一种新型结核分枝杆菌感染快速检测方法的应用

目的探讨酶联免疫斑点试验(ELISPOT)快速诊断结核病的价值。方法选取15例确诊为活动性肺结核的患者和100例入境人员的外周抗凝全血标本,采用ELISPOT检测试剂盒(T SPOT-TB)测定结核杆菌特异抗原刺激反应的效应T淋巴细胞数量。结果TSPOT-TB检测结核病的敏感性为93.3%,特异性为100.0%,阳性预测值为100.0%,阴性预测值为81.8%。采用该方法检测的结核潜伏感染率与病例来源呈密切相关,而与年龄和性别无相关性。结论TSPOT-TB的敏感性和特异性均较高,可用于结核感染的快速检测,但无法判断结核的活动性或潜伏感染。     

酶联免疫斑点技术在老年脊柱结核感染辅助诊断中的应用价值

【目的】评价酶联免疫斑点技术（ELISPOT ）在老年脊柱结核感染辅助诊断中的应用价值。【方法】选取2013年1月至2015年1月本院脊柱外科收治的疑似脊柱结核的老年患者56例,比较 ELISPOT试验、结核菌素（PPD）皮肤试验、血清抗结核抗体检测方法在老年脊柱结核感染辅助诊断中的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。【结果】ELISPOT 试验在脊柱结核诊断中的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为77．14％,85．71％,90．00％,69．23％;PPD 皮肤试验的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为37．14％,71．43％,68．42％,40．54％;血清抗结核抗体试验的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为48．57％,61．90％,68．00％,61．90％。在老年脊柱结核患者中,ELISPOT 试验的敏感性、特异性、阳性预测值均显著高于 PPD 皮肤试验和血清抗结核抗体试验。【结论】ELISPOT 法应用于老年脊柱结核诊断有良好的敏感性和特异性,可作为脊柱结核感染辅助诊断的有效方法。     

酶联免疫斑点检测（TSPOT-TB）结核分枝杆菌与结核病的相关性分析

目的研究酶联免疫斑点（T SPOT-TB）检测结核分枝杆菌特异性T细胞与结核病的相关性分析。方法用酶联免疫宽点技术测定早期分泌性抗原靶ESAT-6和ESAT-10特异性T细胞,由传染病研究所证实或可疑的72例病人作为实验对象,并将TSPOT—TB的测定结果和传统的诊断方法相比较。结果64例肺结核或肺外结核病人中,TSPOT—TB方法检测到63例,表明其灵敏度为98．4％。其中的45例病人同时做结素实验,仅有40例呈阳性（89％）,而TSPOT—TB测定100％为阳性（P=0．056）。72例病人中,有6人被排除活动性结核,其中5（83．3％）人TSPOT-TB实验阴性,因此可以在可疑活动性结核病人快速排除非结核病人。结论TSPOT-TB实验对检测结核是一种灵敏的方法,对现在低发病率背景下检测结核的诊断程序及治疗监测是一种有用的补充。     

干扰素-γ释放试验在儿童结核感染中的应用价值

目的评价干扰素-γ(IFN-γ)释放试验(IGRA)对儿童结核感染的诊断价值。方法采用以结核分枝杆菌特异性抗原——早期分泌抗原靶6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)为基础,基于酶联免疫斑点法(ELISPOT)的IGRA(即T-SPOT)检测了2 200例非结核病患儿和34例活动性结核病患儿体内特异性T淋巴细胞分泌的IFN-γ水平,评价其在儿童活动性结核病和结核分枝杆菌潜伏感染中的敏感性和特异性,同时分析了该实验的各项影响因素。结果 T-SPOT诊断活动性结核病的敏感性为73.5%、特异性为99.0%。T-SPOT检测结果与性别、年龄、卡介苗接种史、结核病接触史、机体免疫状态和感染部位无关。结论 T-SPOT敏感性较高,特异性强,有助于儿童活动性结核病的早期快速诊断。     

酶联免疫斑点法诊断结核感染的阈值

目的：分析确定本实验室条件下酶联免疫斑点法（enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT）诊断结核感染的阈值以及活动性结核与非活动性结核外周血 ELISPOT 分界阈值。方法对确诊为活动性结核病患者、经有效抗结核治疗后非活动性结核患者和健康者进行 ELISPOT 检测。结果以早期分泌抗原靶6000蛋白（early secretary antigenic target 6000 protein,ESAT-6）作为刺激源时,外周血 ELISPOT 诊断结核感染的阈值为26斑点形成细胞（SFCs）／106,敏感度90．3％,特异度88．7％,阳性预测值82．3％,阴性预测值94．0％;以培养滤液10000蛋白（culture filtrate protein,CFP-10）作为刺激源时诊断阈值为18 SFCs／106,敏感度80．6％,特异度86．8％,阳性预测值78．1％,阴性预测值88．4％,两种抗原 ELISPOT 斑点形成细胞之和为441 SFCs／106时,其诊断活动性结核感染敏感度为87．1％,特异度为80．6％。结论在本实验室条件下 ESAT-6-ELISPOT 诊断结核感染的阈值为26 SFCs／106, CFP-10-ELISPOT 诊断结核感染的阈值为18 SFCs／106,该阈值诊断结核感染的敏感度较高,但特异度较结核低流行国家偏低;以 ESAT-6和 CFP-10两种抗原 ELISPOT 斑点形成细胞之和441 SFCs／106作为鉴别活动性结核与非活动性结核的阈值,可以为临床工作提供参考。     

对比研究ELISPOT与QFT—GIT对于结核病诊断的应用价值

目的比较ELISPOT和Quanti—FERON—TBGoldIn-Tube（QFT-GIT）试剂盒,探讨ELISPOT方法在活动性肺结核诊断中的意义。方法应用ELISPOT和Quanti-FERON—TBGoldIn-Tube（QFT-GIT）对105份活动性结核患者（A组）和60份非结核呼吸系统疾病对照组（B组）进行检测。结果ELISPOT与QFT—GIT方法的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为85．71％、86．67％、91．84％及77．61％和83．81％、76．67％、86．27％及73．02％,且两种方法差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论应于ESAT-6／CFP-10融合蛋白技术的ELISPOT检测方法能够诊断活动性肺结核,并对结核感染诊断提供一定的依据。     

酶联免疫斑点试验和结核菌素试验在肺外结核诊断中的价值

【目的】比较酶联免疫斑点试验（ELISPOT）和结核菌素试验（TST）在肺外结核诊断中的价值。【方法】比较75例肺外结核患者（结核组）,50例非结核病患者（对照组）中ELISPOT和TST检测情况和其诊断肺外结核的效能。【结果】结核组ELISPOT和TST检测阳性率明显高于对照组,且差异具有显著性（P〈0．05）;结核组ESAT6、CFP10、C／E融合的释放细胞因子功能细胞（SCF）数量及ESAT6、CFP10、C／E融合的阳性率（82．67％、90．67％、96．0％）均明显高于对照组（6．0％、10．0％、16．0％）,且差异具有显著性（P〈0．05）;ELISPOT和TST诊断肺外结核的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确率分别为90．67％、82．0％、88．31％、85．42％、87．20％和76．0％、78．0％、83．82％、68．42％、66．08％;ELISPOT的灵敏度、阴性预测值、准确率均高于TST,且差异均有显著性（P〈0．05）。【结论】ELISPOT诊断肺外结核的灵敏度和准确率高于TST,其可作为诊断肺外结核的重要辅助检测。     

荧光定量PCR技术在结核杆菌检测中的应用

目的：建立结核病荧光定量PCR快速检测方法。方法：建立检测结核杆菌的荧光定量PCR方法并进行特异性、敏感性、重复性实验，对临床样品进行检测分析。结果：该方法的敏感性达到了1Pg，且特异性高．重复性好。应用荧光定量PCR法及抗酸染色、结核杆菌培养法，对332例活动性肺结核患者晨痰、215例活动性肺结核患者外周血、187例结核性胸膜炎患者胸水进行检测．荧光定量PCR技术阳性率分别为53．0％（176／332）、34．4％（74／215）、36．9％（69／187），经统计学比较分析，3种方法检测率差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：荧光定量PCR技术具有简便、快速、防污染、敏感性与特异性高等优点，是结核病诊断的有效方法之一。[著者文摘]     

抗环瓜氨酸肽抗体和血管内皮生长因子对类风湿关节炎实验诊断意义探讨

目的 探讨抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体和血管内皮生长因子（VEGF）在类风湿关节炎（RA）诊断中的意义以及与类风湿因子（RF）的相关性。方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测实验组和对照组抗CCP抗体和VEGF,采用速率散射光比浊法检测RF水平,并分析上述三者之间的关系。其中实验组为48例RA患者,对照组为32名健康人。结果 抗CCP抗体特异性、敏感性、阳性预测值和阴性预测值依次为100．0％、85．4％、100．0％、82．1％;VEGF的特异性、敏感性、阳性预测值和阴性预测值依次为56．3％、97．9％、77．0％、94．7％;RF特异性、敏感性、阳性预测值和阴性预测值依次为100．0％、89．6％、100．0％、86．5％。三者之间两两具有相关性,尤以VEGF和抗CCP抗体相关性为好。结论 抗CCP抗体和VEGF在RA诊断中具有其独特的应用价值。抗CCP抗体特异性与RF相同并优于VEGF,VEGF敏感性最高,而三者联合检测可进一步提高试验诊断特异性和敏感性。     

酶联免疫斑点试验快速诊断结核分枝杆菌感染的临床应用价值

目的探讨酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测结核分枝杆菌特异抗原T淋巴细胞的频率，在快速诊断结核病中的临床应用价值。方法利用ELISPOT检测对结核菌特异抗原刺激反应，分泌γ干扰素的效应T淋巴细胞数量方法，测定30名健康体检者，24例丙肝患者，65例非结核呼吸道疾病患者和112例结核病患者外周血单个核细胞中结核菌抗原特异的T淋巴细胞的频率。结果112例结核病患者中，107例结核病患者结核抗原特异ELISPOT阳性，提示方法敏感度为95．5％，30名健康对照中，2名健康体检者阳性，其他健康体检者阴性，24例丙肝患者和65例非结核呼吸道疾病患者均为阴性，方法的特异度为93．3％。结论ELISPOT是较灵敏和特异的快速检测结核菌感染的方法，可用于结核病的快速诊断。     

结核感染T细胞酶联免疫斑点试验与结核抗体试验在诊断骨关节结核中的临床应用价值

目的 探讨与分析结核感染T细胞酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB)与结核抗体试验在诊断骨关节结核中的临床应用价值。方法 选取2012年1月～2014年12月在无锡锡山人民医院接受诊治的324例疑似骨关节结核病患者为研究对象,采取随机方法将入选者分为T-SPOT.TB试验组和结核抗体试验组,每组162人,T-SPOT.TB试验组患者采取结核感染T细胞酶联免疫斑点试验,结核抗体试验组则采取结核抗体试验,对比分析两组诊断方式的灵敏度与特异度。结果 T-SPOT.TB试验组的灵敏度和特异度分别为93.43%和84.00%,结核抗体试验组的灵敏度和特异度分别为40.44%和53.85%,组间相比差异有统计学显著性意义(χ²=184.62,P＜0.05; χ²=7.86,P＜0.05)。T-SPOT.TB试验组的假阳性率、假阴性率分别为16.00%和6.57%,结核抗体试验组的假阳性率、假阴性率分别为26.92%和59.56%,组间相比差异有统计学显著性意义(χ²=7.86,156.18,均P＜0.05)。此外, T-SPOT.TB试验组的阳性预测值和阴性预测值分别为96.97%和70.00%,结核抗体试验组的阳性预测值和阴性预测值分别为88.71%和14.74%,组间相比差异有统计学显著性意义(χ²=20.27,73.06,均P＜0.01)。结论 与结核抗体试验相比,结核感染T细胞酶联免疫斑点试验在诊断骨关节结核时具有灵敏度高、特异度高等特点,值得推广使用。     

T细胞斑点试验AB抗原检测结果对结核感染患者诊断意义探讨

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)中AB两种抗原检测结果在临床结核感染患者诊断中的意义。方法选取2013年6~11月住院治疗并最终确诊活动性结核的96例患者为研究对象,采集其外周血进行T-SPOT.TB检测,将检测结果与结核菌素试验(PPD)及最终诊断结果进行对比,并对AB两种抗原检出结果的一致性及其阳性斑点分布特点进行分析。结果 T-SPOT.TB灵敏度为97.9%,特异度为87.8%,准确度为94.5%,阳性预测值(PPV)为94.0%,阴性预测值(NPV)为95.6%,均显著高于PPD检测结果(P0.01)。T-SPOT.TB两种抗原A和B对检测结果阳性率无统计差异,阳性斑点分布特征分析显示抗原A阳性斑点数与结核活动性呈正相关趋势,有较高的特异度;而抗原B则分别在高、低阳性斑点区呈现活动性结核检出的高峰,具有更好的敏感度。结论 T-SPOT.TB试验对活动性结核诊断有高度的敏感度和特异度,且AB两种抗原表现出不同的阳性检出规律和意义。T-SPOT.TB试验可为临床结核病的筛查和大规模流行病学调查提供新的技术分析手段。     

酶联免疫斑点试验在骨关节结核诊断中的价值

目的研究酶联免疫斑点试验（ELISPOT）在骨关节结核临床诊断中的应用价值。方法对54例骨关节病患者进行ELISPOT试验,并进行斑点阅读与统计,判定骨关节结核阳性结果。结果54例患者中20例经手术病理诊断明确为骨关节结核,ELISPOT A抗原试验灵敏度80.00%,特异度91.18%,正确率87.04%,Kappa值0.72。 ELISPOT B抗原试验灵敏度80.00%,特异度97.06%,正确率90.74%,Kappa值0.80。A抗原ROC曲线下面积0.99,B抗原曲线下面积0.87,最佳临界值均为4.5。结论 ELISPOT是一种具有较高敏感性和特异性的检测结核感染的技术,可用于骨结核的辅助诊断。     

Rapid detection of Mycobacterium tuberculosis in sputum by Patho-TB kit in comparison with direct microscopy and culture

The usefulness of a new rapid diagnostic test (Patho-TB) using antibodies specific to mycobacterial antigens was evaluated for the rapid discrimination between pulmonary tuberculosis (TB) and non-TB pulmonary diseases on sputa. One hundred sputa collected from 79 active TB patients and from 21 patients with non-TB pulmonary diseases (asthma and chronic obstructive pulmonary disease) were enrolled into the study and tested for the presence of Mycobacterium tuberculosis by Ziehl–Neelsen smear, Patho-TB kit, and Löwenstein–Jensen culture. The sensitivity, specificity, positive predictive value, and negative predictive value of the Patho-TB test were 95%, 100%, 100%, and 84%, respectively. Patho-TB test is simple, quick, and easy to perform. Its sensitivity, specificity, and positive predictive value are satisfactory. Therefore, it could be used as a screening test in poorly equipped laboratories of TB endemic areas.     

全血γ-干扰素释放试验与ELISA检测结核分枝杆菌抗体在痰菌阴性肺结核辅助诊断中的比较应用

目的：探讨γ-干扰素释放试验（interferon-gamma release assays, IGRA）与酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）在痰菌阴性肺结核诊断中的应用价值。方法：收集93例痰菌阴性肺结核患者和40例健康体检者的肝素钠抗凝全血,采用IGRA试剂盒检测其血浆γ-干扰素含量,其血清标本应用ELISA试剂盒检测结核分枝杆菌抗体（Tuberculosis antibody, TBAb）,并将2种结果进行比较分析。将痰菌阴性肺结核患者分为老年组和中青年组进行比较,分析IGRA检测在不同年龄段间是否有差异。结果：IGRA诊断痰菌阴性肺结核,灵敏度为84.94%,特异度为90.00%,阳性预测值为95.18%,阴性预测值为72.00%;TBAb诊断痰菌阴性肺结核灵敏度为52.69%,特异度为85.00%,阳性预测值为67.20%,阴性预测值为40.96%。2种方法相比较,差异有统计学意义。不同年龄患者间,IGRA检测结果差异无统计学意义。结论：与ELISA相比,IGRA对诊断痰菌阴性肺结核有更高的灵敏度、特异度和阳性预测能力。     

Diagnostic value of an enzyme-linked immunospot assay for interferon-γ in cutaneous tuberculosis

The aim of this study was to evaluate the diagnostic performance of an enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay (T-SPOT.TB; Oxford Immunotec, Oxford, UK) for interferon-γ in patients with suspected cutaneous tuberculosis (TB). From March 2007 to June 2010, a total of 45 patients with suspected cutaneous TB were enrolled. Data on clinical characteristics of the patients and conventional laboratory results were collected, and blood samples were obtained for ELISPOT assay. Ten subjects (22.2%) had culture-confirmed TB, 2 (4.4%) subjects had probable TB, and the remaining 33 (73.3%) subjects did not have TB. Twenty-one patients with mycobacterial infection had available biopsy or surgical specimens for histopathologic examination and 16 (76.2%) specimens had pathologic features (granulomatous inflammation, caseating necrosis, or acid-fast bacilli) consistent with mycobacterial infection. Among these 16 patients, all 6 patients with TB and 3 patients with Mycobacterium marinum infection had positive ELISPOT results, but none of the patients with Mycobacterium abscessus, Mycobacterium chelonae, or Mycobacterium avium infection had positive ELISPOT results. Overall, 9 of 10 patients with culture-confirmed TB and both patients with probable TB had positive ELISPOT assay. For patients with nontuberculous mycobacteria infections, ELISPOT assay was positive only in patients with M. marinum and M. kansasii infection. The sensitivity, specificity, positive predictive value, and negative predictive value for cutaneous TB diagnosis by the ELISPOT assay were 91.6% (95% CI, 64.6-98.5%), 75.8% (95% CI, 59.0-87.2%), 57.9% (95% CI, 34.0-78.9%), and 96.2% (95% CI, 59.0-87.2%), respectively. In conclusion, ELISPOT assay can provide useful support in the diagnosis of cutaneous TB.     

通过不同检测系统评价降钙素原对血流感染的临床诊断价值

目的通过溯源及检测原理不同的两种仪器评价降钙素原对血流感染的临床诊断价值。方法选取北京协和医院门诊及住院血培养报警阳性的患者标本91份及体检健康标本100份,分别使用VIDAS 30全自动免疫分析仪(简称VIDAS 30)及iFlash 3000化学发光免疫分析仪(简称iFlash 3000)检测降钙素原,分析其变化与血流感染发生的相关性及其对血流感染的诊断效能。结果两种方法拟合的线性回归方程为Y=0.823X-0.374(r=0.987,P<0.01);以血培养为“金标准”,通过VIDAS 30及iFlash 3000检测降钙素原诊断血流感染的灵敏度分别为64.7%、61.2%,特异度均为100.0%,准确度分别为84.3%、82.7%,阳性预测值均为100.0%,阴性预测值分别为77.9%、76.3%;两种方法诊断血流感染的受试者工作特征曲线下面积(AUC)分别为0.913、0.876(P=0.001、0.002),最佳截断值分别为0.29、0.27 ng/mL,此时的灵敏度分别为75.3%、71.8%,特异度均为100.0%。结论溯源及原理不同的两种仪器检测降钙素原对血流感染的诊断均有较好的临床应用价值,合理调整最佳截断值可以提高血流感染诊断的灵敏度。