舒拉明对血清刺激的大鼠肾间质成纤维细胞增殖的研究

目的:肾间质成纤维细胞增殖是肾间质纤维化的重要启动机制之一,本研究将探讨舒拉明对血清刺激的大鼠肾间质成纤维细胞增殖的影响及其调控机制。方法:体外培养大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F),舒拉明以不同浓度(0,10,50,100μmol/L)处理细胞,观察细胞数目变化,显微镜拍照,MTT方法检测细胞活性变化,免疫印迹技术检测细胞周期蛋白Cyclin D1和P27的变化。结果:研究发现,舒拉明以剂量依赖性效应抑制细胞生长;MTT方法检测发现随着舒拉明剂量的加大,显著下调细胞增殖活性;通过检测细胞周期正向调控蛋白(Cyclin D1)和细胞周期负向调控蛋白(P27),证实舒拉明可剂量依赖性效应抑制Cyclin D1表达,增强细胞周期负向调控蛋白P27表达。结论:舒拉明可在体外以剂量依赖性效应抑制肾间质成纤维细胞增殖,可能与其调控细胞周期蛋白表达有关。     

细胞周期蛋白D1在三氧化二砷抑制人胆囊癌细胞生长中的作用

目的 探讨细胞周期蛋白(Cyclin)D1在三氧化二砷(As2O3)抑制人胆囊癌细胞体外生长中的作用.方法 不同浓度的As2O3作用于胆囊癌细胞GBC-SD,MTT法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期分布.Western印迹和RT-PCR检测Cyclin D1、D2、D3和CDK4、K6的蛋白和mRNA表达.构建Cyclin D1的表达质粒并转染GBC细胞,观察Cyclin D1过表达时细胞周期的变化.结果 As2O3能抑制胆囊癌细胞生长,作用呈时间、剂量一效应关系;流式细胞仪检测发现As2O3可将增殖过程中的胆囊癌细胞阻滞于G1期;Western印迹及RT-PCR检测显示Cyclin D1表达下降;过表达Cyelin D1逆转了As2O3对细胞周期的改变.结论 Cyclin D1在As2O3抑制人胆囊癌细胞的生长中起重要作用.     

银杏叶提取物在TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞表型转化中的作用研究

目的：揭示银杏叶提取物（EGb）在转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的人肾小管上皮细胞（HKC）表型转化中的作用,并探讨其对单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响。方法：体外培养HKC,经TGF-β1、EGb干预后,应用细胞免疫组化ABC法检测细胞角化蛋白-18与α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达,应用实时定量RT-PCR及Western blot。检测Ⅰ型胶原蛋白,应用Western blot方法检测MCP-1表达。结果：TGF-β1（8ng/ml）刺激HKC细胞72h后,细胞角化蛋白-18表达明显下调,α-SMA、Ⅰ型胶原、MCP-1表达明显上调;加入EGb25、50、100、150mg/L干预72h后,α-SMA、Ⅰ型胶原和MCP-1表达呈剂量依赖性减少,细胞角化蛋白-18表达呈剂量依赖性增加。结论：EGb以浓度依赖性方式抑制TGF-β1诱导的HKC表型转化,该作用机制可能与EGb下调MCP-1基因表达有关。     

松果菊苷对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1/Smads信号通路影响的实验研究

目的基于TGF-β1/Smads信号通路探讨松果菊苷(echinacoside,ECH)对人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFbs)的作用机制。方法自2019年3月至2020年2月新疆医科大学第一附属医院整形外科体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞;通过CCK-8法分析ECH作用24 h和48 h细胞的抑制活性。采用划痕试验检测HSFbs的迁移能力;流式细胞术检测ECH作用24 h后细胞周期的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)检测Smad2、Smad3、Smad7、Col1、Col3、Fibronectin和α-SMA的m RNA的表达;蛋白印迹法(Western blot)检测Smad2/3、P-Smad2/3、Smad7、Col1、Col3、Fibronectin和α-SMA蛋白的表达。结果随着ECH质量浓度的增高,HSFbs的细胞存活率逐渐降低,且呈现浓度依赖性,其IC50值为52.26μg/ml;ECH作用于HSFbs 24 h后,可将HSFbs阻滞在G0-G1期;不同浓度的ECH均可抑制HSFbs的迁移;相比模型组,实验组25、50μg/ml ECH均能够降低TGF-β1诱导的Col1、Col3、Smad2、Smad3、Fibronectin和α-SMA m RNA表达,50μg/ml ECH可促进Smad7m RNA表达;在蛋白表达水平上25、50μg/ml ECH均可使Col3、Fibronectin蛋白表达明显降低,Smad7蛋白表达明显增加,50μg/ml ECH组可降低P-Smad2/3、Col1和α-SMA的蛋白表达。结论ECH的可通过阻断TGF-β1/Smad信号通路进而抑制HSFbs活化、增殖与迁移,并减少胶原的分泌。     

甘露糖敏感型绿脓杆菌制剂对肝癌细胞周期的作用机制研究

目的 探讨甘露糖敏感性绿脓杆菌制剂(pseudomonasaeruginosa mannose sensitive haemagglutination vaccine,PA-MSHA)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞周期的作用及其机制.方法 培养人肝癌细胞株MHCC97L及HepG2,以不同剂量的PA-MSHA作用于肝癌细胞.MTT实验检测PA-MSHA对细胞增殖的影响.流式细胞技术检测PA-MSHA对细胞周期的作用.Western blot检测PA-MSHA作用前后细胞周期蛋白Cyclin D1、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)以及细胞周期蛋白激酶抑制剂p21和p27的表达情况.结果 与对照组相比,PA-MSHA显著抑制MHCC97L和HepG2细胞的增殖,其作用呈剂量及时间依赖性(P＜0.05).PA-MSHA显著诱导肝癌细胞周期阻滞,PA-MSHA作用后G0-G1期和G2-M期细胞比例显著增高,而S期细胞比例则显著下降(P＜0.05).PA-MSHA显著抑制Cyclin D1、CDK2、PCNA蛋白的表达,而促进p21和p27的表达.外源性甘露糖可显著抑制PA-MSHA对肝癌细胞增殖和周期的作用(P＜0.05).结论 PA-MSHA通过调控细胞周期相关蛋白来诱导HCC细胞周期阻滞,抑制细胞增殖.这一作用是通过肝癌细胞表面的甘露糖的介导实现的.     

转化生长因子-β在环孢素A诱导人早孕滋养细胞体外侵袭性生长中的调节作用

目的研究转化生长因子(TGF)-β1与TGF-β2在环孢素A(CsA)诱导滋养细胞活力、侵袭与迁移能力中的调节作用。方法收集人早孕期绒毛组织,原代分离滋养细胞,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CsA处理后滋养细胞的TGF-β1和TGF-β2分泌水平。四唑盐(MTT)法测定滋养细胞存活和生长。Transwell侵袭与迁移试验检测滋养细胞侵袭与迁移能力。结果 CsA剂量依赖性地抑制人早孕期滋养细胞分泌TGF-β2,但不影响TGF-β1的分泌。外源性加入人重组的TGF-β1与TGF-β2抑制基础的和CsA诱导的滋养细胞侵袭、迁移、活力的增强作用;相反,加入TGF-β1或TGF-β2的中和性抗体,则进一步加强CsA诱导的滋养细胞侵袭、迁移与活力的增强作用。结论 CsA通过下调TGF-β2而不是TGF-β1促进人早孕期滋养细胞的体外侵袭性生长。     

上调NICD对人牙周膜干细胞增殖及迁移能力的影响

目的:研究上调Notch胞内区域(Notch Intracellular Domain,NICD)对人牙周膜干细胞增殖及迁移能力的影响。方法:将细胞分为上调组、对照组及空白组,使用MTT比色法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,采用细胞划痕实验检测细胞迁移情况,并使用Western blot检测人牙周膜干细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白(TGF-β、BMP-2、β-caten、LEF-1、Cyclin D1、Caspase-3、Bax、Bcl-2)表达量。结果:对照组各时间点的人牙周膜干细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、迁移、黏附个数、TGF-β、BMP-2、β-caten、LEF-1、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量均低于空白组,且凋亡率、Caspase-3、Bax蛋白表达量高于空白组,差异具有统计学意义(P<0.05)。上调组各时间点人牙周膜干细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、迁移、黏附个数、TGF-β、BMP-2、β-caten、LEF-1、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量均高于空白组和对照组,且凋亡率、Caspase-3、Bax蛋白表达量均低于空...     

三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和细胞周期的作用

目的观察三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和细胞周期的作用.方法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,并应用三七总甙进行干预,用免疫细胞化学染色法结合图像分析观察TGF-β1的表达变化,用流式细胞仪测定细胞周期的变化.结果与对照组相比,三七总甙能够显著抑制细胞TGF-β1的表达,并使细胞停滞于S期, 而G0-G1期、G2-M期细胞明显减少(P＜0.01).结论三七总甙改变细胞周期和抑制增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1的表达,可能成为防治增生性瘢痕的药物.     

三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和细胞周期的作用

目的 观察三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和细胞周期的作用。方法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞，并应用三七总甙进行干预，用免疫细胞化学染色法结合图像分析观察TGF-β1的表达变化，用流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果与对照组相比，三七总甙能够显著抑制细胞TGF-β1的表达，并使细胞停滞于S期，而G0-G1期、G2-M期细胞明显减少（P〈0．01）。结论三七总甙改变细胞周期和抑制增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1的表达，可能成为防治增生性瘢痕的药物。     

热休克蛋白47在转化生长因子β1诱导肾小管间质纤维化中的作用

目的 探讨热休克蛋白47（HSP47）在肾小管间质纤维化中的作用及其可能机制。 方法 常规培养人肾小管上皮细胞（HK-2）,分为对照组、转化生长因子β1（TGF-β1）组、HSP47-siRNA组。RT-PCR检测HSP47、胶原Ⅳ、纤连蛋白（FN）、组织型纤溶酶原激活物抑制剂1（PAI-1）的mRNA表达。Western印迹检测HSP47、胶原Ⅳ、FN蛋白表达。ELISA检测PAI-1的蛋白量。 结果 HK-2细胞有HSP47表达。不同浓度TGF-β1（0、2.5、5、10 μg/L）干预不同时间（12、24、48 h）时,HSP47基因和蛋白表达呈浓度和时间依赖性增高,10 μg/L TGF-β1干预HK-2细胞48 h时,HSP47 mRNA和蛋白表达最强。不同浓度 TGF-β1（0、5、10 μg/L）干预HK-2不同时间（12、24、48 h）时,胶原Ⅳ、FN 、PAI-1 mRNA和蛋白表达亦呈浓度和时间依赖性增高,10 μg/L TGF-β1作用48 h时,3者mRNA和蛋白表达最强。与TGF-β1组比较,HSP47-siRNA组的HSP47、胶原Ⅳ、FN、PAI-1 mRNA和蛋白表达都明显下调。 结论 HSP47可促进肾小管间质纤维化,其机制可能与上调胶原Ⅳ、FN、PAI-1表达有关。     

辛伐他汀对胆管癌细胞周期相关蛋白的作用

目的了解辛伐他汀对胆管癌细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E、CDK4及pRB的作用。方法体外实验使用辛伐他汀处理胆管癌细胞EGI-124 h和48 h后,利用CCK-8试剂盒测定肿瘤细胞增殖情况,其后实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞周期相关基因Cyclin D1、Cyclin E、CDK4及pRB的mRNA,根据结果再用Western blotting验证相应蛋白的表达水平。体内实验使用EGI-1接种于12只NOD-SCID小鼠皮下,成瘤后随机分为实验组和对照组,每组6例。实验组每天按照20 mg/kg的辛伐他汀灌胃,对照组每天喂予同剂量的药物溶剂。24 d后取出移植瘤测量体积并进行免疫组织化学染色,明确上述蛋白的体内表达水平。结果辛伐他汀处理对胆管癌细胞EGI-1有增殖抑制作用,呈现药物的浓度依赖性,其24 h及48 h的半抑制浓度数值分别为(8.27±0.77)μmol/L和(5.90±1.81)μmol/L。辛伐他汀处理48 h的EGI-1细胞内Cyclin D1、CDK4和pRB mRNA表达显著下调(P<0.05),而Cyclin E mRNA表达差异无统计学意义。相应地,EGI-1细胞内Cyclin D1、CDK4、pRB蛋白也被抑制,与mRNA的结果保持一致;同时随药物时间延长,抑制作用增强。体内实验显示,辛伐他汀可抑制小鼠移植瘤生长,免疫组织化学分析显示实验组小鼠移植瘤细胞Cyclin D1、CDK4、pRB蛋白下调(P<0.05)。结论辛伐他汀可通过下调细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4、pRB抑制胆管癌细胞增殖。     

整合素连锁激酶介导转化生长因子β1上调肾小管上皮细胞表达纤连蛋白的研究

目的 研究转化生长因子β1（TGF-β1）诱导肾小管上皮细胞合成纤连蛋白（FN）与整合素连锁激酶（ILK）表达的关系.方法 培养人肾小管上皮细胞（HKC）,用蛋白印迹方法检测TGF-β1诱导HKC合成FN和表达ILK的作用.通过基因转染的方法,将含人野生型ILK基因的表达质粒pCMV-wtILK和无激酶活力的人ILK基因表达质粒pCMV-kdILK转染HKC细胞,观察ILK过度表达和抑制ILK活力对TGF-β1诱导的HKC合成FN的影响.结果 TGF-β1能够刺激HKC合成FN,其作用呈剂量依赖性.TGF-β1刺激8 h即可上调HKC细胞ILK的表达,与TGF-β1所致的FN合成的增加相一致.转染pCMV-wtILK质粒的HKC细胞,其FN的表达呈增加趋势.转染pCMV-kdILK抑制ILK的活力能够显著拮抗TGF-β1刺激HKC表达FN的作用.结论 TGF-β1刺激肾小管上皮细胞FN合成与其所致的ILK表达密切相关.抑制ILK的活力能够拮抗TGF-β1导致的FN合成.     

大黄酸抑制肾间质成纤维细胞激活的实验研究

目的 研究大黄酸(Rhein)抑制转化生长因子β1(TGF-β1)激活大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)作用及探讨大黄治疗肾脏病的作用机制。方法 以NRK-49F细胞为研究对象，采用细胞计数观察细胞生长，流式细胞仪分析细胞周期变化。α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)作为细胞活化指标，同时检测纤连蛋白(FN)表达的水平以评价细胞外基质合成的变化。结果 TGF-β1具有促进NRK-49F增殖的作用，大黄酸呈时间依赖性和剂量依赖性抑制该增殖作用。TGF-β1能够促进NRK-49F进入S期和G2/M期，而经大黄酸作用的细胞主要是G0/G1期细胞。大黄酸呈剂量依赖性显著抑制TGF-β1诱导的NRK-49F细胞α-SMA蛋白表达水平，同时，大黄酸还可减少TGF-β1诱导的NRK-49F细胞FN 蛋白的表达水平。结论 大黄酸能够阻止TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期，抑制该细胞的增殖。同时，大黄酸还具有抑制TGF-β1激活肾间质成纤维细胞的作用，并拮抗TGF-β1导致的FN表达与合成。     

霉酚酸对高糖环境下肾小球系膜细胞外基质的影响

目的：通过检测霉酚酸酯（MMF）的代谢产物霉酚酸（mycophenolic acid,MPA）对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cells,MCs）增殖、转化生长因子-β1（transformation growth factor-β1,TGF-β1）和细胞外基质的主要成分：纤维连接蛋白（fibrin,FN）、层黏连蛋白（laminin,LN）和胶原Ⅳ（typeⅣ collagen,ColⅣ）分泌的影响,探讨MPA对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）的保护机制。方法：四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法测定高糖及高糖加入不同浓度MPA（1～10μmol/L）后对大鼠MCs增殖的影响,ELASE的方法测定各组24h、48h、72hFN、LN、ColⅣ的表达,荧光定量多聚酶链反应的方法检测各组标本中TGF-β1 mRNA的表达,并进行统计学分析。结果：高糖可以诱导MCs增殖及TGF-β1、FN、LN、ColⅣ的表达,MPA抑制高糖环境下MCs增殖和FN、LN和ColⅣ分泌并呈剂量时间依赖性,MPA可以呈剂量依赖性抑制高糖环境下MCs分泌TGF-β1,各组之间有统计学差异（P〈0.05）。结论：MPA可以通过抑制高糖环境下MCs的增殖和TGF-β1的分泌,从而抑制系膜外基质增多、系膜区扩张,有效阻止细胞外基质积聚,从而防止肾小球硬化,延缓DN的发展。     

DCPIB对小胶质细胞株BV-2细胞增殖的抑制作用

目的 探讨容积调控性氯离子通道(VRACs)阻断剂DCPIB对小胶质细胞BV-2细胞增殖的影响及作用机制.方法 不同浓度的DCPIB(10、20、40 μmol/L)作用于BV-2细胞相应的时间后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测DCPIB对细胞增殖的抑制率;流式细胞术检测药物处理后BV-2细胞周期的分布;Western blot检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1的表达.结果 VRACs阻断剂DCPIB可使细胞生长曲线下移,呈时间和浓度依赖性;DCPIB抑制细胞增殖,作用细胞48 h后的抑制率分别为(29.20±3.99)％、(38.93±2.36)％、(68.52±2.16)％,与正常对照组比较均有明显增高(P＜0.01).细胞周期阻滞在G0/G1期,G2/M期和S期细胞明显减少.DCPIB作用BV-2细胞72 h后,与对照组比较,Cyclin D1蛋白表达明显降低.结论 VRACs阻断剂DCPIB可以抑制BV-2细胞增殖,其作用机制可能与阻滞细胞周期和下调Cyclin D1蛋白的表达有关.     

金荞麦提取物调控DDIT4对肾癌细胞凋亡的影响

目的:探讨金荞麦提取物Fr4对肾癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度Fr4处理肾癌细胞786-O,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测786-O细胞中Cyclin D1、P21、Bcl-2、Bax、DDIT4表达。建立过表达DDIT4细胞。在786-O细胞中转染si-DDIT4,并用400μg/ml Fr4处理,研究786-O细胞增殖、凋亡变化。结果:Fr4明显抑制786-O细胞活性(P0.05),并呈剂量和时间依赖性;不同浓度Fr4显著减少Cyclin D1蛋白表达量,提高P21蛋白水平(P0.05),并呈剂量依赖性。400μg/ml的Fr4明显增加细胞凋亡率和Bax、DDIT4蛋白表达量(P0.05),降低Bcl-2蛋白水平。过表达DDIT4显著抑制24 h、48 h、72 h的细胞活性及Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平,增加细胞凋亡率、P21和Bax蛋白表达量(P0.05)。抑制DDIT4逆转了Fr4对786-O细胞增殖、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达的抑制作用,和对细胞凋亡、DDIT4、P21和Bax蛋白表达的促进作用。结论:金荞麦提取物Fr4通过调控DDIT4表达抑制肾癌细胞增殖,并诱导其凋亡。     

水飞蓟宾对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞整合素连接激酶、TGF-β1及α-SMA表达的影响

目的:研究水飞蓟宾(SB)对脂多糖(LPS)作用下大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)整合素连接激酶(ILK)、转化生长因子β1(TGF-β1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法:胰蛋白酶消化法原代及传代培养RPMC,经鉴定后第2代用于实验。细胞随机分组:(1)正常对照组;(2)不同浓度的LPS(1mg/L、10mg/L、100mg/L)作用24h组;(3)不同时间LPS组:10mg/LLPS分别作用于RPMC12h、24h、48h、72h;(4)水飞蓟宾组:不同浓度的SB(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml)分别预孵育2h,加入10mg/LLPS再作用24h。实时定量PCR检测ILK及α-SMAmRNA的表达;Western印迹法检测ILK蛋白表达;ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1的表达。结果:与正常对照组相比,LPS可刺激RPMCILKmRNA和蛋白的表达增高,且在一定范围内呈时间和剂量依赖性(P<0.05);LPS诱导RPMCα-SMAmRNA呈时间和剂量依赖性表达增高(P<0.05);LPS诱导RPMCTGF-β1蛋白表达升高,呈现时间和剂量依赖性(P<0.01);水飞蓟宾组能浓度依赖性地降低LPS所致的RPMCILK、TGF-β1及α-SMA的表达(P<0.05),随水飞蓟宾浓度的增加,抑制作用越强。结论:LPS可以上调RPMCILK、TGF-β1及α-SMA的表达;水飞蓟宾可以抑制LPS所致的RPMCILK、TGF-β1及α-SMA的过度表达。ILK参与了腹膜透析相关性腹膜炎腹膜纤维化的病理过程,水飞蓟宾对腹膜透析相关性腹膜炎具有一定的抑制作用,并具有抑制腹膜纤维化的作用。     

孕激素调节人成骨细胞转化生长因子-β1、β2的表达

目的研究孕激素对正常成人成骨细胞转化生长因子(TGF)-β1、TGF-β2表达的调节作用,探讨孕激素治疗绝经后骨质疏松症(OP)的作用机制.方法鉴定成人成骨细胞(hOB),测定碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素分泌,Van Gieson氏苦味酸酸性复红染色法进行Ⅰ型胶原染色.hOB用孕酮干预.Northern杂交、ELISA分别检测hOB TGF-β1、TGF-β2 mRNA和蛋白质分泌.结果观察到hOB分泌的ALP活性为(74.3±4.7)mU/mg蛋白,培养上清液骨钙素含量为(3.84±0.39)ng/ml蛋白,Ⅰ型胶原染色呈红色.观察到孕酮增强hOB TGF-β1、TGF-β2 mRNA表达呈剂量依赖性(P＜0.001);10-9mol/L孕酮诱导12～24 h促进TGF-β1、TGF-β2 mRNA表达,呈时间依从性.孕酮促进hOB TGF-β1、TGF-β2蛋白质分泌呈剂量依赖性(P＜0.001);10-9mol/L孕酮诱导12～24 h促进TGF-β1、TGF-β2蛋白质分泌,呈时间依从性.结论孕激素可能通过诱导成骨细胞TGF-β1、TGF-β2表达,促进成骨细胞增殖与分化,增强成骨功能及骨基质合成,促进骨形成.     

miR-200a在TGF-β诱导口腔黏膜修复中的功能研究

目的探索miR-200a在TGF-β诱导口腔黏膜修复过程中表达水平的变化和功能。方法分离培养原代人牙龈成纤维细胞(Human Gingival Fibroblast,HGF),加入不同浓度TGF-β,实时荧光定量PCR检测miR-200表达水平的变化。通过转染miR-200a模拟物增加miR-200a表达水平,利用Transwell实验检测细胞迁移能力,利用CCK-8实验检测细胞增殖活性,利用蛋白质免疫印迹实验检测细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达水平。结果 TGF-β处理会引起HGF细胞miR-200a表达水平下降,且随着TGF-β作用浓度增加,miR-200a表达下降比例增加;与对照组相比,转染miR-200a模拟物的实验组miR-200a表达水平上升,细胞增殖活性下降,迁移到Transwell下层小室的细胞数目降低,Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达水平下降。结论 miR-200a在TGF-β诱导口腔黏膜修复过程中可以抑制HGF的增殖活性、迁移能力和Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达,进而影响口腔黏膜的修复和重建。     

阿霉素诱导的足细胞转分化中β-catenin及TGF-β的变化及活性维生素D_3的干预作用

目的:探讨阿霉素诱导的足细胞转分化(EMT)中β-catenin及TGF-β的变化及活性维生素D3干预作用。方法:以体外培养的小鼠足细胞系为研究对象,分6组进行实验:正常组(C组)、阿霉素组(即模型组,ADR组)、低剂量活性维生素D3组(LVD组)、高剂量活性维生素D3组(HVD组)、缬沙坦组(ARB组)、缬沙坦+高剂量活性维生素D3组(AHVD组)。各实验组干预24 h、48 h时通过RT-PCR检测β-catenin、TGF-βmRNA的表达,Western Bolt检测β-catenin蛋白的表达。结果:用药物干预24 h及48 h时,与正常对照组相比,ADR组足细胞β-catenin mRNA及蛋白表达均上调(P<0.01);与ADR组相比,四个药物干预组(ARB组、LVD组、HVD组、AHVD组)β-catenin mRNA及蛋白表达均下调(P<0.05)。24 h时与正常对照组相比,ADR组TGF-βmRNA表达上调(P<0.01);与ADR组相比,四个药物干预组TGF-βmRNA表达明显下调(P<0.01)。48 h时与正常对照组相比,ADR组TGF-βmRNA表达上调(P<0.01);与ADR组相比,HVD组与AHVD组TGF-βmRNA表达明显下调(P<0.01),而LVD组及ARB组无显著下降(P>0.05)。结论:活性维生素D3通过抑制信号转导通路中β-catenin、TGF-β的表达而抑制足细胞发生EMT。