水通道蛋白9表达水平影响HepG2肝癌细胞的生物学行为及对As_2O_3的敏感性

目的研究水通道蛋白9(AQP9)表达水平对三氧化二砷(As2O3)诱导Hep G2肝癌细胞凋亡及对其生物学行为的影响。方法采用MTT法筛选As2O3对肝癌细胞Hep G2增殖抑制作用;将重组质粒p EGFP-N1-AQP9和pshRNA-AQP9转染肝癌细胞,反转录PCR检测AQP9 mRNA的表达,Western blot法检测AQP9蛋白表达;将As2O3加入转染后及未处理的Hep G2细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术分析周期和凋亡情况;TranswellTM实验验证迁移侵袭能力的改变;酶标仪检测caspase-3活性。结果重组质粒对AQP9有明显的过表达及抑制表达作用,转染p EGFP-N1-AQP9组肝癌细胞的增殖抑制作用明显大于单纯As2O3处理组,侵袭及迁移能力显著减弱,细胞周期停滞在G0/G1期,凋亡明显多于单纯As2O3处理组,活化的caspase-3活性最高。转染pshRNA-AQP9组细胞的增殖抑制作用及caspase-3活性小于单纯As2O3处理组,侵袭迁移能力强于单纯As2O3处理组,细胞周期停滞在G0/G1期的数量及凋亡率较少。结论调节AQP9的表达影响Hep G2肝癌细胞的生物学行为并影响As2O3对Hep G2肝癌细胞的敏感性。     

人胚胎干细胞抑制人肝癌细胞系SK-Hep1增殖并促进凋亡

目的探究在人胚胎干细胞hESCs与人肝癌细胞系SK-Hep1共培养微环境中,hESCs对SK-Hep1人肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法建立hESCs与SK-Hep1人肝癌细胞系的非接触式共培养体系,将与hESCs共培养的SK-Hep1细胞作为实验组,单独培养的SK-Hep1细胞作为对照组。MTT法检测SK-Hep1细胞的增殖能力;Transwell小室法检测SK-Hep1的侵袭与迁移能力;Hoechst33258染色后观察共培养后SK-Hep1细胞核的变化;流式细胞术检测SK-Hep1细胞凋亡率。结果与hESCs共培养后,SK-Hep1细胞的增殖能力受到抑制,随着时间增加,抑制效果越显著(P0.05);细胞侵袭、迁移穿过Transwell小室的数量显著减少(P0.05);发生核固缩、变形和浓染的SK-Hep1细胞较对照组增多;细胞凋亡比率较对照组显著增加(P0.05)。结论人胚胎干细胞对SKHep1人肝癌细胞系有抑制作用。     

肝星状细胞通过活化γδ T细胞抑制人HepG2肝癌细胞增殖和侵袭北大核心CSCD

目的研究人肝星状细胞(HSC)作用于γδ T细胞进而对肝癌细胞增殖、侵袭能力产生的影响。方法利用密度梯度离心法及流式细胞术分离获取健康志愿者与肝癌患者的外周血γδ T细胞,使用TranswellTM小室共培养LX-2细胞和γδ T细胞。ELISA检测γδ T细胞上清液中γ干扰素(IFN-γ)含量,CCK-8法检测HepG2的增殖能力,Transwell^(TM)侵袭实验检测HepG2细胞侵袭能力。结果与LX-2细胞共培养后,γδ T细胞分泌IFN-γ量增加,健康志愿者组IFN-γ分泌量增加比肝癌患者组更明显。共培养后γδ T细胞对HepG2细胞增殖、侵袭的抑制能力增强,且健康志愿者组抑制效果增强较肝癌患者组更明显。结论 HSC可以活化γδ T细胞、促进其分泌IFN-γ,进而增强γδ T细胞抑制肝癌细胞增殖和侵袭的能力。     

人胚胎干细胞对肝癌HepG2 细胞体外抑制作用的研究

目的:研究体外共培养情况下人胚胎干细胞H9 对肝癌HepG2 细胞的抑制作用。方法:建立人胚胎干细胞(H9) 与肝癌HepG2 细胞共培养体系,显微镜下观察胚胎干细胞对肿瘤细胞生物学行为的影响,流式细胞仪检测H9 细胞对肿瘤细胞的凋亡与周期的影响,Transwell 小室法检测H9 细胞对HepG2 细胞侵袭和迁移的影响,基因芯片分析共培养后HepG2 细胞全基因组的表达谱变化。结果:结果发现共培养过程中,肝癌HepG2 细胞生长受到抑制,随共培养时间延长,细胞数量逐渐减少,出现老化或凋亡迹象;流式细胞术检测发现HepG2 细胞凋亡率显著增加,细胞周期被阻滞于G0/ G1 期;Transwell 实验发现HepG2 细胞侵袭、迁移力均降低;基因芯片结果发现HepG2 细胞全基因组表达谱发生了显著变化,差异基因涉及多条信号通路。结论:人胚胎干细胞H9 体外对人肝癌细胞HepG2 有一定程度的抑制作用。     

Runx3对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的探讨siRNA干扰Runx3对人肝癌Hep G2细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法以人肝癌Hep G2细胞为研究对象,构建Runx3-siRNA,转染入细胞。将细胞分为对照组、脂质体组、NC-siRNA组和Runx3-siRNA组。用RT-PCR法检测Runx3 mRNA表达,用Western blot检测Runx3蛋白表达。用MTT法、流式细胞法和Transwell小室法观察Runx3对Hep G2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。结果 Runx3-siRNA可抑制Hep G2细胞的增殖(P0.05);Runx3-siRNA可促进Hep G2细胞凋亡(P0.05);Runx3-siRNA可抑制Hep G2细胞的侵袭(P0.05)。结论Runx3基因在肝癌的发生发展中发挥一定的促进作用,有可能成为肝癌治疗的新靶点。     

miR-100靶基因BAZ2A在肝癌迁移侵袭中的机制研究

目的:探讨miR-100和BAZ2A基因在肝癌细胞中的表达及对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响。方法:以qRT-PCR检测和Western blot分析miR-100与BAZ2A在肝癌细胞中的表达情况;以miR-100 mimics转染肝癌细胞SMMC-7721,检测miR-100对BAZ2A表达的影响,细胞划痕实验和Transwell小室实验验证miR-100对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果:miR-100在肝癌细胞中呈低表达,BAZ2A表达与其呈负相关,上调miR-100可以降低BAZ2A的表达,抑制肝癌细胞的迁移侵袭能力。结论:miR-100可以通过抑制BAZ2A的表达来降低肝癌细胞的迁移侵袭能力,达到抗肿瘤的效果。     

Uba-2在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭转移能力的影响

目的探讨Uba-2在肝癌组织中的差异表达以及过表达和低表达时其对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法 qRTPCR法检测肝癌组织中Uba-2 mRNA的表达;将Uba-2的过表达载体和siRNA表达载体转染至肝癌细胞Hep G2后,MTS实验检测Uba-2对肝癌细胞增殖能力的影响;细胞迁移/侵袭实验检测其对肝癌细胞侵袭转移能力的影响;Western blot法检测肝癌细胞Hep G2中TGF-β1~3及VEGF、Snail蛋白的表达。结果 Uba-2在肝癌组织中呈高表达,与癌旁肝组织中的表达差异有显著性(P0.01),qRT-PCR法检测Uba-2在Hep G2细胞中过表达或低表达;细胞增殖实验数据显示Uba-2表达水平与肝癌细胞Hep G2的增殖能力相关,siRNA干扰沉默Hep G2细胞中Uba-2的表达会抑制其增殖生长,细胞迁移/侵袭实验数据显示Uba-2过表达能促进肝癌细胞Hep G2的侵袭、转移能力,且与阴性对照组细胞相比差异有统计学意义;Western blot结果显示Uba-2的异常表达影响TGF-β2及VEGF、Snail蛋白表达水平。结论 Uba-2基因在肝癌组织中的高表达可能具有促进肝癌细胞增殖及侵袭转移的作用。     

人参皂苷Rg3对人肝癌细胞增殖、迁移、黏附和凋亡的影响及其作用机制

目的研究人参皂苷Rg3对不同肝癌细胞增殖、迁移、黏附和调亡的影响及其作用机制。方法以人肝癌细胞系Hep G2、QGY细胞以及人成纤维细胞系HEL细胞为研究对象,运用MTT、细胞黏附、Transwell以及流式细胞仪观察Rg3对肝癌细胞的增殖、黏附、侵袭和转移以及细胞凋亡的影响;结合Western blot检测Rg3作用于Hep G2和QGY细胞后CD44、VEGF蛋白的表达。结果 Rg3能特异性抑制Hep G2和QGY肝癌细胞增殖、黏附、侵袭转移并显著诱导细胞凋亡(P0.05);Hep G2和QGY肝癌细胞暴露于Rg3后细胞中CD44和VEGF蛋白表达显著下调(P0.05)。结论Rg3能抑制人肝癌细胞增殖、黏附、侵袭转移并诱导细胞凋亡,其功能与CD44和VEGF蛋白表达密切相关。     

雪峰虫草对DC-CIK增殖及HepG-2细胞杀伤作用的实验研究

目的:研究雪峰虫草对DC-CIK细胞增殖及肝癌Hep G-2细胞杀伤作用。方法:常规分离健康人外周血单个核细胞并诱导生成DC细胞和CIK细胞,将DC细胞与CIK细胞按1∶5共培养7 d后给药组加入不同浓度的雪峰虫草水提取物,第10天观察形态并计数各组DC-CIK细胞;收集培养第10天的DC-CIK细胞作为效应细胞,对数生长期Hep G-2肝癌细胞作为靶细胞,使Hep G-2∶DC-CIK靶效比为1∶5,cck-8法检测DC-CIK对Hep G-2的杀伤率。结果:雪峰虫草水提物组对DC-CIK有显著的促增长作用,其作用的最佳浓度为0.1 mg/ml。雪峰虫草诱导的DC-CIK细胞对肝癌Hep G-2细胞的杀伤作用优于常规方法培养的DC-CIK细胞;常规方法培养的DC-CIK细胞加雪峰虫草与常规方法培养的DC-CIK细胞对肝癌Hep G-2细胞的杀伤作用无显著性差异,雪峰虫草体外直接杀伤肝癌Hep G-2细胞的作用不明显。结论:雪峰虫草通过促进DC-CIK细胞增殖而增强其杀伤肝癌Hep G-2细胞的作用。     

PHLDA2对肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

目的 探讨血小板白细胞C激酶底物同源性样结构域蛋白家族A成员2（PHLDA2）在肝癌中的表达及对肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法 在线数据库基因表达谱数据动态分析（GEPIA）PHLDA2在369例肝癌组织和160例癌旁组织中的表达差异以及其表达水平对肝癌患者总体生存率的影响。包装PHLDA2敲减慢病毒。细胞计数试剂盒-8（CCK-8）和集落形成实验检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭和迁移,流式细胞术检测细胞凋亡。Western blotting检测Bax和cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果 PHLDA2在肝癌组织中高表达,高表达的PHLDA2降低肝癌患者的总体生存率;敲低PHLDA2可以抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,促进肝癌细胞凋亡。结论 PHLDA2可促进肝癌的发生发展,具有肿瘤促进因子的功能。     

阿司匹林增强TRAIL诱导的HepG-2细胞凋亡

目的:研究阿司匹林能否增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的HepG-2细胞凋亡,并初步探讨其作用机制。方法:HepG-2细胞放入含15%胎牛血清的DMEM培养液中培养,改良苯酚-品红染色观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数,RT-PCR检测细胞中survivinmRNA的表达水平,FCM检测细胞凋亡率和细胞周期。结果:不同浓度的阿司匹林联合TRAIL实验组细胞增殖抑制率明显高于空白对照组及TRAIL和阿司匹林单独用药组,且细胞凋亡指数也明显提高,凋亡率与阿司匹林的浓度呈现剂量依赖关系,联合用药组凋亡相关基因survivin的表达与空白对照组和TRAIL和阿司匹林单用组相比明显下调。结论:阿司匹林能够增强TRAIL诱导的HepG-2细胞凋亡,其作用机制可能与survivin基因的表达下调有关。     

内皮抑素对肝癌HepG-2细胞生长和血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨内皮抑素对人肝癌细胞株HepG-2细胞生长和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及其可能的机制.方法:采用MTT法检测不同浓度的内皮抑素作用不同时间后对HepG-2细胞生长的抑制作用;电镜观察加药前后HepG-2细胞超微结构的变化;免疫组织化学法检测内皮抑素作用前后HepG-2细胞中存活素表达的改变;RT-PCR法检测加药前后HepG-2细胞中VEGF基因表达的变化.结果:内皮抑素能抑制HepG-2细胞的生长增殖,呈剂量-时间依赖性,并诱导细胞凋亡;内皮抑素作用后HepG-2细胞中存活素表达明显减少,VEGF表达明显减少.结论:内皮抑素通过下调存活素的表达,诱导HepG-2细胞的凋亡、抑制其增殖,并能显著降低HepG-2细胞中VEGF的表达.     

SC58125对HepG-2细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨SC-58125对HepG-2细胞增殖和凋亡的作用及其分子机理。方法：应用细胞培养、MTT、TUNEL、流式细胞光度术、琼脂糖凝胶电泳及Western blot等方法研究SC-58125对HepG-2细胞增殖和凋亡的作用及其分子机理。结果：SC58125抑制HepG-2细胞的增殖、诱导其凋亡及引起G₀/G₁期阻滞，S期抑制。并使P33^cdk2、P34^cdc2、cyclinB₁、cyclinE、Mpm-2、Rb、PCNA 7种蛋白水平下降。结论：SC58125抑制HepG-2细胞的增殖及诱导其凋亡，可能与P33^cdk2、P34^cdc2、cyclinB₁、cyclinE、Mpm-2、Rb、PCNA 7种蛋白水平的下降有关。     

RPMI-1640和DMEM培养基中肝癌细胞系BEL-7402与HepG-2的生长状态比较

背景：DMEM和RPMI-1640是两种最常用的商品化培养基,二者对肝癌细胞生长的影响尚未见直接的对比研究。 目的：比较两种常用培养基对人肝癌BEL-7402与HepG-2细胞系体外生长和增殖效果的影响,从中选择更适合的培养基。 方法：分别应用高糖DMEM与RPMI-1640完全培养液培养BEL-7402和HepG-2细胞,于培养的0,24,48,72,96,  120 h用酸性磷酸酶检测法测定细胞生长和增殖速率,并于倒置显微镜下观察细胞的形态。 结果与结论：结果发现BEL-7402和HepG-2细胞在RPMI-1640培养基中的生长增殖速率均明显高于DMEM培养基 (P < 0.01)。镜下观察证实细胞在RPMI-1640培养基中的黏附和伸展状态更好。因此,建议首选RPMI-1640培养基进行肿瘤细胞体外培养。     

中药博癌丸对人肝癌细胞株HepG-2细胞凋亡及相关调控基因的影响

目的:研究中药博癌丸诱导人肝癌细胞株HepG-2细胞凋亡及对相关调控基因表达的影响。方法:采用流式细胞术检测HepG-2凋亡细胞,采用免疫组织化学方法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2、P53的表达。结果:(1)10%、15%的博癌丸药物血清作用48h后,HepG-2细胞凋亡率均显著高于空白对照组,P<0.05;15%博癌丸药物血清组与阳性药物对照组比较无显著性差异,P>0.05。(2)5%、10%、15%博癌丸药物血清均能上调HepG-2凋亡调控基因Bax、P53的表达,P<0.05~0.01,并与剂量有关;15%博癌丸药物血清组与阳性药物对照组比较无显著性差异,P>0.05。结论:博癌丸能诱导HepG-2细胞凋亡,上调促凋亡基因Bax和P53的表达。     

结核分枝杆菌融合蛋白和分泌蛋白对人肝癌细胞HepG-2影响和作用

目的探讨结核分枝杆菌融合蛋白对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用。方法构建含3种目的基因的表达载体pProEXHTa-Ag85B-Hsp16.3、pProEXHTa-Ag85B-ESAT6和pProEXHTb-Hsp16.3,分别转入宿主菌E.coli DH5α中,诱导表达后分别获得Ag85B-Hsp16.3、Ag85B-ESAT6和Hsp16.3三种蛋白,纯化后复性。分别作用于肝癌细胞HepG-2,MTT法检测细胞生长情况。结果成功纯化并复性三种蛋白。MTT实验结果显示,三种蛋白均对HepG-2细胞的生长具有抑制作用,抑制强度与蛋白终浓度和作用时间相关,但各蛋白的抑制作用无明显差异。结论结核分枝杆菌的部分分泌蛋白对肝癌细胞HepG-2具有抑制作用。     

不饱和脂肪酸影响HepG-2细胞PAI-1表达的机制初探

目的：探讨不饱和脂肪酸对HepG-2细胞纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)表达的影响及其机制。方法： 以发色底物法检测PAI-1活性，RT-PCR法检测PAI-1 mRNA水平；构建两个含不同片段缺失的PAI-1启动子序列控制表达的氯霉素转移乙酰酶（CAT）报告基因质粒，转染HepG-2细胞，ELISA法检测CAT表达量。结果： 油酸、亚油酸诱导下HepG-2细胞PAI-1mRNA表达及蛋白活性显著高于对照组；共转染过氧化体增殖物激活型受体表达质粒（PPARα-pSG5）PAI-1转录活性显著增加；转染NF-κB样蛋白结合序列缺失的重组质粒，亚油酸诱导下PAI-1转录活性显著增加，而转染VLDL/脂肪酸反应元件缺失的重组质粒则无显著变化。结论： 不饱和脂肪酸增强HepG-2细胞PAI-1 mRNA表达及活性；PPARα可能是其上调PAI-1表达所涉及的转录因子之一，且VLDL/脂肪酸反应元件在该调控中具有重要作用，但可能并不涉及NF-κB信号转导途径。     

葆盛口服液对人肝癌HepG-2细胞株生长和凋亡的影响

目的研究观察复方中药提取物(葆盛口服液)在体外对肝癌HepG-2细胞株生长和凋亡的作用及机制。方法以人肝癌HepG-2细胞株为研究对象,用MTT法检测葆盛口服液对肿瘤细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞调亡以及凋亡基因Fas的表达情况,以顺铂为对照组,比较葆盛口服液与顺铂的疗效。结果葆盛口服液对Hela细胞有较强的体外增殖抑制作用,流式细胞术发现葆盛口服液能促进Fas表达,诱导HepG-2细胞凋亡。结论葆盛口服液通过阻滞肿瘤细胞的生长及诱导细胞凋亡等机制,对肝癌细胞增殖有一定的抑制作用。