牙本质陶瓷粉、非胶原蛋白及其复合材料对修复性牙本质形成作用的研究

目的：观察牙本质陶瓷粉（ceramic demtin powder,CDP)、CDP与非胶原蛋白（noncollagenous proteins,NCPs）复合材料（CDP／NCPs）对修复性牙本质形成的作用。方法：牙本质粉煅烧后与人牙本质NCPs复合，用SD大鼠牙作直接盖髓实验，并用组织学方法评价修复性牙本质形成的效果。结果：术后14d，CDP组：穿髓下方可见少许成牙本质细胞。CDP／NCPs组：穿髓孔周围见成纤维细胞增殖，呈团块状包绕穿髓孔。术后28d，CDP组：穿髓下方可见少量修复性牙本质团块形成。CDP／NCPs组：可见大量修复性牙本质形成。结论：CDP／NCPs能促进大鼠牙体、牙髓组织修复。     

牙本质陶瓷粉、TGF-β、NCPs及复合材料直接盖髓后对牙髓细胞的促进作用

目的：观察牙本质陶瓷粉（ceramic dentin powder,CDP）、复合转化生长因子（transforming growth factors-TGF-β1）；复合非胶原蛋白（noncollagenous proteins,NCPs）及全复合后对修复性牙本质形成的作用。方法：用SD大鼠牙作直接盖髓实验，并用组织学方法评价每组材料对修复性牙本质形成的效果。结果：各组材料在不同时间对修复牙本质促进作用不同，实验组的作用明显优于对照组，实验组之间未见明显差异。结论：TGF－β1、NCPs对大鼠牙髓组织修复有明显的促进作用。     

TGF—β1在修复性牙本质形成早期的基因表达

目的：利用原位杂交技术，观察TGF－β1在大鼠牙髓修复性牙本质形成早期的基因表特征。方法：在Wistar大鼠上下颌第一磨牙近中面制备一单面洞。分别观察3天和15天后处死动物。组织学处理后切片。体外转录合成单链RNA探针并标记地高辛。将标记探针与标本进行原位杂交。利用生物素标记的抗地高辛抗体和SABC标记，DAB显示杂交信号。苏木素复染。结果：TGF－β1mRNA在备洞3天后的成牙本质细胞和成牙本质细胞层下方的牙髓细胞内表达强阳性。15天后，修复性牙本质下方的成牙本质细胞样细胞表达TGF－β1。结论：在牙髓修复早期，TGF－β1通过自分泌途径，参与了修复性牙本质的形成。     

过表达VEGF165和TGFβ1对鼠牙本质样组织再生的影响

目的：探讨重组质粒pcDNA3.1hisA-VEGF165和pcDNA3.1hisA-TGFβ1稳定转染仓鼠卵巢细胞(CHO)后持续分泌的血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和转化生长因子β1 (transforming growth factor,TGFβ1)蛋白对大鼠体内牙本质样组织形成的影响。方法：脂质体介导重组质粒pcDNA3.1hisA-VEGF165和pcDNA3.1hisA-TGFβ1转染CHO细胞,经G418筛选,建立单克隆细胞株。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后CHO细胞中VEGF165和TGFβ1 mRNA的表达情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测转染后上清中VEGF165和TGFβ1蛋白的表达水平。接种转染后的CHO细胞至胶原膜,选择24只Wistar大鼠双侧上颌第一磨牙为实验牙,将胶原膜置于人工穿髓孔处,ChemFlex玻璃离子充填窝洞。8周后处死动物取材,制备硬组织切片,甲苯胺蓝染色。采用SPSS17.0软件包对ELISA数据进行统计学分析。结果：RT-PCR和ELISA结果显示, CHO细胞转染后VEGF165和TGFβ1基因和蛋白稳定表达。甲苯胺蓝染色显示, 转染pcDNA3.1hisA-VEGF165的CHO组中穿髓孔下方见毛细血管明显充血及炎症细胞浸润,未见硬组织形成;转染pcDNA3.1hisA-TGFβ1的CHO组中,穿髓孔下方可见少量深染矿化团块,周围见增生的牙髓成纤维细胞,偶见炎症细胞浸润,未见管状牙本质形成;转染pcDNA3.1hisA-VEGF165和pcDNA3.1hisA-TGFβ1的2种CHO组中,穿髓孔下方可见大量深染矿化团块,几乎完全封闭穿髓孔,未见结构规则的牙本质桥形成,团块下端成牙本质细胞呈柱状整齐排列;对照组未见硬组织形成。结论：TGFβ1能促进体内矿化组织形成,VEGF165和TGFβ1共同作用,能更好地促进体内矿化组织形成。     

表皮生长因子与胶原蛋白复合物对小型猪修复性牙本质形成作用的实验研究

目的：观察表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)与胶原蛋白海绵(col1agen sponge,CS)复合物对小型猪修复性牙本质形成的影响。方法：选用实验用小型猪牙齿36颗,采用EGF／CS复合物为材料进行直接盖髓术,通过组织病理学方法常规制备牙-颌骨联合切片,光学显微镜下观察修复性牙本质形成情况,并与氢氧化钙糊剂直接盖髓对照。结果：小型猪牙用EGF／CS直接盖髓术后2周,穿髓孔周边可见修复性牙本质团块形成,团块周围有成牙本质细胞样细胞围绕;术后4周有完整的修复性牙本质桥形成;术后12周修复性牙本质桥增厚且结构致密,严密封闭穿髓孔,桥体近髓腔面形成明显的管样牙本质,下方为整齐排列的典型成牙本质细胞。用氢氧化钙糊剂直接盖髓,术后2周可见穿髓孔处有炎症坏死区,只有少量钙化团块形成,术后4～12周逐渐形成完整的修复性牙本质桥,但形成速度较慢且牙本质桥厚度较薄。结论：EGF与胶原蛋白复合物显著促进牙髓细胞分化和修复性牙本质形成,是一种有临床应用价值的生物活性盖髓剂。     

表皮生长因子与胶原蛋白复合物对小型猪修复性牙本质形成作用的实验研究

目的:观察表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)与胶原蛋白海绵(collagen sponge,CS)复合物对小型猪修复性牙本质形成的影响.方法:选用实验用小型猪牙齿36颗,采用EGF/CS复合物为材料进行直接盖髓术,通过组织病理学方法常规制备牙-颌骨联合切片,光学显微镜下观察修复性牙本质形成情况,并与氢氧化钙糊剂直接盖髓对照.结果:小型猪牙用EGF/CS直接盖髓术后2周,穿髓孔周边可见修复性牙本质团块形成,团块周围有成牙本质细胞样细胞围绕;术后4周有完整的修复性牙本质桥形成;术后12周修复性牙本质桥增厚且结构致密,严密封闭穿髓孔,桥体近髓腔面形成明显的管样牙本质,下方为整齐排列的典型成牙本质细胞.用氢氧化钙糊剂直接盖髓,术后2周可见穿髓孔处有炎症坏死区,只有少量钙化团块形成,术后4～12周逐渐形成完整的修复性牙本质桥,但形成速度较慢且牙本质桥厚度较薄.结论:EGF与胶原蛋白复合物显著促进牙髓细胞分化和修复性牙本质形成,是一种有临床应用价值的生物活性盖髓剂.     

TGF-β1在修复性牙本质形成早期的基因表达

目的 :利用原位杂交技术 ,观察TGF - β1在大鼠牙髓修复性牙本质形成早期的基因表特征。 方法 :在Wistar大鼠上下颌第一磨牙近中面制备一单面洞。分别观察 3天和 15天后处死动物。组织学处理后切片。体外转录合成单链RNA探针并标记地高辛。将标记探针与标本进行原位杂交。利用生物素标记的抗地高辛抗体和SABC标记 ,DAB显示杂交信号。苏木素复染。结果 :TGF - β1mRNA在备洞 3天后的成牙本质细胞和成牙本质细胞层下方的牙髓细胞内表达强阳性。 15天后 ,修复性牙本质下方的成牙本质细胞样细胞表达TGF - β1。 结论 :在牙髓修复早期 ,TGF - β1通过自分泌途径 ,参与了修复性牙本质的形成     

猪骨磷蛋白直接盖髓的实验研究

目的观察猪骨磷蛋白对修复性牙本质形成的作用。方法用猪骨磷蛋白作盖髓剂,对小型猪健康牙行盖髓术实验,对照采用氢氧化钙盖髓,盖髓2、4、12周后,通过组织病理学观察牙本质桥形成情况。结果猪骨磷蛋白盖髓2周有团块状的修复性牙本质形成,团块周围有整齐排列的方形或矮柱状的类成牙本质细胞;4周可见大量修复性牙本质团块,呈桥形分布,修复性牙本质周围有整齐排列的柱状的类成牙本质细胞,穿髓孔未完全封闭;12周有完整的修复性牙本质桥形成,将穿髓孔封闭,牙本质结构致密,部分为管状牙本质,牙本质桥下方可见排列整齐的的成牙本质细胞。氢氧化钙盖髓2周穿髓孔下方可见薄层坏死组织;4周有修复性牙本质形成,较猪骨磷蛋白盖髓形成的修复性牙本质薄;12周有完整的修复性牙本质桥形成,牙本质结构致密,部分为管状牙本质,其厚度略低于猪骨磷蛋白盖髓。结论猪骨磷蛋白有良好的生物相容性,用其盖髓,能诱导修复性牙本质形成。     

牙本质粘接剂直接盖髓的动物实验研究

目的：通过动物实验比较传统盖髓剂Ca（OH）：与2种牙本质粘接剂：Prime＆Bond NT和Gluma Comfort Bond直接盖髓的效果，观察牙髓对材料刺激的反应。方法：选用3条杂种犬共45颗牙进行盖髓实验，每条犬分为3组，5颗牙／组：第1组为Prime＆Bond NT，第2组为Gluma Comfort Bond，第3组采用Ca（OH）2对照。机械穿髓后，大量生理盐水冲洗，分别采用3种材料盖髓，玻璃离子充填。3只狗分别于7d、28d、70d处死，HE染色后光学显微镜观察。结果：7d：3组盖髓材料均有炎症反应；28d：2种粘接剂盖髓组均仍可以看到大量炎症细胞浸润，在穿髓孔附近牙髓坏死、消失。Ca（OH）2组也均有少量炎症细胞浸润；70d：2种粘接剂盖髓组均在穿髓孔附近出现牙髓坏死、消失。Ca（OH）2组在穿髓孔附近出现了钙化组织。结论：实验结果显示，牙本质粘接剂对牙髓具有较强的刺激性，不宜用于直接盖髓。     

人牙髓细胞诱导牙本质再生的实验观察

目的:观察人成体牙髓细胞体内诱导牙髓组织修复反应的能力.方法:在矿化诱导液作用下,将一定数量级的人牙髓细胞与β-TCP生物陶瓷颗粒进行复合,植入免疫缺陷鼠磨牙穿髓孔处,7 d、14 d后分别取材进行组织学观察.对照组采用氢氧化钙(Oycal)和空白对照组.结果:组织学观察表明,盖髓术后7 d,各组均出现了牙髓细胞向穿髓孔处迁移、聚集.术后14 d,牙髓细胞组炎症反应仅局限于穿髓孔处,有明显的修复性牙本质桥形成;Dycal组炎症反应涉及到少量冠髓,有部分矿化的纤维性屏障形成;空白对照组炎症反应涉及了大部分冠髓,仅有弥散的骨样牙本质形成.结论:在矿化诱导液作用下,牙髓细胞具有向成牙本质细胞样细胞定向分化的能力,将牙髓细胞植入鼠磨牙的穿髓孔处,显示其具有良好的维持牙髓活力和诱导修复性牙本质形成的能力.     

用甲壳胺直接盖髓的实验研究

目的 观察甲壳胺对修复性牙本质形成的作用。方法 实验组用甲壳胺进行小型猪牙盖髓实验,对照组用氢氧化钙,盖髓后2周、4周、13周观察其组织病理学改变。结果 术后2周,在穿髓孔下方可见修复性牙本质团块形成,团块周围有类成牙本质细胞围绕,在牙髓和盖髓材料之间无坏死层,术后4周,修复性牙本质呈桥形,术后13周,有完整,致密的牙本质桥形成。结论 用甲壳胺盖髓,能诱导修复性牙本质形成,并有良好的生物相容性。     

牙本质黏结剂对牙髓直接影响的动物实验

目的：观察两种牙本质黏结剂对活体牙髓组织的影响，并与氢氧化钙直接盖髓结果进行对比。方法：选用54个犬牙，机械穿髓后，无菌蒸馏水冲洗，控制穿髓孔处的出血和渗出。使用优邦(UB)和Adper Prompt Self-etching Adhesive(AP)两种牙本质黏结剂盖髓，Dycal作对照。于7、30、90d拔除实验牙，脱钙切片，HE染色、Mallory三色法染色和Gram快速细菌染色检查?结果：所有处理组在短期都出现了轻到中度的炎症反应，在长期的观察中，UB和AP两组出现持续的慢性炎症反应，均未发现牙本质桥肜成。Dycal组出现更多的修复性牙本质，并有牙本质桥形成(P＜0．05)结论：这两种牙本质黏结剂会引起牙髓的慢性炎症反应，在穿髓孔不能形成完整的牙本质桥，临床上这两种黏结剂不能直接与牙髓接触。     

修复性牙本质形成的大鼠模型

目的：建立修复性牙本质形成的动物实验模型,观察修复性牙本质形成的组织开矿学特征。方法：在Ｗｉｓｔａｒ大鼠第一磨牙近中面制备窝洞,分别观察３、１５、３０ｄ,标本切片,ＨＥ染色,显微镜下观察。结果：术后３ｄ未见修复性牙本质形成。１５ｄ后可见修复性牙本工可见骨样牙本质。窝洞下原代成牙本质细胞由新分化的成牙本质细胞样细胞取代。３０ｄ后,修复性牙本质明显增加。新分化的成牙本质细胞样细胞发生极化。结论：大鼠模     

蚯蚓提取物用于小型猪牙盖髓的实验研究

目的 观察蚯蚓提取物对小型猪牙修复性牙本质形成的作用.方法 用蚯蚓提取物对30颗小型猪牙进行直接盖髓,对照组30颗牙采用氢氧化钙盖髓;分别于术后2、4、12周运用组织病理学方法观察其促进修复性牙本质形成的效果.结果 蚯蚓提取物盖髓后2周,骨样修复性牙本质团块形成,未见到创面周围牙髓变性坏死.盖髓后4周,穿髓孔下有修复性牙本质形成,大部分牙已将穿髓孔封闭.盖髓后12周,穿髓处可见完整的牙本质桥形成,结构致密,髓腔及根管内牙髓组织基本正常.氢氧化钙盖髓组:术后2周界面可见牙髓变性坏死区,有薄层牙本质团块形成,4～12周逐渐形成完整的牙本质桥,形成速度与蚯蚓提取物组相似.结论 本实验提示蚯蚓提取物能促进小型猪牙髓组织损伤的修复,形成修复性牙本质.     

人牙本质涎蛋白对狗牙髓损伤修复影响的实验研究

目的 探讨人牙本质涎蛋白对狗牙髓损伤修复的影响。方法 实验共分3组，实验组(hDSP组)；对照l组(无hDSP组)；对照2组(PBS组)；选择10Kg、6～12月龄的杂种狗3只，上、下尖牙、上、下磨牙和下前磨牙为实验牙，每只狗选10个牙，随机分配实验组和对照组，实验组共18个牙，对照l组和2组各6个牙。于所选牙齿颈部，用l／2球钻在灭菌生理盐水滴注下穿通髓腔、露髓处置上述实验组和对照组胶原膜，光固化封闭窝洞。2、4、8周处死动物，经4％多聚甲醛灌注后，分离实验牙，再固定48h后，脱钙3～4周，脱水，石蜡包埋，制备5～8μm厚连续切片，HE染色。结果 术后2周：对照组与实验组无明显差异，无牙本质桥形成。术后4周：对照组无牙本质桥形成，实验组有部分骨样牙本质桥形成。术后8周：对照组牙髓组织基本正常，无牙本质桥形成，实验组有完整的骨样牙本质桥形成，其下方有排列整齐的成牙本质细胞样细胞形成。结论 首次发现hDSP在体内能够诱导牙髓细胞分化，形成修复性牙本质。     

Notch 1信号蛋白在早期牙髓损伤修复中表达的免疫组化研究

目的 :通过建立大鼠牙髓损伤动物模型 ,观察Notch1信号蛋白在牙髓损伤修复过程中的表达。方法 :在大鼠第一磨牙牙合面开髓 ,分别对损伤后 2h、12h、2 4h、3d、7d及正常大鼠牙髓标本进行HE染色、免疫组化染色 ,检测各组标本中Notch1信号的表达。结果 :Notch1信号蛋白在正常成年大鼠牙髓组织中无表达 ,在牙髓损伤后表达上调。牙髓损伤 12h ,Notch1在成牙本质细胞层、部分牙髓细胞间质中呈弱阳性表达。损伤后 1～ 3d ,Notch1在成牙本质细胞层、部分牙髓细胞间质及接近损伤部位的牙髓细胞中呈阳性着色。损伤后 7d ,Notch1的表达位于成牙本质细胞层和穿髓孔下方的细胞增殖层。结论 :Notch1信号蛋白在大鼠牙髓损伤后早期阶段表达逐渐上调 ,随后在成牙本质细胞区及富细胞区牙髓细胞中表达增强 ,并沉积于穿髓点附近的细胞增殖层。提示它可能在牙髓损伤的早期自身修复和牙本质矿化中起作用     

转化生长因子β1对体外成牙本质细胞分化的影响

目的：观察转化生长因子β1（transforming growth factorβ1，TGF－β1）对体外培养鼠牙乳头成本本质细胞分化的影响。方法：取17d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚，胰腺蛋白消化分离牙乳头，置半固态培养基培养6d，半固态培养基中加入重组转化生长因子β1和肝素，组织学观察。结果：TGF－β1加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化，并分泌胸外基质，单独加入TGF－β1未见细胞极化，但基质分泌增加，结论：TGF－β1能诱导前成牙本质细胞的细胞学和功能上分化。     

窝洞清洁剂暴露的牙本质中TGF—β超微结构定位

目的：了解不同窝洞清洁剂暴露窗洞内牙本质中TGF－β的能力。方法：采用金标记免疫组化染色，扫描电镜观察。结果：170g/L的EDTA处理组牙本质中有大量TGF－β1暴露，表面玷污层去除彻底；30g/L次的人和100g/L柠檬酸处理组有一定量的TGF－β1暴露，玷污层被部分去除；而PBS且只有少量TGF－β1被暴露。TGF－β2、β3在各组中均未测得。结论：TGF－β1是牙本质中最主要的TGF－β异构体，EDTA是所测试剂中暴露TGF－β最有效的窝清洁剂。     

Runx 2在第三期牙本质形成过程中的分布及其意义

目的:研究Runx 2在牙髓炎症修复中的作用,探讨活髓保存的新途径.方法:建立大鼠第三期牙本质形成动物模型,用免疫组织化学染色方法研究Runx 2的表达变化及其意义.结果:Runx 2于牙髓损伤早期阶段表达于穿髓点下方细胞群;修复性牙本质形成初期于牙髓根尖部强表达,修复性牙本质形成中期表达减弱,而修复性牙本质形成末期表达为阴性.结论:Runx 2在牙髓损伤修复过程中的表达具有明显的时空特异性.     

碱性磷酸酶在第三期牙本质形成过程中的分布及意义

目的：观察碱性磷酸酶在第三期牙本质形成过程中的分布,探讨其在牙髓损伤修复过程中的作用及意义。方法：建立大鼠第三期牙本质形成动物模型,用免疫组织化学染色方法研究大鼠第三期牙本质形成过程中碱性磷酸酶的表达变化。结果：碱性磷酸酶于牙髓损伤早期阶段表达于穿髓点下方细胞群;随着修复性牙本质的形成其表达逐渐减弱直至消失。结论：碱性磷酸酶在牙髓损伤的早期阶段发挥着重要作用。