耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型的研究

目的 应用多重聚合酶链反应(PCR)对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的金黄色葡萄球菌染色体mec基因盒(Staphylococcal chromosomal cassette mec,SCCmec)基因型及亚型进行分型。方法 收集该院2012年1~9月临床分离的30株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,用多重PCR检测MRSA的SCCmec的基因型及亚型。结果 检出SCCmecⅠ型菌株1株(3.3%),SCCmecⅠA型菌株1株(3.3%),SCCmecⅡ型菌株4株(13.3%),SCCmecⅢ型菌株23株(76.7%),SCCmecⅣ型菌株1株(3.3%)。结论 该院分离的MRSA以携带SCCmecⅢ为主。多重PCR可用于临床实验室MRSA的SCCmec基因分型。     

下呼吸道标本MRSA耐药性及分子流行病学研究

目的了解下呼吸道标本中MRSA的耐药性及分子流行病学特点。方法采用Kirby-Bauer纸片扩散法，对我院2005年12月至2006年12月下呼吸道标本分离的107株MRSA药敏结果进行分析；采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对其中32株MRSA进行同源性分析。结果107株MRSA对14种抗菌药物的药敏结果显示对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺均敏感；对奎奴普丁-达福普汀和利福平显示较好的敏感性，敏感率分别为93．5％、70．1％；其次为对氯霉素敏感率54．2％；对四环素、庆大霉素、克林霉素和左氧氟沙星等显示高度耐药或全耐药。PFGE分析表明32株MRSA分为4个PFGE组（A～D型），25株为A型，A型又包括A1、A2、和A33个亚型，其中以A1亚型为主，共17株，A2亚型1株，A3亚型7株，B型5株，C型1株，D型1株。结论我院在2005年12月到2006年12月ICU、结核5科有MRSA暴发流行，主要流行株为A1、A3亚型；这些MRSA菌株为多重耐药菌，应引起临床医师及感染控制部门高度重视。     

医院感染甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的SCCmec分型及同源性研究

目的研究多重耐药的甲氧西林耐药金葡菌（MRSA）菌株的SCCmec基因分型,并对菌株进行同源性分析。方法纳入26株耐药谱相同的MRSA菌株,采用多重PCR检测SCCmec的分型;应用Rep-PCR法采用DiversiLb系统对菌株进行同源性分析。结果 26株MRSA的SCmec多数为Ⅲ型,占84.6%,另检出Ⅱ型2株、Ⅳ型1株,1株未能分型;未发现I型SCCmec。DiversiLab分析结果显示MRSA可分为10组,同源性介于40%～100%。其中SCCmee-Ⅱ亚型2株完全相同。SCCmec-Ⅲ亚型subtype 1型相似性在90%以上;subtype 3型4株为同一组、MRSA相似性在95%以上;subtype 2型可分为5组,相似性在90%以上。结论医院感染多重耐药的MRSA多数以SCCmec-Ⅲ型为主,医院内存在一定流行,应引起临床医师及感染控制部门重视。     

62株多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性分析及同源性研究

目的对多重耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB)进行耐药性分析及同源性研究,为预防与控制院内感染提供理论依据。方法收集、分离及鉴定多重鲍曼不动杆菌62株,采用琼脂稀释法检测菌株对23种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型并分析其同源性。结果 62株MDRAB中,对大部分抗菌药物的耐药率在80.0%以上,PFGE将其分为4型,A型和B型为主要克隆株。A型包括4个亚型共32株,B型有2个亚型共19株,C型有8株,D型有3株。结论 MDRAB耐药情况十分严峻,在临床科室广泛分布并流行传播,成为耐药菌株逐年增加的一个重要因素。     

应用多重聚合酶链反应对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌进行SCCmec基因分型

目的应用多重聚合酶链反应（PCR）对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因型及亚型进行分型。方法收集本院2005年2月至7月临床分离的112株金黄色葡萄球菌，应用PCR扩增mecA基因检测MRSA，用多重PCR检测MRSA的SCCmec的基因型及亚型。用全自动微生物分析仪进行药敏试验。结果72株金黄色葡萄球菌的mecA基因阳性，确定为MRSA，阳性率为64．3％（72／112）。SCCmecⅢ和SCCmecⅢA的阳性率分别为68．1％（49／72）和20．8％（15／72），H16和H56为SCCmecⅡ，H19为SCCmecⅣ，5株MRSA没有被分型。携带SCCmecⅡ、SCCmecⅢ或SCCmecⅢA的菌株均为多重耐药株，而携带SCCmecⅣ的菌株除对B内酰胺类药物耐药外，对其他类别的抗菌素敏感。结论本院分离的MRSA以SCCmecⅢ和SCCmecⅢA为主。多重PCR对MRSA进行SCCmec基因分型结果可靠，适合临床实验室。携带SCCmecⅡ、SCCmecⅢ或SCCmecⅢA的临床分离株耐药性严重。     

甲氧西林耐药／敏感金黄色葡萄球菌基因分型和毒力基因检测

目的：分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（金葡菌）（MRSA）和甲氧西林敏感金葡菌（MSSA）临床分离株基因分型及毒力基因分布特征是否存在差异,了解金葡菌耐药性演变与毒力变迁之间的相关性。方法采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法和多位点序列分型（MLST）方法对呼和浩特地区住院患者中分离的30株 MRSA 和30株 MSSA 进行分子分型,同步采用聚合酶链反应（PCR）方法检测菌株毒力基因。结果60株金葡菌 PFGE 分型共分19个型,MSSA 菌株分布在 I 和 H 型等16个基因型中,而 MRSA 株主要集中分布在 K 和 M 2个基因型中。20株不同 PFGE 型菌株 MLST 分型结果显示,MRSA 株主要为 ST-239型;MSSA 株呈多样性分布特征,主要以 ST-5型、ST-7型、ST-15型为主。毒力基因在 MRSA 和 MSSA 中分布差异显著。MSSA 毒力基因整体携带率明显高于 MRSA（53．9％对40．0％,χ2＝32．7,P ＜0．01）。MRSA 株 sea、cna 和 cap 8基因携带率明显高于 MSSA 携带率（P ＜0．01）,而 sec、seg 、sei、sem、sen、seo、fnbB、ebpS、cap5基因携带率明显低于 MSSA（P＜0．05）。结论呼和浩特地区金葡菌临床分离株基因型呈现多样化分布特点,MRSA 主要以 ST-239型为主。MSSA 毒力基因携带率高,特定毒力因子在 MRSA 和 MSSA 株中呈现一定聚集分布特征,金葡菌特定耐药性的获得可能伴随特定毒力特征的变化。     

多重PCR检测MRSA的SCCmec基因分型

目的了解我院MRSA的流行状况。方法收集2005年1—6月65株社区感染MRSA及60株医院感染MRSA，应用多重PCR对MRSA染色体Dlec基因盒（staphylococcal cassette chromosomeSCCmec）分型及杀白细胞毒素（PVI。）基因检测，应用K—B纸片法进行药敏分析。结果125株MRSA的mecA基因阳性，其中SCCmecII型1株，SCCmecⅢ型120株，SCCmecⅣ型3株，未分型1株；未发现携带PVL基因的MRSA。携带SCCmecII型、SCCmecⅢ型的菌株均为多重耐药株，而携带SCCmecⅣ型的菌株除对8内酰胺类药物耐药外，对其他类别的抗菌药敏感。结论本院分离的MRSA以SCCmecⅢ型为主，发现SCCmecIV型CA-MRSA，但不携带PVL基因；携带SCCmecⅡ、SCCmecⅢ的临床分离株耐药严重。     

62株临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因分型及耐药性分析

目的 了解医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的SCCmec基因型别及耐药特征.方法 应用聚合酶链反应(PCR)技术检测MRSA菌株的mecA基因并对其进行分型,应用E-test法测试MRSA对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、左氧氟沙星和利福平5种药物的MIC值.结果 62株MRSA的mecA基因全部阳性,SCCmecⅢ型60株,SCCmecⅣa型1株,还有1株用本实验方法未能分型.药敏试验显示所检菌株对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺均敏感,对左氧氟沙星和利福平的耐药率分别为96.8%和82.3%.结论 该院以SCCmecⅢ型为主要流行类型,治疗MRSA仍首选万古霉素等糖肽类抗菌药物.     

多重PCR法对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌染色体mec盒的分型研究

目的研究本院2002年连续收集的102株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）染色体mec盒（SCCmec）的分型特点。方法用多重PCR法对MRSA SCCmec的结构和其变异情况进行分析及分子分型。结果102株MRSA中有94株属SCCmec-Ⅲ型，4株属SCCmec-ⅢA亚型，2株属SCCmec-Ⅳ型，2株属SCCmec-Ⅰ型。结论通过多重PCR法分型，表明SCCmec-Ⅲ型是引发本院2002年MRSA感染的主要菌型。     

多重耐药鲍曼不动杆菌整合子及菌株同源性分析

目的了解该院多重耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB)整合子携带情况及菌株同源性,为临床合理用药及控制院内感染提供依据。方法收集多重耐药鲍曼不动杆菌101株,K-B纸片法测定其对12种抗菌药物的敏感性,琼脂稀释法测定其对多粘菌素B的MIC;PCR检测intlⅠ、intlⅡ和intlⅢ基因及可变区;基因外重复回文序列(REP)-PCR分析菌株同源性。结果 101株MDRAB仅对米诺环素和阿米卡星呈现出敏感性,敏感率分别为36.6%和33.7%,对其他10种药物的敏感率均为0;对多粘菌素B的MIC≤2μg/mL;96.0%(97/101)菌株携带Ⅰ类整合酶基因,DNA测序分析整合子可变区携带基因盒为aacA4-catB-aadA1(2 300bp)菌株47株,携带基因盒为aacC1-orfX-orfX-orfX′-aadA1(3 000bp)菌株44株;REP-PCR分析显示耐药菌株分为A～F型,A型中又分为A1～A4,分别为21、24、11和2株;B型分为B1～B2,分别为21和12株,C型和D型各2株,F型5株,E型1株。结论本院MDRAB主要携带Ⅰ类整合子,阳性菌株大多可扩增出可变区耐药基因盒;本院存在以A型和B型克隆株为主的感染流行,必须加强院内感染防控,切断克隆菌株的传播。     

PVL阴性MRSA的基因多态性研究

目的对杀白细胞毒素(PVL)阴性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行基因多态性研究,了解我院MRSA流行分布,为医院感染控制提供实验支持。方法 2006年2月至2007年8月我院临床分离的71株金黄色葡萄球菌;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术,葡萄球菌盒式染色体mec(SCCmec)分型完成其中16株MRSA的基因多态性分析。结果 PFGE分型:共有7组(A、B、C、D、G、I、J),其中A型1株、B型1株、C型8株,且均为C2亚型;D型、G型、1型、J型分别为3株、1株、1株、1株;SCCmec分型:以SCCmecⅡ、SCCmecⅢ为主,各占50.0%(8/16)。结论通过对我院MRSA进行基因多态性分型研究,了解了我院流行的MRSA基因特征,为该菌的感染控制提供分子流行病学依据。     

我国各地区18所教学医院金葡菌临床分离株杀白细胞毒素基因检测及分子流行病学调查

目的研究我国多所医院临床分离金葡菌中杀白细胞毒素（PVL）分布特征及与临床疾病的关系。方法对18所教学医院临床分离809株金葡菌进行PCR检测PVL基因，PVL阳性菌株经纸片扩散法检测MRSA表型，mecA～femB双重PCR确证MRSA基因型，并对PVI，阳性的MRSA进行SCCmec分型，脉冲场凝胶电泳（PFGE）法对PVL阳性的MRSA进行同源性分析。结果809株金葡菌中58株（58／809，7．2％）携带PVL基因。沈阳检出率较高，其次为武汉，与其他医院差异有统计学意义（P〈0．05）；PVL阳性的MRSA15株（15／407，3．5％），MSSA43株（43／402，11．1％），差异无统计学意义（P〉0．05）；PVL阳性的门诊菌株7．9％（5／63），住院6．9％（53／746／，差异无统计学意义（P〉0．05）。PVL阳性的MRSA经SCC—mec分型，Ⅱ型3．8Voo（2／53），Ⅲ型4．7％（12／258），未分型1．0%（1／104），差异无统计学意义（P〉0．05）。PVL阳性的MRSA经PFGE后，A克隆株73．3％（11／15）；B克隆株13．3%（2／15）；C克隆株6．7％（1／15）；D克隆株6．7％（1／15），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PVL可以引起严重感染，及时进行检测并做同源性分析，采取有效的措施控制医院感染的暴发。     

新生儿科医务人员鼻拭子与临床分离MRSA的分子分型

目的了解深圳市儿童医院新生儿临床分离株和该科医务人员鼻拭子耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分子生物学特征及耐药性。方法收集新生儿科临床分离的MRSA以及新生儿科医务人员鼻拭子分离的MRSA 26株,对其进行多位点基因分型(MLST分型)、spa分型、SCCmec分型及脉冲场凝胶电泳(PFGE),同时检测pvl基因,并进行14种抗菌药物药敏试验。结果在26株MRSA中,痰占53.8%,医务人员鼻拭子筛查检出2株。MLST分型共5种,其中ST59占76.9%。spa分型有8种,t437占65.4%。SCCmec分型只有2种,SCCmecⅣ型20株(76.9%)、SCCmecV 4株(15.4%)。PVL基因检测,pvl阳性率15.4%。通过PFGE分析,从新生儿科护理人员的鼻拭子分离的一株MRSA与一株从患者分离的菌株100%同源。药敏试验结果显示所有MRSA对呋喃妥因、奎奴普丁/达福普汀、万古霉素、喹诺酮类抗菌药物100%敏感,而对红霉素、克林霉素和四环素耐药率较高,均在50%以上。结论本研究新生儿科临床分离的MRSA中,最常见的克隆是MRSA-ST59-SCCmecⅣ-t437,在新生儿MRSA的经验性治疗中不宜首选红霉素和克林霉素。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec分型及耐药性分析

目的探讨临床分离的346株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株的临床分布、SCCmec分型及其对常用抗菌药物的耐药情况。方法选择2014年1月至2015年1月该院分离的784例金黄色葡萄球菌(SA),采用PCR方法对其进行MRSA及MRSA SCCmec基因分型鉴定,并对其检出分布及耐药性进行分析。结果 784株SA中MRSA 346株(占44.13%),MRSA中来自痰液占43.06%,伤口分泌物占48.55%;MRSA对青霉素、左氧氟沙星、红霉素耐药性较高,对万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁均敏感。MRSA经SCCmec分型,共发现SCCmecⅡ型130株,SCCmecⅢ型196株,SCCmecⅣ型11株,SCCmecV型9株。结论该院分离的MRSA以SCCmecⅢ型为主,MRSA对多种抗菌药物具有耐药作用,但对万古霉素、替考拉宁等敏感。     

上海地区五所医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性及分子流行病学调查

目的 了解上海地区甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药性及分子流行病学特点.方法 从上海5所医院收集140株MRSA,采用琼脂稀释法和肉汤稀释法检测其耐药性;利用PCR方法检测MRSA的PVL基因和SCCmec型别;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对MRSA做同源性分析并且将主要流行型别的39株MRSA进行spa分型.结果 140株MRSA对庆大霉素、磺胺甲嚼唑和克林霉素的耐药率分别为98.6%(138/140)、98.6%(138/140)和97.9%(137/140);对红霉素、环丙沙星和四环素的耐药率均在80%以上,对利福平的耐药率为10.7%(15/140);未发现对达托霉素、替考拉宁和万古霉素耐药的菌株.菌株MRSA PvL均为阴性,以SCCmecⅢ为主,达45.7%(64/140);其他型别依次为SCCmecⅢ a 25.0%(35/140)、SCCmecⅢb 14.3%(20/140)、SCCmecⅢ10.7%(15/140).SCCmecⅣ最少,占4.3%(6/140).PFGE图谱有16种类型(A～P型),以C型[30.7%(43/140)]、B型[13.6%(191140)]和Ⅰ型[10.7%(15/140)]为主;对主要流行克隆的39株MRSA进行spa分型,共得到t002[33.33%(13/39)]、t030[12.82%(5/39)]、t037[51.28%(20/39)]、t459[2.57%(1/39)]4种类型.结论 上海地区5所医院MRSA共有16种流行克隆株和4种spa型,其中PVL阴性、SCCmecⅢ对红霉素、环丙沙星、克林霉素、四环素、庆大霉素、磺胺甲唑耐药的MRSA克隆可能是上海地区HA-MRSA主要流行克隆株,是医院感染控制的重点,因此临床医生在治疗HA-MRSA感染患者时,要谨慎使用抗菌药物.     

Nasal carriage of methicillin-resistant Staphylococcus aureus among preclinical medical students: epidemiologic and molecular characteristics of methicillin-resistant S. aureus clones

Between May 2008 and October 2009, a total of 2103 interns were randomly tested for nasal colonization of S. aureus and methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). The prevalence of S. aureus among staphylococci specimens was 23.1%, and among the total S. aureus the MRSA prevalence was 9.4%. MRSA isolates were further subtyped using genetic element staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec) typing, pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) band pattern, and multilocus sequence typing. SCCmec type IVa was the most prevalent strain, at 45.4 %. Eleven PFGE patterns were identified in MRSA strains, with 1 predominant (pulsotype A, 45.5%). Eight strains which belonged to clonal complex 78 carried type IVa SCCmec and produced type 3 coagulase. Panton–Valentine leukocidin (PVL) genes (lukS and F-PV) were identified in 10 (45.4%) MRSA strains; these predominately carried ?Sa2958type and ?Sa108PVL-like type PVL phages. After inducing prophages, 8 strains infected other S. aureus isolates and could generate novel PVL-positive strains of S. aureus. The present study demonstrates that interns can carry certain MRSA strains asymptomatically and contribute to the spread of MRSA between the community and hospital.     

宁夏地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分子流行病学研究

目的调查临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的染色体m ec基因盒（SCCm ec）分型及杀白细胞素（PVL）的pvl基因携带率,初步了解宁夏地区MRSA分子流行病学特点。方法对2005年9月至2008年1月从临床标本中分离的MRSA菌株进行pvl基因检测,并应用多重聚合酶链反应（PCR）对MRSA菌株进行SCCm ec分型。结果 88株MRSA菌株中pvl基因阳性菌株8株（9.1%）,SCCm ec分型结果为Ⅲ型86株（97.7%）、Ⅱ型2株（2.3%）。结论宁夏地区分离的MRSA菌株SCCm ec分型以Ⅲ型为主,SCCm ec分型是探索MRSA多重耐药性有效的分子生物学手段。     

Infection control for a methicillin-resistant Staphylococcus aureus outbreak in an advanced emergency medical service center, as monitored by molecular analysis

A methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) outbreak occurred in an advanced emergency medical service center between 2010 and 2011. Our objective was to evaluate the status of the MRSA outbreak, as monitored by molecular analysis. Twenty-eight MRSA strains were isolated from blood samples from 11 patients, from other specimens (pharynx, nasal cavity, etc.) from 12 patients, from two environmental samples, and from the skin, middle nasal meatus, and urine of one patient each from other wards. Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) was performed to evaluate horizontal transmission. Molecular typing by PFGE showed that the 28 MRSA strains presented 7 patterns in total, and that 11 of the MRSA strains had the same PGFE pattern. Unselective use of intranasal mupirocin ointment, MRSA monitoring for new inpatients, and prevention of direct or indirect contact infection were performed. However, the number of inpatients with MRSA did not quickly decrease, and additional molecular typing by PFGE showed that 10 of 19 MRSA strains found (5 of 6 from blood, 5 of 13 from other specimens) were the same as those found previously. Lectures and ward rounds were performed repeatedly, and staff participation in ward rounds was suggested. Finally, the number of inpatients with MRSA significantly decreased more than 6 months after the intervention. Although the MRSA outbreak was thought to have ended, follow-up molecular typing by PFGE showed that horizontal transmission persisted. Our data suggest that various combinations of infection control measures are essential when dealing with an MRSA outbreak, and monitoring by molecular analysis using PFGE is useful to identify the status of the outbreak.     

Multilocus sequence typing (MLST) shows that the 'Iberian' clone of methicillin-resistant Staphylococcus aureus has spread to France and acquired reduced susceptibility to teicoplanin

Infection by methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) presents a serious problem, as these organisms are resistant to a wide range of antibiotics. Moreover, MRSA with reduced susceptibility to glycopeptides (GISA) have emerged in recent years. In our hospital we were faced with an outbreak of GISA between January and March 2000, involving six patients who were free of MRSA when the GISA isolate emerged, and five of whom had not been given glycopeptides. The initial GISA isolate from the six patients was compared with six 'historical' multiple-resistant MRSA isolates (1996-1999), which had not been found to be GISA by the routinely used method. Antibiotic susceptibility was studied through the disc diffusion method, and MICs of glycopeptides were determined by Etest, agar and broth dilution techniques. Molecular strain typing was done by PFGE and multilocus sequence typing (MLST). All 12 isolates that belonged to the gentamicin-resistant group of MRSA were susceptible to vancomycin, but showed reduced susceptibility to teicoplanin through at least one MIC method. PFGE typing yielded five different but closely related profiles, and eight of the 12 clinical isolates were classified into a single PFGE type. MLST yielded an identical allelic profile for all 12 isolates, corresponding to the profile (3-3-1-12-4-4-16) of the 'Iberian' clone HPV107 of MRSA. MLST allowed us to confirm the presence of the 'Iberian' MRSA clone HPV107 with the same allelic profile in our hospital for several years. We can now note that strains of this clone have acquired reduced susceptibility to teicoplanin.