IL—2信号转导中JAK／STAT途径的负调节机制

IL－2是一个多效的刺激因子，通过与IL－2R的相互作用，引发多条IL－2信号转导途径，其中Jak/Stat途径代表了一条极为快速的、从膜到核的信号转导系统。Jak/Stat途径的活化，对介导IL－2诱导的细胞生长、增殖、抗凋亡有重要作用，但Jak/Stat的下调、失活机制在相当程度仍不清楚。本文主要对近几年来发现的一些负调节机制，尤其蛋白酪氨酸磷酸酶的去磷酸化作用以及CIS、PIAS家族蛋白的负调节作用作一综述。     

Slug对照射鼠肠上皮细胞的保护作用及机制

 目的：研究Slug过表达对照射鼠肠上皮细胞的保护作用及机制 方法：以体外培养的小肠隐窝上皮细胞IEC6和转染了Slug cDNA的IEC6为研究对象,对细胞进行6Gy剂量γ射线照射,在照射48h后观察细胞凋亡指数,免疫组化和Western blot法检测PUMA蛋白表达。结果：6Gy射线照射IEC6细胞48h后的细胞凋亡指数为15.6+1.54,明显高于照射联合pcDNA3-Slug cDNA转染组的5.1+1.7（P<0.01）和单独pcDNA3-Slug cDNA转染组的2.21+0.36（P<0.01）。Weatern blot法检测发现,6Gy射线照射IEC6细胞48h后的PUMA相对表达为0.79+0.12,明显高于照射联合pcDNA3-Slug cDNA转染组的0.16+0.01（P<0.01）,免疫组化和Weatern blot法检测结果一致。结论：上调Slug抑制射线诱导的细胞PUMA表达上调,抑制IEC6细胞凋亡。     

IL-2对中子照射后肠上皮细胞生长和凋亡的影响及其机制

目的:观察中子照射对体外培养的IEC-6细胞生长的影响及IL-2对其损伤后增殖和恢复的作用,并进一步探讨IL-2调节受照射肠上皮细胞生长的相关机制。方法:单独用IL-2(1×105U/L)或同时施加JAK1激酶阻断剂(A77-1726)处理受4Gy中子照射的IEC-6细胞,并于照后10、15、30min和1、3、6、12、24、48及72h,用MTT比色法和流式细胞术检测受照射后IEC-6细胞的增殖活力和死亡方式的改变。以免疫细胞化学染色和Western blot检测IEC-6细胞上IL-2Rβ的表达和JAK1活化情况。结果:4Gy中子照射后24h,IEC-6细胞的增殖活力明显降低;而IL-2处理组该细胞的增殖活力有显著提高(P<0.05)。受中子照射的IEC-6细胞经IL-2作用24h,其凋亡率明显降低(P<0.05),而坏死率变化不明显。以IL-2刺激中子照射的IEC-6细胞后,于10及15min可见JAK1发生明显磷酸化活化,24h时IL-2Rβ的表达明显增多。同时应用A77-1726和IL-2处理受中子照射的IEC-6细胞后,其增殖活力明显低于单纯IL-2处理组。结论:IL-2可促进受中子照射的IEC-6细胞增殖,具有抗辐射作用。IL-2Rβ和JAK1活化参与了IL-2对中子损伤的IEC-6细胞生长的调控。     

021 IL-2信号转导中JAK／STAT途径的负调节机制

IL-2是一个多效的刺激因子,通过与IL-2R的相互作用,引发多条IL-2信号转导途径,其中Jak／Stat途径代表了一条极为快速的、从膜到核的信号转导系统。Jak／Stat途径的活化,对介导IL-2诱导的细胞生长、增殖、抗凋亡有重要作用,但Jak／Stat的下调、失活机制在相当程度仍不清楚。本文主要对近几年来发现的一些负调节机制,尤其蛋白酪氨酸磷酸酶的去磷酸化作用以及CIS、PIAS家族蛋白的负调节作用作一综述。     

小鼠IL－3 cDNA转化细胞移植体内表达的初步研究

随着基因治疗技术的发展和多个细胞因子基因的克隆，人们提出了供细胞因子的基因治疗的设想，以期为肿瘤、老年性痴呆、严重的造血功能障碍等这样一类难治疾病的治疗另辟蹊径。为改善放射损伤小鼠受抑制的造血功能，我们采用基因治疗的方法，将小鼠ＩＬ－３基因ｃＤＮＡ与逆转录病毒载体重组，转染包装细胞ＰＡ３１７，用其分泌的含ＩＬ－３ｃＤＮＡ的复制缺陷逆转录病毒感染、转化ＮＩＨ３Ｔ３细胞，从中筛选可在体外分泌ＩＬ－３的克隆，将可分泌ＩＬ－３的细胞种植到放射损伤小鼠体内后发现：受体小鼠血清中检出了ＩＬ－３的活性；其外周血白细胞计数升至５５万／ｍｍ３，以成熟中性粒细胞为主；肝、脾脏内有大量各个分化阶段的中性粒细胞。这些结果表明：可以利用基因治疗技术，在体内表达ＩＬ－３，改善机体的造血功能。     

Fas、Bcl-2在放射损伤小鼠骨髓细胞的表达及意义和川芎嗪对其影响的研究

目的：探讨放射损伤小鼠骨髓细胞Fas、Bcl-2的表达和骨髓细胞凋亡以及川芎嗪对其影响。方法：健康昆明小鼠经6.0Gy^60Coγ照射后立即喂饲川芎嗪并设对照组和正常组，在放射损伤后第3、7、14、21天检测其骨髓细胞Fas、Bcl-2的表达和骨髓细胞凋亡率。结果：照射后骨髓细胞Fas表达增强，Bcl-2表达减弱，骨髓细胞凋亡增加，但川芎嗪能够减轻放射损伤后小鼠骨髓细胞凋亡率，与对照组有显著差异。结论：放射损伤后小鼠骨髓细胞Fas、Bcl-2的表达变化在细胞凋亡过程中起重要作用。川芎嗪具有减轻放射损伤后小鼠骨髓细胞凋亡的作用。     

脊髓损伤后白藜芦醇保护作用的研究进展

正白藜芦(resveratrol,Res)是一种化学名为3,5,4’-三羟基戊二烯的多酚类化合物,广泛地存在于花生、凤梨、朝槐、决明、桑子、大黄、首乌、金雀根、葡萄、虎杖、藜芦等植物中,尤以虎杖含量最高~[1]。白藜芦醇分子式为C14H12O3,相对分子质量228.25,本质是一种植物抗毒素,是葡萄属植物在外来病菌侵入、紫外线照射等不利因素影响下产生的~[2]。于1940年首次从毛叶黎芦的根部获得,其存在的形式主要有四种:顺、反式白藜芦醇及与葡萄糖结合形成的顺、反式白藜芦     

细胞凋亡抑制剂防护晶状体上皮细胞氧化损伤的信号转导机制

目的：旨在探讨细胞凋亡抑制剂阿魏酸钠（SF）、五味子乙素（Sch B）、菊花（FC）、车前子（SP）对氧化损伤的晶状体上皮细胞（LEC）内Ca^2＋、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的影响，揭示天然药物防治白内障的细胞和分子学机制。方法：将四种药物与H202造成氧化损伤的体外培养牛LEC共同孵育后，进行以下研究：1、采用四甲基偶氮唑兰（MTT）法观察在不同时间和浓度条件下LEC活性的变化。2、采用荧光分光光度法测定不同时间细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）。3、采用放射免疫法测定不同时间LEC内cAMP、cGMP的含量。观察药物的剂量效应与时间效应。     

抗鼠IL－1α、IL－6单抗对狼疮倾向NZB／W F1小鼠的免疫调节研究

对狼疮倾向ＮＺＢ／ＷＦ１小鼠在４月龄时腹腔注射抗鼠ＩＬ－１α、抗ＩＬ－６单抗，每日１次１０μｇ×３ｄ，后每月１次×３次，１１月龄活杀，发现这样的剂量不能完全防治狼疮性肾炎，但可减轻蛋白尿，明显降低血清ＩＬ－１α水平，抑制腹腔巨噬细胞分泌ＩＬ－１α。对ＩＬ－６和ＴＮＦ－α水平无明显影响。     

厚朴对小鼠脑老化损伤的保护作用及其可能机制

目的 探讨厚朴对小鼠脑老化损伤的保护作用及其可能机制。方法 60只SPF级雄性昆明小鼠随机分成对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。Morris水迷宫实验评估各组小鼠的学习记忆能力。超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒评估各组小鼠氧化应激水平。TUNEL染色评估神经细胞凋亡的情况。结果 与对照组相比,模型组小鼠的逃避潜伏期、脑组织MDA含量和神经细胞凋亡率均明显升高,在平台象限的停留时间和穿越次数均明显降低,脑组织SOD和GSH-Px含量均明显降低（P<0.05）。低剂量、中剂量和高剂量的厚朴处理后,脑老化小鼠的逃避潜伏期、脑组织MDA含量和神经细胞凋亡率均明显降低,在平台象限的停留时间和穿越次数均明显升高,脑组织SOD和GSH-Px含量均明显升高（P<0.05）。结论 厚朴可显著改善脑老化引起的认知功能障碍,其机制可能与降低氧化损伤和神经细胞凋亡有关。     

IL-6/STAT3 signaling pathway is activated in plasma cell mastitis

Plasma cell mastitis (PCM), a particular type of mastitis, mainly occurs in females at nonpregnant and nonlactating stages. The infiltration of abundant plasma cells and lymphocytes is the hallmark of the disease. The incidence rate of PCM increased gradually and its pathogenesis remained unclear. In this study, we investigated the expression of IL-6/STAT3 signaling pathway, which is vital not only for the differentiation of plasma cells but also for survival of plasma cells and T lymphocytes, in 30 PCM cases, 10 acute mastitis cases and 10 normal breast tissues by immunohistochemical analysis. IL-6 level was significantly higher in PCM patients than in acute mastitis patients or normal group. The positive rate of IL-6 and p-STAT3 staining in PCM samples was 93.3% (28/30) and 70% (21/30), respectively, and there was a significant positive association between IL-6 and p-STAT3 staining (r=0.408, P=0.025). In PCM group, the rate of nipple retraction was 40% (12/30). Significantly higher IL-6 expression was found in PCM patients with nipple retraction than in other PCM patients. However, no significant difference in IL-6 or p-STAT3 staining was detected between PCM patients experiencing recurrence and other PCM patients. In addition, Bcl-2 level was higher in PCM patients than in acute mastitis patients or normal group, but there was no difference in Bcl-2 immunostaining between PCM patients experiencing recurrence and other PCM patients. These indicate that IL-6/STAT3 signaling is activated in PCM and may play an important role in the pathogenesis of PCM.     

Measles virus V protein blocks Jak1-mediated phosphorylation of STAT1 to escape IFN-alpha/beta signaling

Viruses have evolved various strategies to escape the antiviral activity of type I interferons (IFN-alpha/beta). For measles virus, this function is carried by the polycistronic gene P that encodes, by an unusual editing strategy, for the phosphoprotein P and the virulence factor V (MV-V). MV-V prevents STAT1 nuclear translocation by either sequestration or phosphorylation inhibition, thereby blocking IFN-alpha/beta pathway. We show that both the N- and C-terminal domains of MV-V (PNT and VCT) contribute to the inhibition of IFN-alpha/beta signaling. Using the two-hybrid system and co-affinity purification experiments, we identified STAT1 and Jak1 as interactors of MV-V and demonstrate that MV-V can block the direct phosphorylation of STAT1 by Jak1. A deleterious mutation within the PNT domain of MV-V (Y110H) impaired its ability to interact and block STAT1 phosphorylation. Thus, MV-V interacts with at least two components of IFN-alpha/beta receptor complex to block downstream signaling.     

胃癌患者血清IL-1的升高和癌组织JAK2/STAT3信号通路的激活

目的 探讨胃癌患者血清中白细胞介素1(IL-1)含量升高及癌组织中JAK2/STAT3信号通路激活在胃癌生长过程中的作用.方法 选取甘肃省武威肿瘤医院胃癌手术患者及同期健康体检者各30例;酶联免疫吸附法(ELISA)检测样本血清中IL-1和IL-10的含量;免疫组化和Western blot分别检测各组织中Bcl-2、...     

miR-143-3p靶向IL-6R/STAT3通路抑制IL-6诱导的人肺微血管内皮细胞血管生成

目的探究miR-143-3p在IL-6诱导的人肺微血管内皮细胞(HLMVEC)血管生成中的作用和机制。方法首先使用100 ng/ml重组IL-6蛋白处理HLMVEC细胞,管腔形成实验分析IL-6对细胞管腔形成数目的影响,Real-time PCR检测IL-6对miR-143-3p和VEGF mRNA表达的影响。Western blot检测VEGF蛋白水平的变化。然后使用miR-143-3p mimics过表达miR-143-3p,按照上述方法检测miR-143-3p对IL-6诱导的管腔形成数目、VEGF mRNA和蛋白表达的影响。此外,使用双荧光素酶报告基因检测法分析miR-143-3p和IL-6R的关系,Real-time PCR检测miR-143-3p过表达对IL-6R mRNA表达的影响,Western blot检测IL-6R、STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白水平的变化。结果 IL-6能够增加管腔形成数目和VEGF的表达,降低miR-143-3p的表达。过表达miR-143-3p能够抑制IL-6诱导的管腔形成、VEGF、IL-6R和p-STAT3的表达水平,但是不影响STAT3的表达。此外还发现IL-6R是miR-143-3p的一个靶基因。结论 miR-143-3p能够抑制IL-6诱导的内皮细胞血管生成,这可能是通过抑制IL-6R/STAT3通路发挥作用的。     

酪氨酸蛋白激酶JAK1 在IL-6诱导JAK/STAT 途径活化中的作用

目的 酪氨酸蛋白激酶JAK1和转录因子STAT3为参与IL－6诱导的JAK／STAT信号转导途径的两种主要的信号蛋白分子。本研究试图揭示JAK1在JAK／STAT途径诱导活化中的作用。方法 分别采用凝胶阻滞电泳（EMSA）和免疫沉淀（IP）法观察IL－6刺激作用下STAT3和JAK1在3种骨髓瘤细胞系（XG－7，KM－3和Sko-007)中的诱导活化状态。采用RTPCR和Western-blot法检测这两种信号蛋白分子在以上3株靶细胞中的表达情况。结果 尽管SAT3在3株靶细胞中都能够正常表达，但只有Sko-007细胞中出现IL－6刺激作用下STAT3的诱导活化。在XG－7细胞中，既没有检测到JAK1的表达，也没有观察到JAK1的活化。尽管JAK1在KM－3细胞中能够正常表达，但不能被IL－6诱导激活。Sko-007细胞中则同时出现JAK1的表达及IL－6刺激后的诱导活化。结论 JAK1的正常表达和激活是IL－6刺激作用下JAK／STAT信号转导途径在骨髓瘤细胞中诱导活化的前提条件。     

卡介菌多糖核酸对哮喘大鼠肺组织IL-12/STAT4信号通路的影响

目的探讨卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对支气管哮喘大鼠肺组织白介素12/信号转导子及转录激活子4(IL-12/STAT4)信号通路的影响及其在气道炎症中的作用。方法将40只雄性SD大鼠随机分成正常对照组(A组),哮喘模型组(B组),卡介菌多糖核酸组(C组)和地塞米松组(D组),每组10只。采用鸡清卵蛋白(OVA)致敏和激发的方法制备哮喘大鼠模型。苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态学改变,用免疫组化法观察IL-12和STAT4在大鼠哮喘模型肺组织中的表达分布。结果模型组肺组织IL-12和STAT4蛋白表达较少,其平均灰度值显著高于对照组(P<0.01);地塞米松组和卡介菌多糖核酸组肺组织IL-12和STAT4蛋白表达较多,其平均灰度值显著低于哮喘组(P<0.01),而地塞米松组和卡介菌多糖核酸组之间差异无统计学意义;卡介菌多糖核酸组STAT4的表达与IL-12呈正相关(r为0.908,P<0.01)。结论卡介菌多糖核酸调节气道炎症可能是通过调控IL-12/STAT4信号通路的基因表达实现的。     

白血病形成中JAK/STAT信号通路的持续激活

JAK/STAT通路是细胞因子、生长因子、激素等广泛应用的信号转导通路,白血病形成中普遍存在JAK/STAT通路的持续激活。白血病融合蛋白的表达、酪氨酸激酶过度表达或激活突变及某些病毒感染可导致JAK/STAT通路的持续激活和调节异常,并引起细胞的转化和白血病形成。了解白血病形成中JAK/STAT通路的异常调节有助于开发靶向JAK/STAT通路的治疗策略。     

Characterization of IL-4 and IL-13 signals dependent on the human IL-13 receptor alpha chain 1: redundancy of requirement of tyrosine residue for STAT3 activation

IL-4 and IL-13 are pleiotropic cytokines whose biological activities overlap with each other. IL-13 receptor alpha chain 1 (IL-13R alpha 1) is necessary for binding to IL-13, and the heterodimer composed of IL-13R alpha 1 and IL-4R alpha chain transduces IL-13 and IL-4 signals; however, the functional mapping of the intracellular domain of IL-13R alpha 1 is not fully understood. In this study, we constructed wild and mutated types of human IL-13R alpha 1, and analyzed IL-4 and IL-13 signals using an IL-13R alpha 1-transfected human B cell line. Expression of IL-13R alpha 1 evoked STAT3 activation by IL-4 and IL-13, and in stimulated human B cells, on which IL-13R alpha 1 was highly expressed, IL-4 and IL-13 induced STAT3 activation. Replacement of the two tyrosine residues completely abolished STAT3 activation, although replacing either tyrosine residue alone retained it. Furthermore, we found that the Box1 region and the C-terminal tail of IL-13R alpha 1 were critical for binding to Tyk2, and activation of Jak1, Tyk2, the insulin receptor substrate-1 and STAT6 respectively. These results suggest that STAT3 activation is involved with IL-4 and IL-13 signals in human B cells along with the activation of STAT6, and that there is a unique sequence in IL-13R alpha 1 to activate STAT3.