隐丹参酮对人胆管癌HCCC-9810细胞中Survivin基因表达的影响

目的 探讨隐丹参酮(CTS)对人胆管癌HCCC-9810细胞作用的敏感性并研究隐丹参酮对人胆管癌细胞周期及细胞凋亡率的影响,初步探讨隐丹参酮对人胆管癌细胞凋亡抑制基因Survivin表达的影响.方法 体外培养胆管癌细胞HCCC-9810,采用不同浓度隐丹参酮予以干预,通过细胞形态观察及MTT实验,初步研究隐丹参酮对人胆管癌细胞HCCC-9810的敏感性;应用流式细胞仪检测隐丹参酮诱导人胆管癌细胞周期的变化;Hochest染色法检测诱导细胞凋亡;RT-PCR检测人胆管癌HCCC-9810细胞Survivin基因mRNA表达变化.结果 隐丹参酮可明显抑制胆管癌HCCC-9810细胞株的增殖且该抑制效应随药物剂量的增加和作用时间的延长而增强;随着最适药物浓度作用时间的延长,胆管癌细胞明显被阻滞在G0/G1期,使S期细胞比例降低,细胞凋亡数目逐渐增加,Survivin基因mRNA表达逐渐降低.结论 隐丹参酮对人胆管癌HCCC-9810细胞增殖抑制作用呈剂量和时间依赖效应;隐丹参酮能诱导人胆管癌HCCC-9810细胞凋亡,其机制可能是通过影响肿瘤细胞的细胞周期、抑制Survivin基因表达有关.     

丹参酮ⅡA对人胆管癌HCCC-9810细胞增殖及VEGF表达的影响

目的:观察丹参酮Ⅱ A(Tanshinone ⅡA)对人胆管癌HCCC-9810细胞增殖和血管内皮生长因子(Vascular endothelialgrowth factor,VEGF)表达的影响,探讨其可能抗肿瘤的作用机制.方法:体外培养人胆管癌HCCC-9810细胞株,采用MTT比色法观察不同浓度和作用时间下丹参酮ⅡA对HCCC-9810细胞的增殖抑制情况;RT-PCR法检测细胞中VEGF mRNA的转录情况;Western blot法检测细胞内VEGF蛋白的表达.结果:低质量浓度丹参酮Ⅱ A(0.1 mg/L)对HCCC-9810细胞增殖抑制作用不明显,但当质量浓度达到0.25 mg/L以上时,则能显著抑制胆管癌细胞的增殖,其抑制效应随时间和浓度的增加呈逐渐增强,同时抑制癌细胞内VEGF mRNA的转录和VEGF蛋白的表达(P＜0.01).结论:丹参酮ⅡA在体外能显著抑制HCCC-9810细胞增殖,并能抑制VEGF基因表达.提示这可能是其抗肿瘤的作用机制之一.     

白细胞介素-6反义核苷酸抑制胆管癌细胞增殖和诱导其凋亡的实验研究

目的:研究白细胞介素-6(IL-6)反义核苷酸(ASODN)对人肝内胆管癌HCCC-9810细胞增殖和凋亡的影响.方法:通过脂质体Lipofectamine"2000介导IL-6 ASODN转染人肝内胆管癌HCCC-9810细胞.细胞克隆率形成实验和MTT实验检测IL-6 ASODN对胆管癌细胞增殖的影响,流式细胞仪检...     

HGF经HGF/Akt通路抑制肝癌细胞HCCC-9810的增殖

目的:观察肝细胞生长因子(HGF)对人胆管细胞型肝癌细胞HCCC-9810增殖的影响,并探讨其分子机制?方法:HGF处理HCCC-9810细胞后,用MTT及EdU法检测癌细胞的增殖;siRNA干扰技术抑制HCCC-9810细胞内源性Akt的表达,Western blot检测癌细胞Cyclin D1蛋白表达和Akt磷酸化的变化?结果:50和100 ng/ml HGF显著抑制肝癌细胞HCCC-9810的增殖?Western blot结果显示,HGF处理后的肝癌细胞Akt磷酸化和Cyclin D1表达量明显下调?siRNA干扰Akt的表达,阻断了HGF诱导的Cyclin D1表达量的下调及细胞增殖抑制?结论:HGF通过下调Akt磷酸化和Cyclin D1表达量抑制肝癌细胞HCCC-9810的增殖?     

慢性活动性乙型肝炎外周血T细胞亚群上活化抗原的表达

目的探讨慢性活动性乙型肝炎(CAHB)患者外周血活化抗原CD69、HLA-DR分子在T细胞表达的变化及其意义。方法以31例正常人作为对照,采用免疫荧光三色标记流式细胞术,检测30例CAHB患者外周血T细胞亚群及其CD69、HLA-DR抗原表达;同时用荧光定量PCR检测患者的病毒DNA载量。结果CAHB患者外周血CD3+T细胞的百分率(63.78%±9.70%)与正常对照组比较差异有显著性(P<0.01),CD4+T细胞的百分率(45.88%±8.51%)明显低于正常对照组(P<0.001),CD8+T细胞的百分率(44.64%±7.10%)明显高于正常对照组(P<0.001);CD3+T细胞CD69的表达(6.85%±2.83%)与正常人对照组比较差异也有显著性(P<0.01),其中CD4+T细胞CD69的表达(2.31%±0.94%)与正常对照组比较差异无显著(P>0.05),CD8+T细胞表达CD69水平(3.87%±1.81%)明显高于对照组(P<0.01);CD3+T细胞上HLA-DR的表达(17.09%±4.23%)与正常对照组之间差异有显著性(P<0.001),其中CD4+T细胞中HLA-DR+细胞(7.97%±2.43%)和CD8+T细胞中HLA-DR+细胞(5.52%±1.48%)均比正常对照组显著增高(P<0.01)(P<0.001);CD8+CD69+、CD8+HLA-DR+细胞的数量与病毒DNA载量之间呈正相关。结论CAHB患者存在细胞免疫功能紊乱和淋巴细胞异常激活现象,T淋巴细胞的激活以CD8+T细胞为主,其在抗病毒感染中起着重要作用。     

特发性血小板减少性紫癜患者自身血小板的细胞毒杀伤机制

目的研究细胞毒T细胞(CTL)、自然杀伤细胞(NK细胞)介导的针对自身血小板的细胞毒作用及其机制。方法(1)将血小板(靶细胞)与自身CD8+细胞或NK细胞(效应细胞)共同孵育后,流式细胞仪检测膜联蛋白V标记阳性血小板的比例。(2)流式细胞术检测特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者组与正常对照组CD8+细胞膜表面分子CD95配体(FasL)、肿瘤坏死因子(TNFα)和肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体(TRAIL)的表达。(3)逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测ITP患者组与正常对照组CD8+细胞颗粒酶B和穿孔素mRNA的表达。结果(1)血小板单独孵育后,膜联蛋白V标记阳性率在ITP患者组(3.1%±0.9%)和正常对照组(3.2%±1.1%)间差异无统计学意义(P>0.05);(2)血小板与CD8+细胞共同孵育后,ITP患者组血小板的膜联蛋白V标记阳性率(7.6%±2.8%)明显高于正常对照组(3.6%±0.9%,P<0.01);(3)血小板与NK细胞共同孵育后,ITP患者组血小板的膜联蛋白V标记阳性率(3.5%±1.1%)与正常对照组(3.6%±1.0%)差异无统计学意义(P>0.05);(4)ITP患者组CD8+细胞膜表面分子FasL、TNFα表达(17.5%±4.4%、11.9%±4.9%)均高于正常对照组(8.9%±1.5%、6.4%±2.1%,均P<0.05);ITP患者组CD8+细胞膜表面分子TRAIL表达(16%±4%)与正常对照组(14%±3%)间差异无统计学意义(P>0.05);(5)ITP患者组CD8+细胞颗粒酶B、穿孔素mRNA的表达(2.20%±0.15%、2.47%±0.39%)均高于正常对照组(1.63%±0.22%、1.80%±0.31%,均P<0.05)。结论CTL参与了对ITP患者自身血小板的杀伤作用;NK细胞对自身血小板无明显的杀伤作用。凋亡机制和胞质颗粒依赖机制是CTL杀伤血小板的具体途径。     

外周血T细胞亚群及NK细胞比例在转移性结肠癌患者预后评估中的临床意义

目的 探讨反复化疗的转移性结肠癌患者(mCRC)T淋巴细胞亚群和自然杀伤(NK)细胞比例及其临床意义.方法 将我院30例转移性结肠癌患者作为观察组,回顾性分析外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞的检测结果,与30例健康受检者(对照组)进行比较分析,并于化疗4周期后复查结肠癌患者的外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞,对比有效与无效患者的检测结果.结果 mCRC患者中化疗有效组化疗后外周血中B细胞、CD4+细胞、NK细胞及CD4+/CD8+比值均明显高于同组化疗前水平(11.2%±0.98%vs 6.7%±1.05%,P<0.05;30%±2.01%vs 26%±2.02,P<0.05;10%±1.02%vs 8.9%±0.72%,P<0.05;1.2±0.03 vs 0.9±0.06,P<0.05),而化疗无效组化疗前后差异均无统计学意义(P>0.05).化疗无效组外周血中B细胞、CD4+细胞、NK细胞及CD4+/CD8+比值均明显低于正常对照组(2.4%±0.01%vs 15%±1.10%,P<0.05;8%±0.03%vs 37%±2.10%,P<0.05;4.4%±0.12%vs 25%±1.80%,P<0.05;0.44±0.01 vs 1.23±0.02,P<0.05).结论 NK细胞与外周血T淋巴细胞亚群对评价结肠癌化疗的疗效、判断预后具有重要价值.     

心力衰竭大鼠心肌细胞增殖与心功能的关系研究

目的证实成年心力衰竭大鼠心肌细胞存在分化增殖,探讨心肌细胞增殖程度与心功能的相关关系。方法成年SD雄性大鼠分为2组:心肌梗死组(14只,其中心功能代偿8只、失代偿6只),正常对照组(8只)。结扎左冠状动脉前降支形成心肌梗死,建立大鼠心力衰竭模型。1个月后,测血流动力学。心肌组织进行碘化丙啶和α-肌原节肌动蛋白抗体免疫荧光染色,观察心肌细胞有丝分裂相。用增殖细胞核抗原(PCNA)抗体进行免疫组化染色,观察PCNA阳性率。结果(1)成年大鼠左室心肌组织可观察到心肌细胞有丝分裂相。(2)心肌梗死后心功能代偿组PCNA阳性率明显高于对照组(7.2%±1.4%vs2.2%±0.8%,P<0.01),与心功能失代偿组比较差异无统计学意义(3.0%±1.3%vs2.2%±0.8%,P=0.648);心功能代偿组显著高于心功能失代偿组(P<0.01)。(3)心肌梗死组PCNA阳性率与±LVdp/dtmax相关系数分别为0.80(P<0.01)和-0.76(P<0.01)。结论(1)成年心力衰竭大鼠心脏存在心肌细胞增殖;(2)心肌梗死大鼠心肌细胞增殖程度与心脏收缩功能呈正性相关,与舒张功能呈负性相关。     

miR-5701抑制胶质瘤细胞迁移和细胞周期的分子机制研究

目的 研究微小RNA(miRNA)-5701通过下调TXNDC5基因表达抑制胶质瘤细胞迁移和诱导其细胞周期停滞。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测胶质瘤细胞株(LN382、U251、SNB-19、U87MG)及正常脑胶质细胞HEB中miR-5701表达水平。培养SNB-19细胞分为两组,转染阴性对照序列(NC组)和miR-5701拟似物(miR-5701组)。RT-qPCR检测miR-5701的表达水平。划痕实验检测SNB-19细胞迁移能力,流式细胞术检测SNB-19细胞周期。RT-qPCR和Western blot法检测TXNDC5基因的表达水平。通过GEPIA数据库分析胶质瘤组织和癌旁组织中TXNDC5基因表达差异。双荧光素酶报告基因实验验证miR-5701靶向TXNDC5。结果 与HEB细胞比较,胶质瘤细胞株中miR-5701表达水平明显降低(P<0.05)。NC组和miR-5701组miR-5701表达分别为1.66±0.40和13.75±1.61,与NC组比较,miR-5701组miR-5701表达明显增加(P<0.01)。NC组和miR-5701组SNB-19细胞划痕愈合率分别为76.43%±4.38%和40.15%±7.46%,NC组显著高于miR-5701组(P<0.05)。NC组和miR-5701组G0~1期细胞比例分别为48.24%±2.22%和67.38%±2.95%,与NC组比较,miR-5701组G0～1期比例显著增加(P<0.01)。与NC组比较,miR-5701组TXNDC5基因表达水平显著下降(P<0.01)。胶质瘤组织中TXNDC5基因表达明显高于癌旁组织(P<0.01)。TXNDC5基因mRNA第215~235碱基是miR-5701的结合位点(P<0.01)。结论 miR-5701在胶质瘤细胞株中表达下调,过表达miR-5701能够抑制胶质瘤SNB-19细胞的迁移能力及诱导细胞周期停滞,靶向抑制TXNDC5基因表达是miR-5701作用的分子机制。     

IgA肾病患者血清IgA1活化细胞外信号调节激酶并诱发肾小球系膜细胞增殖的作用

目的探讨IgA肾病(IgAN)患者血清IgA1对体外培养的正常人肾小球系膜细胞(HMC)细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化及细胞增殖的刺激作用,并比较其与正常人血清IgA1作用力的异同.方法亲和层析提取正常人及患者血清IgA1,加热聚合(aIgA1),原代培养正常人HMC,Western 杂交测定ERK 蛋白磷酸化,DNA荧光标记技术结合流式细胞仪观察HMC细胞周期变化,直接计数检测HMC增殖.结果 (1)患者及正常人aIgA1均呈时间依赖性诱发HMC ERK信号蛋白磷酸化、DNA 合成和细胞增殖,二者作用趋势相似,作用高峰时间分别为孵育15 min、24～36 h和48～72 h;(2)患者aIgA1刺激强度显著高于正常人aIgA1,在作用高峰时间,患者组和正常人组磷酸化ERK/总ERK 的比值分别为49.5%±10.1%和30.7%±4.4%,S-G2-M期细胞数所占的比例分别为(33.0%±0.3%和30.7%±0.7%,HMC计数分别为(57.78±2.45)×104/ml和(50±1.51)×104/ml,差异均有显著意义(P<0.05);(3)阻断ERK通路只能部分抑制患者aIgA1对HMC增殖的诱导作用. 结论 IgAN患者血清IgA1可以诱导正常人HMC ERK信号蛋白磷酸化并刺激细胞增殖,其作用强于正常人血清IgA1.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究

目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。     

主动脉窦瘤破裂的外科治疗

报告２０例主动脉窦瘤破裂修复术的结果。１７例男性，３例女性。年龄７～５６岁。痊愈１９例，另一例因急性肾功能衰竭一周后死亡。作者就发病机理，诊断和合并畸形的处理进行了讨论。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

阴道炎1236例病原检查分析

对１２３６例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查；结果，细菌感染９００例，念珠菌２３４例，滴虫１０２例。９００例细菌经鉴定；葡萄球菌３００例，阴道加特纳菌２７６例，淋病奈瑟菌１７０例，其它细菌１２４例。结果表明，葡萄球菌，阴道加特纳菌，淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。     

颅咽管瘤切除术后并发症的处理

目的　讨论颅咽管瘤切除术后并发症的处理原则。方法　分析 36例颅咽管瘤切除术后并发症的临床资料。结果　术后并发尿崩症者 14例、高热 11例、电解质紊乱 8例、消化道出血 3例、癫痫 5例 ,死亡2例。结论　颅咽管瘤术后并发症较多 ,加强早期监测和处理 ,可进一步提高该病的治愈率     

碱量法测定壳多糖脱乙酰度的方法探讨

目的：评价壳多糖脱乙酰度测定的减量法的影响因素。方法：通过实验评价碱量法的精准度及样本含潮量等因素对测定结果的影响,并对汪氏推荐计算公式和本文作者提出的改良公式作出评价。结果：碱量法测定壳多糖脱乙酰度受样本性状、含潮率、反应体系中酸量的影响。改良公式更能反映样本实际脱乙酰度。结论：碱量法简便易行,评价指标在可接受范围,可用于壳多糖研制中的质量评价。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。