补肾生血法对慢性再障患者表达整合素αLβ2/CD 11a水平影响的研究

目的:探讨补肾生血法对慢性再生障碍性贫血(简称慢性再障,CAA)患者粘附分子αLβ2/CD 11a表达水平的影响.方法:将60例慢性再障患者随机分为实验组和对照组,分别给予补髓生血颗粒和康力龙,采用RT-PCR方法检测αLβ2/CD 11a和的mRNA表达,流式细胞术(FCM)检测骨髓造血干祖细胞αLβ2/CD 11a的表达水平.结果:CAA患者造血细胞αLβ2/CD 11a表达异常,补髓生血颗粒剂对造血细胞αLβ2/CD 11a的表达水平有调节作用,与康力龙组比较无显著差异.结论:CAA可能存在造血干祖细胞与骨髓微环境功能缺陷,骨髓造血干祖细胞粘附分子水平异常导致其与骨髓基质细胞间的粘附功能降低,从而影响造血,所以调节骨髓造血千祖细胞粘附分子的表达,改善骨髓造血干祖细胞与骨髓基质细胞/细胞外基质间的粘附功能从而促进骨髓造血功能恢复可能是补髓生血颗粒治疗CAA的作用机理之一.     

补肾生血法对慢性再障患者表达α5β1／CD49e水平影响的研究

目的:探讨补肾生血法对慢性再生障碍性贫血(简称慢性再障,CAA)患者α5β1/CD49e表达水平的影响.方法:将60例慢性再障患者随机分为实验组和对照组,分别给予补髓生血颗粒和康力龙,采用逆转录,聚合酶链反应(RT-PCR)检测α5β1/CD49e的mRr NA表达,流式细胞术(FcM)检测骨髓造血干/祖细胞α5β1/CD49e的表达水平.结果:CAA骨髓单个核细胞整合素α5β1/CD49e mRNA及骨髓造血干/祖细胞α5β1/CD49e呈低表达状态,补肾中药补髓生血颗粒能促进其表达,与有效药物康力龙比较无显著差异(P>0.05).结论:CAA可能存在骨髓微环境功能缺陷,调节骨髓造血干/祖细胞粘附分子的表达,改善骨髓造血干/祖细胞与骨髓基质细胞/细胞外基质问的粘附功能,从而促进骨髓造血功能恢复可能是补髓生血颗粒治疗CAA的作用理之一.     

海马生髓丸对复发性流产的免疫调节作用研究

以祖国传统医学“肾主生殖”为理论指导，以补肾为主的海马生髓丸治疗原因不明的复发性流产取得很好疗效。目的：从免疫学因素为出发点，研究海马生髓丸对不明原因的复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion URSA)的治疗机制以及该病的发病机理。方法：应用海马生艇丸治疗不明原因的复发性流产32例，妊娠成功率达40.6％。对部分患者治疗前后外周血清CD3、CD4及CD4／CD8、IL-2、TNF-α、IL-10水平进行观察。结果：治疗后CD4、CD4／CD8、IL-2、TNF-α、IL-10水平与正常对照组相比，无显著差异。结论：URSA的发病机理可能与母体免疫平衡失调，排斥作用增强，使辅助性T细胞TH1／TH2平衡向TH1型免疫应答转换有关，海马生髓丸对该病患者的免疫异常有良好的调节作用。     

雷公藤甲素对Ⅱ型胶原诱导性关节炎小鼠免疫功能的影响

目的研究雷公藤甲素对CIA小鼠免疫功能的影响.方法分离和培养原代小鼠脾T、B淋巴细胞测定细胞增殖活性(MTT法);流式细胞技术(FCM)检测外周血中CD4 、CD8 T细胞亚群含量;放射免疫分析法(RIA)测定脾细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量.结果雷公藤甲素能抑制ConA、LPS诱导刺激的脾T、B淋巴细胞增殖活性;抑制CD3 、CD4 T细胞和降低CD4 /CD8 比值,但对CD8 T细胞有增强作用;降低脾细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6水平.结论雷公藤甲素能抑制CIA小鼠的免疫功能,其作用机制可能是通过调节CD4 /CD8 比值平衡失调、抑制T、B细胞的增殖活性和内源性细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6的水平而实现的.     

海马生髓丸对复发性流产的免疫调节作用研究

以祖国传统医学“肾主生殖”为理论指导 ,以补肾为主的海马生髓丸治疗原因不明的复发性流产取得很好疗效。目的 :从免疫学因素为出发点 ,研究海马生髓丸对不明原因的复发性流产 (unexplainedrecurrentspon taneousabortionURSA)的治疗机制以及该病的发病机理。方法 :应用海马生髓丸治疗不明原因的复发性流产 32例 ,妊娠成功率达 4 0 .6 %。对部分患者治疗前后外周血清CD3 、CD4及CD4/CD8、IL - 2、TNF -α、IL - 10水平进行观察。结果 :治疗后CD4、CD4/CD8、IL - 2、TNF -α、IL - 10水平与正常对照组相比 ,无显著差异。结论 :URSA的发病机理可能与母体免疫平衡失调 ,排斥作用增强 ,使辅助性T细胞TH1/TH2 平衡向TH1型免疫应答转换有关 ,海马生髓丸对该病患者的免疫异常有良好的调节作用。     

益血生髓颗粒对苯试剂诱导的再生障碍性贫血小鼠造血功能及T细胞亚群的影响

目的:研究益血生髓颗粒对苯试剂诱导的再生障碍性贫血(AA)模型小鼠造血及免疫功能的影响。方法:72只SPF级BALB/c小鼠随机分为正常对照组、AA模型组、益血生髓颗粒低剂量组(低剂量组)、益血生髓颗粒高剂量组(高剂量组)和司坦唑醇阳性药组(阳性对照组),除正常对照组其他各组小鼠注射苯和玉米油混合液2 ml/kg,每周4次,建立AA模型,正常组注射同体积玉米油,7周后,低剂量组用药1.2 g/(kg·d),高剂量组用药4.8 g/(kg·d),阳性对照药组予司坦唑醇2 mg/(kg·d),连续给药15 d后,检测血细胞(WBC、RBC、HGB、PLT)、骨髓有核细胞数(BMNC)、T淋巴细胞亚群(CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺、Th₁、Th₂)、血清白介素2(IL-2)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和HE染色骨髓病理学的变化情况。结果:与AA模型组比较,低、高剂量组和阳性对照组小鼠外周血四种血细胞数量、血清M-CSF、CD3⁺CD4⁺T和CD4⁺/CD8⁺比值升高(P<0.05),CD3⁺CD8⁺T、IL-2水平和Th₂细胞百分数降低(P<0.05),骨髓病理学显示骨髓组织增生较模型组活跃,造血细胞增多,非造血细胞减少。结论:益血生髓颗粒可通过对AA小鼠T细胞亚群的免疫调节和促进造血细胞增殖达到一定恢复造血功能的作用。     

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓单个核细胞c-kit mRNA及CD117影响的研究

目的:探讨补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者骨髓单个核细胞c-kitm RNA及CD117表达的影响。方法:分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法及流式细胞技术检测CAA病人治疗前后骨髓单个核细胞c-kitm RNA及CD117水平的变化。结果:CAA患者骨髓c-kitm RNA及其CD117表达水平高于正常对照组,治疗后二者表达水平均有不同程度下降,并且补髓生血颗粒对二者表达水平的下调程度优于再障生血片对照组(P<0.05)。结论:CAA患者骨髓c-kitm RNA及CD117的表达存在异常;补髓生血颗粒剂可能通过调节骨髓c-kitm RNA及CD117的表达来改善CAA的骨髓造血功能,促进骨髓造血功能恢复。     

益气养血法对骨髓抑制小鼠骨髓造血的促增殖作用及机制

目的:探讨益气养血法(以圣愈汤为代表方)对骨髓抑制小鼠骨髓造血的促增殖作用及机制。方法:制备小鼠骨髓抑制模型,以利血生片作为阳性对照药物,药物组分别给予圣愈汤组成中的益气药人参、黄芪(益气法)、补血药四物汤(养血法)、圣愈汤全方(益气养血法)治疗,不同时间点连续观察上述治法对骨髓有核细胞(BMNCs)计数、细胞周期、造血生长因子IL-6、IL-11、GM-CSF的影响。结果:与正常对照组相比,骨髓抑制小鼠BMNCs计数明显减少,BMNCs的细胞增殖能力明显减弱,G_0/G_1期细胞比例明显增加,S期细胞比例显著减少,骨髓造血生长因子IL-6、IL-11和GM-CSF表达明显减少。益气法、养血法、益气养血法均可提高骨髓抑制小鼠BMNCs计数,促进骨髓有核细胞由相对静止时相G_0/G_1期进入细胞增殖活跃时相S期、G_2/M期,增加骨髓造血生长因子IL-6、IL-11和GM-CSF表达,以益气养血法效果更好,并且随着用药时间的增加,疗效持续改善。结论:益气法(人参、黄芪)、养血法(四物汤)、益气养血法均可促进骨髓造血细胞增殖,其机制与促进造血生长因子的合成和分泌,进而进入细胞增殖周期有关,疗效以益气养血法更佳,提示益气法和养血法合用具有协同增效作用。     

海马生髓丸对60C0照射小鼠骨髓细胞及IL-2活性影响的实验研究

目的探讨海马生髓丸对60C0照射小鼠骨髓细胞及IL-2活性的影响.结果显示海马生髓丸可明显恢复60C0照射鼠受损伤的骨髓细胞,增强其增殖能力,同时对IL-2活性的测定有明显增强作用.     

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓造血细胞黏附作用影响的研究

目的:探讨补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anemia,CAA)患者骨髓造血细胞相关黏附分子表达水平的影响.方法:采用免疫荧光法及流式细胞技术分别对使用该颗粒治疗前后的CAA患者骨髓造血干(祖)细胞受体c-kit、CXCR4、骨髓基质细胞的淋巴细胞归巢受体(HCAM/CD44)、细胞间黏附分子(ICAM-1/CD54)表达进行检测,并与再障生血片对照组(简称对照组)及正常组做比较研究.结果:两组患者治疗前c-kit/CD117表达明显高于正常组,而CXCR4、HCAM/CD44、ICAM-1/CD54水平明显低于正常组,治疗后两组患者CXCR4、HCAM/CD44、ICAM-1/CD54表达均有所升高,并且补髓生血颗粒实验组(简称实验组)CXCR4水平优于对照组,治疗后c-kit/CD117与正常组比较无显著差异,亦优于对照组.结论:CAA患者骨髓造血干(祖)细胞受体c-kit、CXCR4、骨髓基质细胞HCAM/CD44、ICAM-1/CD54表达异常,补髓生血颗粒可能是通过提高CXCR4、HCAM/CD44、ICAM-1/CD54的表达以及降低c-kit/CD117的表达而促进骨髓造血的.     

金仙胶囊的生血作用及其机制研究

目的:探讨金仙胶囊对环磷酰胺致骨髓抑制小鼠的生血作用及其机制。方法:将小鼠分为金仙胶囊10、20、30 g/kg组及G-CSF阳性对照组、正常对照组、模型组,各组分别给予相应药物,正常对照组与模型组给予等体积溶媒。在给药第8天,除正常对照组外,各组均腹腔注射环磷酰胺100 mg/kg。末次给药后24 h,检测其外周血细胞数量及IL-1α、IL-6水平;处死小鼠,取双侧股骨,用流式细胞仪检测骨髓CD34-LSK细胞数,并计算各组CD34-LSK细胞占骨髓细胞的百分率。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠外周血WBC、PLT及血清IL-1α显著降低,而IL-6和骨髓造血干细胞CD34-LSK比例显著升高(P0.01)。金仙胶囊20、30 g/kg能显著升高模型小鼠外周血WBC、PLT及血清IL-1α水平,降低IL-6水平和骨髓造血干细胞CD34-LSK比例(P0.01)。结论:金仙胶囊对环磷酰胺致小鼠骨髓抑制具有较好的保护作用,其作用机理可能与调节血液IL-1α及IL-6水平,促进骨髓造血功能有关。     

补髓生血颗粒对慢性髓劳病患者T淋巴细胞亚群、IL-17、IL-17mRNA和RORγtmRNA影响的研究

目的:通过观察补髓生血颗粒对慢性髓劳病患者治疗前后外周血T淋巴细胞亚群、IL-17、IL-17mRNA和RORγtmRNA表达水平的变化,探讨补髓生血颗粒治疗慢性髓劳病患者免疫失衡的作用机制和疗效机理。方法:按照诊断标准收治30例慢性髓劳病患者,应用FCM检测慢性髓劳病患者治疗前后T淋巴细胞亚群(CD_4~+、CD_8~+、CD_4~+/CD_8~+)表达比例的变化,ELISA法检测慢性髓劳病患者治疗前后IL-17表达水平的变化,RT-PCR法检测慢性髓劳病患者治疗前后IL-17mRNA和RORγtmRNA表达水平的变化。结果:疗前试验组慢性髓劳病患者CD_4~+细胞比例、CD_4+/CD_8~+比值降低,CD_8~+细胞比例增高,与正常对照组相比均有显著性差异(P0.05)。疗后试验组CD_4~+细胞比例、CD_4~+/CD_8~+比值升高,CD_8~+细胞比例下降,与疗前相比均有显著性差异(P0.05);疗前试验组慢性髓劳病患者IL-17、IL-17mRNA和RORγtmRNA的表达水平均高于正常组,与正常对照组相比均有显著性差异(P0.05),疗后较疗前下降,相比均具有显著性差异(P0.05)。结论:1补髓生血颗粒通过调整异常表达的T淋巴细胞数量和比值,进而抑制亢进的细胞免疫状态,以促进骨髓造血功能的恢复;2补髓生血颗粒通过下调IL-17、IL-17mRNA和RORγtmRNA的表达水平,以恢复因免疫损伤而导致的骨髓造血功能障碍,进而促进造血干/祖细胞的增殖和分化;3补髓生血颗粒具有调整慢性髓劳病患者免疫失衡的作用,这可能是补髓生血颗粒治疗慢性髓劳病的作用机制之一。     

生血丸促进骨髓抑制小鼠造血功能的机制研究

目的通过观察骨骼抑制小鼠外周血网织红细胞、造血祖/干细胞集落产率的变化,探讨生血丸对60Co合并环磷酰胺致骨髓抑制小鼠的促进造血功能的作用机制。方法雄性BalB/C小鼠随机分为对照组、模型组、生血丸组、重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)阳性对照组,除对照组外,其他3组小鼠以60Co合并环磷酰胺制备骨髓抑制模型后24 h开始给药,生血丸组每天ig 10 g/kg的生血丸1 mL,对照组和模型组ig等体积生理盐水,阳性对照组ip GM-CSF 12 5μg/kg,连续给药7 d。进行网织红细胞计数,造血干祖细胞培养术计数集落产率。结果与模型组相比,生血丸组、阳性对照组均能明显改善骨髓抑制小鼠外周血网织红细胞的计数(P<0.05),生血丸组网织红细胞的形态接近对照组;生血丸组及阳性对照组大鼠各系祖细胞集落产率均得到改善,且两组间比较无显著差异(P>0.05)。结论生血丸能提高骨髓抑制小鼠外周血网织红细胞计数,改善各系造血祖细胞集落产率,可能为生血丸促进骨髓抑制小鼠造血功能的部分机制。     

益髓理血饮对二甲基苯蒽诱导骨髓增生异常综合征模型大鼠骨髓病态造血的影响及机制

目的:探讨中药复方益髓理血饮对二甲基苯蒽(DMBA)诱导的骨髓增生异常综合征(MDS)模型大鼠骨髓病态造血的改善作用及其机制。方法:将清洁级雄性SD大鼠分为正常对照组、模型组、复方皂矾丸阳性组及益髓理血饮低、高剂量组,每组12只。用DMBA诱导建立大鼠MDS模型,于造模第14天开始分组给药,连续30 d。给药后第31天处死各组大鼠,检测各组大鼠骨髓增生程度、病态造血,血清IL-3、TNF-α含量,股骨CD34表达及原始细胞所占比。结果:与正常对照组比较,模型组骨髓增生程度和骨髓病态造血明显,各给药组骨髓增生和病态造血明显改善;模型组血清IL-3含量显著降低(P0.01),TNF-α含量显著升高(P0.01),治疗后各给药组IL-3含量显著升高(P0.05),TNF-α含量降低(P0.05);模型组股骨CD34及髓CD45阳性表达(P0.01),治疗后股骨CD34表达和原始细胞比例均显著降低(P0.05)。以上改善均以高剂量组最为明显。结论:益髓理血饮治疗骨髓增生异常综合征能改善骨髓增生程度和病态造血,升高血清IL-3含量,降低血清TNF-α含量,减少股骨CD34阳性表达,降低股骨原始细胞比例。     

滋肾生血胶囊治疗急性髓系白血病的疗效机制研究

目的:观察滋肾生血胶囊(熟地、首乌、桑椹、枸杞、当归、白芍等)对急性髓系白血病(AML)化疗后造血及免疫功能的影响。方法:按照随机对照原则,将患者分为空白组、对照组和治疗组。观察患者外周血中白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)和中性粒细胞绝对值(NE#)计数,外周血T淋巴细胞亚群及活化水平,细胞因子IL-3、GM-CSF等指标的变化。结果:治疗组治疗后外周血白细胞(WBC)、IL-3、CD3+、CD4+HLA-DR+细胞及CD4+HLA-DR+/CD8+HLA-DR+比值高于空白组(P0.05),而GM-CSF低于空白组(P0.05)。结论:滋肾生血胶囊可以促进患者化疗后骨髓造血恢复,提高机体免疫功能,并增强化疗效果。     

凉血解毒汤对再障小鼠骨髓免疫紊乱的调控

目的:观察再障小鼠骨髓免疫功能及造血负调控因子的变化,及凉血解毒汤的影响。方法:用物理化学复合法复制再障小鼠模型,并给予凉血解毒汤,测小鼠外周血象,骨髓造血干细胞和T细胞凋亡的情况,及骨髓造血负调控因子IFN-γ、TNF-α、IL-2水平。结果:再障小鼠外周血三系减少,网织红细胞下降,骨髓T细胞比例增加,凋亡减少,而造血干细胞比例减少,凋亡增加。凉血解毒汤能在一定程度上促进骨髓T细胞的凋亡,从而减少骨髓造血负调控因子的分泌,抑制造血干细胞的凋亡,促进外周血象及网织红细胞的恢复。结论:凉血解毒汤能有效地改善再障小鼠骨髓T细胞与造血干细胞凋亡失衡的状况,降低造血负调控因子的水平,从实验角度直接说明了热毒与细胞免疫亢进相关。     

补髓生血颗粒对慢性再障患者VLA-4/CD49d及c-kit/CD117的影响

目的:探讨慢性再生障碍性贫血(Chronic Aplastic Anemia,CAA)的发病机制与骨髓单个核细胞粘附作用的相关性.方法:将60例CAA患者按单盲法分为补髓生血颗粒实验组和再障生血片对照组,采用流式细胞术分析了CAA患者治疗前后骨髓单个核细胞VLA-4/CD49d、c-kit/CD117表达水平的变化.结果:CAA患者骨髓单个核细胞VLA-4/CD49d的表达低于正常水平,而c-kit/CD117高于正常水平;补髓生血颗粒对VLA-4/CD49d及c-kit/CD117的表达水平均有调节作用,且优于对照组.     

鳖甲煎丸对肝癌荷瘤小鼠细胞免疫功能的干预作用

目的:观察鳖甲煎丸对肝癌荷瘤小鼠肿瘤细胞免疫功能的影响。方法:将50只小鼠分成实验组和正常组,对实验组小鼠进行肝癌荷瘤小鼠造模后,分为模型组和鳖甲煎丸高、中、低剂量组,连续灌胃给药15d。流式细胞仪对荷瘤小鼠外周血中CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和CD4+T/CD8+T进行测定;采用ELISA法检测荷瘤小鼠外周血中白细胞介素-2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的水平。结果:鳖甲煎丸可使荷瘤小鼠外周血中CD4+T淋巴细胞显著增加(P0.01),CD8+T淋巴细胞亚群的比例显著下降(P0.01),CD4+T/CD8+T升高显著(P0.01);同时,鳖甲煎丸还可以提高肝癌荷瘤小鼠血清IFN-γ水平(P0.01)和血清IL-2水平(P0.01)。结论:鳖甲煎丸抑制肝癌生长的作用可能是通过提高肝癌荷瘤小鼠外周血中CD4+T细胞亚群的比例和降低CD8+T细胞亚群的比例,来纠正CD4+T/CD8+T的失衡,改变Th1/Th2漂移现象,维持Th1功能亚群的优势来实现的。     

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓单个核细胞粘附分子VLA-6/CD49f水平影响的研究

目的：探讨补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血（简称慢性再障,ChronicAplasticAnemiaCAA）患者的整合素VLA亚家族粘附分子VLA-6/CD49f表达水平的影响。方法：将45例慢性再障患者随机分为补髓生血颗粒组（试验组）和再障生血片组（对照组）,采用流式细胞术（FCM）检测试验组和对照组慢性再障患者治疗前后骨髓单个核细胞相关整合素VLA亚家族粘附分子VLA-6/CD49f的抗原表达水平并进行比较分析,并与10例正常人进行比较。结果：CAA患者骨髓单个核细胞粘附分子VLA-6/CD49f处于低表达状态,疗后表达水平升高,且补髓生血颗粒对VLA-6/CD49f表达的调整程度优于再障生血片组,且肾阳虚与肾阴虚患者疗后VLA-5/CD49f表达有显著差异。结论：慢性再障患者骨髓单个核细胞粘附分子VLA-6/CD49f表达水平异常,它可能参与了CAA的造血调控,补髓生血颗粒可以通过调节骨髓细胞粘附分子表达水平来改善CAA的骨髓造血功能,是治疗CAA的有效药物。     

补肾化痰活血法促进再生障碍性贫血小鼠骨髓基质细胞黏附分子表达的影响

目的:观察和比较补肾化痰活血中药对再生障碍性贫血小鼠骨髓基质细胞黏附分子VCAM-1(CD106)、HCAM(CD44)、PECAM-1(CD31)表达的影响.方法:建立再障小鼠模型,各组小鼠分别胃饲生理盐水、补肾化痰活血中药、康力龙和再障生血片,连续喂养14d后,采集骨髓进行骨髓基质细胞培养,应用流式细胞仪检测骨髓基质细胞黏附分子表达水平.结果:模型组小鼠骨髓基质细胞黏附分子CD106、CD44、CD31表达水平均低于正常对照组,治疗后各组小鼠骨髓基质细胞黏附分子CD106、CD44、CD31表达水平均明显提高,差异均有显著性,补肾化痰活血疗效最优.结论:补肾化痰活血中药可能通过提高再障小鼠骨髓基质细胞黏附分子CD106、CD31、CD44表达水平,从而增强造血细胞黏附定位于发育的骨髓微环境,改善骨髓造血功能.