抗核心脂域McAb对LPS体外诱导细胞释放IL-1及其mRNA表达的影响

采用细胞因子活性检测，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及ＲＴ－ＰＣＲ等方法，在体外研究了抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ（ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４）对ＬＰＳ诱导人外周血单核细胞（ｈＰＢＭＣ）释放ＩＬ－１及其ｍＲ－ＮＡ表达水平的影响。结果表明，ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４在体外有抑制ＬＰＳ诱导细胞释放ＩＬ－１的作用；Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及ＲＴ－ＰＣＲ结果证实，这３株ＭｃＡｂ能降低ＩＬ－１ｍＲＮＡ表达的水平；提示抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ可通过与ＬＰＳ的结合而中和ＬＰＳ作用于效应细胞，从而降低或阻碍了效应细胞中ＩＬ－１ｍＲＮＡ的表达，达到抑制细胞释放ＩＬ－１的作用。     

抗细菌核心糖脂域McAb对LPS体外诱导细胞释放TNF…

用细胞因子活性检测，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ方法，在体外研究了抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ和ＬＰＳ诱导人外周血单核细胞释放ＴＮＦ－α和ＩＬ－６及其ｍＲＮＡ表达水平的影响。结果表明，ＥＬ１，ＥＬ３和３Ｈ４在体外有抑制ＬＰＳ诱导细胞释放ＴＮＦ－α的作用；Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ结果证实，这３株ＭｃＡｂ能分别降低细胞ＴＮＦ－α和ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达的水平；提示抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ可能通过与ＬＰＳ的结     

抗细菌核心糖脂域McAb对LPS体外诱导细胞释放TNF－α和IL－6及其mRNA表达的影响

用细胞因子活性检测，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法，在体外研究了抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ（ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４）对ＬＰＳ诱导人外周血单核细胞（ｈＰＢＭＣ）释放ＴＮＦ－α和ＩＬ－６及其ｍＲＮＡ表达水平的影响。结果表明，ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４在体外有抑制ＬＰＳ诱导细胞释放ＴＮＦ－α和ＩＬ－６的作用；Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结果证实，这３株ＭｃＡｂ能分别降低细胞ＴＮＦ－α和ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达的水平；提示抗细菌核心糖脂域ＭｃＡｂ可能通过与ＬＰＳ的结合而中和ＬＰＳ，从而降低或阻碍了效应细胞炎性细胞因子ｍＲＮＡ的表达，达到降低相应细胞因子的作用。     

抗细菌脂多糖核心糖脂域McAb免疫反应特性的研究

应用ＥＬＩＳＡ、免疫印迹及加成指数等方法对我们制备的３株（ＥＬ１、ＥＬ２和ＥＬ３）抗Ｅ．ｃｏｌｉＪ５株和１株（３Ｈ４）抗Ｓ．ｍｉｎｎｅｓｏｔａＲ５９５株核心糖脂域ＭｃＡｂ进行了研究。结果表明，４株ＭｃＡｂ与不同类型的ＬＰＳ均有不同程度的交叉反应，其中以ＥＬ２、ＥＬ３和３Ｈ４３株ＭｃＡｂ的交叉反应更为广泛，且可与类脂Ａ结合。常见的革兰氏阴性菌（ＧＮＢ）及其ＬＰＳ均有较强的抑制ＥＬ３和３Ｈ４结合抗原的作用，ＥＬ１和ＥＬ２的结合抗原反应也可明显被Ｅ．ｃｏｌｉＪ５株和Ｓ．ｍｉｎｎｅｓｏｔａＲ５９５株或ＬＰＳ（Ｒｅ－及Ｒｅ－ＬＰＳ）所抑制；且４株ＭｃＡｂ间与两突变菌株结合反应的加成指数（Ａ．Ｉ）均较低。提示４株抗核心糖脂域ＭｃＡｂ识别ＬＰＳ抗原的表位相似或相距较近。ＭｃＡｂ表现出的与ＬＰＳ较广泛的交叉反应性，可能与其作用位点位于ＬＰＳ内核及类脂Ａ结构中具有共同抗原表位区域有关。     

抗细菌脂多糖核心糖脂域McAb免疫反应特性的研究

应用ＥＬＩＳＡ、免疫印迹及加成指数等方法对我们制备的３株（ＥＬ１、ＥＬ２和ＥＬ３）抗Ｅ．ｃｏｌｉＪ５株和１株（３Ｈ４）抗Ｓ．ｍｉｎｎｅｓｏｔａＲ５９５株核心糖脂域ＭｃＡｂ进行了研究。结果表明，４株ＭｃＡｂ与不同类型的ＬＰＳ均有不同程度的交叉反应，其中以ＥＬ２、ＥＬ３和３Ｈ４３株ＭｃＡｂ的交叉反应更为广泛，且可与类脂Ａ结合，常见的革兰氏阴性菌（ＧＮＢ）及其ＬＰＳ均有较强的抑制ＥＬ３和３Ｈ４结合抗 原     

抗LPS—HDL McAb的交叉反应性

目的：制备具有广泛交叉反应性的抗ＬＰＳＭｃＡｂ。方法：以内毒素－高密度脂蛋白（ＬＰＳ－ＨＤＬ）复合物作为包被抗原，筛选抗ＬＰＳ的ＭｃＡｂ；采用间接ＥＬＩＳＡ法鉴定其交叉反应性；以竞争抑制试验和被动溶血试验分析交叉反应的特异性。结果：用ＬＰＳ－ＨＤＬ筛选获得３株具有广泛交叉反应性的ＭｃＡｂ，阳性率为７５％（３／４）；以ＬＰＳ筛选出１株具有广泛交叉反应性的ＭｃＡｂ，阳性率为１１．１％（１／９）。结论：用ＬＰＳ－ＨＤＬ包被做ＥＬＩＳＡ，有利于筛选出具有广泛交叉反应性的抗ＬＰＳＭｃＡｂ。     

α-黑素细胞刺激素体外对星形胶质细胞产生NO和前炎性细胞因子的影响

目的：研究α－黑素细胞刺激素（α－ＭＳＨ）对ＬＰＳ诱导星形胶质细胞产生ＮＯ和前炎性细胞因子的影响。探讨α－ＭＳＨ的抗炎作用机制。方法：分别用ＬＰＳ或α－ＭＳＨ＋ＬＰＳ处理体外培养的大鼠脑星形胶质细胞,用Ｇｒｉｅｓｓ试剂测定ＮＯ,以ＭＴＴ显色法检测ＩＬ－１、ＩＬ－６和ＴＮＦ－α,采用半定量ＲＴ－ＰＣＲ检测ＭＩＦｍＲＮＡ表达。结果：体外培养的星形胶质细胞在ＬＰＳ刺激下产生ＮＯ、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α和表达ＭＩＦｍＲＮＡ表达。结果：体外的星形胶质细胞在ＬＰＳ刺激下产生ＮＯ、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α和表达ＭＩＦｍＲＮＡ显著增高;若同时给予ＬＰＳ和α－ＭＳＨ,可明显降低ＮＯ、ＩＬ－１、ＩＬ－６和ＴＮＦ－α的产生以及ＭＩＦｍＲＮＡ表达。结论：Ｒ昧α－ＭＳＨ抑制星形胶质细胞产生ＮＯ和前炎性细胞因子与其抑制中枢神     

定量测定IL—4和IFN—γmRNA的RT—竞争PCR法及其 …

目的 建立测定ＩＦＮ－γｍＲＮＡ和ＩＬ－ｍＲＮＡ和ＲＴ－竞争ＰＣＲ方法，探讨体外诱生条件并作临床初步应用。方法 用自行设计和制备的ＩＦＮ－γ ＣＤＮＡ和ＩＬ－４ ｅＤＮＡ竞争模板，作ＲＴ－竞争ＰＣＲ，对健康人经ＰＭＡ和ｃａｌｃｉｕｍ ｉｏｎｏｐｈｏｒｅ（钙离子载体）诱导的ＰＢＭＣ、１１例健康人和１３例哮喘患者ＰＢＭＣ作ＩＦＮ－γ ｍＲＮＡ和ＩＬ－４ ｍＲＮＡ定量测定。结果 在建立了准确的定量测定ｍ     

胸腺细胞对胸腺基质细胞生长及功能的调节

目的研究胸腺细胞对不同亚群胸腺基质细胞生长及功能的调节作用。方法胸腺基质细胞增殖以３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定，ＩＬ－７活性以促ＩＬ－７依赖株法检测，其ｍＲＮＡ表达以ＲＴ－ＰＣＲ法检测。结果胸腺细胞与ＭＴＳＣ４细胞分别以８０∶１，４０∶１或２０∶１的比例共育时，能明显抑制ＭＴＳＣ４细胞的增殖，而培养上清中ＩＬ－７活性无明显改变；当两种细胞的比例为１０∶１或５∶１时，则对ＭＴＳＣ４细胞的增殖无任何影响，而培养上清中的ＩＬ－７活性明显升高。ＲＴ－ＰＣＲ证实，与胸腺细胞共育的ＭＴＥＣ１和ＭＴＳＣ４细胞，ＩＬ－７ｍＲＮＡ水平明显提高。结论胸腺细胞能促进ＭＴＥＣ１和ＭＴＳＣ４细胞分泌ＩＬ－７，对不同亚群基质细胞的生长和功能有不同调节作用     

抗细菌脂多糖核心糖脂域单克隆抗体在实验性菌血症中的保护作用

以小鼠菌血症模型对抗核心糖脂域ＭｃＡｂ（ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４）的免疫保护的效果进行了研究，结果表明，（１）３株ＭｃＡｂ能显著提高受Ｅ．ｃｏｌｉ攻击小鼠的存活率（Ｐ〈０．０５）；（２）ＥＬ３和３Ｈ４还分别有降低３ＬＤ５０绿脓杆菌和５ＬＤ５０鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠病死率的作用（Ｐ〈０．０５）；（３）ＥＬ３和３Ｈ４对受５ＬＤ５０Ｅ．ｃｏｌｉ和１０ＬＤ５０绿脓杆菌攻小鼠有一定的协同保护作用；（４）在ＥＬ     

分泌抗rHuIL—6McAb杂交瘤细胞系的建立及其应用研究

应用常规方法建立了４株稳定分泌抗重组人ＩＬ－６（ｒＨｕＩＬ－６）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）小鼠杂交瘤细胞系１Ｈ３、２Ａ１０、３Ａ３和４Ｂ１。其中，１Ｈ３为ＩｇＧ２ｂ（Ｋ），２Ａ１０为ＩｇＧ１（Ｋ），３Ａ３和４Ｂ１为ＩｇＧ２ａ（Ｋ）。４株ＭｃＡｂ特异性强，与细胞因子ＩＬ－１β、ＩＬ－３、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＧＭ－ＳＣＦ、ＩＣＡＭ－１，以及受体菌菌体蛋白成分均无交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水ＭｃＡ     

分泌抗rHuIL－6McAb杂交瘤细胞系的建立及其应用研究

应用常规方法建立了４株稳定分泌抗重组人ＩＬ－６（ｒＨｕＩＬ－６）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系１Ｈ３、２Ａ１０、３Ａ３和４Ｂ１。其中，１Ｈ３为ＩｇＧ２ｂ（ｋ），２Ａ１０为ＩｇＧ１（ｋ），３Ａ３和４Ｂ１为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。４株ＭｃＡｂ特异性强，与细胞因子ＩＬ－１β、ＩＬ－３、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＧＭ－ＳＣＦ、ＩＣＡＭ－１，以及受体菌菌体蛋白成分均无交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水ＭｃＡｂ效价为１０（－６）～１０（－８）。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＩＬ－６，敏感性为１００ｐｇ／ｍｌ。初步应用表明可用于临床标本的检测。     

抗细菌脂多糖核心糖脂域单克隆抗体在实验性菌血症中的保护作用

以小鼠菌血症模型对抗核心糖脂域ＭｃＡｂ（ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４）的免疫保护的效果进行了研究。结果表明，（１）３株ＭｃＡｂ能显著提高受Ｅ．ｃｏｌｉ攻击小鼠的存活率（Ｐ＜０．０５）；（２）ＥＬ３和３Ｈ４还分别有降低３ＬＤ５０绿脓杆菌和５ＬＤ５０鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠病死率的作用（Ｐ＜０．０５）；（３）ＥＬ３与３Ｈ４对受５ＬＤ５０Ｅ．ｃｏｌｉ和１０ＬＤ５０绿脓杆菌攻击小鼠有一定的协同保护作用；（４）在ＥＬ１预防性保护试验中发现，提前４周注入ＥＬ１，并于攻菌前１周加强一次，ＥＬ１可明显提高５ＬＤ５０Ｅ．ｃｏｌｉＪ５株攻击小鼠的存活率（Ｐ＜０．０５）。提示ＥＬ３和３Ｈ４对细菌感染小鼠具有一定的交叉保护作用。     

分泌抗CRF单克隆抗体杂交瘤的建立及初步鉴定

采用淋巴细胞杂交瘤技术，获得了５株稳定分泌抗促肾上腺皮质激素释放因子（ＣＲＦ）的ＭｃＡｂ杂交瘤细胞株。５株单克隆抗体均为ＩｇＧ２，且均识别ＣＲＦ羧基端。ＥＬＩＳＡ交叉试验结果表明，该ＭｃＡｂ不与ＡＣＴＨ、ＦＳＨ、ＮＰＹ、ＬＨ反应。５株杂支瘤腹水效价在１０－４～１０－５，亲和常数在５×１０７ｍｏｌ／Ｌ－１～１×１０９ｍｏｌ／Ｌ－１。     

编码人分化抗原5C5全长cDNA的克隆及功能初探

目的 编码５Ｃ５分化抗原全长ｃＤＮＡ的克隆及功能探索。方法 构建人活化Ｂ细胞株３Ｄ５细胞的λｇｔ１１ ｃＤＮＡ文库，以核苷酸杂交法从ｃＤＮＡ文库中筛选阳性克隆、作核苷酸序列分析，编码蛋白质氨基酸序列的亲疏水分析，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ测５Ｃ５ ｍＲＮＡ转录本长度，用ＲＴ－ＰＣＲ检测５Ｃ５ ｍＲＮＡ在不同细胞株的表达，观察单抗５Ｃ５－Ｇ１对３Ｄ５细胞增殖的影响。结果 从人活化Ｂ细胞株３Ｄ５的λｇ     

成年大鼠星形细胞经LPS、前炎症因子和免疫调节因子刺激后β-趋化因子的分泌

目的研究在中枢神经系统（ＣＮＳ）的炎症性疾病中,作为构成血脑屏障结构的组成部分之一,可引起白细胞浸润的星形细胞分泌趋化因子的影响因素。方法通过星形细胞体外培养,经不同细胞因子刺激,用原位杂交检测成年大鼠星形细胞β－家系趋化因子的ｍＲＮＡ表达。结果ＩＦＮ－γ可引起ＭＣＰ－１,ＲＡＮＴＥＳ,ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达;ＴＮＦ－α可引起ＲＡＮＴＥＳ和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达;ＬＰＳ可引起ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达。ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０下调由ＬＰＳ引起的ＭＣＰ－１和ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１βｍＲＮＡ表达。ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０可抑制由ＴＮＦ－α引起的ＭＣＰ－１和ＲＡＮＴＥＳ的ｍＲＮＡ表达。ＩＬ－１０还可下调由ＴＮＦ－α引起的ＭＩＰ－１βｍＲＮＡ表达。结论成年大鼠体外试验中的星形细胞可由ＬＰＳ和前炎症因子刺激,产生β－家系趋化因子ｍＲＮＡ的表达。而调节因子如ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０可抑制由ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α和ＬＰＳ引起的β－家系趋化因子的ｍＲＮＡ表达。     

人白细胞介素—15cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

从正常人外周血中分离粘附的单核细胞，加入ＬＰＳ刺激４ｈ后提取细胞ｍＲＮＡ反转录获得ｃＤＮＡ第一链，用两对特异引物进行巢式ＰＣＲ扩增出含ＢａｍＨＩ酶切位点的编码人１Ｌ－１５成熟蛋白的ｃＤＮＡ，其大小约３６０ｂｐ。用ＰＥＧ法回收其片段并将其连接到ｐＢＳＳＫ载体的ＳｍａⅠ位点上进行序列分析，结果表明其序列与文献报道一致。然后再将其片段亚克隆插入到ｐＧＥＸ－２Ｔ的ＢａｍＨＩ位点。筛选插入方向正确的克隆，转化大肠杆菌ＪＭ１０９，以１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导５ｈ收集菌体直接进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，与阴性对照相比，ＭＷ４４ＫＤ处多出一条带，紫外扫描显示此带占菌体蛋白总量的８．８％。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ证实此带能够特异地与兔抗人ＩＬ－１５的抗体发生反应。证明ＲＴ－ＰＣＲ所得的人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ在大肠杆菌中获得了表达，为进一步探讨人ＩＬ－１５的生物学作用打下基础。     

抗A型产气荚膜梭菌α毒素mAb VHt VL基因的克隆与序？…

用提取的Ａ型产气荚膜梭菌α毒素包涵体为免疫原,制备１株ｍＡｂ ２Ｅ３。其Ｉｇ亚类为ＩｇＧ３,细胞培养上清和腹水的ｍＡｂ效价分别为１：１０２４和１：１０＾８。该ｍＡｂ ２Ｅ３可中和α毒素致死性腹腔攻击的小鼠具有良好珠被动保护作用。另外,应用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从杂交瘤细胞株２Ｅ３中,扩增出ｍＡｂ ＶＨ和ＶＬ基因,分别克隆至载体ｐＧＥＭ－Ｔ中。     

静注免疫球蛋白对新生儿单个核细胞IL—2,IL—4mRN …

探讨静注免疫蛋白抑制体外脐血Ｂ细胞免疫蛋白释放的机制。方法运用ＲＴ－ＰＣＲ法观察ＩＶＩＧ对体外新生儿单个核细胞分泌的ＩＬ＿２ｍＲＮＡ及ＩＬ－４ｍＲＮＡ表达的影响。结论ＩＶＩＧ对ＩＬ－２，ＩＬ－４两种细胞因子产生的抑制可能源于转录到分泌至胞外整个阶段任一时相上的抑制 。     

鼠抗人sIL—6R单克隆抗体的制备及sIL—6R检测方法的建立

以重组人ｓＩＬ－６Ｒ蛋白作为抗原，获得３株分泌特异性ＭｃＡｂ的杂交瘤株，分别命名为ＳＩ１０，ＳＩ１１和ＳＩ１２。３株ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１亚类。竞争抑制试验的结果表明，３株ＭｃＡｂ识别两个不同的抗原表位，将杂交瘤细胞注入同系小鼠腹腔诱生的ｃＡｂ腹水，经ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ纯化后用生物素标记，建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳＡ法，该法用于血清ｓＩＬ－６Ｒ的特异性检测，灵敏度为５０μｇ／Ｌ。