病毒蛋白22增强单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦基因治疗系统杀伤卵巢癌细胞的体内研究

目的　探讨病毒蛋白 2 2 (VP2 2 )的细胞间传递作用 ,以及其促进单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV TK ) 更昔洛韦 (GCV)基因治疗系统对卵巢癌移植瘤细胞的体内杀伤效应。方法　用慢病毒感染卵巢癌 3AO细胞 ,形成携带HSV TK基因的 3AO细胞 (3AO TK)及携带HSV VP2 2 TK融合基因的3AO细胞 (3AO VP2 2 TK)。分别在裸鼠皮下接种 10 %含卵巢癌 3AO TK(3AO TK组 )或 3AO VP2 2 TK(3AO VP2 2 TK组 )的混合细胞 ,并以接种单纯 3AO细胞裸鼠为对照 (3AO组 ) ,每组裸鼠 10只。当肿瘤体积达 15 0mm3后 ,分别于腹腔注射GCV 10mg kg、5 0mg kg。结果　注射 10mg kgGCV后 ,3AO TK组与 3AO VP2 2 TK组肿瘤体积、重量比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1) ,3AO VP2 2 TK组肿瘤生长明显受到抑制 ;注射 5 0mg kgGCV后 ,两组肿瘤体积、重量比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。注射GCV 10mg kg后 ,3AO TK组肿瘤抑制率为 37 7% ,3AO VP2 2 TK组肿瘤抑制率为 91 5 % ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1) ;注射GCV 5 0mg kg后 ,3AO TK组肿瘤抑制率为 81 8% ,3AO VP2 2 TK组肿瘤抑制率为 96 7% ,两组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　VP2 2介导的自杀基因产物细胞间扩散作用 ,可明显加强对体内肿瘤细胞的杀伤效应。     

沙立度胺对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤血管生成的影响

目的　探讨沙立度胺(Thd;商品名:反应停)对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长及血管生成的影响。方法　建立 15只人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成 3组: (1)Thd组:腹腔内注射Thd(200mg·kg-1·d-1,浓度为 62 5mg/L); (2 )Thd+环磷酰胺 (CTX)组:按上述Thd剂量,加入浓度为 100mg/L的CTX(100mg·kg-1·d-1 ),腹腔内注射; (3)生理盐水组:腹腔内注射 0 2ml生理盐水。观察各组裸鼠皮下移植瘤生长情况、裸鼠体重的变化,并采用RT PCR、酶联免疫吸附法、及Picture二步免疫组化法检测各组瘤组织中血管内皮生长因子 (VEGF)mRNA、外周血中VEGF含量及瘤组织中微血管密度(MVD)。结果　 ( 1 )Thd组、Thd+CTX组皮下移植瘤体积明显小于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)Thd组瘤组织中VEGFmRNA为 55±9,血中VEGF含量为(29±10)pg/ml;Thd+CTX组瘤组织中VEGFmRNA为 26±7,血中VEGF含量为(12 ±6)pg/ml;生理盐水组瘤组织中VEGFmRNA为 79±7,血中VEGF含量为(71±16)pg/ml。Thd组、Thd+CTX组瘤组织中VEGFmRNA和血中VEGF含量分别与生理盐水组比较,差异均有统计学意义 (P<0.01)。(3)Thd组MVD计数为 (12.6±3.3)条,Thd+CTX组为 (10.6±1.9)条,均明显低于生理盐水组的(19 3±2 8)条(P<0 01)。结论　Thd有抗卵巢癌皮下移植瘤血     

HSV-TK/GCV系统在难治性卵巢癌裸鼠移植瘤模型中的实验研究

目的:建立人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠模型,用HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗模型动物,观察疗效及协同因素。方法:常规培养携带HSV-TK基因的重组逆转录病毒包装细胞PA317,测定病毒滴度。在移植瘤内多点注射包装细胞,观察GCV、ATRA、TPT对移植肿瘤独立及协同治疗后的肿瘤体积变化。治疗结束后分析移植肿瘤组织病理,PCR检测TK基因在NIH3T3细胞及移植肿瘤组织的转导。结果:人卵巢癌标本裸鼠原代移植成功率16.7%,鼠间传代移植成功率89.7%;重组逆转录病毒滴度为6×104cfu/ml;HSV-TK/GCV系统或TPT治疗后肿瘤生长受到抑制(P<0.05),两者联合治疗后,抑制更明显(P<0.05);ATRA灌胃未显示独立或协同治疗作用(P>0.05);HSV-TK/GCV组、TPT组及两者联合组有明显的治疗反应;PCR检测证实,TK基因在NIH3T3细胞及肿瘤组织中的转导。结论:HSV-TK/GCV系统及TPT对人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠有单独及协同治疗作用,全反式维甲酸灌胃对人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠疗效不明显。     

促性腺激素释放激素类似物抑制裸鼠卵巢癌移植瘤生长同时保护化疗后卵巢功能的研究

目的 研究促性腺激素释放激素( GnRH)类似物抑制卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长,同时保护化疗裸鼠卵巢功能的双重作用.方法 构建卵巢癌ES-2细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为6组(每组6只):(1)生理盐水(NS)组:皮下注射NS 0.1ml/d,1周后腹腔注射NS 0.2ml/周;(2)顺铂(DDP)组:皮下注射NS 0.1ml/d,1周后每周腹腔注射5 mg/kg DDP;(3)戈舍瑞林(goserelin)组:皮下注射goserelin 100 μg/d,1周后腹腔注射NS0.2 ml/周;(4) goserelin+ DDP组:皮下注射goserelin 100 μg/d,1周后每周腹腔注射5 mg/kg DDP;(5)西曲瑞克(cetrorelix)组:皮下注射cetrorelix 100 μg/d,1周后腹腔注射NS0.2 ml/周;(6) cetrorelix+ DDP组:皮下注射cetrorelix 100 μg/d,1周后每周腹腔注射5 mg/kg DDP.用药21 d,观察29 d.比较各组裸鼠体质量、移植瘤体积、移植瘤组织中细胞增殖相关核抗原Ki-67的阳性率、动情周期、卵巢各级卵泡比例、血清抗苗勒管激素(AMH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇、孕酮水平的差异.结果 各组裸鼠体质量无明显差异(P＞0.05),用药第29天NS组为(19.8 ±2.2)g,DDP组(20.5±1.4)g,gosereline组(19.6±0.9)g,goserelin+DDP组(19.7±1.6)g,cetrorelix组(20.7±2.2)g,cetrorelix+ DDP组(19.0±1.7)g,分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).用药第12天裸鼠移植瘤体积:NS组为(241±179) mm3,DDP组(78±20) mm3,gosereline组(78±55) mm3,goserelin+ DDP组(64±48) mm3,cetrorelix组(78±64) mm3,cetrorelix+ DDP组(70±19) mm3,用药组均明显小于NS组,差异有统计学意义(P＜0.05);第15、19、22、26、29天各用药组移植瘤体积也均明显小于NS组(P＜0.05).NS组Ki-67阳性率为(33± 10)％,DDP组为3.5％,goserelin组8.8％,goserelin+ DDP组1.5％,cetrorelix组(23±11)％,cetrorelix+ DDP组(8±6)％,DDP组、goserelin组和goserelin +DDP组均明显低于NS组,差异有统计学意义(P＜0.05).goserelin组原始卵泡+窦前卵泡率为(71.5±8.1)％,goserelin+DDP组为(62.4± 4.1)％,cetrorelix组(71.2±7.4)％,cetrorelix+DDP组(63.8±2.9)％,均明显高于DDP组的(47.0±4.8)％,差异均有统计学意义(P＜0.05).goserelin组血清AMH水平为(98±27) ng/ml,明显高于NS组的(66±17) ng/ml,差异有统计学意义(P＜0.05);各组裸鼠血清FSH、雌二醇和孕酮水平分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 GnRH类似物能抑制卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长,同时上调AMH分泌、减少动情次数、延长动情周期时间、增加原始卵泡+窦前卵泡率,从而保护卵巢功能.     

人端粒酶逆转录酶启动子调控下胞嘧啶脱氨酶-胸苷激酶融合基因治疗卵巢癌的体外研究

目的　探讨人端粒酶逆转录酶 (hTERT)启动子调控下的融合双自杀基因———胞嘧啶脱氨酶 胸苷激酶 / 5 氟胞嘧啶 更昔洛韦 (CD TK/ 5 FC GCV)系统对人卵巢癌细胞及正常细胞的体外杀伤作用。方法　应用脂质体转染法将hTERT核心启动子报告质粒pBTdel 2 79转染人卵巢癌细胞系3AO、正常卵巢上皮细胞 (NOEC)和人胚肺成纤维细胞株HELF ,用荧光素酶分析检测hTERT启动子活性 ;应用RT PCR技术检测hTERTmRNA的表达水平。应用基因克隆技术分别构建hTERT启动子和巨细胞病毒 (CMV)启动子调控下的CD TK基因真核表达载体pBTdel 2 79 CD TK和pcDNA3 CD TK ,以及hTERT启动子调控下的TK基因表达载体pBTdel 2 79 TK。用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法和流式细胞术检测pBTdel 2 79 CD TK/ 5 FC GCV系统和pcDNA3 CD TK/ 5 FC GCV系统对上述 3种细胞不同的杀伤作用 ;应用RT PCR技术检测pBTdel 2 79 CD TK和pcDNA3 CD TK转染前后 3AO和NOEC细胞中CD和TK基因的表达情况。用扫描电子显微镜观察pBTdel 2 79 CD TK/ 5 FC GCV作用后 3AO细胞的形态变化。结果　卵巢癌细胞系 3AO中hTERT启动子活性增高 ,为 2 4 1% ,RT PCR检测hTERTmRNA为阳性 ,而在正常细胞NOEC和HELF中 ,hTERT启动子活性仅为 0 3%和 0 7% ,hTERTmRNA为阴性。与p     

乳源免疫调节肽抗人卵巢癌的实验研究

目的:通过荷人卵巢癌裸鼠模型,研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)的抑癌作用.方法:建立荷人卵巢癌裸鼠模型,皮下接种肿瘤细胞后,分别用0.9%氯化钠液(NS组),低剂量PGPIPN(2.5×10-4 mg/L)(PGPIPN1组),高剂量PGPIPN(5.0×10-4mg/L)(PGPIPN2组),0.2 ml隔日腹腔注射;氟尿嘧啶(5-Fu)(30 mg/kg·d)(5-Fu组)通过腹腔注射.种植5周后处死裸鼠,测量荷人卵巢癌裸鼠的体重、瘤重、脾重,计算抑瘤率、脾指数,观察PGPIPN对卵巢癌肿瘤的抑制作用,并通过HE染色、DNA凝胶电泳分析技术观察PGPIPN对卵巢癌细胞及其DNA的影响.结果:荷人卵巢癌裸鼠经PGPIPN治疗后出现肿瘤体积缩小,PGPIPN2组抗瘤效果优于PGPIPN1组,同时还能改善荷人卵巢癌裸鼠的体质,提高荷人卵巢癌裸鼠的生存质量,增强SKOV3裸鼠免疫功能.组织病理学检查发现:PG-PIPN1组可见小片状瘤细胞发生凋亡,PGPIPN2组可见瘤细胞大片发生凋亡.PGPIPN组的瘤组织中提取的DNA进行琼脂糖电泳均出现特征性DNA梯形电泳条带.结论:PGPIPN有明显的抑瘤效应,可诱导人卵巢癌细胞发生凋亡.这为卵巢癌的治疗提供了新方法.     

血管抑素基因治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的实验研究

目的:研究血管抑素(Angiostatin)基因转染治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的作用及其相关机理。方法:使用人卵巢癌细胞株SKOV3建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型。随机将荷瘤裸鼠分为基因治疗组、空质粒组和空白对照组,分别于瘤体注射Angiosta-tin/PCDNA3、空质粒PCDNA3和无菌生理盐水,质粒用脂质体DOTAP介导转染细胞。观察各组动物的肿瘤生长曲线,检测各组肿瘤Angiostatin、VEGF的表达和微血管密度(MVD),利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析,计算细胞凋亡指数(AI)。结果:基因治疗组裸鼠的肿瘤生长在早期受到明显抑制,大约1周后生长速度有所加快,肿瘤组织中Angiostatin蛋白局部高表达,VEGF的表达高于空质粒组和空白对照组,AI(4.21±0.49)高于空质粒组和空白对照组,MVD(19.3±3.2)低于空质粒组。结论:Angiostatin基因可以通过抑制血管生成而在一定程度上抑制肿瘤生长,其作用的发挥是独立于VEGF的。     

重组慢病毒介导的OPCML基因的体外转导及其对卵巢上皮性癌细胞的抑制作用

目的探讨重组慢病毒介导的体外转导OPCML基因的可行性及其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞的抑制作用。方法采用PCR技术,用基因特异性引物将OPCML基因的cDNA从CD1小鼠脑组织中扩增,并将OPCML基因克隆到慢病毒载体表达质粒pWPI GFP上,构建慢病毒载体表达质粒pWPI OPCML;将pWPI OPCML或pWPI GFP(空载体对照)质粒和包装质粒pCMVdR8.74、pMDG共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带OPCML和绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组慢病毒WPI OPCML或仅携带GFP基因的重组慢病毒WPI GFP;用重组慢病毒WPI OPCML和WPI GFP分别转导靶细胞,即人卵巢癌细胞系A2780、OCC1细胞和小鼠正常卵巢上皮细胞系CD1细胞,以未转染任何基因者为空白对照。通过细胞增殖实验、细胞聚合力实验、细胞周期分析和体内成瘤实验观察OPCML基因对卵巢癌细胞的抑制作用。结果(1)OPCML基因能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞,转导效率几乎达100%,并稳定表达;蛋白印迹法检测显示,靶细胞中OPCML和GFP蛋白均有表达。(2)细胞增殖实验显示,A2780细胞中,转导OPCML基因72h后的A2780/OPCML细胞为(7.6±1.0)×105个,明显少于未转导基因的A2780细胞或仅转导空载体的A2780/pWPI细胞[分别为(20.0±2.6)×105和(18.1±1.7)×105个;P<0.01];但OCC1和CD1细胞中,OPCML基因对细胞的增殖无明显的影响(P>0.05)。(3)细胞周期分析显示,OPCML基因对A2780细胞的细胞周期有明显的阻滞作用(转导前、后G0～G1期细胞分别为67%、75%;P<0.05),但对OCC1、CD1细胞则无明显阻滞作用(P>0.05)。(4)细胞聚合力实验显示,与空载体对照相比,OPCML基因能明显增强细胞的黏附力(P<0.05)。(5)移植瘤实验显示,将A2780/OPCML细胞注射到裸鼠皮下,4只裸鼠中仅1只裸鼠有肿瘤生长,其肿瘤重量为10mg,显著低于注射A2780、A2780/pWPI细胞的裸鼠[各4只裸鼠均有肿瘤生长,其肿瘤重量分别为(280±53)及(677±323)mg;P<0.01]。免疫组化法检测显示,肿瘤组织中OPCML蛋白有表达。结论用重组的慢病毒载体作为转基因的工具,具有高效性,同时能使目的基因达到持续稳定的表达。OPCML基因能够增加A2780细胞的黏附能力,抑制A2780细胞的增殖和体内成瘤,提示OPCML基因可能是一个新的抑癌基因。     

Smac基因转染对卵巢癌SKOV3/DDP裸鼠移植瘤顺铂敏感性及微血管生成的影响

目的:探讨转染Smac基因对卵巢癌SKOV3/DDP裸鼠移植瘤顺铂敏感性及微血管生成的影响。方法:建立卵巢癌SKOV3/DDP裸鼠移植瘤模型,随机分为5组,分别给予不同药物干预:(1)对照组:移植瘤内注射生理盐水;(2)DDP组:腹腔内注射顺铂;(3)空质粒+DDP组:移植瘤内注射空质粒,24h后腹腔内注射顺铂;(4)Smac组:移植瘤内注射Smac重组质粒;(5)Smac+DDP组:移植瘤内注射Smac重组质粒,24h后腹腔内注射顺铂。顺铂浓度为0.5mg/m1,给药剂量按3mg/kg计算。观察各组裸鼠移植瘤体积变化,计算抑瘤率。TUNEL法检测移植瘤组织标本的凋亡指数,免疫组化法检测CD34并计算微血管密度(MVD)。结果:Smac+DDP组的移植瘤体积最小,平均抑瘤率72.94%,与其他组比较差异有统计学意义(P0.05)。对照组、DDP组、空质粒+DDP组、Smac组、Smac+DDP组的凋亡指数分别为(19.90±3.18)%,(21.82±4.40)%,(22.64±3.81)%,(30.23±4.06)%,(48.59±4.47)%,MVD计数分别为(24.8±5.36),(21.2±3.11),(19.8±3.70),(14.4±3.85),(11.6±2.70)。其中,Smac+DDP组的凋亡指数最高,MVD最低,与其他组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:Smac基因转染可增强卵巢癌耐药移植瘤对顺铂的敏感性,同时减少微血管生成。     

慢病毒转染自杀基因后联合更音洛韦治疗卵巢上皮性癌的实验研究

目的探讨以抗Ⅰ型粘蛋白单链抗体(anti-MUC1)为靶向的慢病毒高效转染自杀基因后联合更昔洛韦(GCV)对Ⅰ型粘蛋白阳性(MUC1+)卵巢上皮性癌细胞的靶向性基因治疗.方法包装以anti-MUC1为靶向的慢病毒,介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因转染卵巢上皮性癌细胞株SKOV3(MUC1+)及正常成纤维细胞GF(MUC1-),荧光显微镜下观察转染效果.聚合酶链反应(PCR)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术鉴定HSV-tk基因在靶细胞(SKOV3及GF)中的整合转录结果.光学显微镜观察GCV作用后细胞形态变化;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定GCV的体外杀伤效应.结果荧光显微镜下观察到以anti-MUC1为靶向的慢病毒可有效转染SKOV3细胞,PCR、RT-PCR均证明HSV-tk基因已在靶细胞SKOV3中整合且转录表达;而在GF细胞中未见HSV-tk基因的整合及转录表达.光学显微镜下观察到HSV-tk基因转录后的细胞在GCV作用后出现明显形态变化;MTT法显示GCV对转染HSV-tk基因后的SKOV3细胞有显著杀伤作用,其半数抑制浓度为0.10mg/L.结论以anti-MUC1为靶向的慢病毒可将HSV-tk基因高效、靶向性转染MUC1+卵巢上皮性癌细胞,联合应用GCV可高效、靶向性杀伤MUC1+卵巢上皮性癌细胞.     

Gene therapy of epithelial ovarian cancer using adenoviral vectors

Ovarian cancer is the fourth most common cause of death in women. Gene therapy using the herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-tk) gene followed by ganciclovir (GCV) treatment has been successfully applied in the treatment of different cancers in experimental animals and in humans. In a recent report, we have demonstrated that the HSV-tk/GCV system can be used efficiently to kill human epithelial ovarian cancer cells (Gynecol Obstet Invest 1997;43:268–75). In this work, we wanted to test the ability of the HSV-tk/GCV to treat ovarian cancer in an animal model.The immune-deficient nude mice model was employed, and mice were injected intraperitoneally with the human epithelial ovarian cancer cell line OVCAR3, 10⁸ cell/mouse. The mice were divided into three different groups, groups 1 and 2 were treated by intraperitoneal injection of adenovirus carrying the HSV-tk gene (ad-tk) on day 3 after cell implantation. Group 1 received 2 × 10⁸ pfu/mouse; group 2 received 20 × 10⁸ pfu/mouse. Group 3 did not receive any viral injection and served as our negative control. All mice received GCV 10 mg/kg IP bid for 6 days. All mice were hosted in the same facilities and had access to food and water ad libitum. Mice in group 3 started to show clinical manifestations of disease by day 10, and all mice were dead by day 21 (16 ± 1.5). At this point mice in groups 1 and 2 appeared perfectly healthy. Autopsy done on group 3 mice demonstrated multiple cancer implants in the abdominal cavity plus hemorrhagic ascitis. In contrast, autopsy on sample mice from groups 1 and 2 at the same time point failed to demonstrate any macroscopic or microscopic cancer.On further follow-up, mice in groups 1 and 2 started to show cancer-related signs, eg, weight loss, movement difficulty, poor reflex response, and finally death. Survival varied between 50 and 101 days with a mean of 66 ± 17 days for group 1 and 74 ± 13 days for group 2. Autopsy done on treated mice demonstrated multiple cancer implants and ascitis. In conclusion, a single injection of ad-tk/GCV was able to improve survival in an ovarian cancer mouse model from an average of 16 days to 74 days. Trials with multiple injection in a novel immune-competent mouse model of ovarian cancer are underway in our laboratory.     

人免疫重建荷人HPV16阳性宫颈癌SCID鼠模型的建立及其生物学特征研究

目的 :建立人免疫重建荷人HPV16阳性宫颈癌 -严重联合免疫缺陷小鼠模型并研究其生物学特征。方法 :向严重联合免疫缺陷 (SCID)鼠腹腔注射人外周血淋巴细胞 (PBL)后 2 4h ,皮下接种HPV16阳性的人宫颈癌细胞株SiHa细胞建立人免疫重建荷人HPV16阳性宫颈癌SCID鼠模型 ,观察荷瘤鼠成瘤、一般特征和移植瘤生长、转移情况及组织学特征 ,检测外周血、肿瘤组织和肺脾等其它组织中HPV16DNA、血清中人IgG含量和移植物抗宿主情况。结果 :SCID小鼠成瘤率为 10 0 % ,移植瘤生长以局部浸润为主 ,未见转移瘤。免疫重建荷瘤组生存期 (136 .2± 6 .3d)显著长于未重建荷瘤组 (97.8± 3.7d) ;组织学检查示移植前后肿瘤细胞形态相似 ;所有肿瘤组织中HPV16DNA呈阳性 ,而外周血和肺脾等其它组织均为阴性。未发现移植物抗宿主情况。结论 :成功建立的人免疫重建荷人HPV16阳性宫颈癌SCID小鼠模型能较好地模拟人自发宫颈癌的生物学特征     

Modified natural-cycle cryopreserved embryo transfer: is a washout period needed after a failed fresh cycle?

Research questionAre the characteristics of the natural cycle or modified natural cycle (mNC), or live birth rates (LBR), affected by delaying frozen embryo transfer (FET) after a failed fresh IVF cycle?DesignIn a retrospective study, conducted at a university-affiliated tertiary centre, 198 women aged 18–45 years undergoing their first FET cycle after a failed fresh embryo transfer attempt using an mNC were evaluated. Cycles were divided according to the time interval between oocyte retrieval and the start of the FET cycle into the immediate FET group (<22 days) and the delayed FET group (≥22 days). The main outcome measures were ovulation day and LBR.ResultsThe mean interval between oocyte retrieval and the start of the FET cycle was 15.6 ± 3.2 days in the immediate FET group and 84.8 ± 73.7 days in the delayed FET group (P < 0.001). Ovulation day was significantly delayed in the immediate FET group (day 17.1 ± 4.4 versus day 15.4 ± 3.7; P = 0.004). There was no difference between the immediate and delayed FET groups in terms of clinical pregnancy rate (CPR) (25.4% and 25.0%, respectively) or LBR (21.2% and 20.0%, respectively).ConclusionsNatural-cycle characteristics are similar in immediate and delayed cycles, except for a slight delay in ovulation day. Deferring mNC-FET after a failed fresh IVF cycle does not improve the reproductive outcome. These results should encourage patients and clinicians who want to proceed with FET immediately after failure of fresh IVF.     

慢性心理应激对SKOV3荷瘤裸鼠血清NE、IL-10和CA125的影响

目的:探讨心理应激对肿瘤生长及荷瘤裸鼠血清去甲肾上腺素(NE)、白介素-10(IL-10)和糖链抗原125(CA125)含量的影响。方法:随机将裸鼠分为4组:正常生长组(A组),单纯应激组(B组),荷瘤组(C组)及荷瘤应激组(D组),每组6只。于C、D组裸鼠的腋窝皮下注射SKOV3细胞(2×106cells/只),注射前B、D组先行束缚应激7天,接种后再连续应激35天(每天6h),A、C组不予应激,结束后处死全部裸鼠,剥取肿瘤,做病理检查;取血清测NE、IL-10和CA125含量。结果:成功建立人卵巢癌荷瘤裸鼠慢性心理应激模型。心理应激明显增加荷瘤裸鼠的瘤重(P0.05),肿瘤增长率58.46%;各组血清NE、IL-10水平依次为ACD,ABD,差异均有统计学意义(P0.05);各组CA125水平比较,AB(P0.05),ACD(P0.01),BD(P0.01)。结论:慢性心理应激能干扰下丘脑-垂体-肾上腺轴的功能并导致免疫系统防御功能减弱,对致病因素处于易感状态。当应激发生在肿瘤患者时,可促进肿瘤的发生发展并影响其预后。     

HPV16E7肽疫苗对人免疫重建荷人宫颈癌细胞株SiHa细胞SCID鼠免疫功能的影响

目的:观察HPV16E7多肽疫苗对人免疫重建荷人宫颈癌细胞株SiHa细胞严重联合免疫缺陷(SCID)鼠移植瘤的影响。方法:对SCID鼠腹腔注射人外周血淋巴细胞(PBL)后24小时,皮下接种HPV16阳性的人宫颈癌细胞株SiHa细胞,建立人免疫重建荷SiHa细胞的SCID鼠模型,当移植瘤最小体积达100mm3时,三次背部皮下接种疫苗,每次接种间隔二周,观察荷瘤鼠一般生物学特性,检测血浆中人IgG含量、外周血中人CD3+、CD4+、CD8+T细胞、脾重、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)以及脾细胞毒杀伤功能。实验设立空白组,仅为腹腔内注射PBL,疫苗成份仅为不完全佐剂(IFA);随机多肽组,为腹腔内注射PBL,皮下接种SiHa细胞,疫苗成份仅为随机多肽+T辅助多肽+IFA;T辅助多肽组,为腹腔内注射PBL,皮下接种SiHa细胞,疫苗成份仅为T辅助多肽+IFA;多肽治疗组,为腹腔内注射PBL,皮下接种SiHa细胞,疫苗成份为HPV16E711-20(YMLDLQ-PETT),HPV16E786-93(TLGIVCPI)+T辅助多肽+IFA。结果:各组SCID鼠血浆中人IgG水平,8周内随重建时间延长而升高(P<0.05),多肽治疗组达2957.85μg/m l,但各组间无显著性差异;外周血中均可检测到人CD3+、CD4+、CD8+T细胞,但各组间无显著性差异(P>0.05);与空白组比较,其他三组SCID鼠脾重均显著增加(P<0.05)。组织学观察到移植瘤局部TIL浸润及明显的出血和坏死,但经免疫组化未检测到人CD8+T细胞。与空白组比较,多肽治疗组、随机多肽组、辅助多肽组的脾细胞毒杀伤功能均显著降低(P<0.05)。结论:人免疫功能重建的荷SiHa细胞的SCID鼠体内重建的人免疫功能随荷瘤时间的延长受到抑制,多肽疫苗在一定程度上能减轻免疫抑制状态。     

The change in sex hormone binding globulin and the influence by gestational diabetes mellitus in fetal period

Objective. To investigate the influence of gestational diabetes mellitus (GDM) on the change of SHBG in fetus.

Method. Forty-eight pregnant women with GDM and 86 women with normal pregnancy were included in the study. The following were measured in the serums of pregnant women, amniotic fluids, and umbilical cord serums: glucose, insulin, peptide-C, SHBG, and sex hormones.

Results. SHBGs in pregnant women's serums were, when compared with the control group: in male fetuses 308.06 ± 55.64 vs. 445.21 ± 50.07 (p < 0.01) and in female fetuses 312.38 ± 56.61 vs. 451.05 ± 52.87 (p < 0.01). When comparing the levels of SHBGs in amniotic fluids, inclusive of the control group, the following were in male fetuses 8.35 ± 1.07 vs. 8.41 ± 1.09 (p = NS) and in female fetuses 8.31 ± 0.97 vs. 8.39 ± 0.94 (p = NS). For the levels of SHBGs in umbilical cord serums and comparison to the control group were: in male fetuses 41.44 ± 8.83 vs. 40.24 ± 7.50 (p = NS) and in female fetuses 39.93 ± 7.04 vs. 39.69 ± 7.16 (p = NS). The concentration of SHBG in amniotic fluid had no significant relationship to glucose, dehydroepiandrosterone (DHEAS), estradiol, and total and free testosterone, but had an extremely negatively correlated to insulin and peptide-C (p < 0.01) in GDM group.

Conclusion. Although the concentration of SHBG does not change in fetus when pregnant woman is complicated with GDM, it is already influenced by the fetal regulation on hyperinsulinemia.