diabetes (type 1). These studies demonstrated that (1) glucose sensors can be implanted and maintained subcutaneously in the mice; (2) continuous glucose sensor data can be obtained for at least 5 days; and (3) subcutaneous blood glucose sensing paralleled blood glucose levels in normal mice and mice with prediabetes and diabetes. Subcutaneous blood glucose sensing also successfully tracked changes in blood glucose levels induced in the mice with diabetes by administration of oral glucose or insulin. These results mirror the results for subcutaneous blood glucose sensing seen in both normal subjects and patients with diabetes, and therefore validate both our continuous glucose monitoring system in the mouse, and the use of the mouse as a model for implantable glucose sensing in vivo.     

雌激素对D-半乳糖去卵巢小鼠及其apoE基因敲除鼠认知能力的影响

目的观察雌激素对D-半乳糖去卵巢C57BL／6J小鼠及其apoE基因敲除鼠两组动物的认知能力的影响。方法采用D-半乳糖腹腔注射和双侧卵巢切除术制备D-半乳糖去卵巢动物模型（D—gal＋OVX），1w后补充雌激素组开始每周腹腔注射EB（EB）2次，6w后应用Morris水迷宫观察各组小鼠行为学改变。对apoE基因敲除鼠进行同样的处理。结果EB对模型组小鼠有改善认知功能的作用，而对apoE基因敲除组小鼠的认知功能没有改善作用。结论EB可能通过apoE依赖机制而发挥其改善认知功能的作用。     

Comparison of leukocytes obtained from the intestinal lumen of Giardia-infected immunocompetent mice and nude mice

Previous studies have suggested that Giardia infections are cleared immunologically, but have not defined the mechanism of clearance. The aim of the present work was to compare subpopulations of leukocytes harvested from the intestinal lumen of immunocompetent BALB/c mice, which clear Giardia muris infection rapidly, with those of immunodeficient nude mice, which become chronically infected with Giardia muris. Leukocytes were obtained from the intestinal lumen of Giardia-infected mice, and subpopulations of these cells were quantified after immunofluorescent staining with monoclonal antibodies. Identical numbers of leukocytes were harvested from the intestinal lumen of Giardia-infected immunocompetent mice and nude mice, but the number of these leukocytes bearing the T-lymphocyte antigen Thy-1.2 was smaller in nude mice than in immunocompetent mice. In contrast, no striking differences were observed between the numbers of luminal cytotoxic/suppressor T lymphocytes or macrophages in Giardia-infected nude versus immunocompetent mice. The findings suggest that clearance of Giardia muris infection is not mediated by cytotoxic T lymphocytes or macrophages. Subsequently, T lymphocytes and T-lymphocyte subsets were quantified in cell suspensions prepared from Peyer's patches of immunocompetent BALB/c mice and nude mice. It was found that nude mice have a profound deficiency of Peyer's patch helper/inducer T lymphocytes. This deficiency may account for the inability of nude mice to clear Giardia muris infection at a normal rate.     

SOCS-1在内毒素血症及耐受小鼠肝组织中的表达变化及意义

目的:观察内毒素血症及内毒素耐受模型小鼠对LPS刺激的反应性,以及肝组织中SOCS-1表达的变化,试图从机体水平探讨SOCS-1与内毒素耐受状态之间的关系.方法:通过脂多糖(LPS)预处理建立内毒素血症及内毒素耐受动物模型,并与对照组进行比较.分时点用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中TNF-α水平,逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)检测肝组织中TNF-αmRNA的表达水平以及肝组织中SOCS-1mRNA的表达,并观察肝组织病理改变及超微结构改变,免疫组织化学检测SOCS-1在肝脏的表达.结果:在LPS刺激后,LPS组血清TNF-α水平、TNF-αmRNA、SOCS-1mRNA均在1h开始升高,至3h时达到峰值,随后又逐渐下降正常水平;PBS组血清TNF-α水平及TNF-αmRNA表达几乎没有明显变化,且无SOCS-1mRNA表达,与LPS组比较有统计学意义(P<0.01);但是耐受组(ETT)的3h血清TNF-α水平较非耐受组(NETT)低(693.38ng/L±95.2ng/Lvs1110.24ng/L±164.33ng/L,P<0.01);3h肝组织TNF-αmRNA表达峰值较NETT组低(97.96±19.67vs139.14±31.17,P<0.05);而肝组织SOCS-1mRNA表达峰值较NETT组高(91.58±12.94vs 52.82±6.96,P<0.01);肝组织可见脂肪变性、坏死等病理改变,超微结构表现为Kupffer细胞激活,吞噬功能增强;免疫组织化学可见肝组织中SOCS-1的表达.结论:内毒素耐受状态下,肝组织中的SOCS-1mRNA表达却明显增强,肝组织中的SOCS-1mRNA表达、Kupffer细胞的激活以及机体的内毒素耐受状态三者间可能有着紧密的联系.     

Proteoglycan knock-out mice and osteoarthritis

There are several types of small leucine-rich proteoglycans expressed in articular cartilage and its surrounding tissues. Many of these proteoglycans are functioning as a modulator of collagen fibrillogenesis via binding to the surface of collagen fibers. Therefore, deficiencies of their expression in knock-out mice often result in the formation of abnormal collagen fibers leading to the instability of the join, and finally trigger osteoarthritis.