HBV DNA PCR检测在HBsAg阴性献血人群中的应用

目的 探讨HBsAg阴性献血者HBV DNA榆测的应用价值,评估核酸检测的必要性.方法 采用PCR检测HBsAg阴性献血者HBV DNA.采用8人份混合血样测定,超离心浓缩病毒,磁珠法提取病毒核酸.如HBV DNA为阳性,则进一步检测乙型肝炎病毒血清标志物5项.结果 HBVDNA检测限量为25 U/ml,23 225份标本中有4份为HBV DNA阳性,检出率为0.17‰.进一步检测其他HBV感染的血清学指标,发现这4份标本中有2份为抗HBe和抗HBc阳性,1份为抗HBc阳性,1份为抗HBs、抗HBc阳性.对HBV DNA的定量测定表明,其含量在50～200 U/ml.结论 现行的2次酶联免疫技术的血液筛查存在HBV漏检,有必要在现有的血液筛查模式中增加抗HBc检测,或增加病毒核酸筛查.     

不宜采用混合血清以ELISA检测HBsAg

有少数检验部门为了减轻工作量、节省成本 ,采取将 5人份或 10人份血清等体积混合后再测ＨＢｓＡｇ(以下简称混合法 ) ,有关文献[1] 也指出其方法不妥 ,但该文献[1] 对结果的解释尚欠完整。为此我们对采用混合法检测ＨＢｓＡｇ的影响原因进行了实验探讨。1　材料与方法1 1　试剂　ＨＢＶ血清标志物 (ＨＢｓＡｇ、抗 ＨＢｓ)检测试剂为科华公司 (批号 :ＨＢｓＡｇ2 0 0 0 0 5 0 5 ;抗 ＨＢｓ 2 0 0 0 5 2 5 )。1 2　仪器　Ｅｌｘ80 0酶标仪 (ＢＩＯ ＴＥＫ)。1 3　方法1 3 1　ＨＢｓＡｇ强阳性和抗 ＨＢｓ强阳性混合血清标本的制备　将每次…     

HBV—DNA定量检测的分析

目前,PCR法是检测乙型肝炎病毒最敏感的技术。我们利用定量PCR法检测150例乙型肝炎患者血清HBV—DNA含量,同时应用酶联免疫试验（ELISA）检测HBV—M,并对其进行分析,现将结果报告如下。     

HBV DNA定量检测及其与HBV标志物的相关性探讨

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)DNA与不同类型HBV免疫标志物之间的关系,为临床诊断和治疗提供有价值的判断标准。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)对220例血清标本进行HBV免疫标志物检测,同时用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV DNA含量。结果 96例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎核心抗体(抗-HBc)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性(+)标本中HBV DNA阳性检出率为91.7%(88/96);100例HBsAg(+)/抗-HBe(+)抗-HBc(+)标本中HBV DNA阳性检出率为20.0%(20/100)。HBsAg阳性组与HB-sAg阴性组、HBeAg阳性组与HBeAg阴性组的DNA载量比较差异有统计学意义。结论 FQ-PCR可以检测HBV感染的真实性和复制情况,其与ELISA法检测HBV血清标志物相结合,对乙型肝炎的临床诊断及治疗方案的选择、疗效观察及预后判断具有极其重要的作用。     

HBsAg阴性献血者血清(浆)HBV DNA检测的意义

目的　明确HBsAg阴性献血者血清 (浆 )HBVDNA检测的应用价值。 方法　采用聚合酶链反应 (PCR)检测HBsAg阴性献血者血清 (浆 )HBVDNA。如HBVDNA为阳性 ,则进一步检测乙肝“两对半”血清学指标。结果　 5 0 0份标本中有 1 4份为HBVDNA阳性 ,检出率为 2 .8%。进一步检测其它HBV感染的血清学指标 ,发现这 1 4份标本中有 5份表现为抗 HBs、抗 HBe和抗 HBc一项或两项阳性。对HBVDNA的定量测定表明 ,其含量在 1 0 4～ 1 0 6拷贝数 /ml。结论　为尽可能减少输血后HBV感染的发生 ,有必要采用PCR方法检测HBsAg阴性献血者血清 (浆 )HBVDNA     

ELISA检测HBsAg洗板方法的探讨

目的探讨酶联免疫试验(ELISA)检测HBsAg的最佳洗板次数和方式,试图找到一种实用、可靠的ELISA洗板方法。方法选择50例HBsAg阴性体检者完全分离后的血清为检测对象,分别进行3～7次洗板,得到阴性数和假阳性数,得出最佳洗板机洗板次数;收集同一批号试剂盒的阴阳性标准品及质控品,将质控品平行检测31孔,共2板分别用手工和洗板机2种方法各洗板7次。结果不同洗板次数的结果差异有统计学意义,且洗板7次假阳性率最低;2种洗板方式测定值结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论洗板7次能达到理想的洗板效果;对标本量少或无洗板机的基层医院可采用标准化手工洗板的方式。     

RIA检测ELISA HBsAg灰区标本204例结果分析

目的探讨放射免疫法(RIA)对ELISA测定乙肝表面抗原灰区标本的乙肝标志物的检测结果。方法采用RIA方法对经ELISA检测HBsAg临界值以下的部分标本进行乙肝5项检测。结果 RIA方法 HBsAg阳性率为49.02%,有85.29%的标本检出了各类HBV的标志物;按照标志物组合模式计以HBsAg抗-HBe抗-HBc阳性(小三阳)最多(34.80%)。结论受方法学限制,ELISA测定乙肝表面抗原存在一定的漏检率,采用高灵敏度的RIA方法可在一定程度上减少漏检的机会。     

ELISA法检测HBsAg实验条件的优化

目的探讨温度、孵育时间、振荡对ELISA法检测HBsAg的影响,以期进一步优化检测条件。方法采用HBsAg含量约为1ng/mL的血清标本,在4种不同条件(37℃振荡、37℃不振荡、25℃室温震荡、25℃室温不振荡)下的3个不同反应时间(10、20、30min)测定HBsAg,记录吸光度值。结果除10min37℃不振荡和25℃不振荡差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各组差异都有统计学意义(P<0.05)。结论 37℃振荡20min为ELISA检测HBsAg的较佳条件。     

ELISA结合MEIA能有效检测低水平HBsAg

对于乙型肝炎病毒表面抗原 (ＨＢｓＡｇ)浓度介于 0 5ｎｇ/ｍｌ～ 5ｎｇ/ｍｌ的血清标本 ,ＥＬＩＳＡ显色较弱 ,不易判断 ;小于0 5ｎｇ/ｍｌ者 ,ＥＬＩＳＡ更会漏检。我们对ＨＢｓＡｇ浓度在 5ｎｇ/ｍｌ以下的血清标本用ＥＬＩＳＡ结合微粒子酶免疫试验(ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｅｎｚｙｍｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ,ＭＥＩＡ)进行检测 ,现对其应用情况作初步报告 ,并对ＨＢｓＡｇ浓度在 5ｎｇ/ｍｌ以下的病例存在情况进行初步分析。1　材料与方法1 1　标本来源　 1998年 6月～ 2 0 0 1年 5月期间本院门诊体检及非因乙型肝炎住院病人 1…     

ELISA检测HBsAg影响因素探析

ELISA方法具有简便、灵敏度高、特异性强等特点而被广泛应用,成为目前检测HBsAg的常用方法。但ELISA进行HBsAg检测时易受试剂、标本、操作等诸多因素影响出现假阳性或假阴性结果,因此应从以下几方面加强监测,减少错误结果的产生。     

HBsAg胶体金法与ELISA法对比分析

目的 比较胶体金免疫层析(GICA)法与酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测HBsAg结果的差异.方法 1 211例血清标本用GICA法和ELISA法测定.结果 1211例HBsAg测定GICA法阳性186例,阳性率15.4％;ELISA法阳性191例,阳性率15.8％;经x2检验,x2=2,P＞0.05,GICA法与ELISA法检测HBsAg无差别,1 211例血清标本GICA法漏检5例.结论 在HBsAg检测工作中酶标仪判读后有疑问的结果,再配合GICA法检测,以保证结果的准确性.     

在无偿献血中用胶体金法联合ELISA法检测HBsAg

我国人群的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)携带率接近10%,为了减少HBsAg阳性血液的无效采集,本血站对初次献血者用胶体金法进行HBsAg筛选,阴性者采血,阳性者再征得其本人同意下再抽血标本用酶联免疫吸附试验(ELISA)法复检,若复检阴性者可采血,报告如下.……     

ELISA法和电化学发光免疫法检测血清HBsAg结果比较分析

目的对酶联免疫吸附试验（ELISA）和电化学发光免疫法（ECLIA）检测血清中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）结果进行比较分析。方法采用ELISA和ECLIA 2种方法分别检测8 913例血清中的HBsAg。结果 ELISA法和ECLIA法检测出的总阳性数和总阳性率分别为519例占5.82%,451例占5.06%;以ECLIA法为参照,ELISA法假阴性率为0.67%,假阳性率为1.43%,相对敏感性为88.3%,相对特异性为98.5%二者的符合率为97.9%;403例阳性标本用ECLIA法复检,ELISA法的假阳性率为11.9%,相对敏感性为100%,相对特异性为50%,二者的符合率为88.1%;116例弱阳性标本用ECLIA法复检,ELISA法的假阳性率为69%,相对敏感性为100%,相对特异性为50%,二者的符合率为31%;8 394例阴性标本用ECLIA法复检,ELISA法的假阴性率为0.71%,相对敏感性为50%,相对特异性为100%,二者的符合率为99.3%。结论血清HBsAg ELISA法检测存在一定的假阴性率和假阳性率,敏感性和特异性较ECLIA法差,且随HBsAg浓度变化较大。ECLIA法快速、准确、敏感性、特异性更高。     

ELISA一步夹心法检测HBsAg假阴性原因分析

目的:探讨ELISA一步夹心法检测HBsAg假阴性的原因.方法:对ELISA一步夹心法检测HBeAg阳性、HBcAb阳性和HBsAg阴性的血清样品,用ELISA两步夹心法和将样品倍比系列稀释用ELISA一步夹心法检测HBsAg,并用化学发光免疫分析定量检测HBsAg.结果:在112 166份血样中,ELISA一步夹心法检测HBeAg阳性、HBcAb阳性、HBsAg阴性的标本9份,占0.008%;9份HBsAg阴性样品中,ELISA两步夹心法检测有1份阳性;同时经倍比系列稀释后用ELISA一步夹心法检测,在1∶327 68稀释后检出阳性1份,与ELISA两步夹心法检测HBsAg阳性为同一份血样,该标本经定量检测为HBsAg＞250 IU/mL,属钩状效应;其余8份样品经ELISA两步夹心法和一步夹心法检测均为阴性,而定量检测HBsAg其中1份样品为144.41 IU/mL,其余7份均在0.05～5 IU/mL之间.结论:ELISA一步夹心法检测高浓度HBsAg确有漏检现象,而低浓度HBsAg的漏检情况更为严重,建议使用灵敏度更高的试剂和方法来检测;中等浓度的HBsAg漏检应引起检测者及试剂厂家的关注.     

增加洗板次数对HBsAg ELISA检测结果的影响

酶联免疫试验因其操作简单、灵敏度和特异性较高，现已被广泛应用，但影响酶免试验结果的因素较多，如加样量、洗板、温度和温育时间，控制不严就会影响试验结果，特别是洗板因素，许多实验室设定洗板次数的随意性较大。通过比较由同一人使用同一洗板设备经不同洗板次数后的两种质控物的检测结果，发现增加洗板次数对HBsAg ELISA检测结果的影响较大，报告如下。     

化学发光法与ELISA法对HBsAg和HBsAb同时阳性标本检测比较

目的比较化学发光法(CLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)在检测HBsAg和HBsAb同时阳性标本的结果,评价其是否具有一致性。方法用4种不同浓度HBsAg标准品和4种不同浓度HBsAb标准品两两配合成16份样本,用CLIA、ELISA法分别检测,并于24h后再次检测;同时用4种不同浓度HBsAg血清标本和4种不同浓度HBsAb血清标本两两配合成16份样本进行同样检测。结果两种方法HBsAg检测结果均随着HBsAb浓度的增加而呈下降之势,对于1.5ng/mlHBsAg,当加入HBsAb浓度达到400mIU/ml时,CLIA法检测出现阴性结果;低浓度HBsAb受到HBsAg的影响随HBsAg的升高而加大,但随着HBsAb浓度的升高,受到HBsAg的影响呈现下降趋势,随着HBsAb浓度的升高,受到HBsAg的影响呈现下降趋势,当浓度为400mIU/ml时,CLIA法检测基本不受影响,而ELISA法仍然受到150ng/mlHBsAg影响。24h后HBsAg和HBsAb相互间影响更大,出现更多阴性结果。4种不同浓度HBsAg、HBsAb血清标本配成16份样本检测显示类似结果。CLIA法和ELISA法对HBsAg、HBsAb同时阳性标本检测的一致性微弱,标本放置24h后两法一致性加强。结论对于HBsAg和HBsAb同时阳性的标本,最好在当天能用另一种方法进行检测、印证,如果在24h以后进行复查,弱阳性一方可能检测出阴性结果,所以最好重新抽取血液检验。     

ELISA法测定HBsAg临床研究

为了解临床日常工作中 EL ISA法检测 HBs Ag误诊误报情况 ,笔者对 1998- 0 1～ 1999- 12河南周口部分地区无偿献血者、临床住院患者、中学生等 480 85份血清标本 ,在相同的实验条件下分别用两种不同厂家试剂平行检测 ,现将结果报道如下。1　对象和方法1.1　对象　血站无偿献血者血清 2 2 0 0 0例份 ,周口地区人民医院患者血清 3838例份 ,周口地区高考体检学生血清 2 2 2 47例份。1.2　试剂与仪器　 HBs Ag EL ISA试剂盒由河南理利生物技术公司、厦门新创科技公司和上海实业科华生物技术公司提供 ;试剂盒均经过国家批批检 ,并在有效期…     

ELISA法检测HBsAg时阴时阳现象分析

在常规检测中,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)具有灵敏度高、特异性强等优点而被广泛应用[1]。作者在两对半的检测过程中发现有标本的HBsAg检测出现时阴时阳现象,现针对日常检测工作中碰到的此类现象进行分析,并对处理方法进行总结,供各位同行参     

血清HBsAg的胶体金免疫层析法（试纸法）与ELISA法检测结果比较

乙型肝炎病毒表面抗原(HBs Ag)是各类体检和血样检查的必检项目。目前用于检测HBs Ag的方法主要是EL ISA法,EL ISA能给出半定量结果,但操作复杂费时。新开发出来的胶体金免疫层析(金标记法)快速检测HBs Ag方法,无需洗涤、终止,操作快速简便等优点,现多用于无偿献血的筛查,且为一些医疗机构的检测室所应用,为了进一步探讨2种方法检测结果情况,本文对来我科作乙肝二对半EL ISA检测的HBs Ag阳性标本,应用配对方法再用金标快速诊断试纸条作1次检测,并进行比较如下。1　对象和方法1.1　对象　当日到我室检测乙肝二对半的住院及门诊患…     

溶血对ELISA检测HBsAg的实验诊断效能指标的影响

目的探讨标本溶血时酶联免疫吸附实验（ELISA）各实验诊断效能指标的变化及对策研究。方法以时间分辨荧光免疫分析法确诊的结果为金标准,ELISA与之比较求各实验诊断效能指标。标本选择以未溶血时ELISA临界值阴性的标本75例,阳性90例,共165例未溶血标本设为对照组,将165例标本人为处理为轻、中、重度溶血,设为实验A组（试验孔校正前）;同时对实验A组各标本增设试验孔,再进行实验,设为实验B组（试验孔校正后）。对各组标本的各实验诊断效能指标进行比较。结果溶血后ELISA实验的特异性下降、准确度及正确指数均下降、误诊率升高。溶血后ELISA实验经校正孔实验校正后,与校正前比较,特异性升高、准确度及正确指数均升高、误诊率下降。结论溶血对ELISA实验检测HBsAg在特异性、准确度、正确指数及误诊率方面存在影响,通过对溶血样本增设一试验孔,能部分纠正轻、中度溶血时对HBsAg试验结果的影响,从而减轻样本溶血时对实验特异性、准确度、正确指数及误诊率方面的影响,改善实验的诊断效能指标,值得实验室推广使用。