大肠癌组织中HGF、c-Met、MVD的表达变化及意义

目的观察大肠癌组织中肝细胞生长因子（HGF）及其受体c-Met和微血管密度（MVD）的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化法检测48例大肠癌和9例正常大肠组织中的HGF、c-Met蛋白,并应用CD34标记微血管计算MVD。结果大肠癌组织中HGF蛋白阳性35例,c-Met蛋白阳性30例,MVD为（28.63±7.98）条/HP;正常大肠组织中分别为2、1例及（5.37±0.85）条/HP,两组比较,P均〈0.05。HGF、c-Met、MVD表达与大肠癌Dukes分期和淋巴结转移有关（P均〈0.05）。大肠癌组织中HGF、c-Met蛋白的表达呈正相关（r=0.303,P〈0.05）,HGF、c-Met蛋白阳性者MVD均显著高于HGF、c-Met蛋白阴性者（P均〈0.01）。结论大肠癌组织中HGF、c-Met、MVD表达增加,三者在大肠癌的浸润、转移中具有一定作用。     

玻璃酸钠通过干扰HGF/c-Met介导的MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞增殖

目的 分析玻璃酸钠影响肝细胞生长因子(HGF)受体(c-Met)介导的人胃癌(GC)AGS细胞增殖及其作用机制。方法 应用不同浓度的玻璃酸钠作用于AGS细胞。应用HGF激活c-Met。细胞增殖与毒性检测试剂盒(CVTK)测定细胞增殖；Western印迹测定c-Met酪氨酸(Tyr)1234位点磷酸化(p-c-Met-Y1234)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-MEK)、磷酸化细胞外调节激酶(p-ERK)1/2、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)相对蛋白表达。结果 HGF明显促进AGS细胞增殖，并诱导细胞内p-c-Met(Y1234)、p-MEK1/2、p-ERK1/2、p-PI3K、p-AKT明显高表达(P<0.05);不同浓度玻璃酸钠作用细胞后，由HGF引起的细胞增殖明显受到抑制，p-c-Met(Y1234)、p-MEK1/2、p-ERK1/2、p-PI3K、p-AKT表达水平显著降低(P<0.05)。结论 璃酸钠通过抑制人AGS细胞的c-Met酪氨酸磷酸化，调控HGF/c-Met介导的MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路，进而抑...     

STAT3、p-STAT3和E-cadherin在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨STAT3、p-STAT3、E-cadherin在鼻咽癌组织中的表达及其与鼻咽癌临床病理特征的关系。方法收集鼻咽癌初治病例40例。应用免疫组织化学法检测其STAT3、p-STAT3、E-cadherin蛋白表达。结果 STAT3、p-STAT3、E-cadherin蛋白在鼻咽癌组织阳性表达率分别为80%(32/40)、65%(26/40)和12. 5%(5/40),在慢性鼻咽炎组织中的阳性表达率分别为25%(5/20),0%(0/20)和100%(20/20),两组STAT3、p-STAT3、E-cadherin表达差异均有统计学意义(P0. 05); p-STAT3蛋白阳性表达与年龄、N分期和临床分期有关(P0. 05);在鼻咽癌组织中STAT3与E-cadherin蛋白阳性表达水平呈明显的负相关(P0. 05)。结论 STAT3、p-STAT3、E-cadherin可能与鼻咽癌的发生、发展有着密切关系,对其检测有助于判断鼻咽癌的恶性程度及进展情况。     

慢性哮喘患者肺组织 IL-21和转录激活因子3的表达

目的：研究慢性哮喘患者肺组织中 IL-21和转录激活因子3(p-STAT3)表达水平。方法选择30只小鼠随机分为实验组和对照组,实验组进行哮喘干预,检测 IL-21和 p-STAT3的表达水平。实验组小鼠分别在第1、14天皮下注射0.15 ml 卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)混合试剂,在第20天将小鼠放置于实验箱中,用雾化的方法将 OVA 混合试剂喷向实验箱中,2次/d,每次20 min,观察小鼠出现的症状,对照组则在第1、14天皮下注射0.15 ml 无菌氯化钠注射液,其余处置同实验组小鼠。结果实验组小鼠的炎性细胞总数为(18.80±1.82)×105/L,嗜酸粒细胞数为(1.02±0.22)×105/L,单核细胞为(1.56±0.24)×105/L。与对照组比较,差异有统计学意义(t =2.449、2.656、2.361,P 值均<0.05)。实验组小鼠的 IL-21表达水平为(65.45±5.56)ng/L,IL-2表达水平为(55.48±12.11)ng/L,p-STAT3表达水平为(76.86±9.46)ng/L,与对照组比较,差异有统计学意义(t =13.057、12.694、3.982,P 值均<0.05)。结论慢性哮喘小鼠肺组织 IL-21和p-STAT3表达水平明显增加。     

STAT3蛋白在肝癌组织中的表达及临床意义

目的探讨STAT3和p-STAT3蛋白在肝癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学的方法检测了90例肝癌组织及其相应的癌旁组织中STAT3和p-STAT3蛋白的表达,分析STAT3和p-STAT3蛋白表达与临床病理特征及患者预后的关系。特征参数之间用χ2检验;采用Kaplan-Meier法进行生存分析,用Log-rank检验进行曲线间比较;运用Cox回归进行单因素及多因素生存分析。结果肝癌组织中STAT3主要在细胞质中表达,而p-STAT3主要表达在细胞核内;STAT3和p-STAT3在肝癌组织中阳性表达率明显高于癌旁组织;STAT3和p-STAT3蛋白的表达与卫星灶（P=0.033,P〈0.01）、血管浸润（P=0.046,P〈0.01）及AJCC分期（P〈0.01,P〈0.01）有关,与患者的性别（P=0.280,P=0.403）、年龄（P=0.432,P=0.844）、肿瘤大小（P=0.762,P=0.161）、肿瘤数量（P=0.301,P=0.326）、肿瘤的分化程度（P=0.753,P=0.910）及甲胎蛋白（P=0.441,P=0.080）比较差异无统计学意义;肝癌组织中STAT3和p-STAT3蛋白高表达的患者5年生存率明显低于低表达患者。结论 STAT3和p-STAT3蛋白可能参与了肝癌的浸润转移,有望成为一种新的肝癌预后参考指标。     

STAT3、Survivin在胆囊癌中的表达及意义

目的探讨胆囊癌中STAT3、p-STAT3和Survivin蛋白表达及其在胆囊癌发生、发展中的意义。方法采用免疫组织化学SP法检测45例胆囊癌及相应45例癌旁胆囊组织、20例慢性胆囊炎组织中STAT3、p-STAT3及Survivin蛋白的表达,并分析其与临床病理特征、预后的关系。结果本组45例胆囊癌组织中STAT3、p-STAT3和Survivin蛋白阳性率分别为66.7%（30/45）、55.6%（25/45）、64%（29/45）,明显高于癌旁正常组织（P〈0.01）和慢性胆囊炎组织（P〈0.01）。在胆囊癌组织中STAT3、p-STAT3的表达与Survivin表达均呈正相关（r=0.558,0.830;P〈0.01）。STAT3、p-STAT3和Survivin蛋白的表达与胆囊癌病理组织分级、Nevin分期、有无淋巴结转移和3年生存率有关（P〈0.01）。结论 STAT3、p-STAT3、Survivin参与了胆囊癌的发生、发展,可能作为判断胆囊癌转移、预后的临床指标。     

罗格列酮对急性坏死性胰腺炎大鼠肺损伤的保护机制

目的 探讨罗格列酮(ROSI)对急性坏死性胰腺炎(ANP)肺损伤的保护机制.方法 雄性Wistar大鼠75只,按随机表法分为假手术组、ANP组和罗格列酮处理组(ROSI组).采用胆胰管逆行注射5％牛磺胆酸钠制备ANP模型.ANP组在制模后30 min股静脉注射10％二甲基亚砜(DMSO)0.2 ml/100 g体重.ROSI组在制模后30 min股静脉注射10％ DMSO溶解的ROSI 6 mg/kg体重.假手术组在胆胰管内注入等容积生理盐水,术后30 min股静脉注射等量10％ DMSO.术后3、6、12 h分批处死大鼠,取血检测血清淀粉酶,测肺湿、干重比(W/D),取肺组织行病理学检查,蛋白质印迹法检测肺组织STAT1蛋白及磷酸化STAT1(p-STAT1)蛋白表达.结果 ANP组血淀粉酶活性、肺W/D、肺组织病理评分均随时间延长逐渐升高,在各时点均显著高于假手术组(P值均＜0.05),12 h时达峰值,分别为(5017±203) U/L、3.12±1.30、(3.33±0.18)分；STAT1蛋白表达无明显变化,p-STAT1的表达水平则在3h达到峰值,为0.87 ±0.06,以后逐渐下降,但仍显著高于假手术组(P值均＜0.01).ROSI组12 h时的血淀粉酶活性、肺W/D、肺组织病理评分分别为(1912±164) U/L、1.83 ±1.26、(2.78±0.16)分,均显著低于同时点的ANP组(P值均＜0.05)；STAT1蛋白表达无明显变化,3、6、12 h的p-STAT1表达量分别为0.41±0.04、0.22 ±0.05、0.15 ±0.03,均显著低于同时点的ANP组(P值均＜0.05).结论 罗格列酮对ANP大鼠的肺损伤具有保护作用,其机制可能与早期抑制肺组织STAT1蛋白磷酸化有关.     

PI3K、AKT、MRP在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的 检测PI3K、AKT、MRP蛋白在胰腺癌组织中的表达,探讨它们的临床病理学意义及三者之间的相关性.方法 采用免疫组织化学法检测43例胰腺癌组织、9例CP组织和8例正常胰腺组织中PI3K、AKT、MRP蛋白的表达.结果 PI3K、AKT、MRP在胰腺癌组织中的阳性表达率分别为46.51%、55.81%和39.53%,均高于CP和正常胰腺组织中的表达(P<0.01和P<0.05).PI3K、AKT蛋白表达与胰腺癌的淋巴结转移和TNM分期相关(P<0.05).胰腺癌组织中MRP与PBK均异常表达者为32.56%,均正常表达者为46.51%,两者呈显著正相关(r=0.581,P<0.01);MRP与AKT均异常表达者为32.56%,均正常表达者为37.21%,两者呈显著正相关(r=0.432,P<0.05);PI3K与AKT均异常表达者为37.21%,均正常表达者32.56%,两者呈显著正相关(r=0.306,P<0.05).结论 胰腺癌组织PI3K、AKT和MRP蛋白表达上调,三者呈正相关.P13K和AKT的表达与淋巴结转移及TNM分期有关.     

微小RNA-124-3p对自发性高血压大鼠心肌线粒体功能和PI3K/AKT信号通路的调控作用

目的 探究微小RNA(miR)-124-3p对自发性高血压(SHR)大鼠心肌线粒体功能和PI3K/AKT信号通路的调控作用。方法 45只SHR大鼠分为SHR组、SHR+miR-124-3p 激动剂(agomir)和SHR+miR-124-3p 拮抗剂(antagomir)组,每组各15只,另选15只健康大鼠为对照组。通过尾静脉注射miR-124-3p agomir和miR-124-3p antagomir(300 μg)以提高和抑制心肌细胞中miR-124-5p的水平。4周后检测各组大鼠心肌酶指标、心肌组织中miR-124-3p、细胞凋亡水平、线粒体凋亡标志蛋白[细胞色素C(Cyt C)、caspase9、cleaved caspase3]、PI3K/AKT通路水平。双荧光素酶报告实验验证miR-124-3p和PI3K的靶向关系。将心肌细胞分为miR-124-3p NC组和miR-124-3p mimic组,细胞分别转染miR-124-3p NC和miR-124-3p mimic,检测各组细胞中miR-124-3p和PI3K蛋白水平。结果 对照组、SHR组、SHR+miR-124-3p agomir和SHR+miR-124-3p antagomir组大鼠心肌组织中的miR-124-3p水平分别为(0.87±0.12)、(2.56±0.38)、(4.51±0.86)和(1.13±0.16)。四组大鼠各项指标比较差异有统计学意义(P0.05)。SHR组的乳酸脱氢酶[(LDH,1982.35±207.44)IU/L]、肌酸激酶同工酶[(CK-MB,942.55±107.62)IU/L]、凋亡细胞数目[(27.18±2.10)个]、Cyt C、caspase9和cleaved-caspase3蛋白表达量显著高于对照组,PI3K和AKT mRNA和蛋白表达量显著低于对照组(P0.05)。SHR+miR-124-3p agomir组的LDH[(2371.92±244.26)IU/L]、CK-MB[(1301.42±135.49)IU/L]、凋亡细胞数目[(52.76±3.56)]个、Cyt C、caspase9和cleaved-caspase3蛋白表达量显著高于SHR组,PI3K和AKT mRNA和蛋白表达量显著低于SHR组(P0.05)。SHR+miR-124-3p antagomir组的LDH[(1624.43±176.31)IU/L]、CK-MB[(722.41±78.43)IU/L]、凋亡细胞数目[(11.85±0.97)个]、Cyt C、caspase9和cleaved-caspase3蛋白表达量显著低于SHR组,PI3K和AKT mRNA和蛋白表达量显著高于SHR组(P0.05)。双荧光素酶报告结果表明miR-124-3p与PI3K靶向结合。MiR-124-3p mimic组的miR-124-3p水平显著高于miR-124-3p NC组,PI3K mRNA和蛋白的表达水平显著低于miR-124-3p NC组(P0.05)。结论 SHR大鼠心肌组织中miR-124-3p升高,其水平会抑制PI3K/AKT加剧线粒体凋亡途径,导致心肌细胞凋亡。     

磷脂酰肌醇3-激酶γ对急性胰腺炎小鼠胰腺腺泡细胞自噬作用的影响

目的 探讨磷脂酰肌醇3-激酶γ(PI3Kγ)对小鼠实验性急性胰腺炎胰腺腺泡细胞自噬作用的影响,并探讨其意义.方法 野生型C57 BL/6小鼠和PI3Kγ基因敲除小鼠各18只,按数字表法随机分为对照组(6只)和急性胰腺炎(AP)组(12只),采用蛙皮素50μg/kg体重腹腔内注射7次、每次间隔1h的方法制备AP模型.首次注射后7h处死小鼠,光镜下观察胰腺病理学变化,免疫荧光检测自噬泡主要组成蛋白LC3颗粒,荧光分光光度计测定胰蛋白酶活性,蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白beclin1、LC3-Ⅱ和p62的表达.结果 AP组野生型小鼠和PI3Kγ基因敲除小鼠的胰腺自噬空泡数量分别为(5.14±0.85)、(2.25±0.54)个/每高倍视野(HPF),LC3荧光免疫颗粒数量分别为(78.6±9.38)、(26.4±4.21)个/HPF,胰蛋白酶活性分别为(0.827±0.126)、(0.358±0.098) pmol/mg蛋白,各组间差异均具有统计学意义(P值均＜0.05).野生型小鼠的p62蛋白表达较PI3Kγ基因敲除小鼠显著减弱(0.11比0.92,P＜0.05),面LC3 -Ⅱ、beclin1蛋白表达较PI3Kγ基因敲除小鼠显著增强(1.82比0.93,1.43比1.05,P值均＜0.05).结论 AP时PI3Kγ可能通过增强小鼠胰腺腺泡细胞的自噬作用,促进胰蛋白酶原的活化及诱导腺泡细胞坏死.     

冠心病患者高密度脂蛋白抗氧化能力及其对内皮细胞增殖、迁移的影响研究

目的探究冠心病(CHD)患者高密度脂蛋白(HDL)抗氧化能力及其对内皮细胞增殖、迁移的影响。方法选取2015年6—12月就诊于陕西中医药大学附属医院心内科的CHD患者48例,另选取同期在陕西中医药大学附属医院体检健康者28例,采用密度梯度离心法提取CHD患者和体检健康者HDL,采用cell-free法检测HDL抗氧化能力,比较CHD患者和体检健康者HDL的相对荧光强度值(RFU)。将4代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为空白对照组(不做任何处理)、阳性对照组(加入血管内皮生长因子)、对照组(加入体检健康者HDL)、实验组(加入CHD患者HDL),采用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测内皮细胞增殖情况,比较4组内皮细胞吸光度值;采用细胞划痕实验检测内皮细胞迁移能力,比较4组内皮细胞"水渠"宽度比值;采用Western bloting法检测HDL对内皮细胞磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(P-PI3K)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(P-AKT)蛋白表达的影响,比较空白对照组、对照组和实验组内皮细胞PI3K/GAPDH、AKT/GAPDH、P-PI3K/PI3K、P-AKT/AKT蛋白灰度值比值。结果 CHD患者HDL的RFU高于体检健康者(P<0.05)。空白对照组和实验组内皮细胞吸光度值高于阳性对照组和对照组(P<0.05)。实验组内皮细胞"水渠"宽度比值低于阳性对照组和对照组(P<0.05)。空白对照组、对照组和实验组内皮细胞PI3K/GAPDH和AKT/GAPDH蛋白灰度值比值比较,差异无统计学意义(P>0.05);对照组内皮细胞P-PI3K/PI3K和P-AKT/AKT蛋白灰度值比值高于空白对照组和实验组,实验组内皮细胞P-PI3K/PI3K和P-AKT/AKT蛋白灰度值比值低于空白对照组(P<0.05)。结论 CHD患者HDL抗氧化能力减弱,HDL可能通过抑制PI3K-AKT通路而影响内皮细胞增殖和迁移。     

STAT1/SOCS1在高迁移率族蛋白1诱导的大鼠滑膜细胞中的表达

目的 探讨高迁移率族蛋白(HMGB)1对滑膜细胞增殖的影响及机制.方法 ①常规培养的滑膜细胞,随机分为正常对照组和肿瘤坏死因子(TNF)-α组,培养6、12 h和24 h,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)免疫细胞化学法(ICC)检测HMGBI mRNA及蛋白在滑膜细胞中的表达变化;②常规培养的滑膜细胞,随机分为正常对照组、HMGB1组,分别培养6、12 h和24 h,RT-PCR检测磷酸化信号转导和转录激活因子(p-STAT1)mRNA表达;ICC和流式细胞术(FCM)检测p-STAT1、细胞激酶信号抑制剂(SOCSl)蛋白的表达;ICC检测PCNA蛋白的表达.结果 ①TNF-α刺激6、12、24 h显著上调HMGB1mRNA的表达[0.86,0.92,1.06 vs 0.70,P<0.01];其蛋白表达亦增强,HMGB1蛋白不仅表达于细胞核,而且出现于胞质中;② HMGB1作用6、12、24 h显著增强STAT1 mRNA及蛋白的表达量[0.30,0.69,1.05 vs 0.24,P<0.01]及[1.34±0.09,1.55±0.16,1.74±0.13 vs 1.00±0.15,P<0.01];SOCS1蛋白量分别为1.43±0.10、1.58±0.05和1.24±0.15,呈先升高后下降.③ p-STAT1与SOCS1蛋白表达呈负相关(r=-0.484,P=0.04).结论 HMGB1是滑膜细胞增殖过程中的重要细胞因子,其可能通过上调STAT1的表达和活性,促进细胞增殖.     

肝细胞生长因子的抗鼠心肌细胞凋亡作用与抑制钙敏感受体有关

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)在缺血再灌注损伤中的抗细胞凋亡作用与钙敏感性受体(CaSR)mRNA表达下调的关系.方法 分离的新生鼠心肌细胞,随机分为对照组、模拟心肌缺血再灌注组(I/R组)、特异性CaSR激活剂GdCl3组(GdCl3组)、GdCl3+Na+/Ca2+交换抑制剂NiCl2+L-型钙通道阻滞剂CdCl2组(GdCl3+NiCl2+CdCl2组)、GdCl3+选择性PI3K阻断剂LY294002组(GdCl3+LY294002组)、GdCl3+肝细胞生长因子HGF组(GdCl3+HGF组)、GdCl3+HGF+LY294002组.新生鼠心肌细胞经缺氧处理后在缺血缓冲液中培养2 h,然后在标准培养液中培养24 h,建立模拟心肌缺血再灌注(I/R)模型.TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡情况.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组CaSR mRNA表达.Western blot测定促凋亡蛋白Caspase-3,抗凋亡蛋白Bcl-2和磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K).结果 模拟的I/R增强了CaSR mRNA的表达(I/R组:2.62±0.41,对照组:1.00±0.31,P＜0.01)及心肌细胞的凋亡[I/R组:(15.32±2.54)%,对照组:(2.90±1.45)%,P＜0.01].GdCl3进一步增强了CaSR mRNA的表达(GdCl3组:4.46±0.62,I/R组:2.62±0.41,P＜0.01)及心肌细胞的凋亡[GdCl3组:(25.36±2.60)%,L/R组:(15.32±2.54)%,P＜0.01],同时上调了Caspase-3(GdCl3组:1.93±0.28,I/R组:1.50±0.21,P＜0.01),下调了Bcl2的表达(GdCl3组:0.82±0.18,I/R组:1.71±0.30,P＜0.01),抑制了PI3K的磷酸化(I/R组:0.87±0.08,GdCl3组:0.61±0.07,P＜0.01).GdCl3+LY294002组心肌细胞凋亡率显著高于GdCl3组[(32.60±3.42)%比(25.36±2.60)%,P＜0.01],但两组间CaSR mRNA的表达差异无统计学意义.HGF通过抑制Caspase-3(GdCl3+HGF组:1.12±0.23,GdCl3组:1.93±0.28,P＜0.05;GdCl3+HGF+LY294002组:1.87±0.31,GdCl3+LY294002组:3.86±0.47,P＜0.05)和促进Bcl-2的表达(GdCl3+HGF组:2.56±0.54,GdCl3组:0.82±0.18,P＜0.05;GdCl3+HGF+LY294002组:1.68±0.28,GdCl3+LY294002组:0.68±0.13,P＜0.05)减少了I/R和GdCl3诱导的心肌细胞凋亡[GdCl3+HGF组:(11.8±1.89)%,GdCl3组:(25.36±2.60)%,P＜0.05],同时促进了PI3K的磷酸化(GdCl3+HGF组:2.87±0.21,GdCl3组:0.61±0.07,P＜0.05;GdCl3+HGF+LY294002组:2.01±0.14,GdCl3+LY294002组:0.44±0.10,P＜0.05)、下调了CaSR mRNA的表达(GdCl3+HGF组:1.46±0.37,GdCl3组:4.46±0.62,P＜0.01).结论 HGF对心肌细胞的保护作用在I/R诱导的新生鼠心肌细胞凋亡中至少部分与抑制CaSR mRNA表达、促进PI3K的磷酸化途径活化从而下调Caspase-3和上调Bcl-2有关.     

大肠癌组织中PI3K、Akt和HGF的表达变化及意义

目的 观察磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)、丝苏氨酸激酶(Akt)和肝细胞生长因子(HGF)在大肠癌组织中的表达,探讨三者在大肠癌发生发展中的作用及其相关性.方法 采用免疫组化法检测48例大肠癌和9例正常大肠组织中PI3K、Akt和HGF.结果 大肠癌组织中PI3K、Akt和HGF的阳性表达率分别为60.42%、68.75%和72.92%,均明显高于正常大肠组织的11.11%、11.11%、22.22%(P均＜0.05);PI3K、Akt、HGF的表达呈正相关关系(r分别为0.348、0.465、0.451,P均＜0.05).PI3K、Akt和HGF异常表达与大肠癌Dukes分期和淋巴结转移有关(P＜0.05),而与其组织分化程度无关(P＞0.05).结论 大肠癌组织中PI3K、Akt和HGF表达均上调,其与大肠癌的生长、侵袭、转移密切相关;HGF可能通过促进PI3K/Akt信号通路的激活,增强肿瘤细胞侵袭能力.     

基于PI3K/AKT信号通路研究丹酚酸B对成骨细胞骨形成的调控作用

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路在丹酚酸B对成骨细胞骨形成的调控作用。方法 0.00、0.01、0.03、0.10、0.30、1.00 nmol/L的丹酚酸B作用MC3T3-E1细胞12、24、36 h,MTT法检测细胞活力,RT-PCR法检测碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、骨钙素(OCN)mRNA表达,Western印迹检测细胞中ALP、OPN、COLⅠ、OCN及PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果与0.00 nmol/L比较,0.03、0.10、0.30 nmol/L丹酚酸B组细胞活力显著提高(P0.01),ALP、OPN、COLⅠ、OCN蛋白及mRNA表达量上调(P0.01),PI3K及p-AKT表达量上调(P0.01);而LY294002组ALP、OPN、COLⅠ及OCN蛋白及mRNA表达量下调(P0.01),PI3K及p-AKT表达量下调(P0.01)。与LY294002组比较,丹酚酸B+LY294002组ALP、OPN、COLⅠ、OCN蛋白及mRNA表达量上调(P0.01),PI3K及p-AKT表达量上调(P0.01)。结论丹酚酸B通过激活PI3K/AKT信号通路促进MC3T3-E1细胞骨形成。     

心肌营养素1对心肌成纤维细胞增殖的作用机制

目的 探讨在高静水压条件下心肌营养素1(CT-1)对成纤维细胞增殖作用机制.方法 3～4代心肌成纤维细胞用于实验,分为对照组、助溶剂(二甲亚砜,DMSO)组、CT-1反义寡核苷酸组(ASODN)、正义寡核苷酸组(SODN)、MEK-EPK阻断剂PD98059组、JAK-STAT3阻断剂AG490组、PI3K阻断剂LY294002.利用自制压力培养装置,将各组细胞置于160 mm Hg压力下培养8 h. STAT3、ERK1/2和PI3-K的活性通过Western blot分析测定;MTT测定心肌成纤维细胞增殖.结果 高静水压明显促进心肌成纤维细胞增殖,CT-1表达上调,CT-1ASODN干预后,CT-1ASODN能抑制高静水压所致的细胞增殖,吸光度值(A值)为(0.132±0.013 vs 0.154±0.011,P＜0.05),STAT3(2.09±0.25 vs 2.47±0.28, P＜0.05)、ERK1/2(1.13±0.19 vs 1.61±0.22, P＜0.05)和PI3-K(1.25±0.23 vs 1.71±0.25,P＜0.05),蛋白表达水平明显低于对照组.AG490组明显减弱高静水压的促增殖作用(0.118±0.018 vs 0.155±0.010,P＜0.05);PD98059增强高静水压的促增殖(0.185±0.011 vs 0.155±0.010,P＜0.05),PI3-K阻断剂LY294002干预后对高静水压的促增殖作用无影响(0.157±0.015 vs 0.155±0.010,P＞0.05);SODN与对照组相比对心肌成纤维细胞增殖无明显影响.结论 高静水压下,可以激活STAT3、ERK1/2、PI3-K信号通路,心肌成纤维细胞增殖主要通过STAT3通路;ERK1/2通路起负向调节作用;PI3-K 与细胞增殖关系不是很密切.     

Caspase-3抑制剂联合葛根素对颈椎间盘纤维环细胞增殖活力及磷酸化信号转导与转录因子表达的影响

目的探讨含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3抑制剂联合葛根素对颈椎间盘纤维环细胞增殖活力及磷酸化信号转导与转录因子(p-STAT)3表达影响。方法分离培养大鼠颈椎间盘纤维环细胞,用白细胞介素(IL)-1β诱导颈椎间盘纤维环细胞,用葛根素、Caspase-3抑制剂、葛根素联合Caspase-3抑制剂分别处理细胞,Western印迹法检测细胞中酶切Caspase-3、信号转导与转录因子(STAT)3、p-STAT3表达水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 IL-1β作用后的颈椎间盘纤维环细胞光密度值(OD值)由原来的(1.12±0.13)降至(0.63±0.07),细胞凋亡率从(3.15±0.36)%升至(39.54±1.69)%。葛根素和Caspase-3抑制剂单独作用后的细胞OD值分别升至(0.79±0.05)、(0.85±0.07),而细胞凋亡率分别降至(22.47±1.32)%、(20.84±2.01)%;葛根素和Caspase-3抑制剂联合使用后细胞OD值升到(1.05±0.11),细胞凋亡率降为(14.32±1.12)%。葛根素、Caspase-3抑制剂单独作用或者是联合使用后细胞中p-STAT3/STAT3水平较模型组明显下降,并且二者联合使用后p-STAT3/STAT3水平下降最多。结论 Caspase-3抑制剂、葛根素能够降低IL-1β对颈椎间盘纤维环细胞增殖活力抑制作用,抑制IL-1β诱导的颈椎间盘纤维环细胞凋亡,且二者联合使用效果更明显,STAT3可能是其作用机制之一。     

STAT3,mTOR,ERK1/2磷酸化在非小细胞肺癌中的表达

目的探讨检测信号传递与转录活化因子(STAT)3、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和细胞外信号调节激酶(ERK)1/2的磷酸化在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达。方法收集49例手术治疗的原发性NSCLC患者的病理组织及19例癌旁正常肺组织。免疫组化检测肺癌组织及癌旁组织中的STAT3,mTOR和ERK1/2蛋白磷酸化的表达,将结果及患者的临床基本信息及TNM分期、病理类型等因素的进行相统计学分析。结果在NSCLC中STAT3、mTOR和ERK1/2的磷酸化高表达。磷酸化的STAT3(p-STAT3)在鳞癌中的表达高于腺癌(P=0.001)。磷酸化的mTOR(p-mTOR)在存在淋巴结转移的肺癌组织中高表达(P=0.043)。本实验的肺癌组织中蛋白p-ERK1/2与p-STAT3、p-mTOR之间存在相关性(P=0.033,P=0.015)。结论 NSCLC的发生与STAT3、mTOR和ERK1/2的磷酸化表达有关。p-STAT3在鳞癌发病中意义更大。p-mTOR与淋巴结转移有关。p-ERK1/2与p-mTOR、p-STAT3在NSCLC中的表达存在正相关性。     

膀胱癌组织中MACC1、c-Met表达变化及意义

目的观察膀胱癌组织中结肠癌转移相关基因1(MACC1)、肝细胞生长因子受体(c-Met)mRNA及其蛋白的表达变化,并探讨其临床意义。方法分别采用RT-PCR法和免疫组化法检测47例膀胱癌组织及其癌旁组织中的MACC1、c-Met mRNA及其蛋白。结果膀胱癌组织中MACC1、c-Met mRNA相对表达量分别为0.945±0.11、1.070±0.45,MACC1、c-Met蛋白阳性表达率分别为72.3%、68.0%;癌旁组织中分别为0.26±0.14、0.30±0.40、17.0%、19.1%。二者比较,P均<0.05。MACC1和c-Met蛋白表达与膀胱癌的分化程度、临床分期、淋巴结转移等有关(P均<0.05)。结论膀胱癌组织中MACC1、c-Met mRNA及其蛋白表达水平增高;c-Met通路的激活和MACC1过表达可能与膀胱癌的发生发展有关。     

STAT3信号蛋白与食管鳞癌上皮间质转化的关系及其意义

目的:探讨食管鳞癌中STAT3、p-STAT3蛋白表达与食管鳞癌上皮间质转化的关系及其在食管鳞癌浸润转移中的作用.方法:采用免疫组织化学技术检测80例食管鳞癌中STAT3、p-STAT3及上皮间质转化标志物E-cadherin和Vimentin的表达.结果:食管鳞癌组织中STAT3、P-STAT3、E-cadherin和Vimentin蛋白阳性率与癌旁正常组织相比有显著性差异(STAT3: 87.5% vs 70.0%; p-STAT3: 72.5% vs 28.8%; E-cadherin:37.5% vs 78.8%; Vimentin: 48.8% vs 0%,均P<0.01).食管鳞癌组织STAT3、p-STAT3的表达均与E-cadhcrin的表达呈负相关(r=-0.41 0,-0.506;均P=0.000),与Vimentin表达均呈正相关(r=0.293,0.321;P=0.008,0.004),且与癌组织的浸润深度密切相关(均P<0.05).结论:信号蛋白STAT3可能参与了食管鳞癌的上皮间质转化过程,并与食管鳞癌的侵袭转移相关.