核桃青皮提取物通过氧化应激作用抑制Lewis肺癌细胞生长

目的观察不同浓度核桃青皮提取物作用小鼠Lewis肺癌细胞后的氧化应激作用。方法用0、1、2和4μg/L浓度核桃青皮提取物分别作用于体外培养的小鼠Lewis肺癌细胞,采用谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)试剂盒分析药物对细胞的氧化应激作用。结果核桃青皮提取物给药组细胞培养上清中GSH含量、SOD和CAT的活力都明显升高;与空白对照组比较,2、4μg/L浓度组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论核桃青皮提取物可通过提高GSH含量、SOD和CAT的活力而发挥抑制肿瘤细胞生长的作用。     

蛔虫提取物对小鼠Lewis肺癌细胞的细胞毒性作用

目的探讨蛔虫提取物对小鼠Lewis肺癌细胞(LLC)的细胞毒作用。方法选用8种浓度的蛔虫提取物诱导小鼠Lewis肺癌细胞,分别在诱导后24、48、72 h采用四氮唑盐酶还原法(MTT)测A492值,计算细胞存活率和抑制率。结果不同浓度的蛔虫提取物分别作用LLC细胞24、48和72 h,对LLC细胞的增殖均有明显的抑制作用,呈剂量依赖,且以48 h抑制作用最强,之后随着作用时间的延长,BEAL对肿瘤细胞的抑制作用降低。结论蛔虫提取物对小鼠Lewis肺癌细胞具有细胞毒性作用,能够诱导LLC细胞发生凋亡。     

氟伐他汀对小鼠Lewis肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察氟伐他汀对小鼠Lewis肺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 用不同浓度氟伐他汀作用于培养的小鼠Lewis肺癌细胞,用活细胞计数检测细胞增殖,以CCK-8试剂检测Lewis肺癌细胞生长抑制率,Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞仪定量检测氟伐他汀对小鼠Lewis肺癌细胞凋亡影响.结果 用不同浓度氟伐他汀(1、5、10和20 μmol/L)处理小鼠Lewis肺癌细胞12、24、48和72 h后,肺癌细胞增殖明显受抑制,细胞生长抑制率明显升高,这些作用呈明显剂量和时间依赖性,其中以10、20 mol/L氟伐他汀、处理48和72 h的作用最明显.Annexin V-FITC/PI染色后流式细胞仪检测表明,与对照组相比,20 μmol/L氟伐他汀处理肺癌细胞48 h后凋亡细胞明显增多(4.37% vs 12.83%,P＜0.01),当氟伐他汀与甲羟戊酸共同作用细胞后,氟伐他汀引起的细胞凋亡被明显逆转(4.37% vs 5.89%,P＞0.05),提示氟伐他汀对Lewis肺癌细胞的诱导凋亡作用是通过甲羟戊酸途径介导的.结论 氟伐他汀能抑制小鼠Lewis肺癌细胞增殖并诱导其凋亡.     

莪术醇联合顺铂对人食管癌109细胞凋亡以及细胞核因子-κB 表达的影响

目的：研究中药莪术醇联合顺铂对食管癌109细胞系的增殖凋亡、核因子（NF）-κB表达的影响,探讨莪术醇抗肿瘤的分子机制。方法将不同浓度莪术醇、顺铂、莪术醇和顺铂联合作用于食管癌109细胞,用噻唑蓝比色法（MTT 法）检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡, Western blot 法检测作用48小时后细胞 NF-κB 蛋白的表达情况。结果不同浓度莪术醇、顺铂均对食管癌细胞均有抑制增殖、促进凋亡作用,抑制率、凋亡率呈明显浓度依耐性;联合用药后抑制率、凋亡率显著提高,差异有统计学意义（P ＜0．05）;4个浓度的莪术醇与顺铂（2．5 mg／L）作用食管癌48小时后 NF-κB 的表达量随浓度增加而下降,与对照组比较差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论中药莪术醇对人食管癌109细胞株有明显抑制增殖,诱导凋亡的作用,其机制可能与下调NF-κB 蛋白的表达有关。     

人参皂苷增加顺铂抗肺癌A549细胞活性的机理研究

目的观察人参皂苷与顺铂联合作用肺癌A549细胞的细胞毒作用,探索相关作用机制。方法 MTT实验检测人参皂苷、顺铂对人肺癌A549细胞的细胞毒作用;提取药物处理细胞总蛋白,Western blot检测细胞survivin蛋白的表达变化;Annexin V/PI双染、流式细胞仪检测细胞凋亡的发生。结果人参皂苷和顺铂对肺癌A549细胞的半数抑制浓度(IC50)值分别为(43.26±3.27)和(2.34±0.15)μmol/L;20、40μmol/L人参皂苷与顺铂联合作用A549细胞,顺铂对A549细胞的IC50值减少为(1.42±0.33)、(0.61±0.04)μmol/L,P<0.01。Western blot检测显示人参皂苷剂量依赖性的降低肺癌A549细胞survivin蛋白的表达。流式细胞仪凋亡检测显示人参皂苷使顺铂诱导的细胞凋亡增加(P<0.01)。结论人参皂苷可以显著增加顺铂对肺癌A549细胞的致凋亡作用,下调survivin蛋白表达可能是其增敏的主要机制。     

14-3-3ζ和p-Bad在Lewis肺癌细胞株中的表达及意义

目的观察树突细胞(DC)调节的细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK细胞)对Lewis肺癌细胞株存活率和凋亡相关因子14-3-3ζ及p-Bad蛋白表达的影响,探讨其抑瘤机制。方法常规方法培养DC-CIK细胞,Lewis细胞株为靶细胞,利用Transwell板将DC-CIK细胞与Lewis共培养。共培养7 d时运用MTT比色法检测Lewis肺癌细胞的存活率,Western印迹检测Lewis肺癌细胞14-3-3ζ、p-Bad蛋白的表达变化。结果光镜观察发现,利用细胞因子成功地诱导出DC-CIK细胞。第7天时,DC-CIK组的细胞活力明显低于CIK组和正常对照组(P0.01)。Western印迹检测到Lewis肺癌细胞中14-3-3ζ、p-Bad的表达均有下调。结论 DC-CIK细胞能够在体外降低Lewis肺癌细胞的存活率、促进Lewis肺癌细胞凋亡。     

PDCD5蛋白基于顺铂为基础的非小细胞肺癌化疗敏感性

目的探讨程序性细胞死亡因子(PDCD)5过表达后顺铂对A549细胞生物学行为和凋亡作用的影响,同时测定PDCD5在非小细胞肺癌血清中的表达,分析其与化疗后临床参数及疗效的相关性。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪研究PDCD5表达对肺癌细胞化疗敏感性的影响。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中PDCD5蛋白水平。结果 rhPDCD5增强了顺铂诱导A549细胞的增殖和凋亡。共检测40例非小细胞肺癌血清标本,PDCD5蛋白表达与患者年龄、性别无关,与吸烟、TNM分期、有无淋巴结转移及疗效有显著相关性。PDCD5蛋白的低表达与不良疗效呈正相关。结论 RhPDCD5对顺铂诱导的肺癌细胞毒性具有明显的敏感性。PDCD5蛋白高表达的患者可能更适合以顺铂为基础的化疗。PDCD5作为细胞凋亡的调控因子,可能在肿瘤的发病机制和发展过程中发挥重要作用。     

端粒酶反义寡核苷酸促进顺铂诱导原代胃癌细胞凋亡

目的:探讨端粒酶反义寡核苷酸(PS-ASODN)对顺铂诱导原代胃癌细胞凋亡的影响。方法:采用台盼蓝拒染法计算细胞生长抑制率,观察PS-ASODN联合顺铂对原代胃癌细胞生长的影响;流式细胞学观察细胞凋亡率及细胞周期变化。结果:终浓度为3μM的PS-ASODN作用于原代胃癌细胞24 h后加入顺铂(2.0μg/ml),能明显抑制胃癌细胞增殖,同时流式细胞学检测到凋亡峰,细胞受阻于G0/G1期,作用48 h及72 h的凋亡细胞百分率(35.1％,45.7％)明显高于N-ASODN组、PS-ASODN组、DDP组及N-ASODN+DDP组,差异有显著性(P<0.05)。其作用呈时间依赖性及序列特异性。结论:以端粒酶RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸可促进顺铂诱导的胃癌细胞凋亡,对胃癌具有重要治疗价值。     

健脾散结方对Lewis肺癌小鼠细胞相关凋亡蛋白及端粒酶活性的影响

目的观察健脾散结方对Lewis肺癌小鼠细胞相关凋亡蛋白及端粒酶活性的影响。方法选用C57BL/6小鼠接种Lewis肺癌细胞建立动物模型,按实验分组分别干预21 d,观察肿瘤生长情况,采用SABC免疫组化法检测Survivin、c-myc表达,PCR-ELISA法检测端粒酶活性。结果健脾散结方组、顺铂组、联合组的抑瘤率分别为42.36%、57.38%、69.71%;与模型组比较,各药组均可降低Survivin与c-myc表达(P0.05或P0.01),且联合组最明显,健脾散结方与顺铂有协同作用;各药组端粒酶活性均低于模型组(P0.05),且健脾散结方组、顺铂组与联合组比较均有显著差异(P0.05)。结论健脾散结方抑制肿瘤作用可能与下调Survivin、c-myc表达,诱导细胞凋亡,抑制端粒酶活性有关。     

雷帕霉素联合顺铂对肝癌细胞凋亡及自噬的影响

目的研究雷帕霉素联合顺铂对肝癌细胞凋亡、自噬的影响。方法将雷帕霉素及顺铂分别或联合作用于Hep G-2细胞,采用MTT法检测Hep G-2细胞增殖抑制情况,采用流式细胞仪检测Hep G-2细胞凋亡,采用MDC染色、转染p GFP-LC3检测细胞自噬。结果与正常对照组相比,雷帕霉素组未出现明显的细胞凋亡情况;顺铂组细胞凋亡情况较明显,凋亡率达到(21.27±3.65)%;顺铂联合雷帕霉素组细胞凋亡率最高,达到(43.33±5.64)%。三组Hep G-2细胞均出现点状的自噬泡,顺铂联合雷帕霉素组自噬泡数量显著高于雷帕霉素组和顺铂组。结论顺铂可直接诱导Hep G-2细胞凋亡,雷帕霉素本身不诱导Hep G-2细胞凋亡,但其可显著促进顺铂诱导Hep G-2细胞凋亡;顺铂和雷帕霉素均可直接诱导Hep G-2细胞自噬,但两者联合应用促进Hep G-2细胞自噬情况非常明显。     

甲基汞对肺癌细胞的增殖抑制作用

目的探讨甲基汞对小鼠Lewis肺癌细胞的增殖抑制作用。方法采用MTT比色法。对照组仅加培养液;顺铂组、As2O3组、甲基汞组分别加入不同浓度的顺铂、As2O3、甲基汞,用DG-3022A型酶联免疫检测仪测定光密度(A)值,计算增殖抑制率,并以倒置光学显微镜观察各组Lewis肺癌细胞生长密度及形态变化。结果甲基汞对小鼠Lewis肺癌细胞有较强的增殖抑制作用,并存在着时间和剂量效应关系,而且同一时间各浓度之间、同一浓度各时间之间均存在显著性差异(P<0·001);甲基汞的增殖抑制作用强于顺铂和As2O3,起效浓度较后两者低,发挥作用较后两者快。结论甲基汞对小鼠Lewis肺癌细胞有增殖抑制作用,并存在着时间和剂量效应关系,其增殖抑制作用强于顺铂和As2O3。     

自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对顺铂诱导肺癌A549细胞凋亡的影响

目的 探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对顺铂(DDP)诱导肺癌A549细胞凋亡的影响.方法 用MTT法检测药物最适浓度和作用时间,以及不同组肺癌A549细胞增殖率;通过MDC染色法将细胞染色检测自噬空泡的变化;Hoechst33342染色检测细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 DDP作用于A549细胞后细胞增殖率明显下降,并在细胞内可见大量自噬空泡及细胞核染色质凝聚.3-MA和DDP联合作用组细胞增殖率较单独应用DDP组明显下降,细胞自噬水平降低,细胞凋亡率明显增加.结论 DDP能诱导肺癌A549细胞发生自噬和凋亡,而抑制自噬可以促进DDP诱导的细胞凋亡.     

红景天联合顺铂协同诱导人肺腺癌耐药细胞的凋亡

目的观察红景天联合顺铂对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的生长抑制和凋亡诱导作用。方法应用MTT法检测红景天、顺铂对A549/DDP细胞的生长抑制并计算IC50,采用Annexin V-FITC试剂盒、流式细胞仪定量检测凋亡率;采用Western印迹法检测各组细胞Caspase-3、聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)表达水平。结果 A549/DDP对顺铂具有一定耐药性;在红景天、顺铂分别作用24 h后,A549/DDP细胞凋亡率为(11.49+1.73)%、(19.87+3.65)%;显著低于联合用药组(34.88+5.62)%(P<0.05)。联合用药组Caspase-3、PARP活化程度高于红景天组、顺铂组。结论联合红景天与顺铂具有协同作用,抑制肺腺癌耐药细胞生长,促进肺腺癌耐药细胞凋亡,提示红景天在化疗耐药的肺癌治疗中有一定的应用前景。     

藤梨根提取物对肺癌A549细胞凋亡及细胞周期的影响

目的 观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞生长增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法 体外培养肺癌A549细胞,分别给予不同浓度的藤梨根乙酸乙酯提取物进行干预,台盼蓝计数活细胞绘制不同浓度药物作用后细胞的生长曲线;四甲基耦氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度药物作用不同时间对A549细胞生长的抑制率;采用流式细胞术(FCM)测定肺癌细胞周期、凋亡率变化;采用透射电镜观察药物作用后细胞的超微结构变化.结果 台盼蓝计数活细胞及MTT实验结果 均显示当药物浓度在20～160 μg/ml之间时,体外藤梨根提取物可明显抑制肺癌A549细胞的生长,呈现出明显的时间和剂量依赖性.FCM检测显示药物作用后,Go/G1期细胞数目增多,S期和G2/M期细胞数目相应减少,细胞发生G0/G1期阻滞,细胞凋亡率亦明显增加,随药物浓度增加、作用时间延长,其细胞周期阻滞作用及凋亡诱导作用逐渐增强.药物处理48 h后各组A549细胞透射电镜下均可见不同阶段典型的凋亡细胞形态学变化.结论 藤梨根提取物对人肺癌A549细胞生长有明显的抑制作用,呈现时效-量效关系,其作用与使细胞周期发生阻滞和诱导细胞凋亡有关.     

NP方案同期照射对人肺癌细胞凋亡率的影响

目的比较盖诺＋顺铂加同期照射与单纯照射对非小细胞肺癌细胞凋亡率的影响。方法应用细胞培养技术,分别采用单纯照射,盖诺＋顺铂加同期照射应用于人月肺腺癌细胞GLC细胞,进行细胞凋亡实验。通过光镜细胞形态学观察、荧光染色法、流式细胞仪等检测方法观察其诱导凋亡的差异,并进行量化比较效果差异的程度。结果流式细胞仪定量分析细胞凋亡发现,在12h处及时24h处,各处理组凋亡牢之间无显著差异;在48h,同期组中以8Gy的凋亡率最高,盖诺＋顺铂加同期照射与单纯照射相比,凋亡率前者明显高于后者,P〈0．05,有显著性差异。结论靠诺＋顺铂化疔方案可增加GLC细胞的放射敏感性。盖诺＋顺铂加同期照射诱导肺癌细胞发生的凋亡率可明显高于单纯照射应单纯化疗,其值甚至大于单纯照射和单纯化疗所致凋亡指数之和,但这种效应呈现一定的时间-剂量选择性。     

Smac基因过表达联合顺铂对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨Smac基因过表达联合顺铂对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用脂质体介导的转染方法 ,将重组质粒pcDNA3.1+hSmac导入人肝癌细胞株SMMC-7721中,采用Western blot和流式细胞术检测转染前后Smac蛋白表达情况.转染24 h后分别加入终浓度为5、15、25 μg/ml的顺铂诱导细胞凋亡.采用四甲基偶氮唑盐比色法检测癌细胞的增殖抑制作用,吖啶橙-溴化乙锭荧光染色法和膜联蛋白V/碘化丙啶双染标记流式细胞术检测细胞凋亡. 结果 Westernblot和流式细胞术检测结果证实转染后Smac蛋白表达明显增加(P＜0.01).与空白对照相比,Smac基因过表达可抑制癌细胞增殖,促进凋亡(P＜0.01).而且给予顺铂处理后,与空白对照组相比,细胞生长抑制率随剂量增加而显著上升,且转染Smac的细胞生长抑制率较相应未转染Smac的细胞明显升高(P＜0.01).吖啶橙-溴化乙锭荧光染色法和流式细胞术检测显示,转染Smac加顺铂处理组较单纯顺铂处理组细胞凋亡明显增加,差异具有统计学意义(P＜0.01).这表明Smac基因过表达可增强顺铂对肝癌细胞的增殖抑制和凋亡促进作用. 结论 促凋亡基因Smac可在肝癌细胞中过表达,抑制癌细胞的增殖和促进凋亡;而且过表达的Smac基因可增强癌细胞对化疗药物顺铂的敏感性,这为研究Smac在癌细胞凋亡过程中的调控作用以及肝癌化学治疗效果的改善提供了实验基础.     

蛴螬提取物对人肺癌A549细胞诱导凋亡作用的形态学观察

目的 探讨蛴螬提取物对人肺癌A549细胞诱导凋亡的形态学改变.方法 应用MTT法、HE染色、扫描电镜的方法 观察蛴螬提取物对体外培养的人肺癌A549细胞形态学影响.结果 蛴螬石油醚提取物对人肺癌A549细胞株的增殖抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性(P＜0.05或P＜0.01).倒置显微镜下蛴螬石油醚提取物80 μg/ml作用后,早期细胞出现凋亡形态学变化,晚期细胞发生膜破裂坏死.HE染色和扫描电镜观察细胞出现典型凋亡形态变化.结论 蛴螬提取物在体外对人A549肺癌细胞株有显著性抑制增殖和诱导凋亡作用.     

四君子丸对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织细胞caspase-3表达的影响

目的探讨四君子丸对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织细胞凋亡相关蛋白caspase-3表达的影响。方法在小鼠右侧腋窝皮下,接种浓度为1×10~7个/ml的小鼠肺癌Lewis细胞悬液0.1 ml,模型建立成功后将小鼠分为Lewis肺癌组、中药治疗组(成瘤后灌胃四君子丸0.093 6 g/10 g,1次/d,连续14 d)、顺铂组(腹腔注射0.05 mg/10 g,1次/w,持续2次)。采用透射电镜观察各组肿瘤组织细胞形态学变化,采用Real-time PCR和免疫组化测定肿瘤组织caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平。结果透射电镜结果显示:Lewis肺癌组细胞镜下呈现出明显恶性肿瘤细胞特征;中药治疗组镜下可见肿瘤细胞以凋亡变化为主,大量凋亡细胞、凋亡小体及坏死细胞;顺铂组镜下可见坏死细胞和典型凋亡细胞及凋亡小体。Real-time PCR及免疫组化结果共同显示:和Lewis肺癌组比较,中药治疗组和顺铂组caspase-3 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P0.01)。结论四君子丸能够显著提高Lewis肺癌小鼠模型肿瘤组织中caspase-3的表达,从而促进肿瘤细胞凋亡。     

靶向表皮生长因子受体的RNA干扰技术对非小细胞肺癌细胞株A549细胞抑制及顺铂敏感性的研究

目的 利用RNA干扰(RNAi)技术,将携带表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)同源基因的重组质粒稳定转染非小细胞肺癌细胞株A549细胞,观察其对A549细胞生长抑制作用及对顺铂敏感性的变化.方法 根据RNAi原理,体外设计并合成靶向EGFR特异性干扰片段,即h-EGFR,以pGensil-1为载体,构建重组质粒pGensil-1-EGFR,以Lipofectamine 2000介导转染肺腺癌细胞株A549细胞,经G418筛选后挑选出稳定转染的单克隆细胞.将所挑选出的单克隆细胞大量培养后加入不同浓度顺铂(40 mg/L、10 mg/L、2.5 mg/L),采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞活力,绘制生长曲线,流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡的变化,观察RNAi对A549细胞抑制作用及是否与顺铂有协同作用.结果 与对照组、阴性对照组相比,从第2天起实验组生长缓慢,吸光度有统计学差异(P＜0.05);顺铂或联合dsRNA-EGFR对A549细胞有抑制作用,且随着浓度的增加和时间的延长抑制作用增强,dsRNA-EGFR联合顺铂与等浓度顺铂吸光度有统计学差异(P＜0.05),顺铂作用24 h后40 mg/L、10 mg/L、2.5 mg/L顺铂抑制率分别提高了7.8%、30.70%、34.42%.实验组G0/G1细胞百分比较对照组增加了13.84%,较阴性对照组增加了14.65%,进入S期的细胞百分比较对照组减少了19.10%,较阴性对照组减少了18.68%;40 mg/L、10 mg/L、2.5 mg/L顺铂处理细胞24 h后,与对照组相比,凋亡率明显增高(P＜0.05),且浓度越高,凋亡率越高;同一浓度顺铂作用下转染pGensil-1-EGFR的A549细胞凋亡率较A549细胞增高(P＜0.05).结论 dsRNA-EGFR可有效抑制A549细胞生长,使细胞阻滞在G0-G1期,顺铂可有效诱导细胞凋亡,RNAi与顺铂具有协同效应,提高细胞对顺铂的敏感性,RNAi技术为非小细胞肺癌基因治疗提供了新策略.     

人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物诱导人肺上皮细胞凋亡

目的　探讨人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物诱导体外培养的人肺上皮细胞A549凋亡,以及提取物浓度和作用时间与细胞凋亡的相互关系。　方法　根据四氮唑盐酶还原法(MTT)结果,选用5种不同浓度的提取物诱导人肺上皮细胞凋亡。分别在诱导后的5个时间段,采用苏木素伊红(HE)染色盲法计数和二苯胺法检测DNA断裂率,观察肺上皮细胞凋亡情况。同时对某个时间和浓度组的样本,用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。　结果不同浓度人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物诱导A549细胞凋亡,在5h之内细胞凋亡率随提取物浓度增加而增加,两者呈正相关关系,且细胞凋亡率显著高于对照组(P<005),5h细胞凋亡率达高峰(652%)。　结论　人蛔虫Ⅱ期幼虫提取物可诱导人肺上皮细胞凋亡,细胞凋亡与其提取物浓度呈明显的相关关系。在时间上表现为双向变化关系,其变化程度同时受提取物浓度的影响