三氧化二砷诱导肝癌细胞株凋亡的实验研究

目的明确三氧化二砷对人肝癌细胞体外生长的影响，并探讨其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝法、^3H-TdR掺入法、TUNEL法、透射电镜观察及流式细胞术，观察不同浓度的三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721的生长活力、细胞凋亡、DNA合成能力的影响。结果三氧化二砷能显著地抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长，并且具有时间和剂量依赖性；发生作用后，细胞生长有明显的凋亡特征性改变；细胞DNA合成能力下降。结论三氧化二砷能有效地抑制体外肝癌细胞生长，其机制可能与抑制肝癌细胞DNA合成及诱导肝癌细胞凋亡有关。     

奥曲肽对人肝癌细胞的抑制及其机制的研究

目的 探讨生长抑素类似物奥曲肽对人肝癌细胞产生抑制作用及其抑制机制。方法 以奥曲肽作用于人肝癌细胞株SMMC-7721细胞，以人成纤维细胞株HF为正常细胞对照，以5-Fu为阳性药物对照。通过噻唑蓝比色实验（MTT实验），细胞增殖生长反应及传代实验和流式细胞术分析，得出结论。结果 在体外，奥曲肽对SMMC-7721细胞产生抑制作用。该抑制作用具有量效关系和饱和性，奥曲肽与5-Fu对SMMC-7721的抑制程度无明显差异。且对HF细胞无影响。结论 奥曲肽对SMMC-7721细胞具有抑制作用。诱导肿瘤细胞凋亡是其作用机制之一。     

马钱子对人肝癌细胞生长的影响及其作用机制

目的 探讨马钱子对人肝癌细胞生长影响及作用机制.方法 体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,分别加入5％、10％、20％的马钱子药物血清,噻唑蓝(MTT)比色法测定对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制作用.20％马钱子药物血清作用肝癌细胞SMMC-77210、24、48 h后,分别收集细胞,提取蛋白和总RNA,应用Westem blot和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测Fas、Cyclin D1、PCNA蛋白和mRNA表达.结果 20％马钱子药物血清对人肝癌细胞72 h的生长抑制率为(54.94±8.19)％,与5％、10％浓度抑制率(19.928±7.653)％、(29.020 ±6.100)％比较差异有统计学意义(F=18.23,P＜0.01).药物血清作用24、48 h后,肝癌细胞SMMC-7721 Fas蛋白表达分别为(0.302±0.009)、(0.399±0.021),与对照组(0.226±0.022)比较,差异有统计学意义(F=68.25,P＜0.05);药物血清作用48 h后,肝癌细胞SMMC-7721 PCNA蛋白表达为(0.7457±0.0386),与对照组、24 h(0.8529±0.0099、0.9016±0.0139)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);药物血清作用24、48 h后,肝癌细胞SMMC-7721 Cyclin D1 mRNA表达分别为0.045 680 ±0.038 130、0.026 714±0.019934,与对照组(0.145246±0.048543)比较,差异有统计学意义(F=8.671,P＜0.05);药物血清作用24、48 h后,肝癌细胞SMMC-7721 Cyclin D1蛋白表达,PCNA、Fas mRNA表达变化差异无统计学意义(F =68.25,P＞0.05).结论 马钱子具有抑制人肝癌细胞增殖作用,其抑制效应与药物血清浓度成正相关;通过上调肝癌细胞Fas蛋白和下调PCNA蛋白及Cyclin D1 mRNA表达,是马钱子抑制肝癌细胞增殖的机制之一.     

阿司匹林对肝癌细胞生长的抑制作用及其机制

目的 观察阿司匹林(AS)对肝癌细胞SMMC-7721生长的作用,并探讨其作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度阿司匹林对肝癌细胞细胞生长的抑制作用以及流式细胞仪检测不同浓度阿司匹林对肝癌细胞细胞周期的影响;免疫组织化学方法检测阿司匹林对肝癌细胞细胞增殖核抗原(PCNA)、环氧合酶-2(COX-2)表达的影响;并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定COX-2基因的表达.结果 肝癌细胞经不同浓度的阿司匹林作用后,其生长抑制率明显升高(P<0.05),且与阿司匹林浓度有关和作用时间相关.细胞周期检测结果显示,经不同浓度阿司匹林作用后的SMMC-7721细胞,细胞周期发生明显变改.表现为随着阿司匹林浓度的增加,S期细胞比例下降明显,G0/G1期及G2/M期细胞比例则上升(10-2、10-3moL/L AS组与对照组比较P<0.05).免疫细胞化学染色显示,阿司匹林能下调肝癌细胞COX-2、PCNA的表达.RT-PCR检测表明,COX-2基因表达电泳条带与对照组比较辉度明显降低,其中10 mmol/L阿司匹林组最低,说明随着阿司匹林浓度增加,COX-2表达逐渐减少,阿司匹林能下调SMMC-7721细胞表达COX-2基因.结论 阿司匹林能有效抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长,这种作用可能是其通过抑制细胞增殖,与抑制COX-2、PCNA的表达有关.     

α-干扰素和COX-2抑制剂对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制作用研究

目的研究α-干扰素和环氧合酶(COX-2)抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用。方法采用MTT比色法观察不同浓度的塞来昔布和α-干扰素处理对肝癌细胞增殖的影响;通过荧光显微镜检测细胞凋亡。结果实验组与对照组相比,能抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,两种药物高浓度联合作用48 h后,对肝癌细胞的生长抑制率可达92.44%±0.98%。α-干扰素和塞来昔布对肝癌细胞的增殖抑制具有协同作用。荧光显微镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等凋亡形态学改变。结论 COX-2抑制剂塞来昔布和α-干扰素对人肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖有协同抑制作用,同时能诱导其凋亡,并且呈剂量和时间依赖性,这提示α-干扰素和COX-2抑制剂塞来昔布对HCC的预防和治疗可能有积极意义。     

重组人生长激素对体外培养的SMMC-7721肝癌细胞生长的影响

目的 探讨重组人生长激素(rhGH)对体外培养的Bel-7721肝癌细胞生长的影响及机制.方法 采用放射配体法检测SMMC-7721肝癌细胞生长激素受体(GHR)的表达.采用噻唑蓝(MTT)比色法检测Bel-7721肝癌细胞株在不同浓度rhGH(0、1.33、13.33、133.30、1333.00μg/L)作用下的药物敏感性,计算细胞生长率;用流式细胞仪检测肝癌细胞在上述浓度rh-GH作用下细胞周期各时相细胞比率、增殖指数(PI)以及凋亡率.结果 rhGH对体外培养的SMMC-7721肝癌细胞的生长具有一定程度刺激作用,表现为rhGH在133.30μg/L浓度促进肝癌细胞增殖较显著,而rhGH在其他浓度(1.33、13.33、1333.00μg/L)对肝癌细胞增殖虽也表现出一定程度的促进作用,但总体效果较rhGH在133.30 μg/L浓度为弱.rhGH作用48 h后流式细胞检测各实验组S期所占比率、PI均较对照组升高(P<0.05);G_2-M细胞所占比率,13.33、133.30与1333.00μg/L组较对照组显著增高(P<0.05),1.33μg/L与对照组比较差异无统计学意义;各实验组凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).放射配体法发现SMMC-7721肝癌细胞株表达GHR.结论 一定浓度范围的rhGH对7721肝癌细胞生长有促进作用,原因可能与7721肝痛细胞表达GHR,rhGH可促进肝癌细胞DNA合成,提高细胞分裂增殖能力有关.     

丁酸钠对人肝癌细胞株SMMC-7721的诱导分化作用及其机制

目的 探讨丁酸钠(Sodium Butyrate,NaB)抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞生长、诱导其凋亡的分子机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法、倒置显微镜观察药物对细胞生长的影响并绘制细胞增殖抑制曲线;透射电镜观察细胞凋亡的形态变化;流式细胞术分析细胞周期;半定量RT-PCR方法检测细胞p21WAF1基因mRNA的表达水平;Western blot检测细胞p21WAF1蛋白的表达变化.结果 NaB对人肝癌细胞生长的抑制呈剂量依赖和时间依赖关系.将细胞周期阻滞于G0/G1期,NaB上调p21WAF1 mRNA及蛋白的表达.结论 NaB具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖、诱导其凋亡的作用,这种作用可能是通过上调p21WAF1 mRNA及蛋白完成的.     

TSA对人肝癌细胞株E-cadherin启动子区甲基化及表达的影响

目的 探讨去乙酰化转移酶抑制剂TSA对人肝癌SMMC-7721细胞株E-cadherin基因(E-cad)启动子区甲基化及其表达的影响.方法 TSA(300 nm/L)处理人肝癌SMMC-7721细胞,MTT法、TUNEL染色法分别检测细胞生长抑制及凋亡情况,甲基化特异性的PCR(methylation-specificPCR,MSP)检测处理前后E-cad启动子区CpG岛甲基化状态;Western blot检测处理前后E-cad及DNMT3b表达水平的变化.结果 TSA能抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长并诱导其发生凋亡,与对照组相比,实验组细胞生长抑制率为21.85%,对照组细胞凋亡率为(4.69±0.56)%,实验组凋亡率为(14.94±0.91)%,与对照组相比,凋亡细胞明显增多(P=0.000).用药前E-cad启动子区CpG岛为甲基化状态,E-cad蛋白表达阴性.TSA处理后E-cad启动子区CpG岛发牛脱甲基化,E-cad蛋白恢复表达.TSA亦导致DNMT3b的表达水平降低. 结论去乙酰化转移酶抑制剂TSA能抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,并可诱导其发生凋亡,逆转E-cad基因启动子区的甲基化状态,并恢复该基因表达.TSA有可能通过DNMT3b发挥脱甲基化作用.     

重离子与X射线辐射人肝癌细胞后细胞凋亡及STAT-3基因表达的研究

目的 探讨重离子辐射对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖及细胞凋亡的影响,以及STAT-3基因表达的变化.方法 采用克隆存活及流式细胞技术,探讨体外培养的人肝癌细胞系SMMC-7721经X射线及重离子辐射后,细胞周期及细胞凋亡的变化,并采用RT-PCR法及Western blotting法检测肝癌细胞系SMMC-7721 STAT-3基因的表达.结果 人肝癌细胞系SMMC-7721经不同剂量重离子辐射后,随辐射剂量增加,细胞存活率(SF)明显降低(分别t=0.89、0.76、0.41、0.23,均P＜0.05).流式细胞仪检测显示细胞周期G2/M期阻滞增强,重离子较X射线作用更明显(分别t=1.31、8.26,P＜0.05),重离子辐射较X射线对细胞凋亡率影响更大(x2=48.46,P＜0.01).Western blotting和RT-PCR法均显示随着辐射剂量的增加STAT-3基因的表达逐渐增强.结论 重离子较X射线可更明显地诱导癌细胞凋亡,降低细胞存活率,人肝癌细胞系SMMC-7721经X射线及重离子辐射后,细胞凋亡与STAT-3基因的表达相关.     

淫羊藿苷对肝癌细胞株SMMC-7721增殖与凋亡的影响

目的:探讨淫羊藿苷对肝癌细胞株SMMC-7721的抑增殖和促凋亡作用及其机制。方法:以不同浓度(0,6.25,12.5,25,50,100,200,400,800μg/mL)的淫羊藿苷作用于SMMC-7721细胞株不同时间(24,48,72 h)后,用MTT法检测药物对SMMC-7721细胞增殖状态;以不同浓度淫羊藿苷作用SMMC-7721细胞48 h后,用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,用Western blot检测细胞PCNA,Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:与对照组(0μg/mL)比较,各浓度的淫羊藿苷均明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,并呈明显的时间与浓度依赖性(均P<0.05);淫羊藿苷呈浓度依赖性诱导SMMC-7721细胞发生G0/G1期阻滞和凋亡,下调SMMC-7721细胞PCNA蛋白和Bcl-2蛋白,上调Bax蛋白的表达(均P<0.05)。结论:淫羊藿苷可抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡。     

CD147-shRNA对SMMC-7721细胞增殖和运动能力的影响

目的：探讨CD147-shRNA重组质粒对肝癌细胞SMMC-7721增殖和运动能力的影响。方法：将前期合成并筛选的重组质粒pBS/U6/CD147-shRNA3转染至SMMC-7721细胞中,采用MTT法检测细胞增殖;采用划痕愈合实验测定细胞迁移能力。结果：MTT实验结果显示0.3 μg和1 μg的pBS/U6/CD147-shRNA3转染后,SMMC-7721细胞的增殖受到明显抑制,且呈浓度依赖性,最大抑制率为32.2%;转染对照载体的SMMC-7721细胞在划痕24 h后趋于愈合,相比之下,转染pBS/U6/CD147-shRNA3的SMMC-7721细胞划痕愈合能力明显减弱。结论：基因沉默CD147基因对肝癌细胞SMMC-7721的增殖和运动有抑制作用。     

HDAC抑制剂SAHA对人肝癌细胞分化诱导作用的研究

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDAC)抑制剂SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)对人肝癌SMMC-7721细胞的分化诱导作用.方法 倒置显微镜观察SAHA对SMMC-7721细胞形态的影响;MTT比色法测定SAHA对SMMC-7721细胞增殖的抑制情况;免疫细胞化学检测SAHA对SMMC-7721细胞中甲胎蛋白(AFP)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响;流式细胞术(FCM)分析细胞周期;RT-PCR方法榆测处理前后SMMC-7721细胞p21WAF1基因mRNA的表达变化.结果 实验组细胞增殖速度显著减慢,与正常细胞形念变化相似;MTT比色法测定结果显示不同浓度SAHA对SMMC-7721细胞的增殖均有抑制作用,并有明显的剂量依赖和时间依赖关系;免疫细胞化学检测显示SAHA能显著降低PCNA和AFP在SMMC-7721细胞中的表达;流式细胞仪检测结果显示,SMMC-7721细胞经SAHA处理后,G0/G1期细胞明显增加,S期细胞则明显减少,细胞被阻滞于G0/G1期;RT-PCR检测结果表明,实验组细胞中p21WAF1 mRNA的表达明显增加.结论 SAHA对人肝癌细胞具有显著的诱导分化作用,诱导肝癌细胞分化的机理可能与抑制HDAC的活性,上调p21 WAF1 mRNA表达,及阻滞肝癌细胞G0/G1期有关.     

microRNA-126靶向PIK3R2调控肝癌细胞SMMC-7721的增殖和凋亡

【摘要】 目的 研究microRNA-126(miR-126)对肝癌细胞SMMC-7721迁移能力的影响以及对靶基因PIK3R2表达的影响。方法 通过慢病毒转染肝癌细胞株SMMC-7721使其过表达miR-126,利用CCK-8法检测细胞增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡;采用实时定量PCR和蛋白印迹检测细胞PIK3R2表达水平的变化,并通过荧光素酶实验验证miR-126与PIK3R2基因的直接调控关系。结果 与对照组相比,转染miR-126组的SMMC-7721细胞的增殖能力减弱,凋亡增加。过表达miR-126后,SMMC-7721细胞PIK3R2的蛋白表达下调(P=0.0135)。荧光素酶报告基因实验显示,miR-126能明显抑制PIK3R2-3’UTR的荧光素酶活性(P=0.0016)。结论〓过表达miR-126可能通过靶向降低PIK3R2基因的蛋白表达,抑制肝癌细胞的迁移。     

Sonic Hedgehog 信号通路在肝癌细胞增殖中的作用

目的：探讨Sonic Hedgehog（SHH）信号通路在肝癌细胞增殖中的作用及抑制该通路的活性对肝癌细胞对化疗药物敏感性的影响。 方法：分别用不同浓度重组SHH N-末端肽（rSHH-N）、SHH中和抗体（anti-SHH）、SHH通路抑制剂cyclopamine作用人肝癌SMMC-7721细胞不同时间,用MTT法检测细胞增殖状态。比较 5-氟尿嘧啶（5-FU）、anti-SHH、cyclopamine、anti-SHH+5-FU、cyclopamine+5-FU对SMMC-7721细胞增殖抑制作用的差异。 结果：rSHH-N作用后,SMMC-7721细胞增殖明显增加,而anti-SHH和cyclopamine作用后,SMMC-7721细胞增殖明显降低,且均呈时间和浓度依赖性（均P<0.05）;anti-SHH或cyclopamine联合5-FU对SMMC-7721细胞增殖抑制作用明显强于各药单用（均P<0.05）。 结论：SHH信号通路在肝癌生长中起重要作用,阻断SHH信号通路能抑制肝癌细胞增殖且能增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性。     

聚酯型儿茶素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的 探讨聚酯型儿茶素（ＴＳ）的抗癌作用机制。方法 应用四氮唑蓝快速比色（ＭＴＴ）法，透视电镜，琼脂糖凝胶电泳，流式细胞术等方法研究ＴＳ诱导体外培养的人肝癌细胞凋亡。结果 ５０－８００ｍｇ／Ｌ ＴＳ对人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１细胞的生长有明显的抑制作用，且量效关系明显。４００ｍｇ／Ｌ ＴＳ作用于ＳＭＭＣ－７７２１细胞２４ｈ后，透射电镜观察到凋亡小体；ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳上可见典型的“阶梯状”：     

人工合成小分子RNA对前列腺癌细胞周期及增殖的影响

目的 研究人工合成的dsP21-555对前列腺癌细胞株PC-3和LNCaP细胞周期和增殖的影响。方法 合成dsP21-555（实验组）和dsControl（阴性对照组）,分别转染至PC-3和LNCaP。使用Real-time PCR及Western blotting分别检测分析前列腺癌细胞转染后的p21mRNA及p21蛋白的表达情况。流式细胞术检测细胞周期分布,使用MTT实验及集落形成实验检测细胞的活力及增殖能力。结果 转染dsP21-555后PC-3和LNCaP细胞中的p21 mRNA水平分别上调至2.90倍(P<0.01)和2.05倍(P<0.01)。Western blotting实验结果符合这一趋势。流式细胞术检测显示,转染dsP21-555后,在S期和G2/M期的细胞比例下降,在G0/G1期的细胞比例则增加。MTT实验显示,与dsControl组相比,转染dsP21-555后,PC-3和LNCaP细胞的活力明显降低。集落形成实验显示,dsP21-555组的集落的数量较少,细胞增殖能力降低。结论 人工合成的dsP21-555能明显激活前列腺癌细胞中p21基因的表达,并显著抑制前列腺癌细胞周期的进展和增殖。