染色体16三体人胚胎干细胞系的建立

背景:研究显示部分人胚胎干细胞系存建系或体外培养过程中出现染色体异常的现象,建立染色体异常的人胚胎干细胞系.可分析染色体对人胚胎干细胞特性的影响.目的:拟建立染色体异常的人胚胎干细胞系.设计、时间及地点:细胞学体内外观察.于2006-10/2008-02在南京大学医学院附属鼓楼医院生殖医学中心完成.材料:冷冻人胚胎由南京大学医学院附属鼓楼医院生殖医学中心提供,4周龄NOD-scid鼠1只及ICR胎鼠成纤维细胞由南京大学医学院附属鼓楼医院实验动物中心提供.方法:将人冷冻胚胎解冻后,置于囊胚培养基中微滴培养,胚胎发育至扩张囊胚期时分离囊胚中的内细胞团,以ICR胎鼠成纤维细胞作为饲养层,机械法传代,建立的人胚胎干细胞系命名为NJGLChES2.主要观察指标:对10代以后的细胞进行核型分析,选择核型异常的人胚胎干细胞系鉴定其碱性磷酸酶和特异性标记物的表达.通过体外类胚体形成实验及体内畸胎瘤成瘤实验观察其分化能力.结果:NJGLChES2人胚胎干细胞系核型分析结果呈16号染色体三体(47,XX,+16),呈人胚胎干细胞克隆样生长,碱性磷酸酶和胚胎特异性标记物OCT-4,SSEA-3,SSEA-4,TRA-1-60,TRA-1-81的表达均为阳性.体外悬浮培养的NJGLChES2人胚胎干细胞可形成囊状拟胚体,体内接种至NOD-scid鼠腹股沟皮下后在接种部位可形成畸胎瘤,肿瘤组织含有来源于鳞状上皮、横纹肌和呼吸道黏膜上皮3个胚层的多种细胞类型.结论:成功建立16号染色体三体人胚胎干细胞系NJGLChES2,可长期稳定增殖并保持未分化状态,且在体内外具有多向分化潜能.     

X线照射对外周血淋巴细胞Ku70表达与染色体易位的影响

目的分析X线照射引起的染色体易位与DNA双链断裂修复蛋白Ku70表达的关系。方法收集12例健康人外周血标本进行X线照射(0.5 Gy、1 Gy和2 Gy剂量),并进行淋巴细胞分离培养。用荧光原位杂交(FISH)检测其染色体易位率,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和western blot分别检测Ku70 mRNA和蛋白质的表达水平。分析X线照射剂量对染色体易位率和Ku70表达水平影响,以及染色体易位率与Ku70表达水平的相关性。结果 FISH检测结果表明,淋巴细胞经1 Gy和2 Gy剂量X线照射后,染色体易位率均高于对照组(P均0.05);Ku70 mRNA表达量随照射剂量增加而增加(P0.05);并且染色体易位率与Ku70在mRNA和蛋白质水平的表达存在弱相关(r分别为0.473、0.386,P均0.05)。结论染色体易位率和Ku70的表达都与X线照射剂量关系密切,且染色体易位率与Ku70表达间也存在相关性。     

淋巴细胞微核剂量-效应关系曲线制备中应注意的几个问题

微核是细胞质中主核外的小核。它主要来源于染色体的无着丝粒断片和细胞分裂后期滞后的染色体。因此，淋巴细胞微核检测实质上是一项衡量染色体损伤的细胞遗传学方法。作为辐射效应的生物学指标，多年来的研究表明在一定的剂量范围内，微核发生率与剂量呈明显的量效关系。国内外学者研究结果证明，照射离体人血所产生的微核率与整体受照所产生的微核率相同，因此可以用照射离体人血的方法制备剂量效应曲线。     

~■Cоγ射线离体照射人外周血诱发染色体畸变的剂量与效应的关系

目前一致公认机体受到急性照射后,染色体的畸变可作为观测机体受照剂量的指标,以用于防护和临床实践。为建立本实验室的刻度曲线,用(?)Cor线照射离体人外周血诱发染色体畸变,结果用最小二乘法进行泊松方差和加权回归分析,各项畸变均符合幂函数回归方程y=KD~2,双着丝点畸变符合二次多项式回归方程y=bD+CD~2,其λ值(b/c)与国内外资料相近。     

X射线照射对人外周血淋巴细胞 miRNA表达谱影响的初步研究

目的　探讨 X射线照射人外周血淋巴细胞后 miRNA表达谱的变化,为寻找新的辐射损伤生物标志物奠定基础。方法　采集健康成年男性外周血,给予 2Gy与 4Gy X射线照射后分别于 12h和 24h分离外周血淋巴细胞,提取各组细胞总 RNA,采用 Taqman低密度流体芯片技术检测照射组与对照组的 miRNA表达谱差异,并选取 4种 miRNAs进行 PCR单管验证。结果　2Gy与 4Gy X射线照射人外周血淋巴细胞 12h可诱导 283种 miRNAs表达上调,473种 miRNAs表达下调; 2Gy与 4Gy X射线照射人外周血淋巴细胞 24h可诱导 464种 miRNAs表达上调,331种 miRNAs表达下调。其中, 2Gy与 4Gy X射线照射后,有 20种 miRNAs同时表现出时间反应性,即随着照射时间的延长而升高,其升高倍数为 0.25~27.43倍; 8种 miRNA随着照射时间的延长而降低,其下调倍数为 0.11~13.84倍。其次,照射 12h与 24h后,外周血淋巴细胞中仅发现 2种 miRNAs表现出剂量反应性,即随着照射剂量的升高而升高,其升高倍数为 0.16至 1.12倍; 24种 miRNAs随着剂量的增加而降低,其下调倍数为 0.08~45.34。结论　人外周血淋巴细胞经 2Gy与 4Gy X射线照射后,不同时间点可筛选出多种差异表达的 miRNAs,这些差异表达的 miRNAs表现出一定的时间和剂量反应性,可能是辐射损伤评估的潜在指标。     

急性大剂量γ射线照射对小鼠外周血淋巴细胞损伤的作用及其机制

目的：已知射线能引起免疫系统损伤，为此观察急性大剂量γ射线照射后小鼠外周血淋巴细胞的凋亡机制及与免疫功能的关系。方法：用原位末端标记、原位杂交和碱磷酶免疫组化技术观察急性大剂量γ射线照射小鼠外周血淋巴细胞凋亡特征，bax，bcl-2和bcl-XL的表达及T细胞亚群的变化。结果：①照射后，白细胞数迅速下降。而淋巴细胞凋亡率持续升高，7d达到峰值，12个月仍未恢复到正常值。照后24h在6～12Gy范围内呈较好的剂量效应关系，≥15Gy照射后凋亡率降低。②6Gy照后24h，淋巴细胞Bax蛋白表达即出现升高，当剂量为12Gy时达到峰值，≥15Gy照射后出现降低；而Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达在照后24h明显下降，于12Gy照射后降至最低。Bax和Bcl-2 mRNA的表达显示出相似的变化趋势。③照后3d，随照射剂量的增加T细胞及其亚群急剧降低，呈较好的剂量效应关系。结论：≤12Gy照射后细胞凋亡是淋巴细胞的主要死亡方式。照射后Bax的上调及Bcl-XL的下调在急性大剂量照射引起的淋巴细胞凋亡和免疫调控中起重要作用。     

急性大剂量γ射线照射对小鼠外周血淋巴细胞损伤的作用及其机制

目的:已知射线能引起免疫系统损伤,为此观察急性大剂量γ射线照射后小鼠外周血淋巴细胞的凋亡机制及与免疫功能的关系。方法:用原位末端标记、原位杂交和碱磷酶免疫组化技术观察急性大剂量γ射线照射小鼠外周血淋巴细胞凋亡特征,bax,bcl-2和bcl-XL的表达及T细胞亚群的变化。结果:①照射后,白细胞数迅速下降。而淋巴细胞凋亡率持续升高,7d达到峰值,12个月仍未恢复到正常值。照后24h在6～12Gy范围内呈较好的剂量效应关系,≥15Gy照射后凋亡率降低。②6Gy照后24h,淋巴细胞Bax蛋白表达即出现升高,当剂量为12Gy时达到峰值,≥15Gy照射后出现降低;而Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达在照后24h明显下降,于12Gy照射后降至最低。Bax和Bcl-2mRNA的表达显示出相似的变化趋势。③照后3d,随照射剂量的增加T细胞及其亚群急剧降低,呈较好的剂量效应关系。结论:≤12Gy照射后细胞凋亡是淋巴细胞的主要死亡方式。照射后Bax的上调及Bcl-XL的下调在急性大剂量照射引起的淋巴细胞凋亡和免疫调控中起重要作用。     

高强度聚焦超声照射正常离体心肌组织的实验研究——局部心肌的凝固损伤范围与声辐照剂量的关系

目的　探讨高强度聚焦超声 (HIFU)非侵入性凝固局部心肌组织的能量 -效应关系。方法　采用不同强度 (110 0 0W /cm2 、15 80 0W /cm2 和 2 2 2 0 0W /cm2 )的HIFU ,在不同辐照时间 (1s、3s、5s和 8s)的作用下 ,对 2 0只正常猪离体心脏进行定位损伤 ,观察并测定损伤区的形态及体积 ,损伤区及其与周围正常组织交界处的组织同时送病理学检查。结果　不同剂量下HIFU所致的损伤体积范围分布在 (11.2± 1.9)mm3 ～(2 83 .2± 4.5 )mm3 之间 ,不同处理因素间的损伤体积差异具有显著性意义 (P <0 .0 5 )。损伤形态随剂量增大趋向不规则。组织学观察可见损伤区与周围正常组织分界明显。结论　HIFU可有效地使心肌组织发生凝固性坏死 ,但不侵及周围组织     

低水平γ射线照射对小鼠骨髓细胞离体增殖效应的影响

目的研究不同剂量低水平γ射线对小鼠骨髓细胞增殖效应的影响。方法小鼠骨髓细胞分别接受0、2、46、、8cGyγ射线照射,照射完毕在37℃水浴中培养3h。然后分成两组,一组测定其CPM值(每分钟放射性计数),一组测定其O2-量。结果小鼠骨髓细胞分别经0、2、4、6、8cGy低水平γ射线照射,发现经过6cGy照射后,其增殖效应最明显,其增殖效应和一定剂量范围内低水平γ射线照射所产生O2-量正相关。结论O2-量在一定范围内的增加是小鼠骨髓细胞经低水平γ射线照射所产生增殖效应的十分重要的因素。     

紫外线诱导体外培养人软骨细胞凋亡模型的建立

目的建立体外培养的软骨细胞凋亡模型。方法体外培养人鼻中隔软骨细胞,利用UV－C波段的紫外线(254nm)近距离照射诱导细胞凋亡,采用HE染色及流式细胞仪检测凋亡细胞。结果诱导后24h,细胞凋亡率为43.0％,HE染色出现典型的凋亡细胞表现。结论紫外线可诱导软骨细胞凋亡。     

放射工作人员外周血淋巴细胞微核率分析

通过放射工作人员外周血淋巴细胞微核率分析,评价放射工作人员的健康状况.对228名放射工作人员进行外周血淋巴细胞微核率分析.放射工作人员外周血淋巴细胞微核率与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01);不同性别、不同工种、不同工龄放射工作人员外周血淋巴细胞微核率比较差异无统计学意义(P＞0.05).放射工作人员长期受小剂量照射后外周血淋巴细胞微核率有所改变,应加强放射工作人员的防护.     

2016-2020年四川省医用放射工作人员血液常规检查结果分析

目的 探讨长期低剂量医用电离辐射对医疗机构医用放射工作人员外周血细胞的影响.方法 选取2016-2020年在该院进行在岗期间放射作业职业病健康体检的四川省各级医疗机构医用放射工作人员为医用放射组(642例),同时选取2016-2020年在该院进行职业健康体检的非放射作业人员为对照组(636例);对两组5年间血常规检查结...     

紫外线照射对人外周血细胞凋亡的影响

目的　观察短波紫外线（ＵＶＣ） 照射正常人外周血单个核细胞凋亡及白细胞介素２（ＩＬ－ ２） 、ＩＬ－ １２ 水平的影响。方法　采用５０ ｍＪ／ｃｍ２ ,２００ ｍＪ／ｃｍ２ 和４００ ｍＪ／ｃｍ２ 不同剂量的ＵＶＣ照射人体外周血单个核细胞,培养２４ 小时后用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ 法检测细胞凋亡及ＩＬ－ ２ 、ＩＬ－ １２的含量。结果　２００ ｍＪ／ｃｍ２ 、４００ ｍＪ／ｃｍ２ＵＶＣ 照射可明显诱发细胞凋亡（ｐｇ／ｍｌ） ,分别为４５ ．６８ ±１．３５,４６ ．６２ ±１．０２;照射后ＩＬ－ ２ 含量（ｐｇ／ｍｌ）明显下降（分别为１７６．８８±６ ．９７ ,１７４．１０ ±５ ．３６）,与对照组（ｓＡＰＯ－ １／Ｆａｓ ４１．０９ ±１ ．６９ ,ＩＬ－ ２ 为１９２．９８ ±１１．９７ ｐｇ／ｍｌ） 比较差异均有非常显著性（ Ｐ＜０．０１） ,而ＩＬ－ １２ 含量无明显变化。结论　ＵＶＣ 照射可诱发人外周血单个核细胞凋亡,此外凋亡可能是ＵＶＣ引起的ＩＬ－ ２ 缺失所致。     

基于体质量调节管电压联合自动管电流技术降低儿童胸部CT辐射剂量的价值

目的  探讨基于体质量调节管电压联合自动管电流技术在降低儿童胸部CT辐射剂量中的可行性。方法  选择2019年9~12月在联勤保障部队第九八九医院行胸部CT扫描的54例患儿胸部CT图像作为对照组,扫描参数：管电压100 kV或120 kV,管电流采用固定值,范围120~200 mA;另选择2020年1~5月行低剂量扫描的56例患儿胸部图像作为低剂量组,扫描参数：根据患儿体质量选择不同管电压,≤15 kg选择80 kV,≤40 kg选择100 kV, > 40 kg选择120 kV;管电流为自动管电流调节,比较两组患儿的辐射剂量和图像质量。结果  对照组患儿胸部CT有效剂量为0.95±0.55 mSv,低剂量组患儿胸部CT有效剂量为0.18±0.17 mSv,辐射剂量仅为对照组的18.9%。对照组和低剂量组图像满足诊断标准的占比分别为98.15%和96.43%,两组差异无统计学意义（P=0.579）。结论  在可满足诊断要求的前提下,根据患儿体质量选择不同管电压联合运用自动调节管电流技术可以有效降低胸部CT辐射剂量。     

健康人外周血T细胞亚群参考区间的建立

目的建立健康成人血液T淋巴细胞亚群的参考区间。方法使用三标荧光抗体,分别对100例不同年龄性别健康成年人外周血T淋巴细胞亚群进行标记,采用EPICSXL/XL-MCL型流式细胞仪进行检测并分析结果,SPSS13.0软件进行统计学处理。结果18～65岁健康成年人CD3+、CD3+/CD4+、CD3+/CD8+、CD4+/CD8+正常95%范围分别为59.17～76.15、24.26～40.50、18.76～27.40、0.62～2.42;不同年龄段比较中51～65岁CD3+、CD3+/CD4+、CD3+/CD8+、CD4+/CD8+各项指标与18～30岁比较差异有统计学意义(P0.05)。结论在相同地域、相同种族,可以建立健康成年人外周血的T淋巴细胞亚群正常参考区间。     

Effects of radiation exposure and storage on the energy metabolome of platelets in whole blood

Background

Exposure to radiation through battlefield use of nuclear weapons, terrorist attacks or accidents at nuclear power plants is a current concern for the military. Beyond the risk of exposure to personnel is the intentional or accidental irradiation of our blood banking supply system. It is unknown how large doses of ionizing radiation affect storage of blood and blood products, including platelets. The major function of platelets is clot formation which includes aggregation, shape change, vesicle release, and fibrinogen attachment; these tasks require a significant amount of energy. Here, we determine whether the ionizing radiation effects the energy metabolome of platelets in storage.

Study Design and Methods

Fresh whole blood from healthy volunteers was subjected to 0, 25, or 75Gy of X-irradiation, and stored at 4°C. Platelets were isolated from stored WB at 0, 1, 7, 14, and 21 days of storage. Krebs cycle intermediates, nicotinamide adenine dinucleotides, and the tri-, di, and mono- phosphorylated versions of adenosine and guanosine were extracted and measured by tandem mass spectroscopy.

Results

Irradiation at either 25Gy or 75Gy had no significant effect on the amount of any metabolite measured compared to control (0Gy). However, there was a significant fall over time in storage for most of the metabolites measured.

Discussion

These data show that irradiation at high doses has no effect on the concentration of the energy metabolome of platelets derived from whole blood stored in 4°C for up to 21 days and suggests that platelets can maintain their metabolome even after radiation exposure.     

Inactivation of parvovirus B19 in coagulation factor concentrates by UVC radiation: assessment by an in vitro infectivity assay using CFU-E derived from peripheral blood CD34+ cells

BACKGROUND: Nonenveloped and thermostable viruses such as parvovirus B19 (B19) can be transmitted to patients who are receiving plasma-derived coagulation factor concentrates treated by the S/D method for inactivating enveloped viruses. Therefore, it is important to develop and validate new methods for the inactivation of nonenveloped viruses. STUDY DESIGN AND METHODS: Suspensions of B19 in coagulation factor concentrates (FVIII) were irradiated with UVC light. B19 infectivity was determined by an indirect immunofluorescence assay using CFU-E, as a host cell, derived from peripheral blood CD34+ cells. The effects of catechins on B19 infectivity and on FVIII activity after UVC illumination were also examined. RESULTS: The indirect immunofluorescence assay estimated the B19 infectivity of samples containing virus copies of 10(5) to 10(11) per 10 microL to be a median tissue culture-infectious dose of 10(0.3) to 10(5.4) per 10 microL. B19 was inactivated by 3 log at 750 J per m(2) of UVC radiation and was undetectable after 1000 or 2000 J per m(2) of irradiation. However, FVIII activity decreased to 55 to 60 percent of pretreatment activity after 2000 J per m(2) of UVC radiation. This was inhibited in the presence of rutin or catechins. Epigallocatechin gallate could maintain FVIII activity at almost 100 percent of pretreatment activity after 2000 J per m(2) of UVC radiation, while B19 infectivity was decreased to undetectable levels, which resulted in >3.9 log inactivation. CONCLUSION: UVC radiation in the presence of catechins, especially epigallocatechin gallate, appears to be an effective method of increasing the viral safety of FVIII concentrates without the loss of coagulation activity.     

基于M1磁珠富集血液中念珠菌快速检测方法的建立

  目的  建立3种基于重组人甘露聚糖结合凝集素（MBL）蛋白（M1蛋白）磁珠富集技术的血液微量念珠菌快速检测方法（荧光定量PCR法、微培养法、铺板培养法）。  方法  根据荧光定量PCR方法的扩增效果,比较3种裂解液（酵母裂解液、LSTE和TXTE）提取微量念珠菌DNA的效果;通过检测液体培养后的菌量,比较5种微培养液（PBS、SA、YPD、LB和BHI）的增菌效果;使用人血浆模拟样本评价建立的3种方法和标准血培养法对血液中微量念珠菌的检测效果。  结果  与TXTE和LSTE相比,酵母裂解液提取微量念珠菌DNA的效果最佳。 SA、YPD、LB和BHI 4种微培养液中的菌量随时间延长均有上升趋势,特别是BHI增菌效果最佳。 人血浆模拟样本中,荧光定量PCR法虽然能够在最短时间内（3.75 h）检测到病原菌,但不能检出全部阳性样本。 与传统血培养法相比,微培养法和铺板培养法可分别提前至少39 h和22 h获得检测结果,灵敏度为10菌落形成单位/mL（CFU/mL）。  结论  与传统血培养法相比,荧光定量PCR法、微培养法和铺板培养法均能有效缩短检测时间,并且有较高的特异性和灵敏度。