神经性毒剂对人脑乙酰胆碱酯酶的抑制及肟类药物的…

本文观察了神经性毒剂沙林，梭曼，塔崩和ＶＸ对纯化人脑乙酰胆碱酯酶的抑制作用及肟类药物对这些毒剂抑制的酶的体外重活化作用。结果表明，毒剂抑制人脑乙酰胆碱酯ＰＩ５０为７．９－９．１，毒剂的抑制能力为：梭曼＞沙林＝ＶＸ＞塔崩，肟类药物氯磷定，双解磷，双复磷和ＨＩ－６对沙林和ＶＸ抑制的人脑乙酰胆碱酯 酶的重化作用非常显著，但对梭曼和塔崩抑制的酶则母，且不药物对这两种毒剂抑制的乙酰胆碱酯酶的重活化作用也明显     

神经性毒剂中毒对动物心脏损伤的研究

神经性毒剂从结构上可分为Ｇ类毒剂 (主要包括沙林、梭曼、塔崩 )和Ｖ类毒剂 (ＶＸ)。它和有机磷农药杀虫剂一样 ,同属于有机磷酸酯类化合物 ,具有毒性大、作用迅速、防治困难等特点 ,是外军装备的主要化学战剂之一。作为有机磷化合物 ,神经性毒剂的主要中毒机制是抑制乙酰胆碱酯酶活力 ,使乙酰胆碱不能很快被酶水解 ,造成乙酰胆碱在中枢及外周神经系统的蓄积 ,进而诱发一系列胆碱能神经亢奋症状。中毒者出现流涎、肌颤、大汗、缩瞳、步态不稳、呼吸困难、心律不齐、惊厥及昏迷等 ,严重时危及患者生命。在神经性毒剂急性中毒的致死原因中 ,…     

不同磷酰化乙酰胆碱酯酶活性部位空间结构差异

<正> 本文以五种结构相近似的H系列肟类重活化药物(包括HI-6)分别对沙林,梭曼,塔崩和VX抑制的人红细胞乙酰胆碱酯酶(AChE)进行体外重活化实验,药物的结构除了吡啶环上肟基分别为2位和4位以外,其余均相似。毒剂加入红细胞悬液于37℃孵温10min以完全抑制AChE(为延缓梭曼抑制的AChE老化,梭曼的抑制反应于冰浴中进行),洗去剩余毒剂(梭曼于4℃低温下洗去),并加药物于37℃下重活化30min。     

脯氨肽酶在军事医学中的应用

应用酶清除神经性化学毒剂及有机磷农药的研究课题已有 5 0多年。 194 6年Mazur[1] 首次报道了兔组织中一种酶有水解二异丙氟磷酸酯 (DFP)的能力。 1992年国际生化组织 (TheInternationalUnionofBiochemistry)将此酶定义为有机磷酸酸酐水解酶 (Organophophorusacidanhydrolase ,OPAA ,E .C .3.1.8.2 )。它能水解多种有机磷酸乙酰胆碱酯酶抑制剂 ,包括DPF、神经性化学毒剂梭曼 (Soman)、沙林 (Sarin)和塔崩 (Tabun)以及杀虫剂对硫磷 (parathion)和对氧磷 (paraoxon)等。酶法去污染及化学毒剂的销毁意义重大。以前曾根据水解底物的不…     

人血清对氧磷酶的部分纯化及解毒效应

目的　寻求对氧磷酶 (paraoxonase ,EC 3.1.8.1)作为外源性抗毒剂对抗G类有机磷毒剂的可能性。方法　采用亲和凝胶柱层析进行了人血清对氧磷酶的部分纯化 ,测定了其对于不同底物的米氏常数 (Km)以及钙离子对于酶活性的影响 ,比较了不同种属的对氧磷酶活性 ,采用体外解毒 ,体内染毒的方法检测了对氧磷酶对于不同的底物的作用。结果部分纯化的对氧磷酶对于梭曼和对氧磷均有较好的催化水解作用。以对氧磷为底物时 ,Km 值为 0 .2 2mmol·L- 1,比活性为 375 μmol·min- 1·g- 1蛋白 ;以梭曼为底物时 ,Km 值为 0 .6 0mmol·L- 1,比活性为 4 34μmol·min- 1·g- 1蛋白。不同种属来源的血清对氧磷酶的活性差异较大 ,是造成不同种属动物对有机磷毒剂中毒敏感性差别的原因之一。部分纯化的对氧磷酶在含 1mmol·L- 1CaCl2 的缓冲液中活性良好 ,加入乙二胺四乙酸 (EDTA)后 ,无论以对氧磷或梭曼为底物 ,酶活性均受到明显抑制 ,表明人血清对氧磷酶是钙离子依赖性酶。EDTA的pI50 约为 1.8mmol·L- 1。人血清对氧磷酶能有效地水解对氧磷、梭曼、沙林、塔崩及敌敌畏 ,但对VX及乐果无效 ,表明其对P F、P CN及P O键有选择性 ,对P S键无作用。结论　对氧磷酶可作为G类毒剂的抗毒剂     

微量电鳐乙酰胆碱酯酶抑制法测定低剂量梭曼浓度

微量电鳐乙酰胆碱酯酶抑制法测定低剂量梭曼浓度刘星，陈起展梭曼是一种能对机体内乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）强烈抑制而产生毒性的有机磷化合物。我们在Ｈａｍ－ｍｏｎｄ［１］等建立的微量ＡＣｈＥ抑制法测定微量有机磷毒剂浓度基础上改进，建立了一种新型的测定方法，其...     

二乙酰单肟和硝苯地平对梭曼中毒小鼠的保护

羟酸酯酶（ｃａｒｂｏｘｙｌｅｓｔｅｒａｓｅ,ＣａＥ）,是一组能催化水解羟酸酯生成羟酸和乙醇的同工酶,在体内主要分布于肝、肺、血浆、小肠等组织器官。研究表明,梭曼中毒时不仅抑制乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）,而且还可逆性结合并抑制ＣａＥ。ＣａＥ与梭曼结合可使体内游离梭曼浓度降低,从而减轻梭曼对靶部位ＡＣｈＥ的抑制。因此ＣａＥ作为内源性毒剂清除剂已引起了人们的广泛重视。那么,通过加速梭曼抑制的ＣａＥ的重活化,或扩张外周血管增加血浆ＣａＥ与梭曼的结合,充分调动ＣａＥ在体内解毒潜力,可能对提高梭曼的防治水平有…     

4种高毒有机磷化合物体外稳定性及小鼠染毒后体内活性持续时间

目的 评价梭曼、沙林、塔崩和维埃克斯(VX)4种有机磷化合物的体外稳定性及小鼠染毒后毒剂分子在血液中活性持续时间，为有机磷化合物中毒救治中药物的使用频率和给药时间等提供参考和指导。方法 (1)有机磷化合物体外稳定性评价。梭曼、沙林和VX分别用无菌水稀释1×10⁵倍，塔崩用无菌水稀释1×10⁴倍，将以上稀释好的4种有机磷化合物再分别用PBS稀释100倍后置37℃恒温培养箱孵育，分别在0,10,20,40,90,120和240 min取出一定量有机磷化合物与乙酰胆碱酯酶(AChE)溶液0.2 g·L^-1反应，采用Ellman法测定AChE活性，并计算酶活抑制率。(2)有机磷化合物染毒小鼠后血液分离物对AChE活性抑制作用。将4种有机磷化合物配置成不同浓度梯度后对KM小鼠进行腹部皮下染毒，以组内小鼠未出现死亡时的最高使用剂量为随后建模的动物染毒剂量，在该剂量染毒后分别于0,10,20,40,90,120和240 min取全血，采用超滤离心法分离各时间点体内残留的有机磷化合物并采用Ellman法测定其对AChE活性抑制率。结果 ...     

药物预防神经性毒剂中毒的研究进展

神经性毒剂是有机磷酸酯衍生物,包括塔崩、沙林、梭曼和维埃克斯等,至今仍然是战争和恐怖主义活动使用的主要毒剂。它们的主要作用是抑制体内胆碱酯酶的活力,尤其是副交感神经功能亢进的现象最为突出[1]。有关神经性毒剂的解毒治疗原则早在20世纪70年代初就由英国制定,而且几乎     

卡托普利对大鼠血液中梭曼消除的影响

啮齿类动物对梭曼有很强的解毒能力，但在梭曼解毒中，肝脏及肠道等外周器官中羧酸酯酶强大的解毒能力并未得到充分发挥，如能调法提高它们的利用度，就有可能减少梭曼到达靶器官的量，并降低梭曼的毒性，梭曼中毒后，可以引起外周血管痉挛，使更多的梭曼向脑中分布，因此加重脑功能性乙酰胆碱酯酶的抑制程度。尼莫地平通过外周血管扩张作用，山莨菪碱通过改善外周微循环作用，增加了梭曼与外周解毒酶的结合而加快了梭曼的消除。为了解其他因管扩张机制的药物是否也有类似作用，我们观察了卡托普利对大鼠血液中梭曼消除的影响。     

老年痴呆症药物石杉碱甲类似物研究Ⅳ（±）-8，15-二氢-去-11，15-二甲基-8-羟基石杉碱甲的合成

石杉碱甲（１）是从我国草药千层塔中分到的一个可逆性的强效乙酰胆碱酯酶抑制剂，将成为新一代治疗早老性和老年痴呆症的药物．基于乙酰胆碱酯酶的Ｘ－衍射晶体结构及石杉碱甲抑制乙酰胆碱酯酶的作用机制研究结果，设计合成了（±）－８，１５－二氢－去－１１，１５－二甲基－８－羟基石杉碱甲（９ａ，９ｂ）．生物活性试验表明这些类似物抑制酶活性远低于天然石杉碱甲     

对硫磷与对氧磷抑制的人脑乙酰胆碱酯酶的老化及重活化

目的　了解对硫磷与对氧磷在试管内对人脑乙酰胆碱酯酶 (AChE)的抑制 ,膦酰化酶的老化速率及肟类药物的重活化效能有何差别。方法　微量羟胺比色法测定AChE活性。结果　对硫磷与对氧磷抑制人脑AChE 5 0 %活性的摩尔浓度的负对数值(pI50 )分别为 4 .10及 7.5 1,抑制人脑AChE 90 %活性的摩尔浓度的负对数值 (pI90 )值分别为 2 .5 5及6 .5 7。氯磷定、双复磷、双磷定和酰胺磷定 4种重活化剂对对硫磷与对氧磷抑制的人脑AChE的重活化作用有较大差异 ,等摩尔浓度条件下 ,其对对氧磷的重活化作用普遍好于对硫磷。且双肟类重活化剂作用普遍强于单肟类重活化剂 ;对硫磷与对氧磷的最佳重活化剂均为双复磷。对硫磷与对氧磷人脑AChE磷酰化酶的半老化时间 (t0 .5)分别为 14及 12h ,老化达到 99%的时间 (t0 .99)分别为 95及 81h。结论　对硫磷或对氧磷中毒时应尽早使用双复磷或双磷定。且在急性中毒症状控制后 ,仍须连续使用重活化剂 4d。     

催化神经毒剂梭曼水解的抗体酶

催化神经毒剂梭曼水解的抗体酶赵毅民荣康泰徐勤惠（军事医学科学院毒物药物研究所，北京１００８５０）梭曼是难防难治的有机磷毒剂．为了寻找新的解毒途径，本研究设计并合成了全新化合物１－羟基－１－对胺基苯基甲膦酸单频哪基醇酯．此化合物可竞争性地抑制梭曼水解酶...     

梭曼单链抗体的基因克隆和表达

成功地扩增了有机磷毒剂梭曼类似物１－羟基－１－对胺基苯基甲膦酸单频哪基醇酯与血蓝蛋白结合物免疫小鼠脾细胞中抗体重链和轻链基因片段，构建了单链抗体可变区基因（ＶＨ－ｌｉｎｋｅｒ－ＶＬＤＮＡ），并将该基因克隆到噬菌体表达载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ的外壳蛋白ｇ３ｐ基因中，使单链抗体以融合蛋白的形式在Ｅ．ｃｏｌｉＴＧ１中表达在噬菌体表面，构成噬菌体抗体库．通过免疫亲和淘洗和竞争抑制酶联免疫吸附测定法筛选，得到１２株克隆，其分泌的单链抗体与梭曼有结合活性．     

缺氧条件下有机磷毒剂梭曼对大鼠心肌损伤的实验研究

有机磷毒剂——梭曼是难防难治的神经性毒剂之一,其主要中毒机理是对机体乙酰胆碱酯酶(AChE)的抑制,造成胆碱能神经系统功能紊乱,引起中毒症状[1,2]。缺氧条件下梭曼中毒是可能发生在高原缺氧地区的一种特殊的化学中毒损伤,是在一种损伤(缺氧或梭曼中毒)的基础上加上另一种致伤效应(梭曼中毒或缺氧),无疑将使这种特殊损伤伤情和致伤机制复杂化,并增加救治难度。1　材料与方法1.1　动物和药品Wistar大鼠,体重(210±20)g,雌雄不限,由第三军医大学实验动物中心提供;梭曼,纯度94.6%,由军事医学科学院毒物药物研究所提供,临用时配制丙二醇-生理…     

细菌梭曼水解酶活性的测定

细菌梭曼水解酶活性的测定董泗建刘昌玲梭曼水解酶是国内外抗有机磷毒剂药物研究方向之一，是从菌种微球菌中提取分离得到了一种触酶，称它为细菌梭曼水解酶，它不仅具有催化水解过氧化氢的作用，而且也能催化水解Ｇ类有机磷毒剂的作用。目前，检测有机磷毒剂的方法操作麻...     

含磷毒剂体外药效学评价方法建立

目的 含磷毒剂主要是通过抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)发生毒害作用,本文旨在建立一种在体外快速测定AChE 活性的方法,为有机磷毒剂中毒及解救时AChE活性检测奠定基础。方法 以动物全血红细胞作为AChE的来源,利用硫代乙酰胆碱与巯基显色剂DTNB反应形成黄色化合物的原理,用分光光度法在412 nm处比色定量测定AChE活性。首先利用还原型谷胱甘肽能提供巯基,其显色效应相当于硫代胆碱,故用谷胱甘肽进行DTNB法测定AChE活性标准曲线的绘制;其次进行了DTNB法测定全血样品AChE活性的方法学研究,主要包括对全血进行20, 40和60等不同倍数的稀释后测定AChE活性、使用兔、豚鼠、比格犬及猴等不同动物全血红细胞作为AChE的来源进行AChE活性的测定,同时对不同批次全血样品及同一批次血样不同时间的AChE活性进行测定,验证DTNB法测定AChE活性的方法的可行性;最后选择兔全血红细胞作为AChE的来源,对有机磷毒剂如沙林及梭曼进行了体外药效学评价,梭曼终浓度为6.25 nmol·L^-1～0.4 μmol·L^-1,沙林终浓度为6.25 nmol·L^-1～4 μmol·L^-1,以不同浓度沙林及梭曼的负对数对兔子全血AChE抑制百分率的对数作图,求出沙林及梭曼抑制动物全血AChE的量效曲线,计算得到其IC₅₀值和IC₉₀值。结果 以吸光度值（标准管吸光度值-零管吸光度值）为纵坐标,AChE活性为横坐标作图,即得谷胱甘肽标准曲线,标准曲线方程为Y=0.0029＋0.1218X,r＝0.9999,结果表明,该检测方法在AChE活性为0～10.8 mmol·L^-1的范围内保持线性。选取兔全血40倍稀释后作为AChE的来源进行实验,通过对不同动物批内及批间AChE活性进行测定并统计得出,批内差异为0.44%～0.67%,批间差异为1.03%～2.27%。表明该方法批内及批间差异较小,均不超过10%,可以进行有机磷类化合物的体外药效学评价。不同浓度沙林及梭曼对兔全血AChE活性抑制的量效关系表明其作用强度的顺序为：梭曼＞沙林,该实验结果与文献报道相符合。梭曼对兔全血AChE量效曲线图表明,其量效曲线方程为：Y= 372.69-45.53X,R=-0.9930;梭曼对兔全血AChE活性抑制的IC₅₀值和IC₉₀分别为83 nmol·L^-1和0.62 μmol·L^-1。沙林对兔全血AChE量效曲线图表明,其量效曲线方程为：Y= 284.45-3905X,R=-0.9679;沙林对兔全血AChE活性抑制的IC₅₀值和IC₉₀分别为1.2 μmol·L^-1和15 μmol·L^-1。结论 该方法能够快速测定不同动物全血红细胞AChE的活性,实验结果可靠,重现性好,可用于多种有机磷毒剂体外药效学评价。由于红细胞中AChE全部存在于细胞膜表面,因此,本测定方法不需将红细胞溶解就能够直接测定AChE活性,能够减少制备酶原的过程,适于快速完成体外AChE活性的分析测定。     

血浆中游离梭曼的电鳐乙酰胆碱酯酶抑制测定法

梭曼是一种对体内乙酰胆碱酯酶 (ＡＣｈＥ)有强烈抑制作用的有机磷化合物。由于梭曼毒性强且在体内降解迅速 ,国外目前主要通过大进样量气相色谱或气 质联用方法来检测[1,2 ] ,其优点是 :(1)灵敏度较高 ,如检测下限可达1 5 ｐｇ/ｍｌ血浆 ;(2 )可以将梭曼的 4个异构体分开 ,以便研究各异构体在体内的动力学过程。不足之处是 :检测设备价格昂贵 ,样本的预处理过程比较繁琐 ,检测时间较长 ,不适合临床上对毒剂浓度的快速检测。基于ＡＣｈＥ活性抑制测定有机磷毒剂浓度的文献也有报道 ,优点是灵敏、简便[3 ] 。然而 ,该法在检测血浆中残留梭曼…     

可通过血脑屏障的乙酰胆碱酯酶重活化剂的研究进展

神经性毒剂和有机磷农药是乙酰胆碱酯酶的不可逆抑制剂,对人类生命安全构成重大威胁。目前可用于临床预防和治疗的药物大都为季铵型乙酰胆碱酯酶重活化剂,对外周组织和血液中乙酰胆碱酯酶中毒具有较好的活化作用,但季铵盐结构限制了血脑屏障通过率,使这类重活化剂在中枢神经系统发挥作用有限。因此,开发可通过血脑屏障的重活化剂是当前主要发展趋势。本文对可通过血脑屏障的重活化剂的研究进展进行了综述。     

体外小鼠、豚鼠、犬及人血液对梭曼的解毒作用

目的　研究不同种属动物及人血液对梭曼的解毒能力与血液中几种梭曼解毒酶活性的关系。方法　测定血液中梭曼残留浓度及解毒酶活性。结果　小鼠、豚鼠、犬、人血浆对梭曼的解毒能力要明显高于其自身红细胞的解毒能力 ,血浆对梭曼的解毒能力依小鼠、豚鼠、犬、人的顺序由高到低依次排列。啮齿类动物血液中羧酸酯酶 (CaE)活性位点数目多且与梭曼结合快 ,因此在梭曼解毒中可发挥重要作用。犬、人血液中乙酰胆碱酯酶 (AChE)在梭曼解毒中占据了重要的解毒地位 ,犬、人血液中CaE基本没有参与梭曼解毒。结论　血液解毒能力的种属差异与种属间解毒酶结合位点数量的多少及梭曼与酶的结合速率密切相关