星形胶质细胞外泌体对脑创伤小鼠神经保护作用的研究

目的 通过观察星形胶质细胞外泌体对脑创伤小鼠神经细胞调亡的影响,探索星形胶质细胞在脑创伤中的作用及其机制.方法 分离培养小鼠星形胶质细胞并对其进行鉴定.将60只小鼠随机分成假手术组、外泌体组和生理盐水组.在脑创伤后第3天检测小鼠脑组织Bcl2、Bax以及Caspase-3的表达水平、神经细胞凋亡情况以及神经功能预后.结果 样本中存在直径30～150 nm不等的外泌体.脑创伤后第3天,外泌体组小鼠脑组织Bax、Caspase-3的表达水平以及神经细胞调亡水平均低于生理盐水组(P<0.05),而Bcl2的表达水平则高于生理盐水组(P<0.05);外泌体组小鼠神经功能预后较生理盐水组也有明显改善(P<0.05).结论 星形胶质细胞外泌体能显著减少脑创伤小鼠神经细胞调亡,改善神经功能预后.     

星形胶质细胞外泌体对脑创伤小鼠神经保护作用的研究

目的 通过观察星形胶质细胞外泌体对脑创伤小鼠神经细胞调亡的影响,探索星形胶质细胞在脑创伤中的作用及其机制.方法 分离培养小鼠星形胶质细胞并对其进行鉴定.将60只小鼠随机分成假手术组、外泌体组和生理盐水组.在脑创伤后第3天检测小鼠脑组织Bcl2、Bax以及Caspase-3的表达水平、神经细胞凋亡情况以及神经功能预后.结果 样本中存在直径30～150 nm不等的外泌体.脑创伤后第3天,外泌体组小鼠脑组织Bax、Caspase-3的表达水平以及神经细胞调亡水平均低于生理盐水组(P<0.05),而Bcl2的表达水平则高于生理盐水组(P<0.05);外泌体组小鼠神经功能预后较生理盐水组也有明显改善(P<0.05).结论 星形胶质细胞外泌体能显著减少脑创伤小鼠神经细胞调亡,改善神经功能预后.     

亚硝胺诱发小鼠前胃鳞状细胞癌的实验研究

建立小鼠前胃鳞状细胞癌模型和观察其癌变过程。方法１００只小鼠分１０组，用肌氨酸乙酸和亚硝酸盐混和液灌胃，对照组２０只小鼠灌生理盐水，每周２次共５周。给药后每隔１０天取一实验组和２只对照组小鼠作组织学检查。结果：第２－１０组，小鼠前胃鳞状细胞 病率为１０％－４０％。     

侧脑室注射miR-219激动剂对脂多糖所致新生大鼠少突胶质细胞成熟障碍的影响

目的 探讨侧脑室注射miR-219激动剂对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致新生大鼠少突胶质细胞成熟障碍的影响.方法 将出生2d的Sprague-Dawley (SD)大鼠60只随机分为4组,每组15只.对照组:腹腔注射等体积生理盐水,24 h后侧脑室注射2μL miRNA阴性对照.脂多糖组(LPS组):腹腔注射0.25 mg/kg LPS,24 h后侧脑室注射2μL miRNA阴性对照;miR-219激动剂组(miR-219组):腹腔注射等体积的生理盐水,24 h后侧脑室注射2μL miR-219激动剂;LPS加miR-219激动剂组(LPS+ miR-219组):腹腔注射0.25 mg/kg LPS,24 h后侧脑室注射2μL miR-219激动剂.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脑组织中miR-219和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP) mRNA的表达,苏木精伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察脑白质形态学改变,免疫组化观察成熟少突胶质细胞(oligodendrocyte,OL)的表达,免疫印迹法(Western blotting)检测脑组织内MBP和Sox6蛋白的表达.结果 侧脑室注射miR-219激动剂后,miR-219组miR-219的表达增高(P＜0.05);腹腔注射LPS后,LPS组脑白质区组织结构疏松,细胞核固缩,与对照组比较,成熟少突胶质细胞标志物MBP的表达显著下降,少突胶质细胞分化抑制因子Sox6表达明显增多(P＜0.05);相较于LPS组,LPS+ miR-219组MBP表达增多,Sox6表达显著降低(P＜0.05),且与对照组无明显差异(P＞0.05).结论 侧脑室注射miR-219激动剂可以改善LPS致新生鼠少突胶质细胞成熟障碍.     

痰瘀同治方对阿尔茨海默病小鼠脑组织氧化应激与神经炎性反应的影响

目的观察痰瘀同治方对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习认知能力、脑组织氧化应激和神经炎性反应的影响。方法将100只雄性小鼠随机分为5组:对照组,模型组,痰瘀同治方高、中、低剂量组,每组20只。除对照组外,在其他各组小鼠侧脑室注射β淀粉样肽(Aβ)1-40,建立AD小鼠模型,连续14周给予相应药物灌胃。采用Morris水迷宫试验观察小鼠行为学的改变。麻醉后处死小鼠,采用比色法测定小鼠脑组织内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的含量及活性,免疫组织化学法测定脑内神经胶质元纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞(星形胶质细胞)的表达。结果与模型组相比,痰瘀同治方可以明显改善小鼠学习认知能力(P0.01),降低脑组织内MDA水平(P0.05),增加SOD,GSH-PX和GSH含量及活性(P0.05),降低星形胶质细胞表达数量(P0.05)。结论痰瘀同治方通过抑制AD小鼠脑组织内氧化应激与神经炎性反应,明显改善AD小鼠的学习认知能力。     

氯胺酮对幼年小鼠空间学习记忆功能及海马脑区 TSPO 蛋白的影响

目的观察幼年小鼠连续多次接受氯胺酮麻醉后学习记忆认知功能及海马脑区内TSPO蛋白的表达情况。方法出生21 d的幼年小鼠24只随机分为对照组(n=12)和氯胺酮组(n=12),每天1次分别经腹腔注射生理盐水和氯胺酮,连续7 d。然后进行Morris水迷宫实验,包括4 d的适应性训练和1 d的空间探索实验,观察小鼠的学习记忆功能的改变。水迷宫行为学测试后处死小鼠,取双侧的海马脑区,采用Western blotting技术和免疫荧光双标技术检测小鼠海马内小胶质细胞的变化和TSPO表达水平。结果训练期3~4 d,氯胺酮组小鼠潜伏期明显长于对照组(P<0.05)。探索实验显示,与对照组比较,氯胺酮组小鼠在平台所在象限滞留时间和经过次数明显减少(P<0.05);Western blotting分析结果表明,氯胺酮组幼年小鼠海马小胶质细胞标记物Iba-1和TSPO蛋白表达明显增多;免疫荧光双重标记技术显示,氯胺酮组小鼠海马小胶质细胞发生了形态学的改变,TSPO蛋白的表达增强。结论氯胺酮组小鼠海马脑区内小胶质细胞被激活,与之共同表达的TSPO蛋白的表达增高,学习记忆等认知功能减退。     

急性有机磷农药中毒对胆碱酯酶和多巴胺水平的影响

目的观察急性有机磷农药中毒对脑组织中多巴胺水平和胆碱酯酶活性的影响及意义。方法 20只小鼠按随机数字表法分为中毒组和对照组各10只。中毒组:敌敌畏用生理盐水配成溶液,按10 mg/kg腹腔注射诱发小鼠中毒;对照组给予等量生理盐水腹腔注射。分别在中毒组中毒后及对照组腹腔注射后的1 h、24 h、48 h、72 h和120 h测定乙酰胆碱酯酶(AchE)活性及多巴胺水平,每个时间点取2只小鼠进行测定。结果对照组在不同时间点血AchE活性、脑组织AchE活性均较中毒组高(P0.05)。对照组1 h、24 h脑组织多巴胺活性较中毒组高(P0.05);对照组72 h、120 h脑组织多巴胺活性较中毒组低(P0.05);两组48 h脑组织多巴胺水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论有机磷农药中毒不但引起乙酰胆碱在脑组织蓄积,也可引起多巴胺水平异常增高,脑神经递质含量变化可能是导致中毒性精神障碍的原因。     

Cholinesterase Activity and Dopamine Levels in Mice with Acute Organophosphorus Pesticide Poisoning

目的 观察急性有机磷农药中毒对脑组织中多巴胺水平和胆碱酯酶活性的影响及意义.方法 20只小鼠按随机数字表法分为中毒组和对照组各10只.中毒组:敌敌畏用生理盐水配成溶液,按10 mg/kg腹腔注射诱发小鼠中毒;对照组给予等量生理盐水腹腔注射.分别在中毒组中毒后及对照组腹腔注射后的1 h、24 h、48 h、72 h和120 h测定乙酰胆碱酯酶(AchE)活性及多巴胺水平,每个时间点取2只小鼠进行测定.结果 对照组在不同时间点血AchE活性、脑组织AchE活性均较中毒组高(P＜0.05).对照组1 h、24 h脑组织多巴胺活性较中毒组高(P＜0.05);对照组72 h、120 h脑组织多巴胺活性较中毒组低(P＜0.05);两组48 h脑组织多巴胺水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 有机磷农药中毒不但引起乙酰胆碱在脑组织蓄积,也可引起多巴胺水平异常增高,脑神经递质含量变化可能是导致中毒性精神障碍的原因.     

左旋多巴和氯丙嗪致脑组织形态改变实验

对小白鼠注射氯丙嗪和灌胃服左旋多巴胺致脑组织形态改变进行了实验观察。研究结果：氯丙嗪组白鼠全部脑组织无变化，而左旋多巴胺组，脑组织胶质细胞增生，形成胶质结节，神经元空泡改变缠结，间脑部位尤为明显。因此推测，精神分裂症病人脑组织萎缩变性是病人脑多巴胺长期亢盛导致脑组织萎缩性改变，而不是长期应用拮抗剂－－抗精神病药物所致。     

白藜芦醇在PD小鼠模型中对TLR3/TRIF信号通路及脑内炎症微环境的影响

目的 建立1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的小鼠PD模型,探究白藜芦醇(resveratrol,Res)对PD小鼠TLR3/TRIF信号通路及中脑黑质炎症微环境的影响.方法 雄性C57/BL6小鼠30只,按照随机数字表法分为对照组、MPTP组和MPTP+ Res组,每组各10只.对照组腹腔注射相同体积生理盐水;MPTP组腹腔注射生理盐水新鲜配制的MPTP 30 mg/(kg·d),连续7d,结束注射7d后取材;MPTP+ Res组:Res用乙醇溶解为50 mg/mL,用PBS以1∶4的体积比进行稀释,连续注射MPTP 7 d后,腹腔注射Res 28 d,结束注射7d后取材.采用免疫组化及免疫荧光分别观察小鼠中脑黑质中多巴胺能神经元的变化及小胶质细胞、星形胶质细胞的活化状态.采用实时荧光定量PCR技术检测中脑黑质相关炎症因子mRNA的表达.结果 免疫组化结果显示:与MPTP组相比,MPTP+ Res组小鼠中脑黑质TH标记的多巴胺能神经元的数量及形态未发生明显变化;CD11b标记的小胶质细胞胞体相对变小,呈圆形及椭圆形,突起减少,变细、变长;而GFAP标记的星形胶质细胞胞体变小,胞体呈圆形,突起变短.qPCR实验结果表明:与MPTP组相比,MPTP+Res组小鼠中脑黑质部位TLR3、IFN-β的mRNA表达量明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05),但TRIF的mRNA表达量未见明显变化,促炎因子iNOS、TNF-α的mRNA表达量明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).而抗炎因子Arg-1的mRNA表达量明显增加.结论 Res可能通过抑制小胶质细胞及星形胶质细胞活化及激活TLR3/TRIF信号通路,降低中脑黑质的促炎因子的释放,从而改善MPTP诱导的小鼠PD模型中的炎症微环境.     

血管活性肠肽(VIP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脑组织IL-17A含量的影响

目的探讨血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠脑组织IL-17A含量的影响。方法 60只健康雌性Wistar大鼠随机分成正常对照组、EAE对照组、VIP低剂量防治组和VIP高剂量防治组。利用髓鞘碱性蛋白(MBP)+完全福氏佐剂(CFA)诱导建立EAE模型。自造模当日起,每隔一日分别对VIP低、高剂量防治组大鼠腹腔注射VIP 4nmol/kg(0.2 m L)、16 nmo L/kg(0.8 m L),正常对照组及EAE对照组注射0.8 m L生理盐水,连续10 d。观察大鼠发病情况;ELISA法检测脑组织匀浆中IL-17A因子含量变化;免疫组化技术,利用抗胶质纤维酸性蛋白抗体(GFAP)检测脑组织内的星型胶质细胞活化情况。结果 VIP各剂量防治组大鼠发病潜伏期延长、进展期缩短、发病高峰期神经功能障碍评分(NDS)降低,脑组织匀浆中IL-17A含量降低,活化的星型胶质细胞即GFAP~+细胞量减少,且各剂量组间存在一定剂量依赖关系。结论 VIP通过降低脑组织中IL-17A含量、抑制星型胶质细胞活化,发挥对EAE的防治作用。     

急性肝衰竭小鼠血脑屏障结构和水通道蛋白4变化的研究

目的观察急性肝衰竭小鼠脑水肿时血脑屏障结构和脑组织水通道蛋白4(AQP4)的改变。方法本实验于2016年1—12月在武汉大学人民医院中心实验室进行实验,共纳入SPF级C57BL/6小鼠30只,随机数字表法分为模型组和对照组各15只,模型组采用脂多糖及D-氨基半乳糖联合诱导小鼠急性肝衰竭模型,对照组腹腔注射等量生理盐水。24 h后观察小鼠肝组织变化检测血清ALT、AST、血氨水平,血脑屏障结构和脑组织水通道蛋白4的表达水平。结果模型组出现明显病理性肝组织损害,对照组无显著变化;与对照组比较,模型组血清ALT、AST和血氨水平显著升高(t=5.075、6.338、5.718,P<0.05)。模型组脑组织血脑屏障结构轻度异常,电镜下可观察到微血管周围星形胶质细胞足突明显肿胀、内皮细胞出现大量囊泡和液泡,内皮细胞紧密连接打开。脑组织AQP4蛋白表达水平与对照组比较差异无统计学意义(t=-0.961,P=0.397)。结论急性肝衰竭脑水肿时血脑屏障结构存在轻微改变,血管源性水肿机制参与急性肝衰竭脑水肿,但脑组织中AQP4蛋白水平未出现明显改变。     

丙戊酸钠对APP/PS1双转基因小鼠脑内星形胶质细胞和神经营养因子的影响

目的：观察丙戊酸钠（valproic acid sodium salt,VPA）对阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）模型小鼠脑内星形胶质细胞、脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）和胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neu－rotrophic factor,GDNF）的影响。方法：取3月龄的APP/PS1双转基因小鼠AD模型小鼠24只,按随机数字表法平均分为治疗组和对照组。VPA治疗组小鼠腹腔注射VPA 30 mg/（kg·d）,对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水,采用免疫组化学法观察2组小鼠皮质和海马区星形胶质细胞数量的变化,Western blot检测2组小鼠皮质和海马BDNF 和GDNF的表达水平。结果：与对照组比较,VPA治疗组小鼠皮质和海马区星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的阳性细胞数量均明显减少（t=5.476、8.793,P均＝0.00０）,BDNF 和GDNF 表达水平均明显升高（t=4.303,P=0.001;t=2.376,P=0.032）。结论：VPA可抑制星形胶质细胞增生,提高神经营养因子的表达水平。     

血管内注射可溶性Aβ1-40对鼠脑神经胶质细胞的影响

[目的]探讨血液内较高浓度的可溶性 Aβ 1- 40在阿尔茨海默病发病中的作用.[方法] 15只大鼠随机分为 3组,实验组、生理盐水组和空白对照组,每组 5只,通过大鼠颈部血管插管至心脏并留置的方法,向实验组大鼠血液中每日 2次注射 10 μ g的可溶性 Aβ 1- 40,对照组注射同样剂量的生理盐水,而空白对照组不作任何处理.连续 14日后,采用免疫组化方法观察各组大鼠大脑皮质及海马的星形胶质细胞、小胶质细胞.[结果]与生理盐水组和空白对照组相比,实验组注射 Aβ 1- 40以后,皮层、海马的脑实质以及毛细血管周围星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白表达明显增多;小胶质细胞呈明显的激活状态.统计学分析表明,胶质纤维酸性蛋白和 OX 42阳性表达明显高于其余两组(P< 0.01),而生理盐水组和空白对照组无明显差异(P >0.05).[结论]血管内连续注射 Aβ 1- 40以后,可以激活小胶质细胞和星形胶质细胞,提示 Aβ 1- 40在阿尔茨海默病发病中起到很重要的作用.     

普鲁卡因对迟发性变态反应的影响

目的：研究普鲁卡因对１０％和ＳＲＢＣ诱发小鼠迟发性变态反应的影响，方法：采用１０％ＳＲＢＣ注射小鼠跖部皮下诱发迟发性变态反应，实验组腹腔注射普鲁卡因。以生理盐水，氢化考的松分别为空白及阳性对照组，比较足跖肿胀程度，重量及病理差异，结果：普鲁卡因组两中产肿胀度差值，两足重量差值及真皮炎性细胞浸润数与生理盐水对照组相比均明显减轻（Ｐ〈０．０１），结论：普鲁卡因能减轻１０％ＳＲＢＣ诱发的迟发变态反应。     

孕期感染聚肌胞苷酸大鼠子代海马及额叶星形胶质细胞活化研究

目的研究聚肌胞苷酸(PolyI:C)孕期感染所致子代精神分裂症大鼠海马及额叶星形胶质细胞活化特点,探讨星形胶质细胞参与神经炎症反应在精神分裂症病理机制中的作用。方法将18只孕鼠随机分为模型组、双倍剂量组和对照组,每组6只。于孕9 d给予尾静脉注射药物,模型组和双倍剂量组分别注射5、10 mg·kg-1PolyI:C,对照组注射等体积(按5 mg·kg-1PolyI:C)生理盐水。待仔鼠8周龄时进行行为学评估,采用免疫组织化学技术检测脑内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果模型组和双倍剂量组仔鼠移动总路程与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);共济失调和刻板行为评分大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);模型组与双倍剂量组仔鼠移动总路程、共济失调和刻板行为评分比较差异均无统计学意义(P>0.05)。模型组和双倍剂量组仔鼠T1高于对照组,T2、总反应次数、总条件反射率低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。双倍剂量组和模型组仔鼠T1、T2、总反应次数比较差异均有统计学意义(P<0.05);总条件反射率比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组和双倍剂量组仔鼠光密度(OD)值均大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);模型组仔鼠OD值与双倍剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论孕期感染PolyI:C诱导的子代精神分裂症大鼠表现出行为学改变,同时脑内星形胶质细胞存在异常活化,这可能与子代大鼠的行为学改变有关。     

抑制PDGFRα活化对小鼠脑损伤后胶质细胞增殖和瘢痕形成的影响

目的：探讨抑制血小板衍生生长因子受体α（PDGFRα）活化对小鼠脑损伤后胶质细胞增殖和小鼠脑损伤后瘢痕形成的影响,并阐明其作用机制。方法：选取48只8周龄BALB/c小鼠,制备小鼠黑质纹状体通路损伤模型,分为PDGFRα抑制剂AG1296组（AG1296组）和二甲基亚砜（DMSO）对照组（DMSO组）,每组24只。AG1296组小鼠手术后连续3 d应用微量注射器沿损伤部位注入抑制剂AG1296,每日5 μL（5 mmol·L^-1）,DMSO对照组小鼠注入同等剂量的DMSO。术后第1、4、7和14天各取6只小鼠脑损伤前后2 mm脑组织用于检测。应用免疫组织化学染色和Western blotting法检测各组小鼠脑组织中磷酸化PDGFRα（p-PDGFRα）、星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和小胶质细胞标志物离子钙接头蛋白分子1（IBA-1）蛋白表达水平。免疫组织化学染色检测各组小鼠脑组织中NG2、CD45、纤连蛋白（FN）和Ⅳ型胶原蛋白（ColⅣ）蛋白表达。结果：免疫组织化学染色,在损伤后4 d小鼠脑组织中p-PDGFRα棕黄色阳性表达细胞数最多,GFAP蛋白在损伤后14 d表达量最多,IBA-1蛋白在伤后7 d表达量最多。各时间点AG1296组小鼠脑组织中p-PDGFRα、GFAP和IBA-1蛋白表达水平明显低于DMSO组。Western blotting法检测,AG1296组小鼠脑组织中p-PDGFRα、GFAP和IBA-1蛋白表达水平明显低于DMSO组（P<0.01）。损伤后14 d,免疫组织化学染色结果显示AG1296组NG2、CD45、FN和ColⅣ阳性表达细胞数较DMSO组明显减少;瘢痕形成情况,AG1296组大鼠脑组织损伤中心的大空洞消失,仅留下一条缝隙,损伤周边虽然仍有许多GFAP阳性表达的胶质细胞,但未形成明显的境界膜,其他阳性表达细胞明显少于DMSO组。结论：抑制PDGFRα的活化可以降低小鼠脑损伤后胶质细胞的增殖,进而减少瘢痕组织形成。     

外源性MMS与精神分裂症的实验研究

研完表明小鼠皮下注射去水吗啡、吗啡和外源性MMS后,都有显著延长攀爬行为实验时间,升高血浆MMS、脑组织MMS、脑组织游离氨氮和降低脑组织游离丝氨酸、脯氨酸、酪氨酸含量的效应。注射外源性MMS的小鼠此种效应更为明显,氯丙嗪能抑制此种效应,但不能抑制小鼠脑组织的高游离丙氨酸水平。电镜观察未见小鼠脑组织神经细胞有形态学改变。     

MG53改善脂多糖诱导小鼠抑郁样行为的实验研究

目的 探讨Mitsugumin-53(MG53)对小鼠抑郁样行为及海马炎症损伤的影响.方法 24只成年雄性C57BL/6N小鼠随机分为对照组、脂多糖(LPS)组和LPS+MG53组,每组8只.糖水偏好实验和悬尾实验(TST)评估小鼠抑郁样行为;免疫荧光法检测海马小胶质细胞激活情况(IBA1阳性细胞数、小胶质细胞胞体面积...     

穿心莲黄酮对花生四烯代谢血液流变学作用的实验研究

选择新西兰白兔１２只，随机分为三组，分别对照组，药物Ⅰ组，药物Ⅱ组，分别腹腔注射生理盐水，高低浓度黄酮（５ｍｇ／ｋｇ，１０ｍｇ／ｋｇ）：观察注射前，后１ｈ，２ｈ和六种切变率的血液粘度。结果表明：生理盐水注射前后各项指标均无变化。黄酮注射前后血浆６ＫＰＧＦ１α水平均无变化，黄酮注射后１ｈ血浆ＴＸＢ２水平无变化：黄酮注射后２ｈ血浆ＴＸＢ２水平均有降低，其中低浓度无明显降低，高浓度组明显降低。