内质网应激激活剂通过上调GRP78增加肺癌A549细胞对顺铂的敏感性

目的探讨内质网应激激活剂(TM)增加肺癌A549细胞对顺铂(DDP)敏感性的机制。方法 DDP和TM处理肺癌A549细胞,MTT法检测肺癌A549细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western印迹检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-7表达。结果不同浓度的DDP(0,10,20,50μmol/L)作用于肺癌A549细胞24 h,细胞存活率以剂量依赖的方式下降;TM诱导内质网应激后,提高了DDP(20μmol/L)诱导的细胞凋亡率(55.23%±2.31%,P0.05);同时检测到凋亡相关蛋白Caspase-7表达增加。结论 DDP能够诱导肺癌A549细胞凋亡,但是TM通过上调GRP78增加了肺癌A549细胞对DDP敏感性,联合应用TM和DDP有望成为治疗肺癌的新策略。     

miR-34a逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性及其机制

目的探讨过表达miR-34a对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及可能机制。方法成功构建过表达miR-34a的真核载体p CDNA3.1+miR-34a后,将A549/DDP细胞分为对照组(无转染)、空转染组(转染空质粒)和过表达组(转染p CDNA3.1+miR-34a),采用实时荧光定量PCR(q PCR)法检测转染24、48、72及96 h后各组miR-34a水平;给予不同浓度DDP(2、4、8、16、32和64μg/ml)处理48 h后采用CCK-8法比较各组对DDP的敏感性,流式细胞仪PI/Annexin V双染法检测各组转染48、96 h后的凋亡率,分别采用Western印迹检测各组转染48、96 h后常见耐药基因的表达情况。结果 A549/DDP细胞的miR-34a水平均低于其亲本细胞A549和正常支气管上皮细胞系HBE(P0.05);与其余两组相比,过表达组转染后的miR-34a水平升高,且对A549/DDP细胞的增殖抑制率升高(P0.05);过表达组的半数抑制浓度均低于其余两组,过表达组转染48、96 h后的凋亡率高于其余两组,而转染48 h后的P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白1及肺耐药相关蛋白的水平低于其余两组(P0.05);对照组和空转染组以上指标的差异均无统计学意义(P0.05)。结论 A549/DDP细胞中miR-34a水平较低,通过真核载体将其过表达后可抑制增殖率并提高其对DDP的敏感性,可能与其诱导凋亡及降低耐药基因的表达有关。     

miR-200c通过下调TUBB3基因表达逆转老年肺癌患者顺铂耐药性的机制

目的探讨miR-200c逆转肺癌细胞顺铂耐药性的作用机制。方法 miR-200c模拟物转染肺癌A549细胞后,采用实时定量PCR法检测miR-200c的表达;采用细胞活力测定(MTS)法检测miR-200c对肺癌A549细胞顺铂耐受性的影响。采用流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞凋亡率的变化。采用Western blotting检测肿瘤细胞耐药蛋白survivin和Bcl-2蛋白的表达。通过生物信息学分析发现miR-200c下游靶分子TUBB3表达存在差异后,构建TUBB3 3′UTR的野生型和突变型荧光素酶报告载体,然后利用双荧光素酶活性分析miR-200c对TUBB3基因表达的结合位点和调控作用。通过Western blotting检测miR-200c对TUBB3蛋白表达的调控作用以及Bcl-2蛋白和肿瘤细胞耐药蛋白survivin的表达。采用SPSS 19.0统计软件分析实验数据。结果与对照组相比,miR-200c转染肺癌细胞株后,肺癌细胞对顺铂的敏感性呈明显增加趋势[IC_(50)分别为(37.3±3.1)和(15.3±3.3)μmol/L,P0.01]。过表达miR-200c的A549/DDP组的细胞凋亡率明显高于NC组(P0.01)。而肿瘤耐药相关基因Bcl-2和survivin蛋白表达降低。转染miR-200c mimics的A549/DDP细胞中TUBB3蛋白和mRNA的表达均下调(P0.01)。双荧光素酶活性分析显示miR-200c对TUBB3基因表达具有调控作用(P0.01)。这些结果均证实TUBB3为miR-200c的下游靶基因。pcDNA-TUBB3质粒转染后,过表达miR-200c的A549/DDP细胞株survivin和Bcl-2蛋白表达较miR-200c mimics组上调。结论 miR-200c可通过下调TUBB3基因的表达逆转肺癌顺铂耐药细胞的耐药性。     

沉默Survivin人耐药肺癌细胞凋亡相关基因表达变化及临床意义

目的探讨沉默Survivin基因后人耐药肺腺癌(A549DDP)细胞系凋亡相关基因表达变化及临床意义。方法应用RT-PCR法及Western印迹法比较Survivin在人肺腺癌A549细胞系及其耐药A549DDP细胞系的表达水平;通过小分子RNA干扰沉默Survivin基因,并采用微阵列PCR基因芯片(PCR-Array)技术比较沉默Survivin后A549DDP细胞凋亡相关基因表达水平变化。结果 (1)Survivin mRNA、Survivin蛋白在人耐药非小细胞肺癌细胞系呈现高表达。(2)沉默Survivin后A549DDP细胞部分抗/促凋亡基因表达发生改变,促凋亡基因TP53、CASP3、CASP7呈高表达,抗凋亡基因bcl-2、TRAF1、BFAR呈低表达。结论 (1)Survivin与部分抗/促凋亡基因共同参与了非小细胞肺癌耐药的发生。(2)封闭Survivin可改变耐药肺癌细胞的促/抗凋亡基因的表达,Survivin可能作为上游调控点参与调控部分促/抗凋亡基因组的表达。(3)Survivin可能成为逆转肺癌耐药的一个新靶点。     

BAG-1基因沉默对非小细胞肺癌放射敏感性的影响及机制

目的探讨BAG-1基因与非小细胞肺癌放射敏感性的关系,为非小细胞肺癌个体化治疗提供理论依据。方法对A549肺腺癌细胞、H460大细胞癌及NCL-H520鳞癌细胞三株非小细胞肺癌细胞株及人胚肾细胞株HEK293行细胞放射敏感性试验,采用Western blot法检测各细胞株中BAG-1蛋白表达情况。选择其中对放射线相对较抗拒、BAG-1蛋白表达最高的A549细胞株,构建干扰载体pGCsi-BAG-1并筛选BAG-1基因沉默细胞株,用shRNA-2转染,酶标仪检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率,放射敏感性试验观察细胞对放射线的敏感性。结果 shRNA-2转染的细胞株生长受到抑制,且随时间延长抑制作用明显,而阴性对照质粒转染的A549细胞株生长无明显变化;6 Gy射线照射后24 h,shRNA-2转染细胞凋亡率为(49.6±4.23)%,未转染的A549细胞为(15.3±2.11)%,阴性对照质粒转染细胞为(14.8±3.55)%,shRNA-2转染细胞凋亡率较未转染细胞增加了3.2倍(P<0.01),而阴性对照转染细胞与未转染细胞间相比差异无统计学意义;亲本A549细胞和阴性对照转染细胞之间的放射敏感性无差异(P>0.05)。而shRNA-2转染细胞的放射敏感性明显增加,与前二者比较差异有显著性(P<0.05)。结论 BAG-1基因沉默可增强非小细胞肺癌放射敏感性,可能机制为BAG-1基因沉默后抑制细胞生长,抗凋亡作用减弱,细胞内BAG-1分布发生改变,细胞对射线更敏感。     

RNAi技术对A549细胞survivin基因表达及顺铂敏感性的影响

目的 利用RNA干扰(RNAi)技术沉默抗凋亡基因survivin,观察其对人肺腺癌细胞A549增殖以及顺铂药物敏感性的影响.方法 将靶向survivin的基因片段插入到载体后构建重组质粒,将其导入A549细胞,RT-PCR及免疫荧光法分析转染前后A549细胞survivin mRNA及蛋白的表达情况,MTT法检测转染后A549细胞对顺铂的敏感性变化.结果 成功构建pGenesil1.1-survivin重组质粒.转染重组质粒后,A549细胞survivin mRNA和蛋白的表达明显降低;转染前顺铂对A549细胞的IC50明显高于转染后(P＜0.05).结论 靶向survivin的RNAi表达载体能下调survivin基因表达,增强顺铂对A549细胞的药物敏感性.     

顺铂通过抑制RIP活性增强rhTRAIL杀伤肺癌A549细胞

目的探讨顺铂(DDP)通过抑制受体相互作用蛋白(RIP)增强肺癌细胞A549对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)敏感性的分子机制。方法 Western印迹检测顺铂、Nec-1作用A549细胞后RIP的蛋白表达。MTT法检测联合应用DDP+rh TRAIL和Nec-1+rh TRAIL作用后A549细胞的生长抑制率。Western印迹检测DDP+rh TRAIL和Nec-1+rh TRAIL对A549凋亡相关蛋白caspase-8的活化情况。流式细胞仪检测DDP+rh TRAIL和Nec-1+rh TRAIL作用后对A549细胞凋亡的影响。结果 DDP和Nec-1能显著降低A549细胞中RIP的蛋白水平,DDP、Nec-1联合rh TRAIL可以实现caspase-8的活化,促进rh TRAIL对A549细胞的杀伤作用,凋亡率从(5.9±4.93)%提高到(60.5±4.93)%和(64.1±5.17)%(P0.01)。抑制率分别提高到(65.5±4.93)%和(76.3±9.52)%(P0.01)。结论抑制RIP蛋白活性能增加A549细胞对rh TRAIL诱导细胞凋亡的敏感性,有利于促进rh TRAIL蛋白在治疗NSCLC方面的应用。     

重构型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达载体诱导人肺腺癌细胞凋亡的意义

目的构建天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)表达载体,观察Caspase3表达载体对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法应用基因重组方法,建立重构型Caspase3基因的真核表达系统pcDNA3.1revCaspase3质粒和野生型pcDNA3.1Caspase3质粒。将实验细胞分为3组转染pcDNA3.1revCaspase3质粒组,转染pcDNA3.1Caspase3质粒组,转染pcDNA3.1质粒空白对照组。前2组用Caspase3抑制剂DEVDfmk干预。应用Caspase3酶活性分析、流式细胞仪及甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测A549细胞Caspase3酶活性变化及细胞凋亡和增殖情况。结果(1)pcDNA3.1revCaspase3质粒组、pcDNA3.1Caspase3质粒组的A549细胞Caspase3酶活性分别是(11.87±0.92)%、(5.34±0.38)%(t=16.02,P<0.01);用Caspase3抑制剂DEVDfmk干预后,pcDNA3.1revCaspase3质粒组酶活性为(7.04±0.48)%,仍明显高于野生型pcDNA3.1Caspase3质粒组的(4.51±0.20)%(t=11.86,P<0.01)。(2)流式细胞分析结果显示,pcDNA3.1revCaspase3质粒组、pcDNA3.1Caspase3质粒组和pcDNA3.1质粒组的A549细胞凋亡率分别是(20.1±3.5)%、(7.8±2.8)%、(1.4±0.3)%,3组差异有统计学意义(F=44.01,P<0.01)。(3)MTT比色检测显示pcDNA3.1revCaspase3质粒组、pcDNA3.1Caspase3质粒组和pcDNA3.1质粒组的A549细胞生存率分别是(35.7±1.1)%、(72.8±2.9)%、(85.4±4.8)%,转染pcDNA3.1revCaspase3质粒组生存率明显低于其他两组(F=375.07,P<0.01)。结论pcDNA3.1revCaspase3在A549细胞内有较强的自身活化能力,对Caspase3抑制剂抵抗作用较强,可明显诱导A549细胞凋亡并抑制A549细胞生长。     

腺病毒介导的CIAPIN1基因对肺癌细胞生长和细胞周期的影响

目的 以重组腺病毒载体介导细胞因子诱导的凋亡抑制分子1(cytokine induced apoptosis inhibitor 1,CIAPIN1)基因转染人肺腺癌细胞系A549,观察并鉴定该基因在腺癌细胞中的表达及其对细胞生长和细胞周期的影响.方法 构建腺病毒载体介导CIAPIN1基因(Ad-CIAPIN1),转染到低水平表达CIAPIN1的人肺腺癌细胞系A549,采用Western blot检测目的蛋白的表达;台盼蓝染色计数活细胞数,绘制细胞生长曲线;流式细胞术(FCM)分析细胞周期及细胞凋亡的变化.结果 外源性CIAPIN1基因在A549肺癌细胞获得高水平的表达;CIAPIN1能显著抑制A549的生长(P＜0.01);流式细胞仪检测显示肺癌细胞发生凋亡,并出现明显的G1/S期阻滞现象.结论 以腺病毒为载体介导CIAPIN1基因在A549细胞内表达,可发挥抑制细胞生长、诱发细胞凋亡及参与细胞周期调控的作用.提示Ad-CIAPIN1基因可能在人肺癌基因治疗中发挥重要作用.     

问号钩端螺旋体毒力基因mviN的表达及细胞毒性作用研究

目的克隆表达问号钩端螺旋体毒力基因mviN并观察表达产物对血管内皮细胞ECV304及肺上皮细胞A549的毒性作用。方法将mviN基因插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET-mviN,转化大肠杆菌BL21(DH3)以高效表达携带组氨酸标签的Trx-MviN融合蛋白,并作亲和层析纯化。以XTT法检测毒力蛋白Trx-MviN对ECV304及A549细胞增殖的抑制作用,同时以流式细胞术检测其作用于ECV304及A549后的细胞凋亡率。结果成功构建了重组质粒pET-mviN并高效表达出Trx-MviN融合蛋白;毒力蛋白Trx-MviN作用于ECV304及A549后,与对照组相比较,其细胞增殖被显著抑制(P<0.05),而细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论重组质粒pET-mviN高效表达出Trx-MviN融合蛋白,纯化后的融合蛋白Trx-MviN对ECV304及A549具有细胞毒性作用。     

自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对顺铂诱导肺癌A549细胞凋亡的影响

目的 探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对顺铂(DDP)诱导肺癌A549细胞凋亡的影响.方法 用MTT法检测药物最适浓度和作用时间,以及不同组肺癌A549细胞增殖率;通过MDC染色法将细胞染色检测自噬空泡的变化;Hoechst33342染色检测细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 DDP作用于A549细胞后细胞增殖率明显下降,并在细胞内可见大量自噬空泡及细胞核染色质凝聚.3-MA和DDP联合作用组细胞增殖率较单独应用DDP组明显下降,细胞自噬水平降低,细胞凋亡率明显增加.结论 DDP能诱导肺癌A549细胞发生自噬和凋亡,而抑制自噬可以促进DDP诱导的细胞凋亡.     

蛋白酶体抑制剂MG132联合顺铂诱导肺癌A549细胞凋亡的机制

目的探讨蛋白酶体抑制剂(MG132)与顺铂(DDP)联合诱导肺癌A549细胞凋亡的机制及作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度MG132、DDP对肺癌A549细胞的最适作用时间以及抑制率;通过Hochest33342染色法检测细胞形态变化;应用流式细胞术(FCW)检测MG132、DDP及两药联合作用于肺癌A549细胞的凋亡率;采用Western印迹检测药物干预前后细胞中促凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶(caspase)9、核转录因子(NF-κB)的表达情况。结果 MTT结果显示MG132、DDP能有效抑制细胞的增殖,呈浓度及时间依赖性;FCW结果显示MG132与DDP联合用药组作用于肺癌A549细胞凋亡率为(68.27±0.31)%,与MG132(22.13±0.36)%、DDP(25.76±0.25)%单用药组相比,细胞凋亡率明显提高(P<0.05)。Western印迹结果显示,与单用药组相比较,联合用药组凋亡相关蛋白caspase9表达明显增强,NF-κB表达显著减少。结论 MG132与DDP联合应用可明显提高细胞凋亡率,其机制可能是通过提高促凋亡蛋白caspase9的表达,并降低细胞NF-κB的表达而实现的。     

人IFN-β重组慢病毒的制备及对肺癌细胞增殖的影响

人β干扰素;;慢病毒载体;;基因转染;;A549细胞 %X 目的构建人β干扰素（IFN-β）基因重组慢病毒,体外转染人肺癌A549细胞,观察IFN-β基因的表达及其对A549细胞的增殖抑制作用。方法通过聚合酶链反应（PCR）获得人IFN-β基因,克隆到慢病毒载体,通过转染293细胞包装制备慢病毒液,并体外感染A549细胞,采用RT-PCR及Western Blot检测IFN-β基因在A549细胞中的表达情况。应用MTS法检测转染后对A549细胞增殖的影响。结果 IFN-β基因重组质粒经酶切后电泳结果显示能得到与理论大小相符的片段,基因测序结果与GenBank序列完全一致,重组质粒经鉴定正确,转染293细胞获得病毒滴度为3×107PFU/ml,体外感染A549细胞后,RT-PCR、Western Blot检测IFN-β表达水平明显增高,并可明显抑制A549细胞增殖。结论本研究成功构建IFN-β基因重组慢病毒,体外感染后能够稳定表达并抑制A549细胞增殖,为应用IFN-β基因治疗肺癌奠定初步基础。     

Survivin基因在牛蒡子苷元增强人肺癌H460细胞化疗敏感性中的作用

目的 研究Survivin基因在牛蒡子苷元促进肺癌细胞化疗敏感性中的作用.方法 应用RT-PCR技术从H460细胞中扩增全长人Survivin cDNA,并将其克隆至pcDNA3.1(+)表达载体,构建人Survivin基因真核表达质粒.将pcDNA3.1-Survivin重组质粒或空载体分别转染H460细胞,孵育24 h后,应用Western blot法检测Survivin过表达情况;转染细胞与牛蒡子苷元单独或联合顺铂处理,应用Annexin-Ⅴ/PI染色法检测细胞凋亡情况.结果 与未转染和转染空载体质粒的H460细胞相比,转染pcDNA3.1-Survivin重组质粒H460细胞Survivin水平显著增加,提高大约10倍.低剂量顺铂对H460细胞Survivin蛋白表达影响不显著,而牛蒡子苷元可显著抑制Survivin蛋白表达水平.当牛蒡子苷元与顺铂联合作用时,Survivin蛋白表达抑制程度更大.与转染空载体质粒相比,转染Survivin表达重组质粒的细胞对牛蒡子苷元单独或联合顺铂诱导的凋亡具有抗性,细胞凋亡比率显著下降.结论 牛蒡子苷元抑制人肺癌细胞中Survivin基因表达.牛蒡子苷元促人肺癌细胞顺铂敏感性与抑制Survivin通路有关.     

ATF5基因siRNA对肺癌细胞凋亡及化疗增敏的机制

目的探讨转录激活因子(ATF5)基因siRNA对肺癌细胞活力、凋亡及化疗敏感性的影响。方法将ATF5的特异性siRNA(ATF5-siRNA组)转染人肺癌A549细胞,同时转染阴性对照siRNA(阴性组),并设置空白组。采用Western印迹检测ATF5表达沉默效果。噻唑蓝(MTT)、流式细胞术、Western印迹分别检测沉默ATF5表达后的细胞活力、凋亡率、紫杉醇敏感性及相关蛋白表达。结果 ATF5-siRNA组ATF5表达显著低于空白组(P0.05)。ATF5-siRNA组A549细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达明显降低,Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved caspase)3蛋白表达显著升高,细胞对紫杉醇敏感性显著升高,多药耐受相关蛋白基因(MRP)1蛋白表达明显降低,与空白组比较差异均具有统计学意义(P0.05)。结论利用siRNA沉默ATF5基因表达可抑制A549细胞活力,诱导细胞凋亡,增强紫杉醇敏感性,机制可能与下调PCNA和MRP1表达,上调Bax和cleaved caspase3表达有关。     

人CCR7基因真核表达载体构建及表达

目的构建人CCR7基因真核表达质粒,使其在真核细胞中稳定表达,为其临床应用奠定基础。方法以RT—PCR法从临床肺腺癌标本中扩增出CCR7编码区序列,定向克隆至载体pEGFP—N1中构建质粒pEGFP—CCR7,采用脂质体介导的基因转染技术将重组质粒DNA导人肺腺癌A549细胞中,加入G418对细胞进行筛选获得稳定表达CCR7的细胞,并用流式细胞仪对重组质粒的表达进行鉴定。结果PCR、酶切及测序结果证明重组质粒pEGFP—CCR7构建正确,荧光显微镜及流式细胞术在稳定转染A549细胞中检测到人CCR7的表达。结论人CCR7基因真核表达质粒已成功构建并稳定转染肺癌A549细胞株;本研究为临床应用提供了实验依据。     

PI3K/Akt抑制剂联合顺铂治疗肺癌的实验研究

目的 探讨PI3K/Akt抑制剂LY294002[2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮]联合化疗药物顺铂(DDP)治疗肺癌的效应及可能机制,以期为肺癌的临床治疗提供新的理论依据.方法 培养肺腺癌A549细胞,采用MTT方法及流式细胞仪检测LY294002联合DDP对A549细胞增殖及凋亡的影响;通过裸鼠移植瘤实验检测LY294002联合DDP对A549细胞成瘤性的影响.结果 在一定剂量范围内,LY294002与DDP均可抑制A549细胞的生长,其抑制作用呈量-效关系.LY294002与DDP联合作用可增强对A549细胞的抑制作用.LY294002与DDP均可有效的诱导A549细胞凋亡,联用后凋亡率显著增加.裸鼠移植瘤实验显示,LY294002与DDP均可抑制移植瘤的生长,联用后抑瘤率增加.结论 LY294002可增强DDP对A549细胞、裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用,该作用可能是通过增强对A549细胞增殖的抑制以及诱导其凋亡来实现的.     

红景天联合顺铂协同诱导人肺腺癌耐药细胞的凋亡

目的观察红景天联合顺铂对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的生长抑制和凋亡诱导作用。方法应用MTT法检测红景天、顺铂对A549/DDP细胞的生长抑制并计算IC50,采用Annexin V-FITC试剂盒、流式细胞仪定量检测凋亡率;采用Western印迹法检测各组细胞Caspase-3、聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)表达水平。结果 A549/DDP对顺铂具有一定耐药性;在红景天、顺铂分别作用24 h后,A549/DDP细胞凋亡率为(11.49+1.73)%、(19.87+3.65)%;显著低于联合用药组(34.88+5.62)%(P<0.05)。联合用药组Caspase-3、PARP活化程度高于红景天组、顺铂组。结论联合红景天与顺铂具有协同作用,抑制肺腺癌耐药细胞生长,促进肺腺癌耐药细胞凋亡,提示红景天在化疗耐药的肺癌治疗中有一定的应用前景。     

姜黄素抗人肺腺癌A549/DDP细胞增殖及诱导凋亡的作用

目的 研究姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定细胞对顺铂的敏感性和姜黄素对细胞增殖的抑制作用;倒置相差显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态学的变化;应用原位末端标记(TUNEL)染色及流式细胞仪检测细胞凋亡情况;以Western blot分析凋亡相关蛋白表达变化.结果 实验中所用的A549/DDP细胞对顺铂耐药,耐药指数为10.82.姜黄素对A549及A549/DDP细胞增殖均有抑制作用,并且呈时间、浓度依赖性(P＜0.05),对两细胞株的半数抑制浓度分别为16.28/μmol/L和18.06μmol/L,差异无统计学意义(P＞0.05).姜黄素处理A549/DDP细胞后,细胞变形、缩小、脱落.Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小、变形,致密浓染,荧光成团块分布.TUNEL法以及流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P＜0.05).Western blot结果显示,随姜黄素浓度的增加,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶8(cysteinyl aspartate-specific protease-8,caspase-8)p10蛋白水平增加.结论 A549/DDP细胞对姜黄素无抗药性,姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制作用,并能诱导细胞凋亡.caspase-8的活化是其中的机制之一.     

MicroRNA-15b 下调Bcl-2促进耐药肺癌细胞凋亡

目的 探讨微小RNA-15b （microRNA-15b,miR-15b）对人肺癌耐药细胞A549/DDP凋亡的影响.方法 采用体外转染法将MicroRNA-15b瞬时转染到A549/DDP细胞后,应用Real-time PCR检测A549/DDP细胞中MicroRNA-15b的表达情况;流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡变化;并用Western印迹法（Western blot）检测细胞中Bcl-2表达.结果 转染后miR-15b组的miR-15b表达水平显著增加（P〈0.05）;miR-15b组细胞凋亡率为：32.4%±5.1%,与Mock组（5.73%±1.2%）和miR-15b-Cont（6.24%±2.4%）比较,差异具有统计学意义（P〈0.05）;miR-15b组的Bcl-2表达量较对照组明显增加.结论 miR-15b可能通过下调Bcl-2的表达从而诱导A549/DDP细胞的凋亡,这可能为肺癌耐药的治疗提供新靶点.