干扰素在体外对特发性血小板减少性紫患者巨核系集落生长的影响

在体外,干扰素对骨髓增殖性疾病巨核系祖细胞集落具有抑制作用,用于治疗血小板增多症等。近10年来,一些学者观察到,干扰素治疗慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)有效,能使血小板数上升,但机制不清。干扰素在体外对CITP骨髓巨核系祖细胞集落的影响如何,报告极少。本文体外培养CITP患者骨髓巨核祖细胞,观察不同浓度重组干扰素α-2a(rIFNα-2a)对其集落生长的影响,现将结果报告如下。     

血小板生成素和白细胞介素-11对慢性特发性血小板减少性紫癜巨核细胞的影响

目的　探讨重组人血小板生成素 (rh TPO)及联用重组人白细胞介素 - 11(rh IL - 11)对慢性特发性血小板减少性紫瘢 (CITP)患者骨髓巨核祖细胞增殖和成熟的影响。方法　采用血浆凝块法对 2 1例 CITP患者骨髓巨核祖细胞进行体外培养 ,培养体系中加入不同浓度的 rh TPO,或同时加 rh IL - 11两者联用。培养 14天后经 SZ-2 1(GP a)单抗和 ABC试剂盒染色观察集落生长数 ,用 MCDS- 2 0 10型超清晰度骨髓细胞分析系统进行巨核细胞的面积和直径测定。结果　 CITP组骨髓巨核细胞面积及直径明显低于对照组 (P<0 .0 5 )。 rh TPO对 CITP患者的巨核细胞集落形成单位 (CFU - MK)总集落数、巨核细胞直径与面积均有促进作用 ,但无浓度依赖性。体外最适浓度为 10 ng/ ml;rh TPO与 rh IL - 11联用组较单用组的 CFU - MK、总集落数及面积、直径均显著增加。结论　 CITP患者骨髓巨核细胞存在成熟障碍 ,体外 rh TPO单用及与 rh IL - 11联用均可促进 CITP患者巨核祖细胞的增殖与成熟 ,其联用较单用促进作用更强     

慢性特发性血小板减少性紫癜患者骨髓巨核祖细胞增殖及成熟状态的研究

目的:观察CITP患者骨髓巨核祖细胞增殖及成熟状态。方法:采用血浆凝块法进行培养,经SZ-21单抗和免疫组化染色后计数巨核祖细胞集落数,用电子计算机图像分析仪测定巨核细胞直径、面积。结果:CITP患者巨核祖细胞集落数与对照组无明显差异,但面积直径值低于对照组;分组比较,骨髓涂片巨核细胞数正常组巨核祖细胞集落数低于对照组。相关性分析,巨核祖细胞集落数与骨髓涂片巨核细胞数呈正相关,而与外周血小板计数、病程长短无相关。结论:(CITP患者巨核祖细胞存在成熟障碍,部分患者存在增殖障碍,集落数与骨髓涂片巨核细胞数多少呈正相关,与血小板计数、病程长短无相关。     

特发性血小板减少性紫癜骨髓巨核祖细胞体外培养的研究

目的 :探讨特发性血小板减少性紫癜 (ITP)患者骨髓巨核祖细胞体外培养及其临床意义。方法 :采用胶原半固体培养法 ,培养 18例 ITP患者骨髓巨核祖细胞。根据骨髓涂片检查及巨核细胞 (MK)标化记数分为 MK增高 12例 ,MK不增高 6例2组 ;将 0 .1m l自身新鲜血清加入 ITP患者的另一巨核系培养基中培养 ,观察自身新鲜血清对巨核祖细胞集落的影响 ;用 A-PAAP法检测 ITP患者的外周血 T淋巴细胞亚群的表达。结果 :ITP患者巨核祖细胞集落数与对照组差异无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ,MK不增高组巨核祖细胞集落数低于对照组 ;CD4 /CD8比值减低组巨核祖细胞集落数也低于对照组 ,巨核祖细胞集落数的多少与 CD4 /CD8减低程度呈正相关 ;其自身新鲜血清对骨髓巨核祖细胞集落形成有不同程度的抑制作用 (P <0 .0 5 ) ,抑制率为 (2 8.6 8± 2 7.4 0 ) %。结论 :ITP发病与免疫异常有关 ,部分患者存在巨核祖细胞增殖障碍。     

干扰素对特发性血小板减少性紫癜患者骨髓巨核祖细胞的影响

为观察重组成干扰素α－２ａ（ｒＩＦＮα－２ａ）对ＣＩＴＰ患者慢性特发性血小板减少性紫殿（ＣＩＴＰ）患者骨髓巨核祖细胞增殖和成熟的影响，采用血浆凝块法培养３３例巨核祖细胞，经ＳＺ－２１单克隆抗体和ＡＢＣ试剂盒染色后计数其集落，用图象分析仪测定巨细胞的直径、面积和黑度值，并与２５例健康人（对照组）比较。结果：ＣＩＴＰ组患者的巨核祖细胞面积和直径均低于对照组，但集落数正常：ｒＩＦＮα－２ａ在体外对患者巨     

干扰素对特发性血小板减少性紫癜患者骨髓巨核祖细胞的影响

为观察重组干扰素 α２ａ（ｒ Ｉ Ｆ Ｎ α２ａ）对 Ｃ Ｉ Ｔ Ｐ患者慢性特发性血小板减少性紫癜（ Ｃ Ｉ Ｔ Ｐ）患者骨髓巨核祖细胞增殖和成熟的影响,采用血浆凝块法培养３３例巨核祖细胞,经 Ｓ Ｚ２１单克隆抗体和 Ａ Ｂ Ｃ试剂盒染色后计数其集落,用图象分析仪测定巨核细胞的直径、面积和黑度值,并与２５例健康人（对照组）比较。结果： Ｃ Ｉ Ｔ Ｐ组患者的巨核祖细胞面积和直径均低于对照组,但集落数正常;ｒ Ｉ Ｆ Ｎ α２ａ 在体外对患者巨核祖细胞集落生成抑制率明显低于对照组;对患者骨髓涂片,巨核细胞数增高组巨核祖细胞集落抑制率明显低于巨核细胞数正常组。结果表明,ｒ Ｉ Ｆ Ｎ α２ａ 在体外对 Ｃ Ｉ Ｔ Ｐ患者巨核祖细胞增殖的抑制作用较正常对照组弱;用ｒ Ｉ Ｆ Ｎα２ａ 治疗 Ｃ Ｉ Ｔ Ｐ患者宜选择骨髓涂片巨核细胞数增高者     

慢性特发性血小板减小性紫癜患者骨髓巨核细胞成熟程度探讨

采用血浆凝块法对２４例慢性特发性血小板减少性紫癜（ＣＩＴＰ）患者的骨髓巨核细胞体外培养，重点观察巨核细胞成熟度及α－干扰素对ＣＩＴＰ患者骨髓巨核细胞增殖和成熟度的影响。结果显示：ＣＩＴＰ组骨髓巨核祖细胞的ＣＦＵ－ＭＫ和总集落数明显高于对照组，巨核细胞数正常者ＢＦＵ－ＭＫ和总集落数低于对照组；图像分析发现巨核细胞的直径、面积、ＧＰⅢａ和ＧＭＰ－１４０阳性细胞的黑度值均较对照组低。由此表明ＣＩＴＰ患者的巨核细胞存在一定的成熟障碍，α－２ａ干扰素对ＣＩＴＰ患者骨髓巨核细胞的作用是抑制集落生长。     

慢性特发性血小板减小性紫癜患者骨髓巨核细胞成熟程度探讨

采用血浆凝块法对２４例慢性特发性血小板减少性紫癜（ＣＩＴＰ）患者的骨髓巨核细胞体外培养，重点观察巨核细胞成熟度及α－干扰素对ＣＩＴＰ患者骨髓巨核细胞增殖和成熟度的影响。结果显示：ＣＩＴＰ组骨髓巨核祖细胞的ＣＦＵ－ＭＫ和总集落数明显高于对照组，巨核细胞数正常者ＢＦＵ－ＭＫ和总集落数低于对照组；图像分析发现巨核细胞的直径、面积、ＧＰⅡａ和ＧＭＰ－１４０阳性细胞的黑度值均较对照组低。由此表明ＣＩＴＰ患者     

Ⅱ型登革病毒对人骨髓巨核祖细胞集落生长的影响

采用人骨髓巨核祖细胞体外半固体培养技术,观察14例次Ⅱ型登革病毒(D_2V)对巨核祖细胞集落(CFU-MK)生长的影响,与对照组进行比较,显示D_2感染组CFU-MK产率明显减少,经统计学处理差别有非常显著意义,从而证实在体外D_2V能抑制巨核祖细胞增殖。这提示登革出血热病人的出血和血小板减少与巨核细胞受该病毒抑制有关。     

脐血巨核祖细胞的体外扩增

目的联合血小板生成素(TPO)、白细胞介素-11(IL-11)和肝素用脐血CD34 细胞定向扩增巨核祖细胞.方法采用免疫磁珠法(MACS)分选CD34 细胞,用TPO、IL-11和肝素定向扩增巨核祖细胞,巨核祖细胞集落分析(CFU-MK)测定巨核祖细胞扩增倍数,流式细胞术检测巨核祖细胞分化过程中不同细胞组群(CD34 、CD41a 、CD61 、CD34 CD41a 和CD41a CD61 )的变化,免疫组织化学染色(CD41a)和透射电镜观察巨核细胞形态及超微结构,血小板体外活化实验及非肥胖性糖尿病/严重联合免疫缺陷鼠异种体内移植实验评价扩增的巨核祖细胞功能.结果单用TPO 7 d时,CD34 CD41a 细胞扩增(4.0±1.7)倍;与IL-11联用后扩增到(10.5±4.8)倍;再加入肝素后扩增达(29.9±6.4)倍,TPO IL-11 肝素组扩增倍数为TPO组、TPO IL-11组的7.5、2.85倍,与两组相比差异均有显著性(P＜0.05).TPO IL-11 肝素组巨核祖细胞中大集落(＞50个细胞/集落)达(106.8±26.9)倍,较TPO、TPO IL-11组均有明显增加(P＜0.05).将扩增第7天的巨核细胞静脉输注于经放射预处理的非肥胖性糖尿病/严重联合免疫缺陷鼠,可明显加速其血小板及白细胞的恢复并提高小鼠生存率.电镜显示扩增的巨核细胞有一定的界膜发育等成熟特征,体外血小板活化实验证实,扩增的巨核细胞在体外可产生血小板,有正常巨核细胞功能.结论TPO、IL-11和肝素组合的培养体系可有效扩增脐血巨核祖细胞.     

制首乌总多糖对贫血小鼠造血祖细胞增殖的影响

目的观察制首乌总多糖(PPS)对放化疗所致骨髓抑制贫血小鼠造血祖细胞增殖的影响。方法建立骨髓抑制贫血小鼠模型,采用造血祖细胞培养技术,观察PPS体内ip给药和细胞培养直接用药对造血祖细胞增殖和骨髓有核细胞(BMC)数目的影响。结果体内用药能显著增加BMC数目,提高BFU-E、CFU-E和CFU-Meg集落数产率(P<0.01),能增加CFU-GM集落数产率(P<0.05);在一定浓度下,体外直接用药,能增加CFU-Meg集落数产率(P<0.01)。结论PPS能通过间接作用促进红系和粒系祖细胞的增殖,能通过间接和直接作用刺激巨核系祖细胞的增殖。     

系统性红斑狼疮血小板减少患者巨核祖细胞分化障碍

目的　明确系统性红斑狼疮 (SLE)血小板减少患者骨髓巨核祖细胞增殖分化情况 ,以及患者血清对巨核祖细胞增殖分化的影响。方法　分离 7例SLE血小板减少患者 (SLE血小板减少组 )、11例胸外科开胸手术切除肋骨患者 (正常对照组 )和 4例SLE血小板正常但病情活动患者 (SLE血小板正常组 )的骨髓单个核细胞 ,体外巨核祖细胞 (CFU MK)无血清半固体培养 ;并分别加入SLE血小板减少和SLE血小板正常患者的血清 ,观察血清对CFU MK集落形成的影响。结果　SLE血小板减少组CFU MK集落数为 (2 7.33± 9.30 )个 /片 ,明显低于正常对照组的 (6 1.2 2± 2 9.71)个 /片和SLE血小板正常组的 (6 0 .0 0± 2 9.71)个 /片 (P值均 <0 .0 5 ) ;加入SLE血小板减少患者血清后 ,SLE血小板减少组 (n =7)和正常对照组 (n =7)CFU MK集落数分别减少为(14 .2 9± 6 .73)和 (2 9.4 4± 2 3.35 )个 /片 (P <0 .0 5 )。加入SLE血小板正常患者血清后 ,正常对照组 (n =7)CFU MK增加到 (115 .6 0± 72 .99)个 /片 ,与未加血清者的差异无显著性 (P <0 .0 5 ) ;而SLE血小板减少组 (n =7)无显著增加 (P >0 .0 5 )。结论　SLE血小板减少患者骨髓巨核祖细胞分化障碍 ,患者血清对骨髓巨核祖细胞的分化具有抑制作用     

干扰素治疗慢性特发性血小板减少性紫癜的临床探讨

为探讨干扰素治疗慢性特发性血小板减 少性紫癜（cITP）的疗效及其毒副反应, 采用干扰素α-2a（3MIU i.m.每周1次,共8周）和强的松〔1mg/(kg·d),共4周〕分 别治疗20例 和28例cITP患者,并观察治疗前后血小板计数、骨髓涂片巨核细胞计数、免疫学指标、网织 血小板（RPs）百分率和绝对计数,以及巨核祖细胞集落数的变化。结果显示：干扰素治 疗 组的近期有效率（90.00%）明显高于强的松组（64.28%,P＜0.05）。经治疗后RPs%降 低, 产板型巨核细胞百分率由11.43%升至33.19%,但各项免疫学指标无显著变化。结论：干扰素 是一 种治疗cITP的有效药物,而且毒副反应小。其作用机制可能与促进巨核细胞分化成熟及血小 板生成增多有关。     

ITP患者T细胞对巨核细胞生成作用的影响

本文应用改良的血浆凝块技术和共培养系统研究特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者T细胞在体外对异体骨髓巨核细胞生成作用的影响,以探讨ITP的发病机制。实验结果表明,从总体来看,ITP患者的T细胞当加到培养物中和靶细胞共培养时,对巨核系祖细胞集落形成单位(CFU-MK)的集落效应无明显的影响。其中三例PAIgG升高患者的T细胞对CFU-MK有不同程度的抑制作用。以上结果提示ITP的发病机制相当复杂。除体液免疫机制外,也有细胞免疫机制参与,T细胞或其亚群对巨核系祖细胞生成抑制在ITP的发病机制中可能起着一定的作用。     

黄芪注射液对贫血小鼠巨核系造血的作用及其机理的研究

目的　研究黄芪注射液 (AMI)对贫血小鼠巨核系造血的影响及其作用机制。方法　制备贫血小鼠模型 ,随机分为给药组和对照组 ,分别腹腔注射 AMI〔2 0 m g/ (ml· 2 0 g)〕或等量生理盐水 q.d× 6 ,于给药后第8、11、14天常规方法检测外周血血小板数、骨髓有核细胞数 ,同时用体外巨核系祖细胞 (CFU- Meg)培养方法检测CFU- Meg,采集血清作巨核细胞系集落刺激活性 (Meg- CSA)测定。结果　贫血小鼠给药组和对照组比较 ,血清Meg- CSA明显升高 ,给药后第 11天所测各项指标均恢复正常 ,恢复时间明显缩短。结论　 AMI能够升高血清Meg- CSA,加速骨髓抑制后巨核系造血功能的恢复     

小鼠颌下腺组织培养上清液促进粒-单系和巨核系造血的实验研究

目的　证实颌下腺是否合成影响造血的细胞因子 ,并探讨其对粒 -单系和巨核系造血祖细胞增殖分化有何影响 ,为重新认识颌下腺的生理功能提供实验证据。方法　采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测 CD13膜抗原及细胞周期 ,研究小鼠颌下腺组织培养上清液 (SGCM)对小鼠粒 -单系和巨核系造血发生的影响。结果　 SGCM对粒 -单系祖细胞 (CFU- GM)集落生长有明显促进作用 ,能明显促进巨核系造血祖细胞 (CFU- Meg)集落生成 ,而且雄性 SGCM刺激活性高于雌性 SGCM,IL- 3与雌性 SGCM有叠加作用 ,贫血雄性 SGCM对 CFU-GM和 CFU- Meg的刺激活性高于正常小鼠 ,SGCM能促进小鼠骨髓细胞进入增殖活跃期 (S/G2 )。结论　颌下腺能合成与粒 -单系、巨核系造血相关的造血因子。提示颌下腺与造血调控可能有关     

急性ITP患者外周血T细胞对骨髓巨核细胞的影响

目的 探讨急性ITP患者外周血T细胞对骨髓巨核细胞生成的影响.方法 本文采用改良的血浆凝块技术以及细胞共培养系统研究急性ITP患者T细胞在体外对骨髓巨核细胞生成的影响.从而探讨其发病机制.结果 实验结果显示,急性ITP患者外周血T细胞与靶细胞共同培养时,对巨核系祖细胞集落形成单位(CFU-MK)的集落效应无明显的影响.但其中三例PAIgG升高患者的T细胞对CFU-MK有不同程度的抑制作用.结论 ITP的发病机制相当复杂.除体液免疫机制外,还有细胞免疫机制参与.T细胞及其亚群对巨核系祖细胞生成抑制在ITP的发病机制中可能起一定的作用.     

人巨细胞病毒对人脐血巨核系祖细胞生长的影响及作用机制研究

[目的]探讨人巨细胞病毒(HCMV)对巨核系祖细胞生长的影响及其机制.[方法]采用造血祖细胞体外半固体培养技术,用HCMVAD169株分别感染去除T细胞和未去除T细胞的脐血单个核细胞.观察CFU-MK集落数;用原位聚合酶链反应(IS-PCR)检测集落细胞中的HCMVDNA.[结果]2个感染组的CFU-MK集落数均减少,与灭活病毒组比较,分别为29.5%和48.6%(P<0.05),未去除T细胞组CFU-MK集落数减少比去除T细胞组明显(P<0.05),经IS-PCR检测发现各病毒感染组CFU-MK细胞中有HCMVDNA存在.[结论]HCMV在体外能抑制CFU-MK的分化和增殖,HCMV感染引起的血小板减少可能与该病毒对巨核系祖细胞的直接抑制以及免疫因素有关.     

干扰素治疗原发性血小板减少性紫癜14例

目的 观察干扰素对原发性血小板减少性紫癜的治疗效果。方法 对14例慢性原发性血小板减少性紫癜(CITP)采用α-干扰素治疗,观察血小板变化及骨髓情况。结果 完全缓解5例(占35.7%),部分缓解6例(占42.9%),无效3例(占21.4%),总有效率78.6%。且全部病例均能完成治疗过程。结论α-干扰素对提升血小板、缓解出血倾向不失为一种积极的治疗选择。     

骨髓成纤维细胞条件培养液对体外巨核系细胞生成的促进作用

目的：探讨骨髓成纤维细胞条件培养液对体外巨核系细胞生成的促进作用。方法：制备骨髓成纤维细胞条件培养液(bone marrow fibroblasts conditioned medium ,BMF-CM),分别观察BMF-CM或BMF-CM联合IL-11对体外培养条件下成熟巨核细胞生成的影响及BMF-CM对巨核系祖细胞生成的影响,并用RT-PCR的方法检测Meg-01人巨核细胞系细胞NF-E2 mRNA的表达。结果：BMF-CM促进成熟巨核细胞生成。BMF-CM联合IL-11促进成熟巨核细胞生成的效果更佳。BMF-CM能促进巨核系祖细胞的生成。将30％BMF-CM加入Meg-01人巨核细胞系培养体系培养4　h,与对照组相比,NF-E2表达增强。结论：骨髓成纤维细胞条件培养液对体外巨核系细胞生成有促进作用。