有丝分裂蛋白激酶及其上游调节信号在人肝癌组织中的表达

目的本研究检测了肝癌和癌旁肝组织中ERK1、ERK2、JNK1、p38及其上游MEK1、MEK2的蛋白表达量.方法手术切除16例肝癌及癌旁肝组织标本,Western印迹检测ERK1、ERK2、JNK1、p38和MEK1、MEK2蛋白含量.结果每例患者肝癌组织中ERK1、ERK2、p38蛋白表达显著高于癌旁肝组织,在肝癌和癌旁肝组织中ERK1积分光密度值(integralopticdensity,IOD)分别为300±98和98±48(P＜0.01);ERK2的IOD值分别为587±83和232±96(P＜0.01);p38的IOD值分别为270±85和107±87(P＜0.01);JNK1的IOD值分别为111±93和292±109(P＜0.01);肝癌组织中JNK1蛋白表达显著低于癌旁肝组织,MEK1、MEK2蛋白表达显著高于癌旁肝组织,MEK1的IOD值在肝癌组织中JNK1蛋白表达显著低于癌旁肝组织,分别为1*!418±244和805±90(P＜0.01),MEK2的IOD值分别为1*!041±122和468±40(P<0.005).结论在肝癌组织中细胞分裂增殖的信号传导通路ERK1、ERK2、p38、MEK1、MEK2激酶处于高表达,JNK1激酶在肝癌组织中处于低表达,它们的失衡是导致肝癌细胞生长失控和无限增殖的重要原因之一.     

有丝分裂蛋白激酶及其上游调节信号在人肝癌组织中的表达

目的探讨有丝分裂原蛋白激酶(MAPK)通路在调控细胞的增殖和凋亡过程中所起到的作用.方法手术切除16份肝癌及癌旁组织标本,Western印迹检测ERK1、ERK2、JNK1、p38和MEK1、MEK2的蛋白含量.结果在本组的16例患者中,每例患者肝癌组织中的ERK1、ERK2、JNK1、p38蛋白表达显著高于癌旁组织,ERK1积分光密度值(Integral optic density IOD)在肝癌和癌旁组织中分别为300±98和98±48,差异有显著意义(P＜0.01).ERK2的IOD值在肝癌和癌旁组织中分别为587±83和232±96,差异有显著意义(P＜0.01);p38的IOD值在肝癌和癌旁组织中分别为270±85和107±88,差异有显著意义(P＜0.01);肝癌组织中的JNK1蛋白表达显著低于癌旁组织;JNK1的IOD值在肝癌和癌旁组织中分别为111±93和292±109,差异有显著意义(P＜0.01);MEK1、MEK2蛋白表达显著高于癌旁组织,MEK1的IOD值在肝癌和癌旁组织中分别为1418±244和806±90,差异有显著意义(P＜0.01),MEK2的IOD值在肝癌和癌旁组织中分别为1041±122和468±40,差异有显著意义(P＜0.05).结论在肝癌组织中细胞分裂增殖的信号传导通路ERK1、ERK2、MEK1、MEK2激酶处于高表达,JNK1激酶在肝癌组织中处于低表达,它们的失衡导致肝癌细胞生长失控和无限增殖的重要原因之一.JNK1和p38在肝癌组织中可能存在不同的激活途径.     

凋亡抑制基因x-相关细胞凋亡抑制蛋白基因在肝癌细胞中的表达及临床意义

目的探讨x-相关细胞凋亡抑制蛋白基因（XIAP）mRNA及蛋白在肝癌组织和癌旁组织中的表达情况，及其与肝癌发生的关系。方法肝癌患者手术切除标本10例，应用半定量逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测肝癌组织和癌旁组织细胞XIAP mRNA基因的相对表达量，并通过免疫组织化学SP法检测10例肝癌组织和癌旁组织标本XIAP蛋白的表达情况。结果（1）半定量RT-PCR显示：XIAP基因在肝癌组织中均呈高表达，相对表达量为3．211±2．43，而在对应的癌旁组织中呈低表达或无表达，相对表达量为1．947±1．890，两组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）免疫组织化学及图像分析结果显示：在肝癌组织和癌旁组织中XIAP蛋白平均灰度扫描值分别为161．800±29．470和144．240±26．290，两组之间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论XIAP在肝癌中的表达明显增高，可能在肝癌的发生、发展过程中发挥重要作用。     

gax和HIF-1α基因在原发性肝癌组织中的表达及意义

目的探讨同源盒基因(gax)和缺氧诱导因子(HIF1α)表达产物与原发性肝癌发生、发展的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)和蛋白质印迹技术(Westernblot)分别检测20例原发性肝癌患者癌及癌旁肝组织中gax和HIF1α的mRNA以及蛋白质表达水平。结果肝癌组织中HIF1αmRNA(118.1±33.2)及蛋白表达(10.86±2.76)水平显著高于癌旁组织(分别为42.7±10.5与3.52±1.53,P均<0.05);肝癌组织中gaxmRNA表达(39.5±13.8)及其蛋白表达(4.10±1.26)水平低于癌旁组织(P均<0.05)。结论gax和HIF1α基因是调控肝癌组织血管生长的重要基因之一,与gax表达下调及HIF1α表达下调肝癌发生发展密切相关。     

抑癌基因FHIT和PTEN在肝癌中的表达及意义

目的探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)基因和PTEN基因在原发性肝细胞癌(简称肝癌)中的表达及其与临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学SP法和图像分析技术检测了46例肝癌组织及癌旁组织和10例正常肝组织中FHIT和PTEN基因蛋白的表达。结果46例肝癌组织中FHIT和PTEN蛋白免疫组化阳性反应颗粒的平均光密度分别为(0.1339±0.3864)、(0.1534±0.1562),均明显低于相应癌旁组织(0.2051±0.5372)、(0.3271±0.2371)和正常组织(0.2289±0.7589)、(0.3753±0.0519)的水平(P<0.05);FHIT、PTEN与肝癌的病理分级、合并门静脉癌栓有密切关系。结论FHIT和PTEN基因蛋白缺失在肝癌组织中是频发事件。FHIT和PTEN与肝癌的病理分级、合并门静脉癌栓有密切关系。     

肝细胞性肝癌组织中LVD和MVD的表达及其与肝癌侵袭转移的关系

[摘要] 目的 研究肝细胞性肝癌组织中淋巴管密度（lymphatic vessel density,LVD）和微血管密度（microvessel density,MVD）在肝细胞性肝癌中的表达,及其与肝癌侵袭和转移的关系。方法 采用免疫组织化学Supervision法分别检测40例肝细胞性肝癌患者的癌组织、癌旁组织以及10例非肝癌患者的肝脏组织中LVD和MVD的表达情况,分析其与肝癌肝内转移、门脉癌栓和淋巴转移间的关系;分析癌旁组织LVD与癌组织MVD表达之间的关系。结果?在40例肝细胞性肝癌患者的癌组织、癌旁组织及10例非肝癌患者的肝脏组织中平均LVD值分别为（10.65±3.75）、 （8.98±2.52）、 （3.15±1.49）;癌组织与癌旁组织及正常组织的LVD值差异有均统计学意义（均 P ＜0.01）。癌组织、癌旁组织及正常肝脏组织平均MVD值分别为 （71.08±43.19）、 （23.20±4.70）、 （16.80±3.01）,癌组织与癌旁组织及正常组织的MVD值差异有统计学意义（均 P ＜0.01）。结论 肝细胞性肝癌组织中LVD及MVD高表达,与肝内转移、门静脉癌栓及淋巴转移有关。     

NF-κB在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的：探讨NF-κB基因在肝细胞癌组织中的表达及生物学意义。方法：采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western-blot免疫组织化学技术检测32例肝癌组织及癌旁肝组织中的NF-κB基因的mRNA和蛋白表达水平及蛋白定位。结果：NF-κB基因在肝癌组织中的表达较癌旁肝组织显著性增高(P<0.05)。免疫组化结果显示，NF-κB蛋白在肝癌细胞胞浆和胞核中均有表达，而在癌旁肝细胞中仅在胞浆中有表达。结论：NF-κB基因在肝癌组织中呈显著高表达，提示其可能参与了肝癌的发生发展。NF-κB表达定位在癌细胞和癌旁肝细胞中的差异，提示NF-κB活化后，进入胞核，通过调节下游基因的转录，促进肝癌的发生。     

RhoC基因在肝细胞癌中的表达及其意义

目的探讨RhoC基因与肝细胞癌 (HCC)的发生发展和侵袭转移的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)在半定量水平检测 2 5例HCC及其相对应的癌旁肝组织和 4例门静脉主干癌栓或肝外转移灶中RhoCmRNA的表达 ;同时采用PCR产物单链构象多态性 (PCR SS CP)银染法检测RhoC基因的突变情况。结果本组 2 5例HCC中RhoCmRNA的表达较癌旁肝组织高 ,其光密度比值分别为 1 8± 1 1和 1 0± 0 7,P <0 0 1,差异有显著意义 ;4例门静脉主干癌栓或肝外转移灶中的RhoCmRNA的表达较相对应的肝内肝癌病灶高 ,其光密度比值分别为 3 3± 0 5和 2 0± 0 7,P <0 0 1,差异有显著意义 ;将 2 5例HCC分为RhoC基因过表达组和高表达组后发现 ,过表达组中肝癌细胞分化较差 ,静脉受侵严重 ,且以结节性肝癌居多 (P <0 0 5 ) ;而 2 5例HCC经PCR SSCP银染法分析未发现异常泳动条带。结论RhoC基因与HCC的发生发展和侵袭转移密切相关 ,且可能是通过表达升高而非突变发挥作用。     

肝癌及癌旁组织中β-葡萄糖醛酸酶蛋白及mRNA的表达及意义

目的探讨肝细胞癌及癌旁组织中β-葡萄糖醛酸酶（β-G）蛋白及β-G mRNA的表达和临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法和免疫组织化学方法，对25例原发性肝细胞癌及其癌旁组织和10例正常肝脏组织进行检测，并分析其与临床病理特点之间的关系。结果半定量分析显示β-G mRNA的表达在肝脏癌组织（3．71±0．32）与癌旁肝组织（1.83±0.22）以及正常肝脏组织（1．71±0．32）间差异比较，均有统计学意义（均为P〈0．01），而癌旁肝组织和正常肝组织间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；从正常肝组织、癌旁组织到肝癌组织β-G蛋白的阳性细胞表达率分别为（48．2％±5．5％）、（56．8％±6．2％）和（83．8％±9．1％），呈递增趋势（χ^2=42．33，P〈0．01）；β-G蛋白的表达与肝癌病人的门脉癌栓以及淋巴结转移等临床因素有关（P〈0．01），而与肿瘤大小、AFP水平无关。结论β-G与肝细胞的癌变过程密切相关，可能在肝癌的侵袭和转移过程中也起一定的作用。     

门静脉主支癌栓PDGF-mRNA和E-CD蛋白的表达及意义

目的　探讨血小板源性生长因子 (PDGF mRNA)和内皮钙粘附蛋白 (E CD)在门静脉癌栓中表达水平的变化及其在肝癌肝内转移中的作用。方法　采用原位杂交技术检测 12例门静脉癌栓中PDGF mRNA基因的表达 ;采用免疫组化方法检测 33例门静脉癌栓中E CD蛋白和PDGF蛋白的表达 ,并与各自原发灶和癌旁组织进行对照。结果　 (1)E CD蛋白的表达 :门静脉癌栓、肝癌原发灶、癌旁组织的平均吸光度分别为 0 0 15 2± 0 0 0 36 ,0 0 5 2 7± 0 0 0 71和 0 10 0 8± 0 10 6 3。 (2 )PDGF蛋白的表达 :门静脉癌栓、肝癌原发灶、癌旁组织的平均吸光度分别为 0 10 5 9± 0 0 10 4 ,0 0 5 2 1± 0 0 0 92和 0 0 10 8± 0 0 0 2 9。 (3)PDGF mRNA的表达 :门静脉癌栓、肝癌原发灶、癌旁组织的平均吸光度分别为 0 12 0 7± 0 0 16 9,0 0 6 74± 0 0 0 71和 0 0 0 89± 0 0 0 0 6。经方差分析和t检验 ,各组间和各两组间均存在显著性差异 (P <0 0 1)。结论　门静脉癌栓中存在有促进转移和抑制转移两方面的因素 ,E CD蛋白表达减少 ,增加了门静脉癌栓中癌细胞脱落转移 ;而门静脉癌栓中PDGF mRNA表达的增加 ,则促进门静脉癌栓中结缔组织的形成 ,阻碍了癌细胞的脱落转移     

原发性肝癌癌旁组织生长激素受体的基因研究

目的探讨原发性肝癌癌旁组织生长激素受体（GHR）的基因表达情况或变化。方法采用放射配体法、半定量的逆转录-多聚酶链式反应（RT—PCR）对45例原发性肝癌（HCC）的癌旁组织进行了生长激素受体（GHR）的检测，以8例正常肝组织作为对照，并随机选择12例RT—PCR阳性扩增产物直接进行DNA序列测定。结果在蛋白表达水平，应用放射性配体法于正常肝组织与45例HCC癌旁组织中检测到单一的GH特异性结合位点（即GHR）。对照组肝组织GHR的RT值为40．2932±3。5667．fmol／mg；protein，Kd为0．6167±0．1007nmol／L。HCC癌旁组织GHR的RT为33．6283±3．6218fmol／mg。protein，Kd值为0．6319±0．1978nmol／L，与正常肝组织相比，HCC癌旁GHR的RT降低（P〈0．05）．而Kd无显著性改变（P〉0．05）。半定量的RT—PCR法发现GHRmRNA在正常肝组织与HCC癌旁组织的表达率均为100％。GHRmRNA在正常肝组织与原发性肝癌癌旁组织的表达两者之间差异无显著性（P〉0．05）。结论全部肝癌癌旁组织在蛋白与mRNA水平均表达GHR，在其受体功能未明的情况下，目前rhGH在肝癌患者中的使用应慎重，以免造成肿瘤的增殖与复发。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ和PTEN在肝癌组织中的表达及意义

目的检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和PTEN蛋白在肝癌组织与癌旁组织的表达情况,探讨两种蛋白表达㈦临床病理各参数的关系及意义。方法收集100例中山大学附属第一医院手术切除的肝癌㈦癌旁组织标本,构建组织微阵列芯片,应⒚免疫组化染色检测PPARγ和PTEN蛋白的表达。在体外实验中,应用Western blotting法检测人肝癌Huh7细胞中PPARγ活化对PTEN蛋白的影响。结果PPARγ、PTEN蛋白在肝癌组织中阳性表达率分别为82%和62%,明显低于癌旁组织的表达率(分别为95%和92%),差异有统计学意义(P0.05)。肝癌组织中PPARγ蛋白的表达与癌组织的分化程度密切相关,PTEN蛋白表达与癌组织的分化程度和肿瘤门静脉浸润关系密切。体外实验证实Huh7细胞中PPARγ活化后上调PTEN蛋白表达。结论PPARγ和PTEN蛋白在肝癌组织中阳性表达率均低于癌旁组织,PPARγ活化后上调PTEN蛋白表达,两种蛋白在肝癌发生发展中起着重要作用。     

Livin蛋白在原发性肝细胞癌组织中的表达和意义

目的 探讨凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)Livin在人原发性肝癌(HCC)组织中的表达及其与HCC血管生成的关系.方法 应用免疫组织化学法检测42例HCC及对应癌旁组织和12例正常肝组织内Livin的表达情况,观察Livin蛋白与HCC病理学特点及微血管密度(microvessel density,MVD)之间的关系.结果 免疫组织化学(SP)染色结果显示,Livin蛋白在正常肝组织中均不表达,而在42例HCC中的阳性表达率(73.81%)显著高于癌旁组织(4.76%)和正常肝脏组织,有显著统计学意义(X2=39.13,P＜0.05;X2=17.89,P＜0.05);Livin蛋白在病理分级Ⅲ～Ⅳ组阳性表达率(85.12%)强度明显高于病理分级Ⅰ～Ⅱ组(53.33%),两者比较差异有显著统计学意义(X2=4.690,P＜0.05);Livin蛋白在有转移HCC中的阳性表达率(89.47%)明显高于无转移组(60.89%),有统计学意义(X2=4.404,P＜0.05);Livin蛋白阳性表达HCC中的MVD值明显高于Livin蛋白阴性表达HCC中MVD值(23.56±5.12/17.63±4.86;P＜0.05).结论 Livin蛋白基因在原发性肝癌组织中高表达,提示该基因可能参与了肝癌的发生发展过程;Livin蛋白在HCC组织中的表达明显上调且与血管生成和浸润转移有关.     

P21ras、PIK3CA在肝癌与肝硬化中的表达及意义

目的 研究P21ras和PIK3CA蛋白在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌、乙型病毒性肝炎后肝硬化及正常肝组织标本中的表达差异、相关性及意义.方法 收集乙肝病毒相关性肝细胞肝癌组织标本34例、乙型病毒性肝炎后肝硬化37例、正常肝组织标本30例,用免疫组化检测P21ras和PIK3CA蛋白表达水平,并进行比较和相关性分析.结果 P21 ras在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌、乙型病毒性肝炎后肝硬化及正常肝组织标本中的平均灰度值分别为138.86±2.9、145.34±2.06和152.07±1.17,与肝病的不同进展情况存在显著性差异(P＜0.01).PIK3CA在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌、乙型病毒性肝炎后肝硬化及正常肝组织标本中的平均灰度值分别为138.20±3.14、149.49±0.78和154.71±1.29,与肝病的不同进展情况存在显著性差异(P＜0.01).在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌组和乙型病毒性肝炎后肝硬化组中,P21ras和PIK3CA蛋白表达均有相关性,在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌组中r=0.64,P＜0.05;乙型病毒性肝炎后肝硬化组中r=0.42,P＜0.05.结论 P21ras和PIK3CA蛋白在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌、乙型病毒性肝炎后肝硬化组织的过表达提示二者参与了肝硬化、肝癌的发病过程.在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌和乙型病毒性肝炎后肝硬化中可能存在着P21ras\PI3K的信号转导途径,从而促进肝细胞再生,发生肝硬化及癌变.     

原发性肝细胞癌中EphA7蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨酪氨酸蛋白激酶 EphA7 蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化和 Western blot 方法检测 EphA7 蛋白在40例原发性肝细胞癌及相应的癌旁肝组 织和10例正常肝组织中的表达情况,并分析其与原发性肝细胞癌的临床病理因素之间的关系.结果 EphA7蛋白的表达主要位于原发性肝细胞癌细胞或肝细胞的胞质,以及纤维间隔内的血管内皮细胞.原发性肝细胞癌组织、癌旁肝组织及正常肝组织中均有EphA7蛋白的表达,Western blot分析结果显示EphA7蛋白在肝细胞癌组织(0.58±0.26)中的表达水平高于癌旁肝组织(0.40±0.22,P<0.05)和正常肝组织(0.32±0.16,P<0.05),而在癌旁肝组织和正常肝组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05);EphA7蛋白的表达水平与原发性肝细胞癌细胞的分化程度、门静脉癌栓、淋巴结转移和甲胎蛋白水平等临床病理因素相关(P<0.05).结论 EphA7 蛋白的表达与原发性肝细胞癌的生物学行为密切相关,可能在原发性肝细胞癌的恶性转化、侵袭和转移过程中发挥重要作用.     

肝细胞癌中MyD88和STAT3的表达及其意义

目的 探讨髓样分化因子88(MyD88)和转录激活因子3(STAT3)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其生物学意义.方法 采用免疫组化方法 检测MyD88和STAT3在82例肝痛组织及其对应的癌旁肝组织中的表达水平.结合肝癌临床病理指标分析它们的相关性.结果 MyD88和STAT3蛋白在癌组织中的阳性表达率分别为67.1%(55/82)和69.5%(57/82),高于癌旁肝组织中的11.0%(9/82)和8.5%(7/82).差异均具有统计学意义(P＜0.05).在肝癌组织中MyD88与STAT3的阳性表达呈正相关(r=0.578,P=0.002).MyD88和STAT3表达与HCC患者的性别、癌的分化程度、有无HBV感染和肝硬化有关;上述4指标分组间差异具有显著性(P＜0.05).而与HCC肿瘤大小及有无静脉浸润无关;该2指标分组间差异无显著性(P＞0.05).结论 MyD88和STAT3表达上调,导致肝癌细胞增殖和免疫逃逸是肝癌发生发展的重要分子机制.     

EphA7基因在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨原发性肝细胞癌中EphA7 mRNA的表达及其临床意义.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光定量PCR法检测EphA7 mRNA在40例肝癌及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中的表达,并分析其与肝癌临床病理因素之间的关系.结果 40例肝癌组织及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中均有EphA7 mRNA的表达.实时荧光定量PCR分析显示EphA7 mRNA在肝癌组织(20.0711±32.0232)中的表达显著高于癌旁肝组织(4.5184±9.4738,P＜0.05)和正常肝组织(4.1764±4.7193,P＜0.05),而在癌旁肝组织和正常肝组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).EphA7 mRNA的过表达与肝癌细胞的分化程度、门静脉癌栓的形成及淋巴结转移等临床病理因素有关(P＜0.05).结论 EphA7的过表达与原发性肝细胞癌的生物学行为密切相关,可能在肝癌的恶性转化、侵袭和转移过程中发挥作用.     

磷酸化蛋白p27在肝细胞肝癌中表达及其意义

目的 探讨人肝细胞肝癌组织中磷酸化蛋白p27的表达及其与临床病理特征的关系.方法 利用Ti4+-IMAC富集和LC-MS2-MS3检测磷酸化蛋白的方法鉴定人肝细胞肝癌组织磷酸化蛋白,进一步利用Western blot检测40例肝细胞肝癌、相应癌旁组织和12例正常肝组织中T187、S10磷酸化p27蛋白(P-p27T187、P-p27S10)的表达.结果在肝癌组织磷酸化蛋白的筛选中鉴定到磷酸化蛋白p27,并确定IPI、磷酸化位点、蛋白激酶等信息,Western blot检测提示P-p27T187与P-p27S10在肝细胞肝癌组织表达明显高于癌旁、正常肝组织,其相对表达量分别为0.635±0.108、0.306±0.078和0.149±0.031,差异有统计学意义(P<0.05).且P-p27T187和P-p27S10与肝癌病理分级、临床分期及转移相关,而与发病年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤数目等无明显相关(P>0.05).结论 磷酸化蛋白p27在肝细胞肝癌中表达水平明显升高,与肝癌的发生发展及转移相关.