纤维粘连蛋白影响成骨细胞增殖和Ⅰ型胶原表达的研究

目的探讨纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)对成骨细胞增殖和表达Ⅰ型胶原的影响,明确FN促进成骨细胞成骨功能的作用。方法体外原代培养大鼠成骨细胞,加入一定浓度的FN作用细胞,采用MTT法检测成骨细胞的增殖率,并利用免疫组化方法观察成骨细胞表达Ⅰ型胶原的变化,SPSS10.0统计软件进行数据分析。结果FN作用成骨细胞后,能够明显提高细胞的增殖率,细胞增殖率的差异变化有统计学意义(P<0.05),并且其作用具有剂量依赖性。以50μg/ml浓度的FN作用细胞48h,细胞表达Ⅰ型胶原的能力比空白对照组相比有显著提高。结论FN能够促进成骨细胞的增殖,并能诱导成骨细胞Ⅰ型胶原的表达。     

人牙囊细胞的培养及其特性

目的：体外培养人牙囊细胞并研究其特性。方法：取年龄为12岁人埋藏阻生第三磨牙的牙囊，组织块法进行人牙囊细胞的培养，HE染色、扫描电镜观察人牙囊细胞的形态，免疫组织化学染色技术观察I型胶原及波形蛋白在牙囊细胞中的表达及定位。结果：培养的人牙囊细胞呈梭形、卵圆形及多角形，形似成纤维细胞；扫描电镜可见细胞多呈梭形，也可见多角形，所有细胞表面均有颗粒状物质，有的细胞表面多且密，有的细胞表面较少，折光性较强，细胞核周围分布较多；在牙囊细胞中I型胶原和波形蛋白的表达呈阳性，定位于细胞的胞质中，围绕细胞核周围染色较强，细胞核内染色阴性。结论：体外可以培养人牙囊细胞，人牙囊细胞具有成纤维细胞的特性，具有合成I型胶原的能力。     

牛血浆粘连蛋白对培养的人牙髓成纤维细胞FN和Ⅲ型胶原表达的影响

观察了不同浓度牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＮ）对培养的人牙髓成纤维细胞Ⅲ型胶原、ＦＮ表达的影响；用图象分析仪对染色强弱进行相对定量分析，ＦＮ（１０、２０μｇ／ｍｌ）组的人牙髓细胞Ⅲ型胶原表达最强，ＦＮ（４０，８０μｇ／ｍｌ）组的人牙髓细胞ＦＮ表达最强，说明ＦＮ的不同浓度影响了培养的人牙髓成纤维细胞的功能，ＥＬＩＳＡ测定结果可做为图象分析的参考与补充。     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞形成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的影响

目的:观察釉基质蛋白对体外培养的人牙周膜细胞形成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的影响.方法:改良组织块法培养人牙周膜细胞,免疫细胞化学方法和图像分析方法观察细胞形成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的能力.结果:50、100、200 mg/L的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原,其中,以100 mg/L釉基质蛋白的促Ⅰ型胶原合成作用最明显,50 mg/L釉基质蛋白的促Ⅲ型胶原合成作用最明显.但是,这种促进作用有一定的时间性.结论:一定浓度的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞形成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原.     

五倍子水提取物对人牙髓细胞Ⅰ型胶原合成的影响

目的:观察五倍子水提取物对人牙髓细胞Ⅰ型胶原合成的影响。方法:取第6代体外培养的人牙髓细胞分别与终末浓度为5、10μg/m L的五倍子水提取物共同培养3 d后,采用免疫组化染色法观察人牙髓细胞中Ⅰ型胶原的表达情况,并用HPIAS-1000图像分析系统进行定量分析。结果:对照组和不同浓度五倍子水提取物作用的实验组人牙髓细胞中均有Ⅰ型胶原的表达,其免疫反应物质多定位于胞浆。人牙髓细胞经5、10μg/m L浓度的五倍子水提取物作用后,其Ⅰ型胶原的表达水平均明显增高,其中以10μg/m L组的增高程度最大,各组间两两相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:5、10μg/m L五倍子水提取物均能明显促进人牙髓细胞中Ⅰ型胶原的表达;提示其具有促进牙髓细胞向成牙本质细胞分化的作用。     

牛血浆纤维粘连蛋白对培养的人牙髓细胞ConA、WGA、SBA凝集素受体表达的影响

本文观察了不同浓度牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＮ）和人工合成肽（ＲＧＤＳ．４０μｇ／ｍｌ）对人牙髓成纤维细胞ＣｏｎＡ、ＷＧＡ、ＳＢＡ凝集素受体的影响，培养液中ＦＮ的浓度分别为１０、２０、４０、８０μｇ／ｍｌ，ＲＧＤＳ的浓度为４０μｇ／ｍｌ．凝集素受体的表达情况通过图象分析仪进行半定量分析，培养的人牙髓细胞不表达ＳＢＡ受体，ＦＮ（４０、８０μｇ／ｍｌ）可显著地使人牙髓细胞ＣｏｎＡ受体表达增强，而ＷＧＡ的受体表达减弱，ＲＧＤＳ（４０μｇ／ｍｌ）组的细胞ＷＧＡ的受体表达弱于ＦＮ（１０、２０μｇ／ｍｌ）组。     

氟对体外培养人牙乳头细胞分泌I型胶原的影响

目的　了解氟对体外培养人牙乳头细胞分泌I型胶原的影响。方法　对人牙乳头细胞体外培养 ,分别给予 0 .0 g/L、0 .2× 10 -6g/L、1.0× 10 6g/L、5 .0× 10 6g/L、2 5 .0× 10 -6g/L氟处理 ,采用Westernblot方法分析氟对细胞培养外I型胶原的影响。结果　体外培养的人牙乳头细胞合成Ⅰ型胶原可以分泌Ⅰ型胶原。 0 .0g/L、0 .2× 10 -6g/L、1.0× 10 6g/L、5 .0× 10 6g/L氟对细胞外Ⅰ型胶原量无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;2 5 .0× 10 -6g/L氟处理组细胞外I型胶原量较其它组高 (P <0 .0 5 )。结论　过量氟可能抑制细胞外I型胶原降解     

体外培养人牙囊细胞的生物学特性

目的 研究体外培养的人牙囊细胞的生物学特性.方法 分离18岁人埋伏阻生下颌第三磨牙的牙囊,组织块法进行人牙囊细胞的培养,取不同代数细胞行HE染色观察细胞形态,MTS四唑盐比色法检测细胞增殖活性,茜素红染色定量分析成骨能力.结果 第9代细胞面积比第3代、第6代细胞面积显著增大(P＜0.05);第3、6、9代细胞增殖活性两两比较,差异有统计学意义(P＜0.05);第3代细胞成骨能力明显强于第6代细胞(P＜0.05).结论 随着体外培养代数的增加,人牙囊细胞生物学特征发生明显变化,面积逐渐增大,增殖活性逐渐变缓,成骨分化潜力逐渐减弱.     

牛血浆纤维粘连蛋白对人牙髓成纤维细胞增殖,DNA合成,细胞…

采用四唑盐比色法（ＭＴＴ）、３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验、细胞大小测定的图象分析等方法，观察不同浓度牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＮ）和人工合成肽段（ＲＧＤＳ，４０ｕｇ／ｍｌ）对外培养的人牙髓细胞的影响。ＦＮ（２０、４０ｕｇ／ｍｌ）可促进牙髓成纤维细胞增殖、刺激细胞ＤＮＡ合成，ＦＮ（１０、８０ｕｇ／ｍｌ）、ＲＧＤＳ（４０ｕｇ／ｍｌ）和空白组成对牙髓细胞无上述效应。４种浓度ＦＮ和ＲＧＤＳ（４０ｕｇ／ｍｌ）均使牙髓细     

人牙囊细胞的体外分离、培养及表型鉴定

目的 :建立人牙囊细胞 (dentalfolliclecells ,DFCs)的体外培养方法 ,为牙周组织工程研究提供可靠的种子细胞来源。方法 :分离人 8月龄胚胎下颌磨牙牙胚 ,胰酶消化后分离牙囊组织 ,采用胶原酶消化法和组织块法相结合原代培养人牙囊细胞 ,利用牙囊细胞和上皮根鞘细胞对胰酶的耐受性差别分离纯化 ,通过倒置显微镜及HE染色观察细胞形态及生长状况、透射电镜观察细胞的超微结构 ;采用免疫组化波形丝蛋白 (vimemtin ,Vim)、角蛋白(cytokeration ,CK)、Ⅰ型胶原 (typeⅠcollagen ,ColⅠ )、Ⅲ型胶原 (typeⅢcollagen ,ColⅢ )、纤维连接蛋白 (fibronectin ,FN)和早期矿化相关的标志骨桥蛋白 (osteopontin ,OPN)、骨涎蛋白 (bonesialapretion ,BSP)的表达情况对细胞做表型鉴定。结果 :原代培养的人牙囊细胞生长良好 ,但其中混有少量上皮根鞘细胞 ,经传代可完全分离 ,传至 11代仍保持原有活力 ;牙囊细胞为长梭型 ,成纤维样 ;电镜下见细胞核浆比例大 ,核仁明显 ,含有溶酶体、大量的粗面内质网和发达的高尔基体 ,含有大量的中间丝。电镜结果显示细胞代谢旺盛 ,增殖活性高 ,含有牙囊细胞特有的高密度电子颗粒 ,免疫组化Vim、ColⅠ、ColⅢ、FN、OPN、BSP呈阳性着色 ,抗角蛋白呈阴性着色。结论 :本实验培养的是牙囊细     

牛血浆纤维粘连蛋白对培养的人牙髓细胞增殖,表型的影响

目的：将传代的人牙髓细胞培养于加入１０％ＦＣＳ的ＤＭＥＭ液中，其中含５０μｇ／ｍｇＬ－ＶｉｔＣ、１０ｍｍｏｌ／Ｌβ－磷酸甘油钠，观察牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＮ，２０μｇ／ｍｌ）对细胞的增殖、表型的影响。方法：细胞培养，免疫组化染色，扫描电镜。结果：ＦＮ（２０μｇ／ｍｌ）在细胞增殖期可促进细胞增殖，但在静止期则无明显的促增殖作用，也不能改变细胞的形态、生长方式；两组细胞的ＣｏｎＡ、ＷＧＡ凝集素受体的表达也无差异。扫描电镜证实：两组细胞表面光滑。结论：ＦＮ（２０μｇ／ｍｌ）可促进含１０％ＦＣＳ的ＤＭＥＭ液中的人牙髓细胞的增殖，但不影响其表型。     

牛血浆纤维粘连蛋白对人牙髓成纤维细胞增殖、DNA合成、细胞形态的影响

采用四唑盐比色法（ＭＴＴ）、３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验、细胞大小测定的图象分析等方法，观察不同浓度牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＭ）和人工合成肽段（ＲＧＤＳ，４０μｇ／ｍｌ）对体外培养的人牙髓细胞的影响。ＦＮ（２０、４０μｇ／ｍｌ）可促进牙髓成纤维细胞增殖、刺激细胞ＤＮＡ合成，ＦＮ（１０、８０μｇ／ｍｌ）、ＲＧＤＳ（４０μｇ／ｍｌ）和空白组对牙髓细胞无上述效应。４种浓度ＦＮ和ＲＧＤＳ（４０μｇ／ｍｌ）均使牙髓细胞处于伸展状态，支持细胞的粘附。说明ＦＮ可促进牙髓细胞增殖，并可通过整合素受体调节细胞与基质之间的联系。     

人牙囊细胞与胶原凝胶复合煅烧骨三维培养的实验研究

目的:建立人牙囊细胞(dentalfolliclecells,DFCs)的体外三维立体培养模型。方法:取第4代DFCs分别 接种于煅烧骨(sinteredbovinebone,SBB)(A组)、胶原凝胶(B组)、胶原复合煅烧骨三维支架上(C组),并以二维 培养的DFCs(D组)作对照,1周、2周取材,扫描电镜观察细胞形态以及与材料的贴附情况,细胞计数观察细胞在 材料上的增殖情况,组织化学方法检测DFCs的碱性磷酸酶(ALP)活性。结果:扫描电镜见A组、B组和C组细胞 均完全伸展,但C组细胞数量明显增多,细胞外基质分泌增加,优于A组、B组和对照组D组,而对照组细胞在二维 培养条件下复层生长呈膜状结构,膜表面部分细胞脱落死亡,细胞外基质分泌较实验组少。A组与C组的ALP活 性无差异(P>0.05),但显著高于对照组B组和对照组(P<0.05)。1周时3组细胞Ⅰ型胶原合成情况无明显差 异,但2周时C组细胞的Ⅰ型胶原平均灰度值明显高于其他2组(P<0.01)。结论:A、B、C组对DFCs的贴附、增 殖,分化均有影响,但C组作支架最优。胶原凝胶与煅烧骨的复合支架更有利于牙囊细胞的增殖贴附和分化。     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原的影响

目的：观察釉基质蛋白对体外培养的人牙周膜细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原的影响。方法：改良组织块法培养人牙周膜细胞，免疫细胞化学方法和图像分析方法观察细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原的能力。结果：50、100、200mg/L的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞合成I、Ⅲ型胶原，其中，以100mg/L釉基质蛋白的促I型胶原合成作用最明显，50mg/L釉基质蛋白的促Ⅲ型胶原合成作用最明显。但是，这种促进作用有一定的时间性。结论：一定浓度的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原。     

人牙囊细胞的分离培养和生物学特性

目的：应用酶消化法体外培养人牙囊细胞并研究其生物学特性。方法：分离合法引产人胚胎乳牙胚的牙囊组织，消化法获得人牙囊细胞，HE染色观察细胞形态、免疫组织化学染色技术检测波形丝蛋白、Ⅰ型胶原表达，RT—PCR检测细胞的骨钙素、骨涎蛋白、碱性磷酸酶的表达。结果：原代培养的人牙囊细胞呈成纤维细胞形态，有部分一上皮成分混杂，经纯化后可排除；在牙囊细胞中Ⅰ型胶原和波形丝蛋白的表达呈阳性，定位于细胞的胞质中；RT—PCR结果显示骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶表达。结论：体外培养的人牙囊细胞具有成纤维细胞的特性，具有合成Ⅰ型胶原的能力；不同程度表达Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎蛋白、碱性磷酸酶等矿化相关蛋白。     

bFGF对体外培养人牙囊细胞VEGF表达的影响

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外培养人牙囊细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法：选取生长状态良好的人牙囊细胞,与10ng／mlbFGF孵育不同时间后,采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）及酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测人牙囊细胞VEGFmRNA表达及上清液中VEGF蛋白分泌变化。结果：bFGF作用1、3、6、12h后人牙囊细胞VEGFmRNA表达均较0h组显著增强（p〈0．01）,其中bFGF作用6h后VEGFmRNA表达最强;细胞培养上清液中VEGF蛋白分泌量随时间延长逐渐增加,但bFGF处理组VEGF蛋白分泌量高于对照组（p〈0．01）。结论：bFGF能够促进体外培养人牙囊细胞VEGF的表达。     

机械拉伸对人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原及蛋白合成的影响

目的：研究拉伸应变对人牙周膜成纤维细胞I型胶原及蛋白合成的影响。方法：应用酶联免疫吸附实验及考马斯亮蓝微板法对拉伸应变下的细胞合成代谢变化进行观察,应变范围为1－8％,结果：在0．5－8％拉伸应变范围内,人牙周膜成纤维细胞I型胶原合成无明显变化,但1－8％拉伸应变作用下细胞蛋白合成减少,其中2％拉伸应变影响最明显。结论：拉伸应变可改变人牙周膜成纤维细胞细胞外基质成分。     

口腔鳞癌IV型胶原和层粘连蛋白的表达与颈淋巴结转移的关系

目的 探讨口腔鳞癌ＩＶ型胶原（ｃｏｌ ＩＶ）和层粘连蛋白（ＬＮ）的表达及其与临床病理参数的关系。方法 应用免疫组化ＳＡＢＣ法检测了３０例口腔鳞癌组织和５例人正常口腔膜组ＣｏｌⅣ和ＬＮ的表达,并用病理图像分析软件定量分析了两者的表达程度;对ＣｏｌⅣ和ＬＮ的表达与临床病理参数的关系进行了统计学分析。结果 ＣｏｌⅣ和ＬＮ的表达部位相同,主要分布于口腔粘膜和鳞癌组织基底膜;正常粘膜ＣｏｌⅣ和ＬＮ表达完整连